早期妊娠丢失患者蜕膜组织中血管重塑相关miRNA及其靶基因表达的研究

目的 探讨早期妊娠丢失（EPL）患者蜕膜组织中血管重塑相关miRNA及其靶基因的表达。方法 选取2020年10至12月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院门诊手术室行早孕人工流产手术的患者40例为研究对象,其中因EPL行人工流产手术者20例（EPL组）,正常早孕要求终止妊娠行人工流产者20例（对照组）,收集其废弃的流产蜕膜组织。采用q RTPCR法检测两组患者蜕膜组织中与血管重塑相关的差异表达miRNA。通过3’非翻译区（3’-UTR）荧光素酶报告基因验证miRNA与其预测靶基因之间的关系。qRT-PCR和Western blot法验证两组患者蜕膜组织中预测靶基因的表达。结果 EPL组患者蜕膜组织中miR-29c-3p、miR-193a-5p和miR-125a-5p表达水平均升高,而其对应的靶基因血管内皮生长因子A(VEGFA)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA和蛋白表达水平均下调。3’-UTR荧光素酶报告基因证实差异表达的miRNA与预测靶基因之间存在负调控。结论 蜕膜组织中miR-29c-3p、miR-125a-5p、miR-193a-5p可能通过下调靶基因VEGFA和...     

上调miR-378a-3p对血管瘤内皮细胞生长和侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-378a-3p（miR-378a-3p）对血管瘤内皮细胞（HemECs）增殖、侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法 HemECs细胞随机分为对照组、miR-NC组及miR-378a-3p组;对照组为常规培养HemECs细胞,miR NC组和miR-378a-3p组HemECs细胞分别在脂质体（Lipofectamine RNAIMAX）的介导下转染阴性对照以及miR-378a-3p模拟物。荧光定量PCR（qPCR）检测miR-378a-3p的表达量,细胞计数（CCK 8）检测各组细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移;在线数据库TargetScan预测以及双荧光素酶报告基因验证miR-378a-3p与驱动蛋白超家族2A（KIF2A）的靶向关系。 〖HTH〗结果〓〖HTK〗与对照组相比,miR-378a-3p模拟物能明显上调HemECs细胞中miR-378a-3p的表达量（P＜0.05）;上调miR-378a-3p的表达量抑制HemECs细胞增殖,降低其侵袭、迁移的能力（P＜0.05）;KIF2A是miR-378a-3p下游靶基因之一。结论 miR-378a-3p可能通过靶向KIF2A抑制HemECs细胞的增殖、侵袭及迁移。     

外周血中miRNAs表达水平对精神分裂症的诊断价值

目的:探讨外周血中miRNAs的表达水平对精神分裂症的诊断价值.方法:选取40例精神分裂症患者作为观察组,40例健康体检者作为对照组.实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定精神分裂症患者外周血液中miRNAs表达情况.通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNAs的诊断效能.采用可视化和集成发现数据库(DAVID)工具对miRNAs靶基因进行基因功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:两组受试对象外周血miR-30d-5p、miR-181b-3p、miR-652-5p、miR-193a-3p、miR-181b-5p、miR-346、miR-572、miR-7-5p、miR-564、miR-548d-3p和miR-30a-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p表达水平高于对照组(P<0.05);miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p的ROC曲线下面积(AUC)值分别为0.763,0.659和0.725,三者联合检测的AUC值为0.802.miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p靶基因与突触结构和神经功能密切相关,三者共同靶基因SATB2和PER2在精神分裂症患者中异常表达(P<0.05).结论:miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p在精神分裂症中异常表达,三者及其靶基因结合有望作为精神分裂症诊断规范和治疗监测的生物标记物.     

横纹肌肉瘤相关差异miRNAs和靶基因的生物信息学分析

目的:运用生物信息学分析人正常横纹肌和横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)差异miRNAs和靶基因,为研究RMS提供新思路.方法:GEO2R分析RMS组织的差异miRNAs,利用Sangerbox绘制火山图.TargetScan、miRDB、miRwalk预测靶基因并利用Veen分析交集靶基因.Enrichr分析靶基因的GO富集分析和KEGG信号通路.Cytoscape结合生存分析筛选hub基因及miRNAs与hub基因的分子调控网络.结果:GEO2R分析发现2549个差异miRNAs,上调和下调miRNAs分别有1318个和1231个,根据|log2FCl＞1.5,P＜0.05筛选出6个差异miRNAs(上调:miR-410-3p 、miR-381-3p、miR-483-3p和miR-376a-3p,下调:miR-29c-3p和miR-145-5p);TargetScan、miRDB、miRwalk分别预测6个差异miRNAs的靶基因后Veen图取交集的靶基因共计1262个;GO富集和KEGG信号通路分析靶基因富集于RNA聚合酶Ⅱ的调控、调节干细胞多能性的信号通路、Hippo信号通路等过程;Cytoscape筛选出top10 hub基因后结合生存曲线分析显示FBXL3高表达,SPSB4、VHL、SMAD4、NRAS、KRAS低表达时患者预后较好.结论:利用生物信息学分析正常横纹肌和横纹肌肉瘤组织的差异miRNAs-靶基因,筛选出miR-145-5p (SPSB4、FBXL3、SMAD4、NRAS)、miR-29c-3p(VHL)、miR-381-3p(KRAS),可为横纹肌肉瘤的研究提供潜在的分子靶点.     

miR-181a-5p靶向HMGB1调节急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-181a-5p调控HMGB1的表达在雨蛙素(cerulein)联合脂多糖(lipopolyasccharide, LPS)诱导的严重急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的影响。方法 以未处理的AR42J细胞作为正常组,1×10^-8 mol/L的cerulein联合10μg/mL的LPS诱导AR42J细胞24 h建立体外严重AP组,用脂质体转染法将miR-NC(空载体)和miR-181a-5p mimic转染至严重AP组作为miR-NC对照组和miR-181a-5p过表达组。采用qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 m RNA的表达水平;Western Blot检测HMGB1和Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-181a-5p和HMGB1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 与正...     

自然流产模型小鼠子宫蜕膜组织miRNAs的表达

目的 寻找自然流产模型小鼠(CBA/J×DBA/2)子宫蜕膜组织与正常妊娠小鼠(CBA/J×BALB/c)子宫蜕膜组织之间差异表达的miRNAs.方法 建立自然流产小鼠模型和正常妊娠小鼠模型,利用miRCURY LNATM microRNA Arrays 10.0检测两组孕小鼠子宫蜕膜组织miRNAs的表达,筛选两组小鼠子宫蜕膜组织差异表达的miRNAs,并对其进行功能检索和靶基因预测.结果 CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率为30.9%,CBA/J×BALB/c小鼠胚胎吸收率为7.0%,两者差异有统计学意义(P<0.01).miRNAs芯片数据表明流产蜕膜组织和正常蜕膜组织之间有13个miRNAs存在明显表达差异(ratios≥2.0或≤0.5),其中表达上调8个,表达下调5个.预测软件显示miR-21和miR-26a的靶基因分别是和妊娠相关的RECK和LIF两个因子.结论 小鼠子宫蜕膜组织miR-21和miR-26a的差异性表达可能在小鼠胚胎自然流产过程中扮演重要角色.     

生物信息学在三阴性乳腺癌mi RNA生物标志物筛选中的应用

目的：通过医学癌症数据库（TCGA）和基因表达数据库（GEO）分析三阴性乳腺癌（TNBC）中差异表达微小RNA（miRNAs）并预测其靶基因,探讨其生物学功能和分子机制,寻找TNBC预后相关靶点。方法：下载TCGA数据库中343项关于乳腺癌组织与癌旁组织相关的miRNAs表达数据,筛选乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNAs;GEO数据库验证miRNAs在TNBC细胞系的26种细胞株中的表达以及TNBC患者经过化疗前后血清中miRNAs的变化;通过基因本体（GO）功能注释及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集、蛋白质互作网络分析候选miRNAs的靶基因功能。结果： TCGA数据库,在乳腺癌组织中的miR-21-5p表达水平明显高于相邻癌旁组织（logFC=5.557,P<0.01）;GEO数据库筛选,miR-21-5p在TNBC细胞系中表达水平明显升高,在26种TNBC细胞株中超过20种细胞株相对表达水平>70 000,TNBC患者经联合化疗后miR-21-5p的表达水平明显降低（logFC=-5.07,P<0.01）;GO分析,miR-21-5p主要在DNA复制、转录以及血管重构等方面发挥调控作用;KEGG富集分析,miR-21-5p主要通过促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）和转化生长因子β（TGF-β）等通路影响TNBC的发生发展。结论： miR-21-5p在TNBC组织中表达上调,在TNBC进展中发挥正调控作用,可能成为鉴定TNBC相关预后程度的关键生物学标志物。DUSP8等可能作为miR-21-5p的靶基因参与调控TNBC的发生发展。     

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨微小RNA（microRNA,miRNA）-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移及凋亡的影响和潜在分子机制。方法：利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系（NC为对照组）,利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验、Transwell实验以及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果：miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异具有统计学意义（P< 0.01）;与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（分别为：t = 6.11,8.90,11.53,均P< 0.05）,且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡;miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+ 空质粒组比较,miR-193a-3p+ TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义（分别为：t = 3.43,2.88,9.32,均P< 0.05）。结论：miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。     

MiR-30a-5p通过泛素水解酶22抑制人宫颈癌细胞上皮-间质转化功能

【目的】研究microRNA-30a-5p（miR-30a-5p）对人宫颈癌Hela细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。【方法】宫颈癌Hela细胞株分别转染目的mir的模拟物和阴性对照模拟物,分别以30a-5p组、NC组命名并标记细胞。同时,以未经过处理的Hela细胞作为对照（Control组）。分别用逆转录-聚合酶链反应法检测各组宫颈癌细胞的miR-30a-5p含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞神经-钙粘素（N-cadherin）、α-连环蛋白（α-Catenin）和泛素水解酶22（USP22）表达水平。运用生物信息学方法预测miR-30a-5p的靶基因。采用Western blot法检测USP22过表达对miR-30a-5p抑制EMT的拮抗作用。双荧光素酶实验检测miR-30a-5p与USP22的关系。建立皮下移植瘤模型观察miR-30a-5p的体内作用。【结果】30a-5p组宫颈癌细胞miR-30a-5p的表达水平明显上调,表达水平为Control组的853.82（862.26~843.11）倍（P＜0.01）。30a-5p组侵袭细胞数量8.17（8.32~8.03）明显低于Control组（P＜0.01）。30a-5p组细胞N-cadherin蛋白的细胞内含量明显下降,α-Catenin蛋白的细胞内含量明显上升,USP22蛋白表达量明显降低。合并USP22过表达处理的30a-5p组宫颈癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,α-Catenin蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-30a-5p的下游靶基因（P＜0.01）。30a-5p组皮下移植瘤明显小于Control组（P＜0.01）。与Control组肿瘤组织相比,30a-5p组肿瘤组织miR-30a-5p的相对含量升高,USP22蛋白含量降低,N-cadherin蛋白的含量降低,α-Catenin蛋白含量升高。【结论】miR-30a-5p在宫颈癌Hela细胞中,可能通过靶向识别下游靶基因USP22,进而抑制其翻译。最终实现对宫颈癌细胞EMT过程的抑制。     

CCl4诱导大鼠纤维化肝组织 microRNA 差异表达及其初步分析

目的：探索 microRNA 在四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠纤维化肝组织中的差异表达及其意义。方法采用 microR-NA 高通量测序分析技术检测对照组(n=10)与模型组(n=10)肝脏组织 microRNA 表达,对差异 microRNA 进行靶基因预测,对靶基因进行基因本(GO)分析、pathway 分析。结果对照组与模型组间筛选出37个差异 microRNA,上调29个,下调8个;从microRNA-基因网络图中发现关键上调为 miR-184、miR-10b-5p、miR-199a-3p 等;关键下调为 miR-200b-3p、miR-199a-5p、miR-125b-5p 等。结论模型组 microRNA 表达谱变化明显,肝纤维化的形成与 microRNA 调控细胞增殖、凋亡、细胞周期等有关。     

miR-30a-5p通过调节靶基因ARG1对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响

目的:探讨miR-30a-5p通过调节靶基因精氨酸酶-1(ARG1)对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响.方法:选取急性缺血性脑卒中患者60例为病例组,同期体检健康者60例作为对照组.RT-qPCR检测外周血候选miRNAs,miR-30a-5p及靶基因ARG1表达情况;将miR-30a-5p模拟物、阴性对照模拟物及mock转染到HL-60或RAW264.7细胞中,荧光素酶报告基因分析miR-30a-5p与ARG1的作用关系;RT-qPCR和Western blot检测ARG1 mRNA和蛋白的表达情况.结果:miR-30a-5p、miR-579-3p和Let-7e表达水平在病例组和对照组存在统计学差异(P<0.001),生物信息学预测miR-579-3p和Let-7e没有免疫调节相关的靶基因,而ARG1是miR-30a-5p潜在靶基因.荧光素酶报告基因实验证实ARG1是miR-30a-5p直接作用靶点,ARG1 mRNA在缺血性脑卒中外周血中明显上调(P<0.05).miR-30a-5p模拟物转染HL-60和/或RAW 264.7细胞24 h后,ARG1 mRNA和蛋白表达水平较mock和NC组明显降低(P<0.05).miR-30a-5p对LPS处理后的RAW 264.7细胞48 h后,miR-30a-5p模拟物组NO水平较mock和NC组明显升高(P<0.05).结论:miR-30a-5p及其靶基因ARG1是急性缺血性脑卒中重要的分子标志物之一,miR-30a-5p可能通过抑制靶向基因ARG1表达参与缺血性卒中免疫应答的病理生理过程.     

miRNAs参与养血柔肝法治疗骨关节炎的生物信息学分析

目的 分析miRNAs在养血柔肝法“养血软坚胶囊”治疗骨关节炎中的生物学信息.方法 将40只SD大鼠进行前交叉切除(ACLT)造模成骨关节炎模型,模型验证造模成功后,随机分为模型组(n=20)和中药组(n=20).模型组不干预,中药组予大鼠灌胃饲养,药物采用养血柔肝法中成药养血软坚胶囊.4周后取材,提取关节软骨组织的RNA,制备文库,通过数据预处理、测序错误率分布检查、测序数据过滤、差异表达的miRNAs的鉴定、差异表达的miRNA的靶基因的鉴定、差异表达的miRNA的靶基因的功能分析、网络图构建等步骤,对差异表达的miRNAs进行数据分析.并RT-PCR验证所得结果.结果 中药组与模型组并共有35个miRNAs表达有差异.其中7个上调(共调控了1174个靶基因),28个下调(共调控了2216个靶基因);对差异miRNAs的靶基因进行蛋白互作网络分析(PPI)后,通过连接度最高的几个节点,获得了19个重要的靶基因.关节软骨中,中药组rno-miR-199a-5p、mo-miR-140-3p的表达高于模型组,中药组rno-miR-300-3p、mo-miR-9a-3p的表达低于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 养血柔肝法中药“养血软坚胶囊”可以调控骨关节炎大鼠模型的miR-199a-5p,miR-140-3p,miR-300-3p和miR-9a-3p等miRNAs.     

miR-125a-5p在胃癌组织中表达的生物信息学分析及实验验证研究

目的 通过生物信息学分析方法,系统评价miR-125a-5p在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性;通过实验观察miR-125a-5p在胃癌组织中的表达,分析其临床意义,并采用生物信息学方法,进行靶基因和信号通路富集分析。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测miR-125a-5p在胃癌组织和癌旁组织中的表达,并分析其临床意义;采用UALCAN数据库分析miR-125a-5p在胃癌组织中的表达及临床病理特征;采用miRecords数据库的预测软件预测其靶基因,选择至少3个以上软件支持的靶基因,运用DAVID 6.7在线富集分析靶基因参与的信号通路。结果 生物信息学分析和实验研究均发现,相对于癌旁组织,miR-125a-5p在胃癌组织中表达明显下调(P<0.05),其表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、肿瘤组织增殖阶段、肿瘤组织类型相关(P<0.05);生物信息学分析提示,miR-125a-5p与临床病理特征关系密切,其靶基因富集在33个与肿瘤相关的信号通路中。结论 miR-125a-5p是胃癌中下调表达的分子标记物,是潜在的具有临床相关性的抑癌基因,是与临床...     

基于TCGA数据库构建前列腺癌相关miRNA预后模型

目的利用癌症基因组图谱数据库（TCGA）中前列腺癌患者的miRNA和mRNA数据及临床信息,构建由miRNA组成的预后风险评分模型,为后续研究提供理论基础。方法从TCGA数据库中下载有关前列腺癌的相关miRNA和mRNA数据,利用R语言进行生存预后分析及临床病理特征分析。利用TargetScan、miRDB和miRanda来预测差异表达miRNA潜在靶基因,并通过基因功能富集分析揭示前列腺癌中有效分子学机制。结果miR-19a-3p、miR-144-3p、miR-223-5p和miR-483-3p这4种miRNA与前列腺癌患者总生存期密切相关。临床病理特征分析发现miR-483-3p表达量与T分期有关,miR-19a-3p表达量与患者年龄有关,miR-223-5p表达量与Gleason评分有关。功能富集分析显示,这4种miRNA的差异表达基因可能参与叉头转录因子和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路。通过筛选共得出33个潜在靶基因。Kaplan-Meier生存分析显示,前列腺癌患者心肌肌动蛋白α1（ACTC1）、CD177、丝切蛋白2（CFL2）、肌蛋白修饰调节因子2（MBNL2）、含钯蛋白（PALLD）、磷酸二酯酶5A（PDE5A）、联丝蛋白（SYNM）或突触极蛋白2（SYNPO2）高表达组患者无病生存期均长于低表达组患者（均P＜0.05）。结论miR-19a-3p、miR-144-3p、miR-223-5p和miR-483-3p等miRNA与前列腺癌预后有关,其潜在的靶基因ACTC1、CD177、CFL2、MBNL2、PALLD、PDE5A、SYNM、SYNPO2可用于评估前列腺癌患者的预后情况。     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

肺炎支原体肺炎患儿血液中差异表达miRNAs的筛选及鉴定

目的：筛选鉴定与肺炎支原体肺炎相关的特异性miRNAs。方法：收集肺炎支原体肺炎患儿的血液,通过miRNA芯片技术分析肺炎支原体肺炎患儿和正常人血液淋巴细胞中miRNAs的表达谱变化,通过RT-PCR方法验证芯片检测结果的准确性,确认与肺炎支原体肺炎相关的特异性miRNAs。利用靶基因软件预测各自可能的靶基因,利用RT-PCT验证mRNA表达差异。结果：肺炎支原体肺炎患儿血液淋巴细胞中筛选出表达上调的miRNA 105个,表达下调的133个。其中上调（大于5倍）的30个,上调（大于10倍）的10个,下调（小于0.5倍）的133个(P＜0.05)。选取表达差异显著的miR-20a-3p、miR-100-5p、miR-93-5p以及let-7b-5进行后续RT-PCR的验证,结果与芯片一致;Bcl-2、IGF-1R、PTEN、TGFβR1 mRNA表达有不同程度的降低。结论：miRNAs在肺炎支原体肺炎患儿血液淋巴细胞中存在差异表达,而这些差异表达的miRNAs及其潜在靶基因可能参与肺炎支原体导致的感染与免疫反应。     

miR-1187靶向调控Arhgef9在七氟醚致海马神经元凋亡中的作用

目的探讨miR-1187靶向调控Rho鸟苷交换因子-9（Arhgef9）在七氟醚致小鼠海马神经元凋亡中的调控作用。方法通过基因芯片技术测定小鼠海马miRNA。利用miRWalk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测。为验证预测结果与实际情况是否相符,同步进行mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作关系的mRNA。为说明miRNA与mRNA的互作关系,进一步利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络。采用RT-PCR法检测海马神经元miR-1187mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测miR-1187转染后海马神经元存活率,荧光素酶实验检测Arhgef9是否为miR-1187的靶基因。结果海马神经元凋亡主要与9个miRNA相关,即miR-101b-3p、miR-1187、miR-188-5p、miR-219a-5p、miR-338-3p、miR-425-5p、miR-467a-3p、miR-705、miR-92a-3p。miR-1187在七氟醚诱导海马神经元损伤模型中的相对表达量明显降低（P＜0.05）,miR-1187高表达质粒（miR-1187mimics）转染后,海马神经元存活率明显升高（P＜0.05）。miR-1187与Arhgef9存在靶向关系,miR-1187通过与Arhgef9基因mRNA的3忆非翻译区互补配对来发挥作用。结论miR-1187是海马神经元抗细胞凋亡的抑制因子;高表达miR-1187通过靶向调节Arhgef9mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生。     

miRNA在哮喘儿童支气管肺泡灌洗液细胞中的表达和作用研究

目的探讨miRNA参与儿童哮喘发病的可能作用机制。方法选取2016年1月至2017年2月在浙江大学医学院附属儿童医院呼吸内科住院的哮喘患儿15例为哮喘组,同期在本院确诊为支气管异物的12例患儿（均在24h内取出异物）为对照组。使用miRNA芯片检测支气管肺泡灌洗液细胞中miRNA的表达水平,并用qRT-PCR进行验证,通过生物信息学数据筛选出可能靶基因E-钙黏蛋白（E-cadherin）,检测其表达水平。结果哮喘组患儿支气管肺泡灌洗液细胞中有65个miRNA与对照组存在差异表达,包括43个表达下调和22个表达上调的miRNA。其中miR-34/449家族的6个miRNA和miR-200家族的7个miRNA占所有表达下调miRNAs的30.2%。应用qRT-PCR验证两个miRNA家族中存在差异表达的miRNA,证实有10个miRNA与miRNA芯片结果一致,包括miR-34b-5p、miR-34b-3p、miR-34c-5p、miR-34c-3p、miR-200a-5p、miR-200a-3p、miR-200b-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p、miR-141-3p。与对照组相比,miR-34/449家族和miR-200家族的预测靶基因E-cadherin在哮喘组中呈低表达（P＜0.05）。结论部分miRNA参与了哮喘的发病,其中miR-34/449和miR-200家族可能通过调节E-cadherin的表达参与儿童哮喘的发病,为儿童哮喘的治疗提供新方向。     

miRNA-23b-3p在不明原因复发性流产蜕膜组织中的表达及作用机理研究

目的 研究miRNA-23b-3p在不明原因复发性流产(URSA)蜕膜组织中的表达并分析其可能的作用机制。方法 选取2021年10月至2022年10在内蒙古自治区人民医院因URSA稽留流产行清宫术的患者及无生育计划行人工流产术的正常妊娠者各3例，均收集蜕膜组织。比较两组蜕膜组织中miRNA-23b-3p表达水平，利用生物信息学方法预测miRNA-23b-3p潜在靶基因和相关信号通路。结果 URSA组miRNA-23b-3p的表达水平较正常妊娠人工流产患者明显升高(P<0.01);利用生物信息学方法分析发现，miRWalk、RNAInter和RNA22 3个数据库具有2 359个miRNA-23b-3p的靶基因交集；通过GO及KEGG功能富集及信号通路分析，miRNA-23b-3p靶基因主要富集于Wnt信号通路(P<0.05),并且2 359个交集靶基因中38个靶基因富集于Wnt信号通路。结论 蜕膜组织中miRNA-23b-3p可能通过调控Wnt信号通路参与URSA发生发展，为后续URSA防治策略研究提供了新的思路和靶点。     

肾透明细胞癌相关特异miRNAs的筛选及分子网络调控机制分析

目的 miRNAs(microRNAs)是肿瘤重要的调节因子,对细胞增殖、细胞周期的控制、逃避细胞凋亡、组织侵袭及转移、血管形成、无限复制潜力均起到重要的调节作用。文中对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)与癌旁正常肾组织的差异miRNAs表达谱进行分子网络调控机制分析,找到关键miRNA并验证其靶基因。方法通过TargetScan预测得到差异miRNA调控的所有靶基因,并在筛选后利用GO显著性功能分析和KEGG Pathway显著性分析,构建差异miRNA与靶基因的调控网络。筛选关键miRNA及其靶基因,对miR-199a-5p调控的靶基因进行验证。结果 miR-22、miR-199a-5p、miR-429是调控网络的关键miRNA。转化生长因子β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGFBR1)、jun B原癌基因(jun B proto-cologene,JunB)是miR-199a-5p的靶基因。结论 miR-199a-5p通过抑制TGFBR1、JunB的表达在ccRCC进展过程中起到重要的调控作用。