大黄中游离蒽醌类化合物在实验性急性胰腺炎大鼠的组织药理学研究

目的：研究熟大黄主要成分在急性胰腺炎大鼠模型体内靶向分布情况,以验证方剂组织药理学假说。方法：采用正常SD大鼠（正常组,n=5）、蛙皮素腹腔注射建立急性胰腺炎模型大鼠（模型组,n=5）作为实验对象。熟大黄颗粒剂（20 g·kg^-1）每周灌胃2组大鼠1次,2 h后取心、肝、脾、肺、肾、胰腺等6个组织,运用高效液相色谱-质谱法测定各组织匀浆中熟大黄中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素等成分谱及其浓度。结果：除熟大黄的芦荟大黄素和大黄素甲醚在正常大鼠肝脏和肾脏内的浓度高于胰腺组织内的浓度之外,胰腺组织内各个成分的分布谱及浓度并与其他的器官没有明显差异;熟大黄中的大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚在急性胰腺炎模型大鼠胰腺组织中的浓度高于其他组织器官,且在胰腺、肾、脾组织内的浓度明显高于正常组。结论：在急性胰腺炎的状态下,熟大黄的有效成分在胰腺具有靶向分布特点,为方剂组织药理学假说提供了实验依据。     

基于支持向量机的5种大黄苷元治疗脑缺血的配伍研究

目的筛选大黄中5种能够治疗脑缺血的大黄苷元(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的最佳配伍。方法采用均匀设计法将大鼠分为14组,每组15只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,以神经功能症状评分、脑梗死面积为指标,探讨不同配伍的大黄苷元对脑缺血大鼠的影响,同时基于支持向量机(SVM)建立大黄苷元药效预测模型。结果经SVM回归分析,得到大黄苷元最优配伍为芦荟大黄素6.653 4 mg/kg、大黄酸26.000 8 mg/kg、大黄素11.004 2 mg/kg、大黄酚3.841 4 mg/kg和大黄素甲醚3.862 0 mg/kg。结论不同配比的大黄苷元能有效改善大鼠脑缺血的各个指标,采用均匀设计结合SVM的模拟预测方法优选出了5种大黄苷元组分的最佳配比。     

外翻肠囊法研究肝豆汤醇提物主要成分的肠吸收特征

为了探究复方肝豆汤醇提物中主要化学成分的肠吸收特性,该文采用大鼠外翻肠囊模型,选择肝豆汤醇提物中盐酸小檗碱、槲皮素、山柰素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素6种主要成分作为考察对象,评价各成分在不同肠段的吸收特征。结果表明,肝豆汤醇提物中6种成分均可进入肠囊,在高、中、低3种不同质量浓度的肝豆汤醇提物中,盐酸小檗碱、槲皮素、山柰素3种成分在不同肠段的吸收均为线性吸收,符合零级吸收速率,且在空肠与回肠中吸收速率常数K_a随着剂量增加均增加(P0.05),符合被动吸收;而大黄酸在空肠和回肠中的K_a随着剂量增加并无显著性差异,符合主动转运。大黄酚和芦荟大黄素2种成分在肠段中吸收均较差。提示肠囊对肝豆汤醇提物中药物成分吸收具有选择性,各成分在肠囊中的吸收特征并不完全相同。     

Interaction of five anthraquinones from rhubarb with human organic anion transporter 1 (SLC22A6) and 3 (SLC22A8) and drug–drug interaction in rats

Ethnopharmacological relevance

Rhubarb is a well-known traditional Chinese medicine and has been used in China for thousands of years. Anthraquinone derivatives including rhein, emodin, aloe-emodin, chrysophanol and physcion are the important components in rhubarb.

Materials and methods

Here we studied the interaction of five anthraquinone derivatives with human renal organic anion transporter 1 (hOAT1) and hOAT3 stably expressed in cells, and interaction of rhein or rhubarb extract (RE) with furosemide (FS, substrate of OATs) in rats.

Results

Uptake of 6-carboxyl fluorescein via hOAT1 and fluorescein via hOAT3 were markedly inhibited by rhein, emodin and aloe-emodin, and slightly inhibited by chrysophanol and physcion. The estimated IC₅₀ values for rhein, emodin, aloe-emodin and probenecid (typical inhibitor of hOAT1 and hOAT3) were 0.23, 0.61, 2.29 and 18.34 μM for hOAT1, and 0.08, 1.22, 5.37 and 5.83 μM for hOAT3, respectively. Furthermore, the data from the cellular accumulation assay indicated that these five compounds were not substrates of hOAT1 or hOAT3. Pharmacokinetic interaction between rhein and FS in rats showed that area under the curve (AUC_0–t) for FS was increased by 65% when coadministrated with rhein. RE was also used to interact with FS in rats and results showed that AUC_0–t of FS was increased by 32% and by 52% when coadministrated with single-dose or multiple-dose of RE, respectively.

Conclusions

These findings suggested that five anthraquinones inhibited hOAT1 and hOAT3, but these compounds were not transported by hOAT1 or hOAT3. Furthermore, rhein or RE, might cause drug–drug interaction when coadministrated with substrates of OAT1 or OAT3 in vivo.     

A comparative study on the tissue distributions of rhubarb anthraquinones in normal and CCl4-injured rats orally administered rhubarb extract

Aim of the study

The present study comparatively investigated the tissue distributions of rhubarb anthraquinone derivatives (AQs) to examine whether they undergo different uptakes in normal or CCl₄-induced liver-damaged rats, to explore possible reasons for the different toxicities of AQs in pathological model rats and normal rats at the tissue distribution level.

Materials and methods

The total rhubarb extract (14.49 g kg⁻¹ of body weight per day based on the quantity of crude material) was administrated orally to normal and model rats for 12 weeks. The concentrations of free AQs in tissues were quantitated by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS). After drug withdrawal for 4 weeks, tissue distributions were again determined.

Results

The five free AQs—aloe-emodin, rhein, emodin, chrysophanol and physcion—were detected in the liver, kidney and spleen, while only rhein, aloe-emodin and emodin reached the quantitative limit. The tissue distributions of rhein (p < 0.001), aloe-emodin (p < 0.001) and emodin (p < 0.05) in normal rats were higher than those in model rats with rhein > aloe-emodin > emodin in kidney and spleen tissues and aloe-emodin > rhein > emodin in liver tissues. Free AQs were not detected in the tissues after drug withdrawal for 4 weeks.

Conclusions

These results suggest that the tissue toxicity of AQs in normal animals is higher than that in pathological model animals with little accumulative toxicity of rhubarb. The results are concordant with the traditional Chinese theory of You Gu Wu Yun recorded first in Su Wen, a classical Chinese medical treatise.     

肝细胞亲和色谱法体外筛选大黄降脂活性成分研究

目的：评价大黄蒽醌类成分体外降脂活性及筛选其药效成分,探讨其在细胞内的成分代谢。方法：采用体外HepG2细胞系脂肪变性模型评价大黄蒽醌类成分降脂活性,采用肝细胞亲和色谱法筛选大黄蒽醌类细胞亲和成分,以HPLC法及HPLC-Q-TOF-MS法检测鉴定亲和成分。结果：与正常组相比,建立的体外肝细胞脂肪变性模型组细胞内三酰甘油（TG）含量显著升高（P<0.05）,与模型组比较,不同浓度的五种大黄蒽醌类成分作用后给药组细胞内TG含量均显著降低（P<0.05）,呈剂量效应关系;肝细胞亲和色谱法筛选出大黄提取液特异性亲和色谱成分主要有4个,分别为芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚四个化合物,而大黄酸发生了细胞内代谢。结论：大黄蒽醌类5种成分均具有体外降脂活性,芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚以原型的形式体外肝细胞降脂,而大黄酸可能以细胞内代谢为芦荟大黄素形式降脂。本研究建立了肝细胞亲和色谱法与体外肝细胞降脂活性评价的联用技术,实现了中药成分体外降脂活性评价,药效成分体外代谢的一体化研究,为大黄蒽醌类调脂药物开发提供科学依据。     

大蒜硝黄膏中大黄游离蒽醌类成分体外经皮渗透实验研究

目的 研究大蒜硝黄膏中大黄游离蒽醌类成分体外透皮吸收特性,并考察不同赋形剂（醋、姜汁、植物油）和不同配伍对大黄透皮特性的影响。方法 以大黄中游离蒽醌类成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为指标,采用体外透皮吸收实验法研究。结果 不同赋形剂和不同配伍条件下,大黄游离蒽醌类成分的透皮吸收均以零级动力学进行;以醋为赋形剂,各成分的8 h累积透过量和透皮速率均高于姜汁和植物油;不同配伍实验中,全方中各成分的8 h累积透过量和透皮速率最高,大黄芒硝配伍组略低,大黄大蒜配伍组次之,大黄组最低。结论 大蒜硝黄膏赋形剂以醋为最优,其次是姜汁,植物油最差。大蒜、芒硝对大黄游离蒽醌类成分的透皮吸收均有促进作用,芒硝的作用优于大蒜。     

Identification of the multiple bioactive derivatives and their endogenous molecular targets that may mediate the laxative effect of rhubarb in rats

ObjectiveTo determine the mechanism of the laxative effect of rhubarb (Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.) in rats using a combined bioinformatic and in vivo approach.MethodsSubstances derived from rhubarb that are present in the colorectum were identified using high-performance liquid chromatography, coupled with linear ion-trap quadrupole Orbitrap high-resolution mass spectrometry. The targets with a potential laxative effect were identified from databases and the literature, then used with rhubarb-derived substances in molecular docking modeling. The expression of candidate endogenous target molecules that bound specific components of rhubarb was then measured in constipated rats that had or had not been administered rhubarb by western blotting. Finally, potentially bioactive compounds were traced back to their prototype components.ResultsWe identified 17 anthraquinones and 21 anthrones derived from rhubarb in the colorectum of rats. G-scoring identified three potential mediators of the laxative effect: c-kit, 5-hydroxytryptamine receptor 4 (5-HT4), and aquaporin-3 (AQP3). In addition, 10 rhubarb-derived components (aloe-emodin, emodin, rhein, chrysophanol, physcion, sennoside A, sennoside C, physcionanthrone, aloe-emodinanthrone, and rheinanthrone), which have strong binding affinities for more than one of the three potential targets, were selected as likely active compounds. Rhubarb extract increased the expression of c-kit and 5-HT4, and reduced the expression of AQP3 in the colon of constipated rats, which might mediate its laxative effect. We also found that a single prototype component may be metabolized into several active metabolites, and a single active ingredient can also be generated from various prototype compounds.ConclusionThe present study demonstrates that various anthraquinones and anthrones present in rhubarb may be metabolized to form bioactive compounds that have additive or synergistic effects to promote defecation via c-kit, 5-HT4 and/or AQP3.     

3种大黄饮片在贮存过程中5种蒽醌成分的含量变化

目的:分析生大黄、酒大黄和熟大黄3种大黄饮片在贮存中过程中5种蒽醌成分的含量变化。方法:采用超高效液相色谱仪,分别对贮存1,3,6,9和12月的生大黄、酒大黄和熟大黄中的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量进行检测。结果:检测的5种蒽醌成分在3种大黄饮片的贮存过程中均呈明显的下降趋势,其中以大黄酚和大黄素甲醚含量下降最为明显。3种饮片中熟大黄的蒽醌成分含量下降较小,而酒大黄的蒽醌成分含量下降最为明显。结论:大黄饮片在贮存过程中蒽醌成分下降明显。炮制工艺的不同对大黄饮片贮存中蒽醌成分含量变化有影响。     

酒制对大黄中游离蒽醌在大鼠体内组织分布的影响

传统炮制理论指导思想"酒制升提",大黄经过炮制成为饮片酒大黄治疗上焦病症,如目赤肿痛,口舌生疮等疾病,炮制前后大黄药性的改变使得其临床应用侧重点不同,为研究中药炮制理论的科学内涵,该文同时建立测定大鼠组织中芦荟大黄素、大黄酸和大黄素的液-质联用方法,通过分别灌胃给予SD大鼠大黄生品和酒制品水煎液,采用LC-MS测定组织(心、肺、脑、肝、肾)中芦荟大黄素、大黄酸和大黄素的含量,探讨酒制对大黄中游离蒽醌成分在大鼠体内组织分布的影响。试验结果显示大黄酒制能明显改变芦荟大黄素、大黄酸和大黄素在大鼠体内的分布,其中各成分在心与肺组织中的分布增加,在肝和肾中的分布与生品组相比变化不大,而在脑中没有检测到3种成分,提示芦荟大黄素、大黄酸、大黄素不能透过血脑屏障。酒制对大黄中游离蒽醌成分在大鼠体内的药物组织分布有较大影响,这也验证了传统中医理论,酒大黄多用于治疗上焦病症,该研究结果为探讨大黄炮制机制提供了实验依据。     

生长年限、海拔和光照对大黄中8种成分量的影响研究

目的分析生长年限、海拔、光照因素对大黄中蒽醌和鞣质类等8种成分量的影响,为大黄种植最佳生长条件的选择提供理论依据。方法采用HPLC法同时测定人工种植的54批药用大黄样品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、(+)-儿茶素8种成分的量,并采用方差分析进行不同生长年限、不同海拔、不同光照环境(阴坡、阳坡)与各成分量的相关性分析。结果 1、2、3年生的游离型蒽醌质量分数平均值分别为4.26、5.18、8.10 mg/g,结合型蒽醌质量分数平均值分别为4.67、5.62、6.76 mg/g,(+)-儿茶素质量分数平均值分别为3.12、4.18、4.72mg/g。在海拔(1 300±50)、(1 500±50)、(1 700±50)m 3个不同的范围,1年生与2年生和3年生比较,大黄中8种成分的量有极显著性差异(P0.01)。在3个不同的生长年限之中,海拔(1 300±50)m处的大黄中8种成分的量与(1 500±50)m和(1 700±50)m处大黄比较,有极显著性差异(P0.01)。在3个不同的生长年限和3个不同海拔范围,阴坡和阳坡的大黄中8种成分的量相比,无显著性差异(P0.05)。结论在同一生长年限,随海拔的升高,以及同一生长海拔范围,随生长年限的增加,大黄中蒽醌和鞣质类的量都呈现明显的上升趋势,有显著性差异。而光照(阴坡、阳坡)不同时,大黄中蒽醌和鞣质类的量无显著性差异,但其蒽醌和鞣质类量的均数阳坡高于阴坡。大黄人工种植宜选择海拔在1 400 m以上,生长年限不低于3年,阳光直接照射的阳坡环境,有利于提高药用大黄中蒽醌和和鞣质类化学成分的总量。     

大黄泻下效应的药理学新解释

大黄以"泻下"效应著称,其效应部位在结肠、且与"水"密切相关,对大黄蒽醌衍生物构效关系分析证实,具有1,8-二羟基且在2,3,6或7位没有羟基的蒽醌苷(emodin,rhein,chrysophanol)能产生较强的"水泻作用";结肠上皮细胞AQP丰富表达,AQPs表达异常可能导致结肠对水的吸收减少和/或肠液分泌增加,这可能是以结肠为主要药理效应部位的药物(泻下药)重要的效应分子之一,为大黄"泻下"功效的药理效应机制研究提供了新视角。大黄这一"水泻作用"是否与结肠AQP变化有关。通过对中医药理论、大黄功效与药理和AQPs研究资料分析,认为大黄对结肠AQP的调节效应可能是其"泻下"功效的药理学新解释,亦可能是大黄具有多重功效的缘由。     

中药大黄主要有效成分药理学研究进展

大黄蒽醌类衍生物主要包括芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚及大黄酸。其中芦荟大黄素能抗菌、防护肝损伤及抗癌等,大黄酚能"泻下"及改善学习记忆,大黄素能抗菌、调节胃肠蠕动、调节血液系统生化指标及护肝等,大黄酸能抗肿瘤及抗炎等,大黄素甲醚能防护肝损伤及减轻缺血—再灌注损伤等。     

双柏喷膜剂塑料包材吸附性研究

目的 考察3种医用塑料包材对双柏喷膜剂中各成分的吸附性,选择合适双柏喷膜剂的包装材料。方法 将双柏喷膜剂分装在聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）、聚丙烯（PP）、高密度聚乙烯（HDPE）塑料喷雾瓶中,分别进行影响因素试验与常规留样试验,分别对样品溶液进行性状检查、喷瓶材料性质考察、喷瓶内部颜色检查,筛选较佳包材进行相容性长期试验,观察喷瓶内壁颜色变化以及采用HPLC法测定药物质量浓度和瓶壁吸附药物的量。结果 3种包材载药后颜色变化程度：HDPE＞PP＞PET,PP瓶出现硬度、冲击强度下降;PET瓶对蒽醌类成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等产生微量吸附,其他成分均未产生吸附;贮存在PET瓶中的双柏喷膜剂,各成分除在水溶液中不稳定的大黄酚、大黄素甲醚外,其他药物的量均稳定。结论 PET适宜作为双柏喷膜剂的包装材料。     

“一测多评”法用于栀子金花丸多成分含量测定的可行性研究

目的：利用一个对照品同步测定栀子金花丸中10种成分的含量,探讨“一测多评”技术在中成药不同类型化合物质量评价中应用的可行性。 方法：以栀子金花丸为研究对象,采用高效液相色谱法,以大黄素为内参物,在254 nm检测波长下,建立小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚与大黄素间的相对校正因子。采用外标法测定栀子金花丸中大黄素的含量,通过待测成分间的相对校正因子计算栀子金花丸中其他9种成分的含量;并将“一测多评”法的计算值与外标法实测值用相对误差进行评价,以验证“一测多评”法的技术可行性和方法适用性。 结果：2种计算结果没有显著性差异,相对误差<5%。 结论：“一测多评”的质量评价模式可用于栀子金花丸中3种不同类型化合物的多指标同步质量评价。     

HPLC法同时测定舒血通合剂中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量

目的:建立血舒通中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定方法。方法:采用Phenomenex-C18(5μm,4.6mm×250mm)柱,以甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相(75:25),流速:1.0mL.min-1;柱温:30℃;检测波长254nm。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚线性范围分别为1.705～34.104、3.220～64.400、2.180～43.600、1.771～35.422、0.459～9.182μg.mL-1,与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为100.32%、101.29%、100.77%、99.84%、100.02%,RSD分别为2.07%、2.01%、2.25%、1.75%、2.47%。结论:该方法可作为舒血通中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量测定的一种准确、灵敏、可行的方法。     

HPLC法测定清热解毒方芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定清热解毒方中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:KromasilC₁₈(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸(85∶15)为流动相,流速:1.0mL·min^-1,检测波长:254nm,柱温:35℃。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.0125～16.2μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、0.625～10μg范围内呈良好线性关系,相关系数分别为0.9991,0.9998,0.9997,0.9994,0.9996,平均回收率分别为101.4%,102.0%,101.7%,102.1%,100.8%。结论:该方法操作简单、准确,且重复性好,可作为清热解毒方质量的控制指标之一。     

《中华人民共和国药典》大黄总蒽醌含量测定方法的改进

目的:对《中华人民共和国药典》中大黄药材含量测定项下总蒽醌测定方法进行改进,并与药典方法进行对比分析,确定改进方法的可行性。方法:将大黄总蒽醌提取方法中的双相水解改为单相水解,并采用HPLC法测定大黄药材中总蒽醌含量。色谱条件：色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇-0....     

大黄中4种蒽醌类化合物抑幽门螺杆菌效果比较

 目的:对4种大黄蒽醌化合物抑制幽门螺杆菌( Helicobacter pylori )进行实验研究。方法:用梯度碱提取法，将大黄中的4种蒽醌类化合物提取，然后用试管稀释法和纸片扩散法，分别观察其对幽门螺杆菌的抑菌效果。结果:4种大黄蒽醌，最低抑菌浓度及抑制幽门螺杆菌环分别为:大黄素(emodin) 0.40μg· ml^{-1(30mm,强)、大黄酸(rhein)0.60μg·ml-1(28mm,强)、大黄酚(chrysophanol ) 0.78μg·ml-1(24mm,强)、芦荟大黄素(aloe-emodin)0.85μg·ml-1(23mm,强)。衬照品大黄提取物(Rheum officinale extracts)仅为17.24μg·ml-1(15mm，中)。空白对照为灭菌注射用水，无抑菌环，幽门螺杆菌生长正常。结论:4种大黄蒽醌类化合物对幽门螺杆菌均有较强的抑制生长作用。}