胃癌肿瘤裂解物修饰的树突状细胞体外诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞

目的　利用树突状细胞呈递肿瘤抗原的特性提高细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)对胃癌细胞的杀伤活性。方法　胃细胞癌患者外周血来源的有核细胞体外经GM -CSF和IL -4诱导产生树突状细胞 ,负载肿瘤裂解物后诱导自体CTLs产生。用细胞毒试验检测CTLs杀伤活性 ,和用ELISA测定细胞因子的分泌。结果　胃癌患者自体来源的DC裂解物能诱导产生的CTLs对自体胃癌细胞具有高杀伤率 ,可达 83 % ;致敏的DC组中IL -12与TNF -α的浓度 ( 1161± 2 3 9pg/ml,10 44± 3 12 pg/ml)显著高于未致敏的DC组 ( P <0 .0 5 )。结论　DC能呈递胃癌裂解物 ,诱导产生抗原特异性CTLs。     

肺癌抗原负载的树突细胞体外诱导细胞毒性T淋巴细胞的杀瘤作用

目的探讨不同方式肺癌抗原负载的树突状细胞(DC)在抗肿瘤免疫中的作用。方法取肺癌患者外周静脉血体外诱导和培养DC,分别以肺癌细胞总RNA转染DC(转染组)、肺癌细胞融合DC(融合组)和肺癌细胞冻融抗原负载DC(冻融组),以未负载抗原的DC(未负载组)和T细胞组作为对照,比较各组(每组n=6)DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肺癌细胞A_(549)的杀伤率(%)。结果转染组、融合组、冻融组、未负载组和T细胞组的杀伤率分别为(73．2±5．9)%、(61．6±6．2)%、(55．3±6．9)%、(22．3±6．1)%和(19．8±6．3)%(P＜0．05)；其中转染组、融合组和冻融组高于未负载组和T细胞组(P＜0．05)；转染组和融合组之间差异无统计学意义(P＞0．05),但两者均大于冻融组(P＜0．05)。RNA转染DC所需的肿瘤细胞数仅是冻融及融合方式的1/5和1/6。结论3种肺癌抗原负载DC方式均有诱导效应细胞杀伤靶细胞的增效作用,而以肺癌细胞总RNA转染方式为佳。     

人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物负载树突状细胞对体外免疫应答的影响

目的:研究人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物对体外免疫应答反应的影响.方法:体外诱导培养人脐血树突状细胞(DC).人卵巢癌细胞SKOV3分别用光动力学方法(激光照射)及冻融的方法制备细胞裂解物,与DC共培养48 h,RPMI1640与DC培养作为阴性对照,采用流式细胞仪检测DC免疫表型CD1a、CD80、CD86、HLA-...     

不同类型肿瘤抗原致敏的树突状细胞体外诱导前列腺癌特异性CTL的研究

目的:研究肿瘤冻融抗原及弱酸洗脱提取的肿瘤抗原肽分别冲击致敏树突状细胞(dendritic cells,DCs)体外诱导前列腺癌特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的效应。方法:采用反复冻融法和弱酸洗脱法,分别获取前列腺癌细胞株PC-3的肿瘤抗原,应用重组人GM-CSF、IL-4体外培养诱导外周血单个核细胞获得DC,并分别负载两种前列腺癌肿瘤抗原,检测其体外激活肿瘤特异性CTL的能力,用LDH释放法检测其对PC-3的体外杀伤效应。结果:用枸橼酸-磷酸盐缓冲液洗脱或反复冻融PC-3(2×107)后获得的肿瘤抗原蛋白含量分别为(312.2±7.9)μg和(963.0±25.3)μg,负载两种前列腺癌细胞抗原的DCs致敏的CTL对PC-3细胞有明显的杀伤作用,而且负载弱酸洗脱提取的肿瘤抗原肽的DCs致敏的特异性CTL具有更明显的杀伤作用[(60.4±5.52)%vs(43.7±4.11)%,P<0.01)]。结论:弱酸洗脱和反复冻融方法都可以有效获取前列腺癌抗原,用于体外致敏DCs后,均具有活化CTL的能力,而且弱酸洗脱提取的肿瘤抗原肽更为有效。     

肝癌特异性细胞毒T淋巴细胞的实施及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞，观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其扩上癌术后复发的临床应用价值。方法用细胞因子体外周期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８产市民人刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化随访其术后复发情况。结果，体外研究表明，肝癌细胞经ＩＮＦ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＯＤ     

超抗原诱导细胞毒性T淋巴细胞抗膀胱肿瘤效应的研究

研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ａ对淋巴细胞激活,增殖的作用及对Ｅ－Ｊ膀胱肿瘤细胞的抑癌效应。方法：分离健康供血者的Ｔ淋巴细胞,加ＳＥＡ培养其活化增殖,用ＭＴＴ显色法测定细胞毒性Ｔ淋巴细胞的细胞增殖动力学及对Ｅ－Ｊ膀胱细胞体外肿瘤的作用。     

肝癌特异性细胞毒 T 淋巴细胞的实验及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＴＳ－ＣＴＬｓ），观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其抗肝癌术后复发的临床应用价值。方法：用细胞因子体外短期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８单抗共刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化并随访其术后复发情况。结果：体外研究表明，肝癌细胞经ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＩ类分子，ＩＣＡＭ－１及Ｂ７分子的表达增高，用此细胞辅以ＣＤ２８单抗刺激诱导产生的ＴＳ－ＣＴＬｓ体现了高度的对自体肝癌的杀伤活性及特异性，其杀伤活性由ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＣＤ８、ＬＦＡ－１、ＩＣＡＭ－１及ＭＨＣＩ类分子所介导。体内研究的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬｓ对ＳＣＩＤ小鼠人肝癌模型具有显著的抑瘤作用。１２例初步临床应用的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬ对于提高机体的Ｔ细胞免疫功能，对于预防肝癌术后复发均具有良好作用，值得进一步深入研究和应用。结论：ＴＳ－ＣＴＬｓ作为一种新的肿瘤特异性免疫治疗方法可望进一步提高肝癌和其它实体肿瘤的外科综合治疗水平。     

细胞毒T细胞功能缺陷与肾癌的免疫逃逸

肾癌(RCC)是一种高度恶性的肿瘤，有多耐药性，对传统的化疗、放疗不敏感。但又是一种免疫原性的肿瘤，对以IL-2或／和干扰素(IFN)为基础的细胞因子治疗有一定的反应，但治疗的反应率仅为15％～20％。过继免疫治疗也并未显示出更好的疗效。肿瘤能够通过多种机制逃避机体的免疫监视是目前免疫治疗效果不理想的主要原因。细胞免疫，特别是抗肿瘤特异性的细胞毒T细胞(CTL)是机体主要的抗肿瘤免疫，RCC可以通过免疫原性的改变、抑制CIL的活化与增殖、拮抗CIL的杀伤效应和诱导其凋亡等途径实现免疫逃逸。进一步阐明发生逃逸的机制有助于提高免疫治疗的疗效。     

细胞毒T细胞功能缺陷与肾癌的免疫逃逸

肾癌(RCC)是一种高度恶性的肿瘤,有多耐药性,对传统的化疗、放疗不敏感.但又是一种免疫原性的肿瘤,对以IL-2或/和干扰素(IFN)为基础的细胞因子治疗有一定的反应,但治疗的反应率仅为15%～20%,过继免疫治疗也并未显示出更好的疗效.肿瘤能够通过多种机制逃避机体的免疫监视是目前免疫治疗效果不理想的主要原因.细胞免疫,特别是抗肿瘤特异性的细胞毒T细胞(CTL)是机体主要的抗肿瘤免疫,RCC可以通过免疫原性的改变、抑制CTL的活化与增殖、拮抗CTL的杀伤效应和诱导其凋亡等途径实现免疫逃逸.进一步阐明发生逃逸的机制有助于提高免疫治疗的疗效.     

乳腺癌细胞抗原负载的自体树突状细胞体内诱导特异性T细胞应答

目的 以乳腺癌细胞抗原体外负载自体树突状细胞(DCs)对24例乳腺癌患者进行自身免疫,探讨其体内诱导特异性T细胞免疫应答的能力.方法 新鲜癌组织制备成热休克凋亡细胞抗原负载外周单核细胞来源DC,分别在采血后第1、2、4、6周于患者腹股沟淋巴结富集区进行皮内注射,细胞剂量为4×10+～6×106/次.结果 DC免疫治疗后患者血清抗瘤免疫因子水平明显上升:白细胞介素(IL)-2治疗前为(33.8±7.2)ng/L,治疗后为(68.5±12.4)ng/L;IL-12治疗前为(48.5±10.9)ng/L,治疗后为(118.2±31.5)ng/L;肿瘤坏死因子(TNF)-α治疗前为(18.7±5.3)ng/L,治疗后为(78.3±11.5)ng/L;干扰素(IFN)-γ治疗前为(20.5±6.3)ng/L,治疗后为(92.6±14.9)ng/L,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01);DTH试验阳性率为7/10;4/10例IFN-γ+CD8+T细胞频率较治疗前明显增加.随访发现:除1例患者在治疗后3个月内疾病进展(PD),其余患者病情稳定无复发与转移症状(SD).结论 以乳腺癌细胞为抗原负载自体DC免疫患者,能够有效提高患者非特异免疫水平,激发体内特异性T细胞免疫应答,是一种安全、副反应较小、有效的乳腺癌辅助治疗手段.     

肾癌合并静脉瘤栓的外科治疗效果观察

目的 观察肾癌根治性切除加瘤栓取出术治疗肾癌合并静脉瘤栓的效果。方法 总结8例肾脏恶性肿瘤合并静脉瘤栓患者的临床及病理资料。男7例，女1例。平均年龄58岁。右侧7例，左侧1例。Robson分期Ⅲ期5例，Ⅳ期3例。瘤栓类型：肾静脉型1例，肝下型4例，肝上型3例。结果 7例患者行肾肿瘤根治性切除加瘤栓取出术，1例行右肾肿瘤及右肾上腺根治性切除术，腔静脉瘤栓放射治疗。1例瘤栓达右心房者术中死亡。随访7例，3例分别存活2、4和22个月，均死于远隔转移。4例术后已随访12、14、25和47个月者现仍无瘤存活。结论 肾肿瘤根治性切除加瘤栓取出术是治疗肾癌合并静脉瘤栓的有效方法。     

生长抑素与肾癌的关系及肿瘤坏死因子的影响

为探索肾癌生物治疗的新途径，将肾癌细胞接种于裸鼠背部皮下，荷瘤裸鼠随机分为３个ＴＮＦ组及２个对照组。给药后第３天取血０５～０８ｍｌ，及移植瘤、瘤旁及正常组织各１ｇ，放射免疫法测定组织标本中生长抑素（ＳＳ）浓度。结果：肿瘤组织、对照组肿瘤旁、正常组织中ＳＳ浓度（ｐｇ／ｍｌ）依次为０．６７３、０９００、０５１４；ＴＮＦ组分别为０．７９１、０８７０、１０４３。结论：肾癌生长（对照组）时瘤旁组织中ＳＳ浓度最高，而肿瘤及正常组织中较低，提示瘤旁组织具有抑制肿瘤生长的作用。应用ＴＮＦ后ＳＳ含量以正常组织中最高，瘤旁及肿瘤组织较低。表明ＴＮＦ不但对肿瘤有直接杀伤作用，而且能促进机体增强抑制肿瘤生长、扩散作用。     

肾癌腔静脉转移的诊断与治疗

目的：提高肾癌伴下腔静脉癌栓的诊疗水平。方法：总结12例肾癌并发腔静脉转移患者的诊疗情况。结果：12例患者中,手术成功取栓10例,随访4～20个月,9例无瘤生存。行肾动脉栓塞1例,生存3个月。放弃治疗1例,生存2个月。结论：MRI是目前确定癌栓范围的最好方法。对于肾癌伴腔静脉癌栓,只要无远处器官转移,应积极采取手术治疗。     

肾癌伴下腔静脉癌栓的诊断与治疗

目的 探讨肾癌伴下腔静脉癌栓的诊断及治疗。方法 回顾性分析1997年1月至2003年11月21例肾癌伴下腔静脉癌栓患者资料，男13例，女8例，平均年龄50岁。右侧13例，左侧8例。临床表现主要为腰痛和（或）血尿。经彩色多普勒超声、CT和MRI确诊。Ⅰ型癌栓3例，Ⅱ型10例，Ⅲ型6例，Ⅳ型2例。其中行肾癌根治术加下腔静脉癌栓取出术15例，肾癌根治术加下腔静脉节段切除术4例。结果 19例手术者中，8例术后仅存活3～13个月，11例随访4～57个月至今，无瘤生存8例，带瘤生存3例。2例未行手术者分别于3、5个月后死亡。结论 彩色多普勒超声、CT和MRI对肾癌伴下腔静脉癌栓诊断率较高，可准确判断癌栓位置。对无淋巴结和远处转移者，积极行肾癌根治术加下腔静脉癌栓取出术或下腔静脉节段切除术治疗效果满意。     

肾癌树突状细胞疫苗的体外活性研究

目的 探讨负载人肾癌细胞抗原肽制备树突状细胞(DC)疫苗体外杀伤肾癌细胞的作用.方法 利用细胞膜酸洗脱法获得人肾透明细胞癌细胞株786-0细胞表面抗原肽.外周血单个核细胞在体外经人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子,白细胞介素4和脂多糖诱导获得成熟的DC,并负载分离到的抗原肽制备DC疫苗.利用疫苗体外诱导出特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)作为实验组.同时设置4个对照组,对照组1用未负载抗原肽的DC和单个核细胞混合培养,对照组2用单个核细胞进行培养,对照组3用抗原肽与单个核细胞混合培养,对照组4用未负载抗原肽的DC单独培养.4个对照组也加入同实验组相同的各种因子进行培养.51Cr释放法检测特异性CTL的杀伤活性.结果 疫苗诱导的特异性CTL对肾癌细胞的杀伤活性为(31.93±5.05)%,与对照组(5.88±2.26)%、(8.03±6.70)%、(9.70±2.09)%、(9.35±3.58)%相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 负载抗原肽的DC疫苗体外试验有高效的抗肾癌细胞活性.     

趋化因子在树突状细胞肿瘤疫苗研究中的进展

趋化因子是一类调节免疫细胞定向迁移的细胞因子,其与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥生物学功能.树突状细胞(DC)是重要的专职抗原递呈细胞,其主要的应用是制备成各种肿瘤疫苗,树突状细胞功能的行使与趋化因子及其受体介导的细胞迁移密切相关,趋化因子在树突状细胞游走与迁徙过程中始终发挥着调节、促进或抑制的作用,从而促使树突状细胞递呈抗原、激活初始T细胞,引起机体免疫反应,杀伤、消灭肿瘤细胞和炎性分子.     

肾细胞癌浸润淋巴细胞的杀伤肿瘤活性测定及表型分析

采用Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ方法从１９例ＲＣＣ中成功地分离到１７例ＴＩＬ，经１９天培养，ＴＩＬ数量平均达１．０４×１０~（１１）个细胞。杀伤自体肿瘤活性为５７．８７±５．８８％，对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性为３７．３９±１０．８８％，两组间比较差异有非常显著性（Ｐ＜０．０１）。明显高于外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）的杀伤肿瘤活性（２２．３９±８．８４％）。ＴＩＬ中ＣＤ_３和ＣＤ８细胞分别为６９．９３±６．８０％及４０．２１±６．８０％，均明显高于ＰＢＬ中的ＣＤ３和ＣＤ_８细胞（Ｐ＜０．０１）。ＴＩＬ对Ｋ５６２细胞的杀伤活性为２６．８９±１２．７９％，提示活化的ＴＩＬ有显著的杀伤肿瘤活性，且对自体肿瘤细胞的杀伤活性更为显著，其杀伤活性主要由Ｔ淋巴细胞介导。     

T-cell recognition of a prostate specific antigen is not sufficient to induce prostate tissue destruction

METHODS: The ability of CD8(+) T-cells to induce prostate inflammation was examined using a prostate ovalbumin expressing transgenic mouse (POET) and/or adoptive transfer of T-cell receptor (TCR) transgenic T-cells (OT-I) that specifically recognize ovalbumin. Localization of inflammatory cells to prostate tissue was examined following T-cell activation via endogenous prostatic antigen, recombinant type 5 adenovirus carrying the gene coding ovalbumin (Ad5-mOVA), or adoptive transfer of in vitro antigen stimulated OT-I cells. RESULTS: Ovalbumin specific OT-I cells were activated by autologous prostate antigen and trafficked to the prostate, but did not induce inflammation unless present in overwhelming numbers ( approximately 65% of CD8(+) T-cells). Activation of antigen specific CD8(+) T-cells in vitro (peptide pulsed antigen presenting cells) or in vivo (Ad5-mOVA) induced transitory prostate inflammation, without induction of prostate pathology, regardless of CD4(+) T-cell availability. Inflammation also was observed in OT-I x POET mice but again, pathological effects were not observed. CONCLUSIONS: T lymphocytes specific for a prostate antigen are capable of inducing inflammatory infiltration of prostatic tissue rapidly following activation, but do not produce pathological prostate injury.     

肾癌下腔静脉癌栓的诊断和治疗(附8例报告并文献复习)

目的 提高肾癌下腔静脉癌栓的诊治水平。方法 回顾性分析8例肾癌下腔静脉癌栓患者的临床资料。结果 所有病人均明确诊断。手术4例均完整取出癌拴。术后随访9～56个月,其中2例分别于术后34、56个月死于肝转移和骨骼转移,另2例仍健在,存活时间分别为22个月和9个月。结论 影像学检查对诊断十分重要,B超可作为初选手段,NRI对确定下腔静脉内癌柱的大小及延仰程度优于CT。无淋巴结转移及远处扩散者应积极手术治疗。对较大的肾癌,术前可行肾动脉化疗栓塞辅助治疗。癌栓水平除肝上型外对预后影响不大。     

转化生长因子β不敏感的树突状细胞疫苗对肾癌的免疫治疗作用

目的观察转化生长因子β（TGF-β）不敏感、肿瘤细胞裂解物负载的树突状细胞（DC）疫苗对小鼠肾癌的治疗作用。方法利用修饰的TβRII粒构建逆转录病毒载体，转染肾癌Renca细胞裂解物负载的DC，获得表达显性负相TpRII（TpRIIDN）的DC，流式细胞仪测定细胞表型变化，观察TGF-β体外增殖抑制效果，Western blot检测SMAD-2的磷酸化水平。Renea细胞皮下荷瘤BALB／C鼠40只，随机分TβRIIN—DC组、DC-抗原组、DC组和对照组4组，每组10只，分别给予不同的皮下接种，观察肿瘤体积改变和小鼠生存期。结果经方差分析，TβRIIDN—DC组与DC-抗原组，DC、组的DC细胞CD86、CD80，CD40、CD11c及MHC-Ⅱ表型差异无统计学意义（P＞0．05），TGF-β对TβRIIDN—DC细胞的增殖无抑制作用。在TβRIIDN—DC组未检测到磷酸化SMAD-2。TβRIIDN—DC组、DC抗原组、DC组和对照组的小鼠肿瘤体积分别为（36．27±13．09）、（115．51±20．75）、（218．10±18．93）和（239．21±21．82）mm^3，4组荷瘤小鼠生存期分别为（75．6±10．2）、（44．3±8．5）、（19．0±5．4）和（21．2±6．7）d，其中TβRIIDN—DC组2只小鼠肿瘤完全消失，TβRIIDN-DC组肿瘤体积及荷瘤小鼠生存期与其他各组比较差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论TGF-β不敏感的DC疫苗对肾癌荷瘤BALB／C小鼠有明显的免疫治疗作用。