电磁脉冲对血管内皮细胞骨架微丝聚合肽肌动蛋白表达的影响

目的研究不同脉冲次数电磁脉冲（electromagnetic pulse,EMP）作用对人脐血管内皮细胞（ECV-304）骨架聚合态肌动蛋白（F-actin）表达的影响。方法EMP采用0、100、200、400次脉冲数各辐照ECV-304细胞,用异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽染色F-actin和PI染色胞核的双标染色法,观察受辐照血管内皮细胞内微丝形态学的变化,记录并测定细胞F-actin的平均荧光强度。结果对照组细胞中的大部分荧光样物质呈弥漫状态,胞膜荧光较弱,胞浆内可见少量肌动蛋白纤维丝,方向不规则。与对照组相比,各暴露组细胞均可见其胞浆中微丝F-actin明显粗大、变长,其间的荧光样物质大多为较长的粗大应力丝,沿细胞纵轴排列较多,细胞内数量和荧光强度明显增加（P〈0.01）,细胞膜结构完整且荧光增强。随着EMP脉冲次数的增加而微丝F-actin表达显著增多,以400次脉冲组最为明显（P〈0.01）。结论EMP可引起血管内皮细胞的骨架F-actin表达增高且存在着一定的量效关系。     

巨细胞病毒对人胚成纤维细胞β肌动蛋白mRNA及微丝的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（CMV）对人胚成纤维细胞（HF）的感染及其对细胞肌动蛋白基因 （β-actin）mRNA表达水平和微丝的影响。方法： 应用细胞形态学、RT-PCR半定量法、透射电镜观察CMV对HF细胞的感染及感染后细胞β-actin mRNA和微丝的变化。结果： 经CMV作用后，HF细胞形态由梭形变粗、变圆甚至脱壁；HF细胞有CMV即刻早期抗原基因(IE)mRNA表达，且随着CMV滴度的增加，IE mRNA相对表达量逐渐升高, 而β-actin mRNA相对表达量逐渐减弱，甘油醛3-磷酸脱氢酶基因 （GAPDH） mRNA表达无明显变化。透射电镜下，在HF细胞核、浆内见到大量CMV病毒颗粒；并有细胞微丝断裂、减少，排列紊乱。结论： CMV能感染HF细胞，并在其中活化复制，且致细胞β-actin mRNA表达水平降低；微丝形态、结构发生改变。     

心脉灵注射液对培养神经细胞谷氨酸损伤的影响

目的:观察心脉灵注射液和MK-801对谷氨酸所致的培养神经细胞损伤的作用。方法:制备培养神经细胞谷氨酸损伤模型,测定上清液中一氧化氮和丙二醛的含量,同时相差显微镜下观察活细胞的形态改变。结果:MK-801和心脉灵液可使谷氨酸致神经细胞形态损伤得到减轻,并可使培养上清液中增高的一氧化氮和丙二醛含量显著低于谷氨酸组。结论:心脉灵液在细胞水平上具有神经元保护作用.     

切应力对联合培养的血管内皮细胞F-肌动蛋白排列的影响

与平滑肌细胞联合培养的血管内皮细胞在静态时形态就开始发生变化,即由单独培养条件下在的多边形到联合培养条件下的长梭形。切应力作用下,联合培养的内皮细胞的形态在较短时间内发生更进一步的变化。F－actintlEylli持细胞形态及使内皮细胞与细胞外基质的粘附上起着重要的作用。为了探讨切应力对联合培养的血管内皮细胞卜肌动蛋白的排列的影响,本文应用平滑肌细胞与内皮细胞联合培养模型,将牛主动脉平滑肌细胞和内皮细胞进行联合培养,待内皮细胞形成单层后,用手行平板流动胜,将内皮细胞置于40dyn／cm’稳定层流切应力之下12、24／…     

缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制

背景：建立人肝细胞体外缺氧再给氧损伤模型,模拟移植器官缺血再灌注损伤,从细胞分子水平探讨缺血再灌注所致纤维形肌动蛋白微丝损伤的机制,目前尚无相关研究报道。 目的：分析缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制。 方法：建立体外大鼠肝细胞缺氧再给氧模型。肝细胞随机分为正常对照组、缺氧再给氧组。缺氧再给氧组又分为缺氧再给氧2 h、缺氧再给氧4 h、缺氧再给氧6 h组(分别为细胞缺氧3 h后再给氧2,4,6 h)。光镜观察细胞形态,电镜观察超微结构的改变,共聚焦激光显微镜观察纤维形肌动蛋白微丝含量变化,Real-time PCR 检测 HSP27、丝切蛋白基因的转录水平,Western blot检测HSP27、丝切蛋白蛋白的表达水平。 结果与结论：光镜下缺氧再给氧各组梭形细胞显著增多,且脱落细胞明显增多;透射电镜下缺氧再给氧组与对照组相比内质网数量明显减少,线粒体密度深,糖原消失;共聚焦激光显微镜可见缺氧再给氧组纤维形肌动蛋白纤维荧光紊乱,形态明显改变,荧光染色明显减弱,平均荧光强度缺氧再给氧各组明显低于对照组(P < 0.05);Real-time PCR和Western blot检测H/R各组HSP27、丝切蛋白基因转录和蛋白表达水平显著低于正常对照组(P < 0.05)。表明缺氧再给氧可能是通过抑制肝细胞内HSP27、丝切蛋白的蛋白表达和基因转录,从而影响纤维形肌动蛋白微丝的正确装配以及减弱纤维形肌动蛋白的正常循环,进而改变纤维形肌动蛋白微丝骨架。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

硒蛋白H减缓谷氨酸对神经细胞损伤的作用

目的探讨硒蛋白是否可以缓解谷氨酸(glutamate,Glu)对神经细胞的损伤。方法利用转入硒蛋白基因的HT-22细胞株(Sel H)和HT-22加空病毒载体细胞株(HT+V)两种细胞株作为研究对象。分别分为:HT+V对照组、HT+V Glu组、Sel H对照组和Sel H Glu组,MTT法处理Glu(4×10~(-3)mol/L)6、10、24 h后检测各组细胞的抑制率,用倒置显微镜、透射电镜观察各组细胞形态及超微结构的变化,采用氧自由基(ROS)特异性标记探针DHE对各组细胞进行标记,用荧光电子显微镜观察ROS标志物的产生。结果 Sel H转染细胞在Glu损伤6、10、24 h后生长抑制率分别为(2.9±0.023)%、(17.3±0.018)%、(20.4±0.029)%,明显低于空载体对照组(P0.05)。倒置显微镜观察显示:HT+V Glu组细胞明显较HT+V对照组减少,细胞体积缩小,皱缩。Sel H Glu组处理后细胞数量虽比Sel H对照组数量减少,但较空载体处理组数量明显增多。透射电镜观察结果显示:与HT+V Glu组相比Sel H Glu组凋亡细胞数目减少,线粒体、内质网的损伤减轻。荧光电子显微镜观察结果显示:Sel H Glu组DHE(特异性标记ROS)染色的平均光密度值(0.024 3±0.001 6)明显低于HT+V Glu组(0.048 0±0.001 6)(P0.05)。结论硒蛋白H可以减缓Glu导致的神经细胞损伤,硒蛋白H可能通过减少受损神经细胞ROS产生实现减缓Glu对神经细胞损伤的作用。     

核F-肌动蛋白和肌球蛋白对受损DNA作用新认识

正据Caridi CP 2018年6月22日(Nature,2018 Jun.20.)报道,美国南加州大学的研究人员发现细胞具有它自己的护理团队和急救室来协助修复受损DNA。大约20年来,DNA重复序列已有了一个不好的绰号:垃圾DNA。解码基因组的科学家们称它们为垃圾DNA是因为他们起初专注于理解单个基因的功能。从此以后,已有研究证实了DNA重复序     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞F-肌动蛋白构筑的影响

目的　探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞抗应力和粘附能力的影响 ,为改进血管内皮细胞种植的组织工程学技术提供生物力学基础。　方法　应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术 ,以静态条件下单独培养的内皮细胞、联合培养的内皮细胞以及切应力作用下单独培养的内皮细胞为对照组 ,研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞骨架F 肌动蛋白构筑的变化。　结果　静态条件下单独培养的内皮细胞的F 肌动蛋白排列松散 ,不规则 ,微丝较细 ;联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白微丝明显增多增粗。切应力作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白发生重排 ,并形成大量沿切应力方向排列的应力纤维 ,且发生重排的时间明显早于单独培养的内皮细胞。　结论　在切应力作用和血管平滑肌细胞的影响下 ,内皮细胞F 肌动蛋白构筑的变化有利于增强内皮细胞的抗应力和粘附能力     

流体切应力作用下中性粒细胞F-肌动蛋白的变化

中性粒细胞担负着机体的防御功能,其生理特点关系着功能实现。由于中性粒细胞的成熟储存与功能发挥是在不同的动力环境中完成的,因而也就存在着不同的环境适应。ｆ－ａｃｔｉｎ的含量与细胞的力学性质有着密切关系。通过对不同在力下Ｆ－ａｃｔｉｎ含量及分布的观察,我们发现：在低切应力范围内随着切应力的升高Ｆ－ａｃｔｉｎ的含量下降,不同的剪工类型所产生的效果有所差异;切应力与ｆ－ＭＬＰ或ＴＮＦ联合作用会使Ｆ－ａｃｔ     

灌流液镁浓度对测定谷氨酸引起的培养神经细胞内钙浓度的影响

Ｍｇ２＋对谷氨酸（ｇｌｕ）受体亚型Ｎ－甲基－Ｄ－门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体通道的阻断作用，早在８０年代就已由电生理实验证实，此后通过荧光测定细胞内游离钙浓度［Ｃａ２＋］ｉ得到进一步证实。令人困惑的是，在研究ｇｌｕ对离休神经细胞作用的文献中，所用缓冲液的...     

雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤

 目的：建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α（estrogen receptor α, ERα）对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用。方法：原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase, NSE）免疫组化染色鉴定神经元的纯度。建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒（V-ERα-RFP-flag）感染经谷氨酸诱导的神经细胞。实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERα mRNA和蛋白表达水平。实验分为3组：（1）对照组：用空慢病毒（V-RFP-flag）感染经谷氨酸诱导的神经细胞;（2）雌激素组：用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;（3）慢病毒组：用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞。流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1（N-methyl-D-aspartate receptor 1, NMDAR1）及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1（vesicular glutamate transporter protein 1, VGLUT1）的变化。结果：成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%。成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERα mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）。与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低（P<0.05）,且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低（P<0.05）,免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少（P<0.01）。结论：雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现。     

脑室注射L-谷氨酸对成年大鼠下丘脑GnRH含量的影响

目的 :观察脑室注射L -谷氨酸 (L -Glu)对成年雄性Wistar大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)含量的影响。方法 :摘取下丘脑组织 ,匀浆化 ,用RIA法检测匀浆上清液中GnRH的含量。结果 :脑室分别注射 0 0 1176、0 1176、1 176 0 μg/ 2 0 μl-1 -1L -Glu后 40分钟 ,下丘脑GnRH含量依次为 1 5 9± 0 41、0 88± 0 34、0 70± 0 42ng/ 10mg湿重 ,均显著低于盐水对照组 (P <0 .0 1) ;脑室注射 0 1176 μg/ 2 0 μl-1·-1L -Glu后 2 0、40、12 0分钟 ,下丘脑GnRH含量依次为 0 99± 0 37、0 88± 0 34、1 2 6± 0 39ng/ 10mg湿重 ,亦均显著低于盐水对照组 (P <0 .0 1)。脑室注射L -Glu对下丘脑GnRH含量的降低作用呈现剂量与时间依从关系。而脑室注射3H -Glu 2 μCi/ 2 0 μl-1·-1后 40分钟发现 ,大脑、小脑、垂体、下丘脑内侧基底部 (MBH)和视前区 (POA) 5个不同部位脑组织中以MBH对3H -Glu的摄取量最大 (10 6 9 82± 490 33cpm/ 10mg湿重 )。结论 :L -Glu可能参与了大鼠下丘脑GnRH神经元功能活动的调节。     

微丝对豚鼠胃窦平滑肌细胞钾电流的影响

目的　观察微丝对豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钾电流的影响 ,并且探讨肌动蛋白微丝是否参与低渗牵张增强豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钾电流的过程。方法　本实验用Ⅱ型胶原酶急性分离单个豚鼠胃窦部环行平滑肌细胞 ,采用传统全细胞模式的膜片钳技术 ,以微丝的解聚剂细胞松弛素B(Cytochala sin -B)和微丝的稳定剂鬼笔环肽 (Phalloidin)作为工具药分别研究了在等渗和低渗条件下 ,微丝与钾电流之间的关系。统计学处理采用同体对照t检验和异体对照t检验 ,所有统计结果皆以均数±标准误来表示。结果　细胞松弛素B明显增强钙激活钾电流(IK(Ca) )和延迟…     

2.136微丝对豚鼠胃窦平滑肌细胞钾电流的影响

目的观察微丝对豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钾电流的影响,并且探讨肌动蛋白微丝是否参与低渗牵张增强豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钾电流的过程.     

微丝重组对细胞增殖作用的研究

用罗丹明－鬼笔环肽（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ－ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）显示微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ，ＭＦ）的荧光染色法对Ｇ０期小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞向Ｓ期过渡过程中，ＭＦ结构的变化及ＭＦ重组对ＮＤＡ合成的影响进行了研究。Ｇ０期细胞在血清刺激１ｈ后ＭＦ解聚，３ｈ后重新组装，并恢复原来的分布，我们发现细胞松驰素Ｂ使ＭＦ解聚并与蛋白激酶激活剂－佛波酯同样可促进Ｇ０期细胞提前进入Ｓ期，促进ＤＮ     

米诺环素抑制谷氨酸诱导的大鼠视网膜神经细胞凋亡

目的：观察米诺环素对谷氨酸诱导的大鼠视网膜神经细胞凋亡的抑制效应及其作用机制。方法:取原代培养的SD乳鼠视网膜神经细胞，随机分为正常对照组、米诺环素对照组（米诺环素20 μmol/L）、谷氨酸组（谷氨酸1 mmol/L）和米诺环素治疗组（米诺环素20 μmol/L＋谷氨酸1 mmol/L）。干预1 h后采用Annexin V/PI流式细胞仪计数凋亡细胞数量，同时检测Rh123以评估线粒体膜电位改变。干预12 h后行MTT检测细胞活性；另取细胞培养上清液做一氧化氮合酶（NOS）的活力单位检测。结果:干预1 h后，流式细胞仪Annexin V/PI检测凋亡细胞比例：正常对照组、米诺环素对照组、谷氨酸组、米诺环素治疗组分别为5.1％、4.3％、15.2％、8.3％。Rh123各组阳性率分别为67.1%、54.2%、27.5%、32.4%。干预12 h后，MTT检测各组细胞吸光度均值分别为： 0.093±0.008、0.099±0.012、0.038±0.008、0.088±0.016。治疗组与正常组之间无显著差异（P>0.05），谷氨酸组与其它各组之间均存在显著差异（P<0.05）。NOS活力单位检测，以正常对照组均数为1，另3组与其比值的均数分别为： 0.987±0.219、1.513±0.472、1.176±0.259。其中谷氨酸组与其它3组之间存在显著差异（P<0.05）。结论:20 μmol/L米诺环素可显著减轻谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡，其作用机制与稳定线粒体膜电位，以及抑制NOS活性有关。     

谷氨酸诱导新生小鼠皮层神经细胞损伤体外模型的建立

目的:本实验建立谷氨酸(Glu)诱导神经细胞的损伤模型,观察Glu对神经细胞的兴奋毒性作用,探索Glu诱导神经细胞损伤模型的最佳浓度,为进一步研究Glu与神经系统疾病之间的关系奠定基础。方法:原代培养新生小鼠皮层神经细胞,鉴定成功后,采用不同浓度的Glu诱导神经细胞损伤,酶标仪测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和死亡率,以获得Glu诱导神经细胞损伤模型的最佳浓度。结果:成功培养新生小鼠皮层神经细胞,Glu诱导神经细胞损伤呈浓度依赖性。实验中Glu浓度=100μmol/L,细胞凋亡率(%)为44.34±6.19而细胞死亡率仅为4.6±0.90说明在Glu浓度=100μmol/L诱导神经细胞,能得到较大的凋亡率和较小的死亡率。结论:成功建立Glu诱导的神经细胞损伤模型,验证Glu=100μmol/L为诱导神经凋亡的最佳浓度。     

早期人胚羊膜共聚焦激光扫描光学切片及F-肌动蛋白的研究

目的　建立羊膜组织共聚焦激光扫描显微镜光学切片的方法 ,探讨早期人胚羊膜细胞结构、分层及细胞骨架的空间结构。　方法　采用共聚焦激光扫描光学切片和荧光探针双重标记技术对妊娠 7～ 9周早期人胚羊膜进行形态观察、细胞F 肌动蛋白表达定量分析、细胞分层及厚度计算。　结果　羊膜由两层不同类型的细胞组成 ,内层细胞为多边形扁平细胞 ,外层细胞为长梭形细胞 ;内层细胞胞质中的F 肌动蛋白表达量较低 ,外层细胞胞质中的F 肌动蛋白表达量明显高于内层细胞 ,两者差异有统计学意义 ;7～ 9周人胚羊膜厚度为 30± 2 μm。其中 ,上皮层厚度为 10 μm± 2 μm ,间充质层厚度为 14μm± 2 μm。　结论　 1 早期人胚羊膜由两层细胞即内层的上皮细胞层和外层的间充质细胞层组成 ,胞质中F 肌动蛋白的表达量间充质细胞高于上皮细胞 ;2 通过共聚焦激光扫描连续光学切片可以计算出羊膜各层的厚度 ;3 共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合FITC 鬼笔环肽和碘化丙啶双重标记技术是观察和分析羊膜组织细胞立体结构的良好方法。