噬菌体展示技术构建寻常型天疱疮患者桥粒芯糖蛋白3抗体文库

目的：用噬菌体展示技术构建寻常型天疱疮患者桥粒芯糖蛋白3抗体文库。方法：收集寻常型天疱疮患者外周血,分离淋巴细胞抽提RNA,采和RT－PCR反应以人的抗体特异性HuVHBACK、HuJHFOR和HuVkBACK、HuJkFOR引物扩增抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因片段,并将其与接头拼接成ScFv片段克隆于大肠杆菌。结果：抗体基因ScFv片段与噬菌体基因III的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达,构建了天疱疮患者的重组噬菌体抗体库,ELISA检测证明ScFv基因产物具有抗体活性。结论：天疱疮噬菌体抗体库的构建为天疱疮发病机理、诊断和治疗研究打下了基础。     

正常包皮为底物的免疫印迹技术检测寻常型天疱疮抗体

目的建立以正常包皮为底物用免疫印迹技术检测寻常型天疱疮抗体的方法。方法环切的正常包皮分离表皮后提取天疱疮抗原,进行免疫印迹反应,对15份寻常型天疱疮(PV)患者血清进行检测,并与间接免疫荧光(IIF)比较。结果15份血清都检测到与表皮分离抗原结合的IgG抗体,且在约130KD抗原处出现条带,7份血清同时与分子量为160KD抗原结合,健康对照者中未检测出特异性天疱疮抗体。免疫印迹和间接免疫荧光结果差异无显著性意义(P=1)。结论免疫印迹技术在天疱疮的实验室诊断中具有重要的应用价值。     

ELISA技术检测寻常型天疱疮桥粒芯蛋白3抗体水平研究

目的:评价酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)3抗体在寻常型天疱疮(PV)诊断中的意义.方法:对来自不同中心的106例PV患者和106例对照人群血清标本编盲后,进行ELISA检测抗Dsg3自身抗体和间接免疫荧光(IIF)法检测血清天疱疮自身抗体.结果:ELISA法检测Dsg3抗体敏感度为77.4%,特异性为94.3%;IIF法检测抗体敏感度为79.2%,特异性为94.3%.两组间的差异无统计学意义.结论:ELISA方法检测Dsg3抗体对于寻常型天疱疮的诊断是一种较好的辅助方法.     

寻常型天疱疮患者血清对HaCaT细胞Dsg、MMP-9表达的影响

 目的:探讨寻常型天疱疮（PV）患者血清对HaCaT细胞桥粒芯蛋白（Dsg）1、3和基质金属蛋白酶（MMP）9表达的影响及其参与PV棘层松解的可能机制。方法:用含5%PV血清的高糖DMEM培养基孵育HaCaT细胞,以正常培养组、健康血清组以及抗Dsg3抗体组（阳性对照组）作为对照。刮取细胞提取总RNA及蛋白质,Q PCR检测Dsg1、Dsg3和MMP 9 mRNA转录水平,Western Blot检测Dsg1、Dsg3和MMP 9表达,荧光单克隆Dsg1/3抗体分别检测细胞表面Dsg1、Dsg3表达。 结果:Q PCR结果显示：与正常培养组比较,含5% PV血清培养组HaCaT细胞Dsg1、Dsg3、MMP 9基因的mRNA相对表达量分别上升约432%、402%、402%,而抗Dsg3抗体组分别上升约495%、488%、604%,PV血清组与正常培养组间有明显差异（P值均<0.05）。 Western Blot结果显示：与正常培养组相比,PV血清组HaCaT细胞表面Dsg1、Dsg3、MMP 9蛋白表达升高。Dsg1、Dsg3荧光单克隆抗体检测显示：PV血清组HaCaT表面Dsg1线状荧光消失,替代为颗粒状、团块状荧光颗粒分散于细胞表面和胞浆区域,而细胞表面Dsg3线状荧光仍然存在,但强度减弱。 结论:PV血清能促进Dsg1、Dsg3和MMP 9转录及表达,Dsg3抗体可通过诱导角质形成细胞Dsg1蛋白内吞,削弱抗体补偿作用参与棘层松解。     

桥粒芯蛋白1酶联免疫吸附试验检测落叶型天疱疮血清抗体的评价

目的 探讨桥粒芯蛋白1（Dsg1）酶联免疫吸附试验（ELISA）检测落叶型天疱疮（PF）血清学抗体的意义。方法 将80例PF患者和132例对照人群的血清标本进行编盲,用ELISA法检测所有标本中抗Dsg1自身抗体,同时应用间接免疫荧光（IIF）法检测所有标本的抗体滴度,操作过程为随机检测,最后将两方法的结果进行比较。结果 75例PF患者和5例对照人群（包括1例不确定值,大疱性类天疱疮、SLE、皮肌炎、湿疹及健康者各1例）Dsg1 ELISA为阳性,71例PF患者和0例对照人群IIF为阳性。Dsg1 ELISA的敏感性为93.8%（95%可信区间0.85 ~ 0.98）,特异性为96.2%（95%可信区间0.91 ~ 0.99）。IIF的敏感性为88.8%（95%可信区间0.82 ~ 0.96）,特异性为100%（95%可信区间0.96 ~ 1.00）。两者相比,敏感性（P = 0.289）和特异性（P = 1.000）差异均无统计学意义。结论 Dsg1 ELISA是一种简便、敏感、特异的血清学检测方法,可作为诊断PF的一种辅助手段。     

抗Dsg—3 EC3—4的单链抗体片段在寻常型天疱疮鼠模型中的作用

目的 探讨抗桥粒芯糖蛋白3(Dsg-3)EC3-4的单链抗体片段(ScFv)在寻常型天疱疮(PV)鼠模型中的作用。方法 在不同时间点。将抗Dsg-3 EC3-4的ScFv通过皮下注射至BALB/c新生鼠,从临床表现、组织病理和免疫荧光三方面评价其对PV鼠模型构建的影响。结果 单独注射抗Dsg-3 EC3-4的ScFv不能在BALB/c新生鼠中诱导出PV的改变,任何时间点注射抗Dsg-3 EC3-4的ScFv都不能阻断PV患者血清对BALB/c新生鼠的致病作用。结论 单独注射抗Dsg-3 EC3-4的ScFv缺乏致病性,也不能阻断PV患者血清对BALB/c新生鼠的致病作用。     

寻常型天疱疮信号通路研究进展

 寻常型天疱疮（PV）是一种罕见的自身免疫性大疱性皮肤病,其病理生理特征是自身抗体与桥粒芯蛋白（Dsg）结合导致棘层松解。尽管关于天疱疮发病机制信号通路的研究越来越多,但目前信号通路在天疱疮发病机制的作用尚未明确。p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、蛋白激酶C（PKC）和表皮生长因子受体（EGFR）等信号通路的活性改变被认为与PV发病密切相关。本文就相关信号通路阐述PV发病机制,为其寻找有效靶向药物治疗提供新的思路。     

重组嵌合毒素Dsg3EC_(1-2)PE40对寻常型天疱疮患者T、B淋巴细胞的影响

目的探讨重组嵌合毒素Dsg3EC_(1-2)PE40对寻常型天疱疮患者外周血淋巴细胞的影响。方法对重组嵌合毒素Dsg3EC_(1-2)PE40进行表达,并分离纯化；分别以不同浓度重组嵌合毒素作用于寻常型天疱疮患者外周血淋巴细胞,通过ELISPOT法、MTT比色试验及~3H-TdR掺入试验来观察重组嵌合毒素对T、B淋巴细胞的影响。结果纯化后的重组嵌合毒素纯度达80％以上,它能够特异性与天疱疮抗体IgG结合,而与正常人IgG不结合。重组嵌合毒素可使寻常型天疱疮外周血产生抗体的B细胞数量减少约40％左右；在重组嵌合毒素作用下,T细胞的增殖、代谢较重组Dsg3EC_(1-2)明显降低,两者间差异有统计学意义(P<0．01)。结论重组嵌合毒素Dsg3EC_(1-2)PE40可以抑制寻常型天疱疮外周血B细胞的抗体产生作用,对寻常型天疱疮外周血T细胞具有明显的抑制或杀伤作用。     

重组嵌合毒素Dsg3EC1-2PE40对寻常型天疱疮患者T、B淋巴细胞的影响

目的 探讨重组嵌合毒素Dsg3EC_1-2PE40对寻常型天疱疮患者外周血淋巴细胞的影响。方法 对重组嵌合毒素Dsg3EC_1-2PE40进行表达,并分离纯化;分别以不同浓度重组嵌合毒素作用于寻常型天疱疮患者外周血淋巴细胞,通过ELISPOT法、MTT比色试验及³H-TdR掺入试验来观察重组嵌合毒素对T、B淋巴细胞的影响。结果 纯化后的重组嵌合毒素纯度达80%以上,它能够特异性与天疱疮抗体IgG结合,而与正常人IgG不结合。重组嵌合毒素可使寻常型天疱疮外周血产生抗体的B细胞数量减少约40%左右;在重组嵌合毒素作用下,T细胞的增殖、代谢较重组Dsg3EC_1-2明显降低,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 重组嵌合毒素Dsg3EC_1-2PE40可以抑制寻常型天疱疮外周血B细胞的抗体产生作用,对寻常型天疱疮外周血T细胞具有明显的抑制或杀伤作用。     

天疱疮抗体及PDAI与病情活动度关系的研究现状与展望

天疱疮疾病面积评分(Pemphigus disease area index,PDAI)是评估天疱疮病情活动度众多评分体系中的可靠指标;而抗桥粒芯糖蛋白(Desmoglein,Dsg)抗体,大多学者认为与病情活动度呈正相关,但目前对此尚未达成共识。因此或许可以通过验证PDAI值与抗Dsg抗体滴度的相关性来证实抗体滴度与病情活动度的关系,并进一步界定出病情轻中重度所对应的抗Dsg抗体滴度区间,指导治疗。国内尚无类似文献报道,还需要进一步的临床研究来证实。     

天疱疮抗体亚类在天疱疮发病中的作用

目的 了解天疱疮抗体亚类在天疱疮发病中的作用。方法 用亲和层析法提取并纯化天疱疮抗体亚类,在天疱疮器官培养模型上观察各抗体亚类致棘层松解的作用：并用免疫印迹法测定各抗体亚类与角质形成细胞膜抗原的结合。结果 纯化的抗体亚类在浓度达到０．５ｍｇ／ｍＬ时均能在器官培养模型上致表皮产生棘层松解,并能与角质形成细胞膜表面相对分子质量为１０００００和１５０００蛋白结合。结论 天疱疮抗体亚类在体外模型上均有一定     

以大疱性脓疱为主要表现的寻常型天疱疮1例首报

目的首报1例以大疱性脓疱为主要表现的寻常型天疱疮。方法取疱液细菌培养,组织病理和直接免疫荧光,激素治疗观察。结果疱液细菌培养阴性;病理检查:皮肤组织表皮内基底层上棘层松解裂隙及疱形成,疱内见棘层松解细胞,直接免疫荧光:IgG、C3(+),沿表皮中下层细胞间网状沉积;激素治疗有良效。结论以大疱性脓疱表现的寻常型天疱疮经文献检索国内、外未见相同病例报道。     

重症寻常型天疱疮25例的治疗和依从性分析

目的探讨基层医院治疗重症寻常型天疱疮的难点和患者依从性等因素对疗效的影响。方法回顾分析25例重症寻常型天疱疮的临床资料。结果患者多为复发者(占84.00%),以低收入的农民和工人为主(占68.00%),入院时大多病情较重(全身皮肤受累占88.00%,口腔黏膜受损占76.00%,≥2种合并症占44.00%)。激素早期联合免疫抑制剂治疗取得满意疗效,总有效率为88.00%。激素导致的不良反应有76.32%发生在长时间大剂量持续应用激素的患者。结论重症天疱疮的治疗方案应个体化,以尽早控制病情,避免由于长时间大剂量持续应用激素而引发严重副作用。同时,应提高患者用药的依从性和基层医生对重症寻常型天疱疮的诊疗水平,有效降低复发率。     

健康成人食物特异性抗体IgG,IgG4含量参考范围探讨

目的探讨健康成人食物特异性抗体IgG和IgG4含量的参考范围。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测240例健康成人血清中8种常见食物(牛奶、鸡蛋、大豆、蟹、鳕鱼、虾、花生及小麦)特异性抗体IgG和IgG4。结果 8种食物特异性IgG及特异性IgG4含量均不存在性别差异(P>0.05),但是青年组(20～50岁)食物特异性IgG及特异性IgG4的含量均显著高于老年组(>50岁),差异有统计学意义(P<0.01),青年组食物特异性IgG含量为(43.73±9.91)U/mL,特异性IgG4含量为(23.38±11.53)UA/mL;老年组食物特异性IgG含量为(41.81±8.67)U/mL,特异性IgG4含量为(21.88±8.90)UA/mL。结论健康成人的血清食物特异性IgG及特异性IgG4水平不存在性别差异,男女可通用正常参考范围;青年组食物特异性IgG及特异性IgG4的含量均显著高于老年组。     

寻常型天疱疮患者TC RBD基因RSS断裂末端的检测

目的：探讨寻常型天疱疮（PV）患者PBMC中TCRBD1和TCRBD2断裂末端RSS5’、RSS3’的差异,及其在天疱疮发病机制中的作用。方法：采用LM-PCR技术,比较天疱疮患者与正常人PBMC中TCRBD1和TCRBD2断裂末端RSS5’、RSS3’的差异情况。结果：2例正常人未检测出TCRBD1和TCRBD2基因RSS断端,2例PV患者均检测出TCRBD1和TCRBD2基因RSS断端。结论：TCRBD参与重排,寻常型天疱疮患者外周血寡克隆增生的T细胞和外周血TCR二次基因重排可能存在相关。     

慢性荨麻疹患者食物过敏原特异性IgE及IgG检测

目的 探讨慢性荨麻疹患者食物过敏原检测的意义。方法 对502例慢性荨麻疹患者进行食物过敏原特异性IgE与IgG检测,并进行统计学分析;同时对花生、黄豆、牛奶等过敏原的特异性IgE与IgG不同结果组进行双盲安慰剂食物激发试验。结果 １８８例患者食物过敏原特异性IgE阳性,阳性检出率为37.4%,其中腰果、花生黄豆阳性率较高;３６２例患者至少对１种食物过敏,IgG阳性检出率为72.1％,牛奶、鸡蛋、虾蟹为主要过敏原。双盲安慰剂食物激发试验证实,两种抗体检测都有假阳性与假阴性。结论 临床医生应在慢性荨麻疹的治疗中注意筛查食物过敏原,特别是IgG介导的过敏反应。     

伴甲状腺抗体阳性的荨麻疹患者血清白介素13、总IgG及IgG3水平检测

目的:观察伴有器官特异性自身抗体的荨麻疹患者血清中白介素(IL)-13、总IgG及IgG3的水平.方法:用ELISA方法检测24例伴有器官特异性自身抗体的荨麻疹患者、24例慢性荨麻疹患者及24例健康对照者血清IL-13的水平;用散射比浊方法检测30例伴有器官特异性自身抗体的荨麻疹患者和20例健康对照血清总IgG及IgG3水平.结果:自身免疫性荨麻疹患者血清中IL-13明显高于慢性荨麻疹组及健康对照组,总IgG及IgG3的水平亦高于健康对照组,差异具有统计学意义(P ＜ 0.05).结论:IL-13及IgG3可能参与了自身免疫性荨麻疹的发病过程.     

HLA Haplotypes and Class II Molecular Alleles in Argentinian Patients with Pemphigus Vulgaris

Background: Pemphigus is a group of chronic blistering autoimmune diseases of which pemphigus vulgaris (PV) is the more frequent clinical form. The association of PV with the HLA serotypes suggests that there is a genetic predisposition to the disease. Objectives: To determine the frequency of class I and class II HLA antigens and the allelic variants of the class II HLA antigens, DR and DQ, in patients with PV and to determine the relative risk. Methods: An observational, prospective, transverse, and controlled study carried out between 1995 and 1999. Forty-seven patients with a diagnosis of PV and a control sampling of 199 unselected individuals from the same ethnic group were included. The HLA alleles were determined by polymerase chain reaction. Results: No significant associations were detected between HLA A, B, or C and our patients. The DR and DQ molecular alleles positively associated with PV were two different haplotypes: DRb1* 0402/DQb1* 0302 and DRb1* 1401/DQb1* 0503. Conclusions: In patients with the haplotype DRb1* 0402/DQb1* 0302 the affectation of 10%–30% of the corporal surface prevailed (ACS). In patients with DRb1* 1401/DRQb1* 0503, involvement of <10% of the ACS prevailed. Antécédents: Le terme Pemphigus désigne un groupe de dermatoses autoimmunes chroniques, dont la plus fréquente est le Pemphigus vulgaire (PV). Le lien entre le pemphigus et les sérotypes des antigènes HLA indique qu'il existe une prédisposition génétique à cette maladie. Objectifs: Déterminer la fréquence des antigènes HLA de classe I et II ainsi que les allèles des antigènes HLA de classe II, DR et DQ, chez les patients atteints de PV et en évaluer le risque relatif. Méthodes: Une étude par observation, prospective, transverse et contr?lée a été menée entre 1995 et 1999. Quarante sept patients atteints de PV et un groupe de contr?le formé de 199 personnes du même groupe ethnique y ont participé. Les allèles de HLA ontété déterminés par réaction en cha?ne de la polymérase (PCR). Résultats: Aucun lien significatif n'a été décelé entre les allèles HLA A, B ou C et nos patients. Par contre, un lien solide a été établi entre le PV et deux haplotypes distincts des allèles DR et DQ: DRb1* 0402/DQb1* 0302 et DRb1* 1401/DQb1* 0503. Conclusions: Chez les patients présentant le haplotype DRbl* 0402/DQb1* 0302, 10% à 30% de la surface du corps a été affectée. Chez les patients présentant le haplotype DRb1* 1401/DRQb1* 0503, moins de 10% de la surface du corps a été affectée.