不同端粒酶抑制剂对肝癌细胞端粒酶活力的影响

目的通过多种端粒酶抑制剂同时作用于人肝癌SMMC-7721细胞,比较各种端粒酶抑制剂抑制癌细胞端粒酶活力的效果。方法利用针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸(ASODN)和正义寡核苷酸(NODN),针对端粒酶催化亚基的反义寡核苷酸(HASODN)和正义寡核苷酸(HNODN),以及没食子酰表没食子儿茶素(EGCG),3’-叠氮3’-脱氧胸苷(AZT),全反式维甲酸(ATRA),盐酸阿酶素(ADM)作用于人肝癌SMMC-7721细胞株,实时荧光定量端粒重复序列扩增法(real-timefluorescentquantitativeTRAPassay,FQ-TRAP)检测端粒酶抑制剂作用后SMMC-7721细胞端粒酶活力变化。结果FQ-TRAP法可检测到102个细胞的端粒酶活力,ASODN、NODN、HASODN、HNODN、EGCG、AZT、ADM、ATRA作用于SMMC-7721细胞后,与对照组比较,癌细胞的端粒酶活力均受到抑制(P<0.05),其端粒酶活力的下调率分别为93.30%、43.44%、41.02%、39.26%、58.15%、48.93%、24.44%和53.49%。结论FQ-TRAP法可快速、简便及定量检测人端粒酶活力。ASODN,EGCG抑制SMMC-7721细胞端粒酶活力的效果较明显。     

应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术筛选硝酸羟胺中毒小鼠血清差异蛋白

目的 应用蛋白质芯片及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,筛选硝酸羟胺(HAN)中毒小鼠血清差异蛋白,为研究其中毒损伤机制提供基础资料.方法 实验动物为ICR小鼠,雄性,体质量为19～23 g,随机分为对照组(n=8)和染毒组(n=8),对照组小鼠腹腔注射生理盐水,染毒组小鼠腹腔注射HAN(亚致死剂量LD20=158 mg/kg).染毒24 h后取血,采用弱阳离子蛋白质芯片CM10及SELDI-TOF-MS技术对血清样品进行蛋白质谱分析,得出差异蛋白分子量,用BioMarker Wizard软件进行统计,登录相关数据库搜索分子量接近的血清差异蛋白.结果 染毒后,动物出现流涎、紫绀、呼吸困难、肌肉颤动、屏息症状,提示缺氧缺血严重.经蛋白质谱仪分析,获得4种血清差异蛋白,并检索得到相关血清蛋白.结论 实验获得了HAN染毒小鼠血清差异蛋白,该差异蛋白有可能参与了HAN中毒损伤的发生和发展过程.     

单纯性室间隔缺损血清标志蛋白的筛选

目的应用蛋白质组学表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术筛选单纯性室间隔缺损血清标志蛋白,为从蛋白质分子水平研究其致病机理奠定基础。方法用CM10芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿、85例儿科常见病患儿及23例其它先天性心脏病患儿血清,分析血清蛋白质谱,筛选室间隔缺损血清标志蛋白。结果有25个蛋白成分在三组之间具有统计学差异,其中,与儿科常见病对照组相比,11个蛋白成分在VSD血清中高表达,14个下调;与其它先天性心脏病组相比,14个蛋白成分在VSD血清中高表达,11个下调。结论表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术可能是发现与筛选室间隔缺损血清标志蛋白的快速、有效的蛋白质组学工具。     

异烟肼敏感与耐药结核杆菌临床分离株培养滤液蛋白比较分析

目的寻找异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白。方法应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)捕获并应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对1株异烟肼单耐药结核杆菌和1株异烟肼敏感结核杆菌临床分离株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液蛋白进行比较,描述性分析其差异。结果在异烟肼敏感和异烟肼单耐药结核杆菌株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液中分别检测到164、175、133、147种蛋白质/多肽,其相对分子量(依质荷比m/z而得)范围分别为982⁹ 328、9979 328、997⁹ 327、1 0509 327、1 050⁸ 903、9 968 903、9 96⁹ 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为179 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为17² 100、212 100、21¹ 943、601 943、60⁵ 355、415 355、41³ 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 0833 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 083⁸ 812、1 0128 812、1 012⁹ 327之间,表达丰度在769 327之间,表达丰度在76¹ 811、251 811、25³ 010之间。结论异烟肼敏感结核杆菌和耐药结核杆菌液体培养早中期滤液蛋白质存在差异,但是否为异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白则有待进一步证实。     

双向电泳筛选矽肺模型大鼠肺组织差异蛋白

目的应用双向电泳技术筛选矽肺相关蛋白。方法对Wistar雄性大鼠气管灌注法染尘,于1、2、4、8周处死大鼠,观察矽肺模型情况,提取总蛋白进行双向电泳(2-DE)筛选差异蛋白,后通过表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)进行鉴定。结果至8周时肺组织中矽结节及纤维化明显,双向电泳共分离出45个差异点,质谱分析后得到Prx-1、alpha-enolase、macrophage-capping protein、GAPDH、S-100A8、actin 6个差异蛋白。结论双向电泳技术获得了矽肺模型大鼠的肺组织差异蛋白点,质谱分析得到差异蛋白。     

蛋白指纹图谱技术诊断胎儿神经管缺陷的初步研究

目的:探讨表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在胎儿神经管缺陷(NTD)产前诊断中的应用。方法:取神经管缺陷胎儿的孕妇羊水8例作为NTD组,取正常胎儿的孕妇羊水16例作为对照组,分别进行蛋白质谱分析,确定两组间蛋白峰值的差异。结果:24份羊水检测质谱图,共有96个蛋白质峰,通过统计分析,发现有5个不同质荷比蛋白质在两组的相对含量有明显差异。质荷分别为3484、8126、15112、16139和30891。结论:神经管缺陷胎儿孕妇的羊水中存在差异蛋白质的变化,这一组蛋白质谱图的特征变化具有疾病提示意义,可用于胎儿产前诊断。     

SELDI技术预测FOLFIRI方案治疗结肠癌疗效敏感性的应用研究

目的：应用SELDI 技术发现预测FOLFIRI 方案治疗晚期结肠癌患者疗效敏感性的界定指纹,探索新的用药指征.方法：选择12例行FOLFIRI 方案化疗,并有可观察疗效的晚期结肠癌术后患者,应用表面增强飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS） 技术在化疗前对患者的血清样本进行检测,根据RECIST 实体肿瘤疗效评价标准将FOLFIRI 方案治疗1 疗程（3 周期） 后2 周~3 个月内的患者分成稳定组（SD） 和无效组（PD）.应用ProteinChip 3.2.0 和Biomarker Wizard 3.1 软件分析两组之间有显著差异的指纹（ 峰型及丰度） 并进行比较.结果：术后稳定组与无效组相比有3 个蛋白质峰有显著差异性,M/Z 分别为1372、1698、1865,与稳定组相比,无效组上调的峰M/Z 为1372 和1698,下调的峰M/Z 为1865.结论：应用SELDI 技术可以获得预测FOLFIRI 方案治疗结肠癌疗效敏感性的标识指纹,其M/Z 为：1372±50H＋、1698±50H＋、1865±50H＋.其中M/Z：1372±50H＋ 丰度〈10、1698±50H＋ 丰度〈5、1865±50H＋ 丰度〉10 为预计FOLFIRI 方案治疗结肠癌可获得稳定的标识指纹;其M/Z：1372±50H＋ 丰度≥ 10、1698±50H＋ 丰度≥ 5、1865±50H＋ 丰度≤ 10 为预计FOLFIRI 方案治疗结肠癌无效的标识指纹.     

同型半胱氨酸对肝癌细胞基因mRNA表达的影响

目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对人肝癌细胞株-7721细胞固醇调控元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因mRNA表达的影响。方法用反转录多聚酶联反应法(RT-PCR)不同浓度(0．2，1和5mmol／L)、不同时间(2，4，8，24h)，Hcy对7721细胞SREBP-1基因mRNA表达的影响作用。结果Hcy可使7721细胞SREBP-1基因mRNA表达上调，在Hcy浓度为5mmol／L，作用18h SREBP-1的mRNA表达相对较高。结论Hcy使7721细胞SREBP-1基因mRNA表达上调。     

激光解吸快速菌种鉴定与不同前处理方法 对常见食源性致病菌菌种的鉴定分析

【目的】比较研究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术与不同样品前处理方法对常见食源性致病菌菌种鉴定的影响。【方法】收集51株常见的食源性致病菌,包括沙门氏菌、葡萄球菌、李斯特菌、弧菌、埃希氏菌及志贺氏菌等,分别研究直接涂抹法、原位甲酸提取法、甲酸乙腈提取法对菌种鉴定结果的影响。【结果】不同样品前处理方法对沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌的鉴定结果无明显差异;头状葡萄球菌、科氏葡萄球菌、副溶血弧菌和创伤弧菌,采用直接涂抹法无法获得有效鉴定结果,而原位甲酸提取法和甲酸乙腈提取法则均能获得准确的鉴定结果;采用直接涂抹法和原位甲酸提取法,李斯特菌属中的非单增李斯特菌常被错误鉴定为单增李斯特菌,采用甲酸乙腈提取法能够有效改善李斯特菌属不同种的鉴定准确性。【结论】不同样品前处理方法对常见食源性致病菌菌种的MALDI-TOF MS鉴定结果具有一定影响,对于不同菌种选择合适的样品前处理方法才能获得可靠准确的鉴定结果。     

多种芯片检测和多元分析法在肝纤维化患者血浆蛋白表达谱分析中的初步应用

[目的]运用多种表面增强激光解吸-离子化飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）蛋白质芯片及多元分析方法寻找由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染引起的肝纤维化病程相关的血浆生物标志物。[方法]选用多种SELDI化学表面芯片,比较分析肝纤维化病人和正常血浆样本,筛选和确定3种最佳芯片类型。用这3种芯片分析无肝纤维化、轻度肝纤维化、重度肝纤维化和肝硬化4组共110例患者的血浆样本。运用主成分分析（PCA）、偏最小二乘回归（PLSR）、软独立建模分类法（SIMCA）等数据分析技术寻找差异蛋白。用聚类分析法研究差异蛋白的表达相似性。[结果]3种最适芯片类型分别是弱阳离子交换芯片（WCX2）、强阴离子交换芯片（SAX2）、固定化镍金属螯合亲和层析芯片（IMAC-Ni）。这3种芯片吸附的蛋白质种类互不相同,所发现的差异蛋白质峰也不同。经t检验分析,3种芯片共发现了20个差异蛋白峰。运用PCA、PLSR、SIMCA等数据分析技术,分别发现了105、98、62个差异峰,并对差异峰的重要性的可信度进行衡量。运用聚类分析技术,将差异蛋白的表达模式分组。[结论]联用多种SELDI芯片检测,结合多元分析方法,使SELDI技术成为筛选疾病相关的生物学标志物的有力工具。     

卵巢癌细胞系中差异表达蛋白的相关性研究

目的:筛查卵巢癌细胞系中差异表达蛋白,寻找与卵巢癌发生发展相关的基因。方法:体外培养卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OVCA433、OVCA420和正常卵巢细胞系IOSE386,利用蛋白阵列方法分析卵巢癌细胞系和正常卵巢细胞系中蛋白表达的差异性;利用QUANTITY 1分析软件分析图片结果,并对图片结果进行统计学分析。结果:分析发现卵巢癌细胞系中17种蛋白的表达水平相对于正常卵巢细胞系差异有统计学意义。结论:卵巢癌细胞系和正常卵巢细胞系存在着差异表达蛋白,这些蛋白可能与卵巢癌的发生发展存在着一定的相关性。     

端粒酶对细胞周期调控和肿瘤发生的影响

自端粒酶发现至今的十几年中,人们对其结构和功能进行了系统的研究,发现端粒酶与肿瘤发生具有明显的关联。肿瘤细胞具有细胞周期失调的共同特点,而正常细胞脱氧核糖核酸在受到损伤后能够发生细胞周期阻滞以及时修复损伤,即通过细胞关卡调控,这是保持基因组稳定的关键事件。细胞周期关卡调节异常可导致遗传改变,并可能导致细胞的恶性转化。本文就端粒酶激活、细胞周期失调对肿瘤形成的影响以及两者之间关系的研究做一综述。     

食管癌端粒酶表达与其活性关系

目的探讨食管癌端粒酶亚基因表达及其与端粒酶活性的关系。方法采用端粒末端重复序列扩增技术检测29例食管鳞癌组织及其相应癌旁正常组织、47例食管鳞状上皮不典型增生组织的端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应技术检测端粒酶各亚单位基因mRNA的表达。结果端粒酶活性阳性检出率、亚单位基因端粒酶逆转录酶(mTERT)mRNA表达在食管癌、不典型增生组织和癌旁正常组织之间差异有统计学意义(P<0.001);而端粒酶亚单位基因hTR或TP1mRNA在3种食管组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。在105例食管癌组织、癌旁正常组织和不典型增生组织中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关(P<0.001);而hTR或TP1mRNA表达与端粒酶活性无明显相关(P>0.05)。结论端粒酶在食管癌的发生发展过程中可能起关键性作用:hTERT与端粒酶活性密切相关;端粒酶有望成为食管癌的生物标志物。     

Smac联合顺铂对人肝癌细胞凋亡调控因子影响

目的研究第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(Smac)基因联合顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9和细胞色素c(Cyt c)蛋白表达的影响。方法利用脂质体介导的方法将Smac转染入SMMC-7721,G418筛选后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法检测筛选所得SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;顺铂处理后采用免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白的表达。结果SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白表达均明显增加,12～120 h A₄₉₀值为0.28～0.70,均明显低于同一时间点的SMMC-7721(0.31～1.10)(P<0.05);与SMMC-7721比较,SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3和Cyt c蛋白表达均增高,累积光密度值(IOD)分别从19 939/14 924增至28 347/21 017(P<0.05);顺铂作用下,SMMC-7721和SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白表达均增加,且后者更明显;剂量为25μg/mL时,SMMC-7721/Smac的caspase-3、caspase-9的IOD分别从对照的28 347/22 412增至46 696/39 728(P<0.001)。结论Smac稳定过表达联合顺铂可明显增强细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9和Cyt c表达,从而促进细胞凋亡。     

端粒酶在石英致细胞恶性转化中的作用

目的　观察在石英诱发人胚肺成纤维细胞恶性转化中端粒酶的作用。方法　将端粒酶功能片段(hTERT)导入人胚肺成纤维细胞 (HELF)中。经细胞毒性实验确定染毒剂量后 ,用石英粉尘 (1 6 0 μg cm2 )对导入 未导入hTERT的HELF进行染毒 ,分离转化灶 ,观察细胞生物性状 ,测定细胞生长曲线、端粒酶活性和端粒长度 ,进行软琼脂集落形成实验 ,判定转化性质。结果　将hTERT成功地导入了人胚肺成纤维细胞系(HELF T+ ) ,发现石英刺激后 ,导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞的恶性转化率高于未导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞 (P <0 0 5 )且有较高的端粒酶活性和端粒长度。结论　端粒酶在石英诱导细胞发生恶性转化的过程中发挥了重要作用。建立的端粒酶基因导入的细胞系可用于其它环境与职业危害因素相关疾病发病过程中的端粒酶作用的研究     

MET抑制剂在晚期肝癌中的应用进展

目前晚期肝细胞癌的标准药物治疗是索拉菲尼,但其临床效果是有限的,而且副作用较大。但除索拉菲尼以外,在所有完成的Ⅲ期临床对照研究中,没有药物在作为一线或二线用药时能明显提高生存率。最近一项Ⅱ期随机对照研究结果的亚组分析显示,一种选择性MET抑制剂ARQ197,在全身治疗失败或不耐受全身治疗的伴有MET扩增的晚期肝细胞癌患者中应用,能明显提高总生存率。在本文中,我们对所有目前正在进行及已经完成临床试验的MET抑制剂做一综述。旨在进一步了解MET抑制剂在肝癌中的应用情况,为晚期肝癌的药物治疗提供新的策略。     

系统评价妊娠期糖尿病胎盘差异表达蛋白对胎儿的影响

目的系统评价妊娠期糖尿病胎盘差异表达蛋白对胎儿的影响。方法于2019年6月计算机检索PubMed、Web of Science、Cochrane Library、EMBase、Medline (Ovid)、Scopus、中国生物医学文献数据库、中国知网、万方数据知识服务平台、维普中与妊娠期糖尿病胎盘蛋白表达有关的文献,检索时限为2010年1月-2019年6月。采用主题词与自由词结合的方式进行检索,同时手工检索相关文献的参考文献。运用纽卡斯尔渥太华量表评价纳入研究的方法学质量,进行描述性分析。结果最终纳入15篇文献,均为病例对照研究,共包含844名研究对象。系统评价结果显示:胎盘差异表达蛋白通过干扰葡萄糖、脂质代谢与转运,影响氨基酸转运和蛋白质合成,调整胎盘屏障,增加水、甘油和铁转运4个途径影响胎儿生长发育和妊娠结局。结论胎盘蛋白表达失调可能介导胎盘营养转运能力的改变和影响胎盘屏障,参与胎儿宫内生长发育和增加不良胎儿结局的风险。但其因果关系及调控机制尚不明确,有待进一步深入研究。     

甘氨脱氧胆酸钠对人肝癌细胞周期及P21 mRNA表达的影响

目的：探讨甘氨脱氧胆酸钠（glycodeoxrycholic acid,GDCA）作用人肝癌细胞SMMC7721后对细胞周期及P21mRNA表达的影响。方法：流式细胞仪对细胞周期进行检测;Trizol提取细胞RNA,然后进行RT-PCR。结果：GD-CA100、200、400μmol/L处理组均对SMMC7721的细胞周期具有阻滞作用,主要表现为G1期的延长,S期缩短。P21mRNA的表达明显上调。结论：GDCA对SMMC7721的细胞周期具有明显阻滞作用,并能下调P21mRNA的表达。     

血水草血根碱致钉螺肝脏差异表达蛋白质的鉴定

目的 分析血水草血根碱致钉螺肝脏蛋白质表达的变化.方法 从血水草粉末中分离血根碱,配成5 mg/L水溶液,每500 ml药液投放50只钉螺,25℃浸泡36 h,解剖活螺并收集肝脏,双向电泳分离血根碱处理组和清水对照组钉螺肝脏蛋白质,ImageMaster 2D 5.0软件分析图谱,筛选差异蛋白质,并用质谱鉴定.结果 血根碱组和清水对照组分别检出(433±14)、(385±12)个蛋白质点;质谱鉴定获得11个差异表达蛋白,分别是原肌球蛋白、假定蛋白XP_533132、肌动蛋白87E、角蛋白6A、β-微管蛋白、线粒体内膜蛋白4样蛋白、角蛋白2、咽侧体抑制激素A前体、ENSANGP00000020184、肌动蛋白-3、ENSANGP00000013943.其中假定蛋白XP_533132、ENSANGP00000013943在血根碱处理组表达下调,其余9个蛋白质在血根碱处理组表达上调.结论 血根碱引起钉螺肝脏蛋白质表达发生改变.