流式细胞术分析不同剂量X射线对HL—60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL－60细胞的影响,建立X射线诱导HL－60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性,采用对数生长期的HL－60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用硫式细胞仪分析HL－60细胞周期的改变,结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL－60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势,经2,5Cy剂量照射的HL－60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2／M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL－60细胞主要表现为S期细胞和G2／M期细胞的比例均减少,结果显示,以X射线照射HL－60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测之间存在一定的关系。     

咖啡因对X射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的 探讨细胞周期检测点对不同放射剂量射线的耐受性及咖啡因对细胞周期检测点的影响。方法 对数生长期的急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)细胞经不同剂量的X射线照射，并加入终浓度为5mmol／L的咖啡因培养4h后．用亚G1峰法检测细胞凋亡，用DNA链缺口标记法(TdT)分析凋亡细胞的细胞周期特异性。结果 不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡，2Gy X射线的照射主要诱导G1期细胞凋亡，20Gy X射线照射诱导的细胞凋亡由G1期发展至以S期和G2期为主。加入咖啡因能使射线诱导的细胞凋亡减少，其中2Gy X射线照射的细胞表现为G1期细胞凋亡减少，而20Gy X射线照射的细胞主要表现为以S期和G2期为主的细胞凋亡的减少。结论 细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系，咖啡因对射线诱导的细胞凋亡及检测点的影响与射线的剂量有关。     

尼莫地平对HL-60细胞凋亡的影响及其机制

目的研究尼莫地平(NMDP)对HL-60细胞的作用及其机制。方法取对数生长期HL-60细胞并调整细胞浓度为5×108/L,分为对照组和实验组,置24孔板培养,每孔加入HL-60细胞培养液1.5 mL,实验组各孔再加NMDP 0.01 g/L。分别培养0、8、16、24 h,通过倒置显微镜观察细胞的动态变化;采用Giemsa染色光学显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA的碎片;流式细胞仪检测DNA含量;细胞免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果实验组细胞从培养8 h起,可见不同程度的变形、出泡,细胞和小泡仍保持膜的完整性,随着培养时间延长,出泡细胞增加,细胞体积变小,部分细胞裂解;对照组细胞一直无形态学变化。Giemsa染色可见实验组细胞核膜裂解,染色质呈紫红色或蓝紫色,分割成块状,浓缩、靠近核膜,呈边集现象,并有典型的凋亡小体形成;对照组细胞保持大小一致,胞内染色质呈紫红色或蓝紫色,分布均匀。DNA凝胶电泳显示,实验组在8、16、24 h出现典型的梯形带。实验组细胞的凋亡率随时间延长而增加,自8 h起与对照组差异有显著意义(t=15.06~20.75,P<0.01)。实验组Bcl-2蛋白表达下降,16、24 h与对照组比较差异有显著意义(t=3.66、5.62,P<0.05);Bax蛋白表达升高,与对照组比较,162、4 h有显著性差异(t=4.13、7.55,P<0.01)。Bcl-2/Bax蛋白表达比值逐渐下降,与对照组比较,8、16、24 h差异皆有显著性(t=5.32~7.76,P<0.05)。结论NMDP可诱导HL-60细胞凋亡。Bcl-2/Bax蛋白比值下降,可能是NMDP诱导HL-60细胞凋亡的机制之一。     

X射线诱导Raji细胞凋亡的实验研究

目的探讨X射线对人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及凋亡的影响。方法用不同剂量X射线照射细胞,并在不同时间段用倒置显微镜观察照射后细胞的形态变化及生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,并观察X射线对克隆形成的影响。结果 16Gy照射后48h对Raji细胞的抑制率(92.67±1.20)%最显著;8Gy照射后48h早期凋亡率(42.04±3.62)%最高;8Gy照射后24h细胞周期G2/M期细胞(57.86±3.31)%,明显大于正常对照组(14.54±2.32)%;8Gy照射后第7天无克隆形成,第14天克隆数为(5.33±2.40),明显小于正常对照组第7天(116.67±20.28)和第14天(263.33±20.27)。结论 X射线可抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,照射后细胞周期阻滞在G2/M期,X射线8Gy照射后不能完全抑制Raji细胞的增殖。     

紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡对Bcl-2基因家族的影响

,而此凋亡可能与Bad的表达上调和Bcl-2基因表达下调有关,而与Bax和Bcl-xl的表达无关.     

天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显。结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应。     

维甲酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察维甲酸（ＲＡ）在体外诱导ＨＬ６０细胞（人早幼粒细胞白血病细胞株）凋亡的作用,探讨维甲酸治疗早幼粒细胞白血病的作用机制。方法：用ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段定量测定技术、流式细胞术分析及光镜和电镜观察凋亡细胞。结果：在体外培养中加维甲酸５０ｍｇ／Ｌ孵育４ｈ,ＤＮＡ片段率达５５７％±１２１％,而对照为１２５％±４９％（Ｐ＜０００１,ｎ＝９）;流式细胞术检测发现,在５０ｍｇ／Ｌ维甲酸作用下,细胞凋亡达５０％,对照为９％。电镜观察维甲酸组ＨＬ６０细胞出现典型的凋亡细胞形态改变。维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡具有剂量及时间依赖性,维甲酸作用６ｈ,出现凋亡高峰;随维甲酸浓度升高,诱导凋亡作用明显增强。在环孢素Ａ（ＣｓＡ）存在时,低浓度的维甲酸也有明显诱导ＨＬ６０细胞凋亡作用。结论：维甲酸在体外能诱导ＨＬ６０细胞凋亡,ＣｓＡ能增强维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡活性。研究提示诱导白血病细胞凋亡是维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的重要机制之一。     

尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡Caspase信号途径的影响

目的探讨尼莫地平(NMDP)对阿糖胞苷(Ara-c)诱导HL-60细胞凋亡机制的影响。方法取对数生长期HL-60细胞,分为未加任何药物的HL-60细胞组(对照组)、NMDP(0.001～0.100g/L)组、Ara-c(0.005～0.500g/L)组、NMDP+Ara-c组,各组HL-60细胞均处理24h。采用ATP化学发光法检测细胞增殖抑制率,AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡,化学发光法检测各组细胞Caspase 8活性。结果与对照组比较,不同浓度NMDP组及Ara-c组细胞增殖抑制率差异均有显著性(F=12 231.563、6 404.210,P<0.01);当Ara-c浓度为0.010g/L、NMDP浓度为0.050g/L时,细胞增殖抑制率最高,差异有显著性(F=916.836,P<0.01)。当Ara-c浓度为0.010g/L、NMDP浓度为0.050g/L时,Ara-c组及NMDP+Ara-c组细胞凋亡率明显高于对照组、NMDP组,以NMDP+Ara-c组凋亡率为最高(F=148.02,P<0.01)。与对照组及NMDP组相比,Ara-c组与NMDP+Ara-c组Caspase 8活性均明显升高,以NMDP+Ara-c组增高最显著(F=732.84,P<0.01)。结论 NMDP能增强Ara-c诱导的HL-60细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase 8活性有关。     

菱角提取物诱导 HL-60 细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨菱角提取物对人早幼粒细胞性白血病细胞株 HL-60 细胞增殖和凋亡的影响及凋亡的分子机制。方法 采用 MTT 法检测菱角提取物对 HL-60 细胞的增殖抑制作用;吖啶橙染色和 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;比色法测定 Caspase-3、9 蛋白活性。结果 菱角提取物能抑制 HL-60 细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。菱角提取物可诱导 HL-60 细胞凋亡并显示一定的剂量依赖关系。与对照组比较,菱角提取物可明显降低 HL-60 细胞线粒体膜电位,上调 Caspase-3、9 蛋白活性。结论 菱角提取物可抑制 HL-60 细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位、激活 Caspase-3、9 蛋白继而诱导 HL-60 细胞凋亡有关。     

氟伐他汀对HL-60细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：研究氟伐他汀（Flu）对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞（HL-60细胞）凋亡的诱导作用及可能的机制,为其临床应用提供理论依据。方法：体外培养的HL-60细胞分为空白对照组、阳性对照组［全反式维甲酸（ATRA）,10  μmol·L^-1］、Flu组（20  μmol·L^-1）和Flu（20  μmol·L^-1）加［甲羟戊酸（Mev）,100  μmol·L^-1］组。HL-60细胞被处理后,应用ACETM分析系统检测caspase-3活性以确定细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪分析细胞凋亡,DNA凝胶电泳评价DNA碎片阶梯状条带及透射电镜观察细胞的超微改变。结果：处理24 h后,Flu组HL-60细胞caspase-3活性（A405,30.68±1.57）显著高于对照组（12.05±2.15,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞caspase-3活性明显降低（14.62±1.36）,接近对照组细胞的水平（P>0.05）。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测
,与对照组比较,Flu组HL-60细胞凋亡率明显增加（4.24%  vs  10.76%,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞凋亡率降低到5.11%,与对照组细胞凋亡率(4.24%)比较差异无显著性（P>0.05）。处理72 h后Flu组HL-60细胞在琼脂糖凝胶电泳图上可观察到DNA碎片梯状条带。透射电镜观察显示：Flu组HL-60细胞胞体缩小,胞质浓缩,核染色质凝聚,呈块状聚集于核膜内侧,胞膜及细胞器完好。结论：Flu能诱导HL-60细胞凋亡,这种作用是Mev途径依赖的,提示抑制Mev途径可能是Flu诱导HL-60细胞凋亡的分子机制之一。     

穿山甲煎液诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨中药穿山甲对急性髓细胞性白血病细胞株HL-60的作用。方法：以人白血病细胞株HL-60为研究对象。采用形态学观察。流式细胞仪、Caspase-3酶活性测定、免疫组化等方法。结果：穿山甲浓度在2.5-10mg/ml范围内可抑制HL-60细胞生长,并诱导其发生凋亡;并激活Caspase-3酶活性。下降bcl-2基因表达。结论：穿山甲对HL-60细胞有诱导凋亡作用。     

姜黄素对急性髓性白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响

为了探讨姜黄素对白血病细胞的杀灭能力, 运用细胞培养、流式细胞仪和末端ＴｄＴ酶标记技术系统研究其药理作用和方式。结果发现, 姜黄素能选择性抑制急性髓性白血病细胞ＨＬ－６０ 的增殖, 呈时间与剂量依赖曲线, 姜黄素体外抑制ＨＬ－６０ 细胞２４ ｈ 达到最大峰值。亚Ｇ１ 凋亡峰出现在１２ ｈ 后,并随时间延长而逐步增加,２４ ｈ 可达３４．４％ 。用末端ＴｄＴ酶标记法进一步证实凋亡的细胞数在同一时相可达到４１％ 。结果提示： 姜黄素有明确的抗白血病细胞增殖的能力, 其作用机理是诱导细胞凋亡, 体外浓度和作用时间可作为其进一步临床运用的参考。     

姜黄素对人急性髓性白血病细胞的作用及机理的初步探讨

目的　探讨姜黄素对急性髓性白血病细胞 (HL- 6 0 )增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法　采用 MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对 HL- 6 0的抑制作用 ;流式细胞仪分析细胞周期分布 ;透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果　姜黄素可抑制 HL- 6 0细胞的生长 ,其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系 ;中效浓度 (IC50 )为 2 4 .8μm ol/ L 时 ,流式细胞仪分析证实姜黄素能使 HL- 6 0细胞聚积在 S期、G2 / M期 ;电镜观察发现姜黄素可使 HL- 6 0细胞超微结构发生改变。结论　姜黄素可干扰 HL- 6 0细胞的周期分布 ,具有抗细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用     

HL—60细胞在诱导分化中DNA含量及细胞动力学观察

以显微分光光度法和流式细胞计观察经维甲酸(RA)或二甲亚砜(DMSO)处理 HL-60细胞的 DNA含量和细胞增殖的动态变化.结果显示 HL-60细胞的 DNA 含量由原来高出一倍以上降至接近正常.其中 RA处理细胞 DNA 在处理后第3天和第5天有二次剧降,而 DMSO 处理细胞 DNA 量呈平缓逐日下降.两种处理细胞在诱导第2天 G_1/G_0期细胞明显增多,并在第3天达到高峰。对两种诱导剂作用机理进行了讨论.     

罗格列酮对人HL60细胞诱导凋亡作用的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARγ)配体罗格列酮(rosiglitazone,ROZ)对人急性髓性白血病细胞诱导凋亡作用的分子机制.方法 体外培养人急性髓性白血病HL60细胞,流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测细胞凋亡,West blot法检测药物处理后PPARγ、Bcl-2、Bax、NF-KB 蛋白表达的改变. 结果ROZ(50,100 μmol/L)可诱导HL60细胞凋亡.ROZ(2,10,50 μmol/L)处理后,HL60细胞PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.ROZ(10 μmol/L)处理HL60细胞6、12、24小时后PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.呈浓度依赖性和时间依赖性.结论 过氧化物酶增殖因子活化受体PPARγ配体罗格列酮诱导HL60细胞凋亡.使PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.     

顺铂引起卵巢癌细胞周期变化及凋亡的观察

目的 :了解顺铂 (DDP)引起卵巢癌细胞COC1、COC1/DDP细胞周期变化及凋亡规律。方法 :用光镜、电镜及流式细胞术等方法观察细胞凋亡规律及进行细胞周期分析。结果 :DDP引起COC1、COC1/DDP细胞周期变化主要表现为S期阻滞 ,P <0 .0 1;细胞死亡方式主要是凋亡 ,凋亡细胞发生在S期 ,P <0 .0 1;COC1、COC1/DDP细胞凋亡率不同 ,COC1凋亡率高 ,两组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :DDP引起COC1、COC1/DDP细胞S期阻滞、S期细胞凋亡 ,细胞凋亡与获得性耐药有关     

二甲基亚砜对HL-60细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

探讨二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性和细胞周期的影响。采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测二甲基亚砜处理前后的ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的改变,以流式细胞仪分析细胞周期的改变。二甲基亚砜作用于ＨＬ－６０细胞后,其端粒酶活性明显受到抑制,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著减少。二甲基亚砜可抑制ＨＬ－６０细胞的端粒酶活性,阻止细胞周期的进程。     

去甲斑蝥素诱导HL60细胞凋亡的研究

探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定NCTD对HL60细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示 :NCTD作用 4 8h对HL60细胞有较强生长抑制作用 ,作用 2 4h后达到凋亡高峰 ;1、5、10、50 μmol L的NCTD作用 2 4h后 ,G1期细胞百分数均减少 ,S期与G2 M期细胞百分数均增加 ,呈现G2 M期阻滞现象。说明NCTD可诱导HL60细胞凋亡 ,抑制瘤细胞分裂生长 ,且有明显的时间和剂量效应     

昆明山海棠总生物碱诱发HL-60细胞凋亡的观察

目的 观察昆明山海棠（TH）总生物碱诱导白血病细胞凋亡的发生情况。方法 应用台盼蓝染色法,荧光双重染色法,DNA电泳结合流式细胞仪对HL-6O细胞的凋亡进行观测。结果 HL-60细胞在TH总生物碱作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变、DNA梯状带及亚G1峰,且动态变化过程较为一致。结论 TH总生物碱具有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,总生物碱是TH诱导凋亡的有效成份之一。