柴胡皂苷A对脑外伤大鼠海马神经元自噬及AMPK-mTORC1通路的影响

目的 探讨柴胡皂苷A对脑外伤大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)–雷帕毒素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路及海马神经元自噬的影响.方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及柴胡皂苷A低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)组,和阳性对照(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤,15 m...     

茶多酚对内毒素抑制人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察茶多酚对脂多糖(LPS)诱导下人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响.方法 采用组织块培养法培养原代HPDLFs并传代、免疫组化检测,取第5代细胞用于实验.将LPS及茶多酚分组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别于24、48、72 h检测HPDLFs增殖活力.结果 免疫组化染色结果显示,所培养细胞的波形丝蛋白染色呈阳性表现,阳性部位位于胞质,角蛋白染色呈阴性表现.各浓度LPS组在24、48、72 h的光密度(OD)值(4 mg/L LPS组:0.323±0.007、0.345±0.010、0.437±0.007;20 mg/L LPS组:0.270±0.004、0.283±0.009、0.367±0.007; 100 mg/L LPS组:0.175±0.006、0.187±0.006、0.248±0.005;500 mg/L LPS组:0.088±0.004、0.091±0.006、0.153±0.009)与同时段空白对照组(0.306±0.008、0.333±0.007、0.399±0.007)组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).100 mg/L LPS组和各浓度茶多酚组在24、48、72 h的OD值(100 mg/L LPS组:0.216±0.010、0.260±0.010、0.352±0.012; 100 mg/L LPS组+0.125 g/L茶多酚组:0.300±0.010、0.408±0.013、0.490±0.014;100 mg/L LPS组+0.25 g/L茶多酚组:0.333±0.012、0.416±0.010、0.532±0.012;100 mg/L LPS组+0.5 g/L茶多酚组:0.390±0.012、0.485±0.011、0.642±0.013;100 mg/L LPS组+1 g/L茶多酚组:0.368±0.010、0.481±0.006、0.621±0.007)与同时段空白对照组(0.450±0.012、0.528±0.011、0.687±0.010)组间比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);各浓度茶多酚组在24、48、72 h的OD值均低于同时段100 mg/L LPS组(均P＜0.05).结论 LPS抑制HPDLFs的增殖,茶多酚明显促进LPS诱导下HPDLFs的增殖,这提示茶多酚可应用于牙周炎的预防及治疗.     

黄芪多糖对肺癌A549细胞自噬的作用及机制研究

目的 探讨黄芪多糖（APS）对黄嘌呤氧化酶（XOD）诱导的肺癌A549细胞自噬模型及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的影响及对自噬相关调节因子表达。方法 实验分为6组：正常组、模型组(20 U·L^-1 XOD处理24 h)、低、中、高3个浓度实验组(在模型组基础上分别使用100,200和400 mg·L^-1 APS进行处理)及3-MA抑制组(在模型组基础上使用2 mmol·L^-1 3-甲基腺嘌呤进行处理)。以免疫荧光法检测自噬相关蛋白,以蛋白质印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测mRNA的表达水平。结果 正常组、模型组、高浓度实验组及3-MA抑制组的微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）的蛋白荧光强度分别为6 368.50±17.90,2.57×10⁴±224.03,7 443.00±19.20和8 356.50±18.52;抗坏死骨片1（P62）的蛋白荧光强度分别为2.86×10⁴     

黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞AGEs及RAGEmRNA表达的影响

目的研究黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞（Fbs）AGEs浓度及RAGEmRNA表达的影响。方法30例2型糖尿病足溃疡患者随机分为黄芪多糖外敷治疗（A）组和外用生理盐水外敷治疗（B）组,各15例,组织块法培养Fbs,荧光分析法与逆转录一多聚酶链反应（reverse traBcription polymerasechain reaction,RT—PCR）技术检测成纤维细胞AGEs浓度及RAGEmRNA的表达,观察2组患者的肉芽组织出现时间（GT）和溃疡愈合时间（HT）。结果从第2周开始,A组的AGEs浓度及RAGEmRNA的表达显著低于B组（P〈0．05）,而且A组的GT和HT均显著低于B组（P〈0．01）。结论黄芪多糖可以有效降低糖尿病足溃疡Fbs的AGEs浓度及RAGEmR．NA的表达,显著缩短糖尿病足溃疡患者的GT和HT。     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

自噬通路中 mTOR 和 Beclin1与肿瘤关系的研究进展

细胞自噬是进化上保守的降解胞内受损的细胞器、异常蛋白质、外源微生物的溶酶体依赖代谢途径。研究证实,自噬与多种肿瘤细胞的恶性转化和肿瘤细胞的生长有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关基因 Beclin1可通过调节细胞自噬活性而在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用。目前,有关肿瘤细胞自噬性死亡的研究受到越来越多人的关注,它很可能成为肿瘤精确治疗的新靶点。深入研究自噬通路中相关因子,如 mTOR 和beclin1的具体作用条件及其机制,为基于自噬调节治疗肿瘤新方法提供更多的理论基础。本文现就对自噬通路中mTOR、Beclin1在肿瘤发生及发展中的作用及其治疗的研究进展作一简要概述。     

牛磺酸对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

观察牛磺酸(taurine，Tau)在血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast，CFb)增殖过程中对一氧化氮(nitric oxide，NO)及蛋白激酶C alpha(p-PKCα)的影响，以探讨牛磺酸抑制CFb增殖的信号转导途径。胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb，用Ang II诱导促进其增殖，采用MTT法检测细胞增殖；ELISA法测定I型胶原、 III型胶原的含量；流式细胞仪检测细胞周期；硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量；Western blotting法检测p-PKCα含量。牛磺酸(40、 80和160 mmol·L^-1)可抑制Ang II诱导的CFb增殖及I型胶原、III型胶原合成增加(P<0.05，P<0.01)，并使细胞G₀/G₁期百分率增加，S期细胞百分率降低(P<0.05，P<0.01)。牛磺酸明显抑制p-PKCα的蛋白表达， 提高CFb NO含量， 与Ang II组比较差别具有明显统计学意义(P<0.05， P<0.01)。牛磺酸通过降低p-PKCα的表达而提高CFb NO的含量，使CFb的增殖和胶原合成受到抑制。     

miR-145-3p靶向HDAC4调控人牙周膜成纤维细胞的自噬机制研究

目的 研究miR-145-3p能否调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的自噬及其可能存在的作用机制.方法 收集12～18岁因正畸需要减数而拔除的健康前磨牙,采集和培养HPDLFs,并进行鉴定.将miR-145-3p类似物(miR-145-3p-mimics组)、miR-145-3p抑制物(miR-145-3p-inh...     

芦荟多糖对人成纤维细胞体外分泌转化生长因子-β1的影响

目的观察芦荟多糖对体外培养成纤维细胞分泌转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。方法不同浓度（25,50,100,100,400mg·L-1）芦荟多糖作用于人成纤维细胞,采用ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1水平。并以等体积的细胞培养液处理为对照组。结果经芦荟多糖作用后人成纤维细胞培养液中TGF-β1水平与对照组比较明显升高（P〈0．05～0．01）,且呈一定的量效关系。结论芦荟多糖具有促进人成纤维细胞分泌TGF-β1作用。     

TGF—β1对人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1对体外培养的人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响。方法：采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,采用羟脯氨酸试剂盒来观察细胞合成胶原的情况。结果：0．1、1．0、10．0、50．0ng／ml的转化生成因子β1可以促进牙周膜成纤维细胞合成胶原,其中10ng／ml的TGF—β1在48h促胶原合成作用最明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：转化生长因子β1有促进人牙周膜成纤维细胞合成胶原的作用。     

左卡尼汀抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖并诱导自噬和凋亡的研究

目的 研究左卡尼汀对高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬、凋亡和增殖的影响机制。方法 将HMC细胞随机分为NC、Man、HG、LC、sh-TRPC6及sh-TRPC6+AICAR组。NC组、Man组及HG组中HMC细胞分别用正常糖培养基、高渗培养基及高糖培养基培养。将HG组HMC细胞经1.8 mmol·L^-1左卡尼汀处理后,随机分为LC组、sh-TRPC6组及sh-TRPC6+AICAR组。sh-TRPC6组及sh-TRPC6+AICAR组转染sh-TRPC6,sh-TRPC6+AICAR组再经AICAR处理。以蛋白质印迹法检测各组HMC细胞中瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)、腺苷一磷酸活化蛋白激酶/西罗莫司靶蛋白信号通路(AMPK/mTOR)通路相关蛋白及自噬相关蛋白的表达水平,以细胞计数法-8(CCK-8)检测各组HMC细胞的增殖活力,以Annexin V-FITC/PI检测各组HMC细胞的凋亡水平。结果 在高糖条件下,HMC细胞增殖活力显著上调,且自噬和凋亡水平被抑制(P<0.05)。LC组和HG组的增殖活力(光密度值)分别为0.65±0.04和0.86...     

雷帕霉素对肾间质成纤维细胞结缔组织生长因子和纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究雷帕霉素(RAP)对体外转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肾间质成纤维细胞NRK-49F的作用及其抗纤维化的作用机制.方法 TGF-β1 2ng/ml刺激肾间质成纤维细胞NRK-49F后,分为对照组(C组)及不同浓度RAP 20、40、60、80、100ng/ml处理组(分别为A1、A2、A3、A4、A5组);分别孵育24、48、72 h;采用Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(FN)表达的变化.结果 与C组相比,不同浓度RAP均能降低CTGF和FN蛋白表达;其中,A2组抑制效应最为明显(P＜0.05),24 h时CTGF和FN蛋白表达分别下降45.11％和37.84％,48 h时分别下降40.09％和45.68％,72 h时分别下降49.62％和51.65％.结论 RAP可以抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞CTGF和FN表达增加,提示RAP可能用于防治肾间质纤维化.     

黄芪多糖对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芪多糖对前列腺癌细胞株PC3细胞增殖和凋亡的影响。方法分别用浓度为0.5、1、2.5、5、10 mg/ml的黄芪多糖(APS)干预PC3细胞12、24、36 h后,用甲基噻唑基四唑法检测不同浓度APS对PC3细胞增殖的量效和时效关系;台盼蓝染色法测定细胞生长曲线;APS干预24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 APS能抑制PC3细胞的增殖,呈时间与浓度依赖性,不同浓度APS组之间与不同作用时间组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。APS干预PC3细胞24 h后,对照组细胞凋亡率为5.01%,1 mg/ml和5 mg/ml的APS培养24 h细胞凋亡率分别为14.46%和27.71%,较对照组明显增加,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论APS能够抑制前列腺癌细胞株PC3细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨黄芪多糖对结直肠癌自噬的影响

目的 探讨黄芪多糖（APS）对结直肠癌自噬的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测APS各剂量（0.25 g/L、0.5 g/L、0.75 g/L、1 g/L）组对人结直肠癌HCT-116细胞增殖的影响,通过细胞划痕实验检测APS对HCT-116细胞迁移的影响,通过单丹磺酰尸胺染色检测APS对结直肠癌细胞自噬的影响,采用Western blot法检测APS对HCT-116细胞和结直肠癌荷瘤裸鼠肿瘤中自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白LC3B、p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、PI3K、Akt及m TOR表达的影响;通过免疫组化染色检测APS对结直肠癌肿瘤中自噬相关蛋白p62表达的影响。结果APS可抑制HCT-116细胞增殖,且呈剂量依赖性（P<0.05）;APS可通过诱导细胞自噬抑制HCT-116细胞增殖和迁移,而自噬抑制剂3-MA(2 mmol/L)不仅可减弱APS对HCT-116细胞自噬的诱导作用,也可减弱APS对HCT-116细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.05）;APS可上调HCT-116细胞及结直肠癌小鼠肿瘤中自噬相关蛋白LC3BⅡ...     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞合成层黏连蛋白的影响

牙周膜成纤维细胞（PDLF）是一种具有多种生物学功能和分化潜能的细胞群,在牙周组织重建过程中起重要作用,其增殖和优先迁移是牙周再生获得成功的首要条件,目前的研究表明,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）能促进体外培养的人牙周膜细胞增殖和分化,还能促使PDLF在牙根面上特别是病变牙根的表面附着和增殖。本研究目的是观察在外源性bFGF对体外的PDLF细胞合成层黏连蛋白（LN）的影响。     

自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的：探讨自噬（ autophagy）对正常培养多发性骨髓瘤（ Multiple myeloma,MM）细胞株增殖的影响。方法 MM细胞株U266在正常培养条件下分别加入雷帕霉素和3－甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）,以正常血清培养U266细胞及淋巴瘤Jurkat细胞株为对照组;分别检测细胞的增殖及凋亡水平;单丹磺酰尸胺（ monodansylcadaverine ,MDC）荧光染色法检测细胞自噬水平;逆转录PCR检测自噬相关基因mtor、Beclin1、Atg5在细胞内水平,蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关蛋白轻链3I／Ⅱ（ LC3I／Ⅱ）含量。结果 U266细胞及Jurkat细胞内均存在自噬,但前者水平高于后者。雷帕霉素可诱导MM细胞发生自噬,3-MA对自噬有双重作用。雷帕霉素及3-MA下调细胞增殖水平。雷帕霉素及3-MA处理24 h可上调正常培养条件下U266细胞凋亡水平（1．7％±0．2％,19．1％±1．0％和16．8％±0．61％）。延长培养时间至72 h,雷帕霉素处理组凋亡水平无明显变化（16．9％±0．48％）。而3-MA处理组凋亡水平下降（9．0％±0．70％）。结论 MM细胞株内会存在一定水平的自噬,并通过实验证明其高于淋巴瘤Jurkat细胞株的自噬水平。在正常培养条件下加入了雷帕霉素及3-MA可抑制MM细胞的增殖,并可诱导细胞凋亡。     

紫杉醇对成纤维细胞增殖侵袭能力的影响

目的研究在Transwell培养条件下紫杉醇对成纤维细胞增殖侵袭能力的影响。方法培养、传代并鉴定胸主动脉外膜成纤维细胞,然后用Transwell小室建立细胞培养模型,以0,9 nmol.L-1紫杉醇分别干预;用MTT法检测成纤维细胞侵袭增殖的情况。结果 0,9 nmol.L-1紫杉醇组成纤维细胞光吸收值分别为(0.56±0.08),(0.44±0.05),2组比较有统计学意义(P<0.01)。结论紫杉醇能显著降低血管外膜成纤维细胞的增殖能力,可以延缓介入治疗后血管的再狭窄。     

mTOR信号通路对扩张性心肌病大鼠心肌纤维化进程调控作用的实验研究

目的探讨哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在扩张性心肌病大鼠心肌纤维化进程中的作用。方法Wistar大鼠30只随机分为2组,扩张性心肌病模型组（DCM组）和对照组,每组15只,DCM组即实验起始每天通过尾静脉注射阿霉素建立大鼠扩心病模型（2．5mg／kg,2次／周,共6周）,对照组同法注射等量0．9％氯化钠溶液。6周后超声心动图检测大鼠左心室结构和功能,苦味酸一天狼星红染色观察大鼠心肌间质胶原纤维的变化,RT—PCR方法检测roTOR与真核起始因子4E（eIF-4E）的表达。结果与对照组比较,DCM组大鼠左心室直径增加,收缩功能降低（P〈0．05）;左心室心肌间质胶原容积、mTOR和eIF4E的mRNA表达水平明显增加（P〈0．05）。结论mTOR和eIF-4E的表达增加可能是介导扩张性心肌病心肌纤维化重构的机制之一。     

黄芪注射液对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的干预作用

目的观察黄芪注射液对体外培养人胚肺成纤维细胞增生以及细胞外基质合成的影响。方法用0⁴00 mg/mL浓度的黄芪注射液作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,24400 mg/mL浓度的黄芪注射液作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,24⁷2 h后观察不同浓度的黄芪注射液对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性,天狼猩红染色观察胶原生成情况。结果与对照组相比,在2572 h后观察不同浓度的黄芪注射液对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性,天狼猩红染色观察胶原生成情况。结果与对照组相比,在25²00 mg/mL浓度作用下,黄芪注射液对成纤维细胞的生长具有促进作用;在400 mg/mL浓度作用下,黄芪注射液能够明显抑制人胚肺成纤维细胞的增殖。结论黄芪注射液在高浓度条件下抑制人胚肺成纤维细胞的生长,中低浓度下促进成纤维细胞的生长,呈现剂量依赖性。     

黄芪多糖对脐血造血细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪多糖对脐血造血细胞凋亡作用的影响。方法采用淋巴细胞分离液分离出脐血中的单个核细胞（MNC）,IMDM培养基加入不同浓度的黄芪多糖进行无血清体外培养48h和72h。收获培养后的细胞用AnnexinV-FITC和半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）荧光分别标记,流式细胞技术分析测定细胞的凋亡表达情况。结果在无血清IMDM培养液中培养后,AnnexinV及Caspase-3在脐血造血细胞表面均有表达。培养48h后在黄芪多糖40μg／ml组,细胞表面Annexin V及Caspase-3的表达均比对照组有明显减少（P〈0．05）。培养72h后Caspase-3的表达在黄芪多糖40μg／ml组为（44．90±1．18）％,较对照组[（52．47±1．95）％]有明显减少,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论在体外无血清及细胞因子的培养体系中,一定浓度的黄芪多糖具有抑制造血细胞凋亡的作用。Caspase-3在造血细胞凋亡过程中起着重要的作用。