苯并[a]芘对小鼠肝脏的氧化损伤作用研究

[目的]探讨不同剂量苯并[a]芘对小鼠肝脏的氧化损伤作用. [方法]用不同剂量(1 mg/kg,2.5mg/kg,6.25 mg/kg体重)苯并[a]芘对小鼠急性染毒,植物油为对照,2周后测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量,用单细胞凝胶电泳技术检测小鼠肝脏细胞DNA损伤情况. [结果]与对照组比较,各染毒组SOD活性均显著性下降(P＜0.05),MDA含量显著升高(P＜0.05),肝脏细胞彗星率随苯并[a]芘剂量增加而增加.彗星尾长随剂量增加而延长(P＜0.01). [结论]苯并[a]芘对小鼠肝脏有明显的氧化损伤作用.     

中国八省市食用植物油中苯并[a]芘的调查分析

目的了解中国食用植物油中苯并[a]芘的污染状况。方法 2011年对中国八省(区、市)不同销售场所销售的部分食用植物油中苯并[a]芘含量进行调查,通过对数据进行统计分析后进行评价。结果从食用油种类分析,菜籽油和花生油苯并[a]芘含量最高,分析可能与其生产加工方式有关。从样本类型分析,散装植物油苯并[a]芘含量高于定型包装产品。结论中国食用植物油(主要为花生油和菜籽油)仍存在苯并[a]芘超标现象。     

煤尘及其苯并[a]芘混合物细胞遗传毒性研究

目的探讨煤尘及其苯并[a]芘混合物有无细胞遗传毒性。方法分别用烟煤、无烟煤、褐煤粉尘及其与苯并[a]芘混合物的二甲基亚砜混悬液,作人外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)试验。试验分为加与不加体外代谢活化系统(S9)2部分。将三种煤尘及其苯并[a]芘混合物各分为500μg/皿、50μg/皿和5μg/皿3个剂量组并各设三个平行样;设生理盐水(NS)为阴性对照;二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照;丝裂霉素C和环磷酰胺为阳性对照。全部标本37℃培养72 h后制成染色体标本玻片,油镜下观察、计数细胞第二增殖周期分裂相的染色单体交换频率。结果3种煤尘在加和不加S9时均不能使SCE频率升高。苯并[a]芘在不加S9时无诱变作用,加入S9后可使SCE频率显著高于DMSO组(P<0.05)。丝裂霉素C和环磷酰胺均使SCE频率显著升高(P<0.05)。三种煤尘与苯并[a]芘的混合物加入S9后,其SCE频率显著高于DMSO组(P<0.05),但与加入S9的苯并[a]芘组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论三种煤尘及其苯并[a]芘混合物均未见细胞遗传毒性作用。     

苯并[a]芘对大鼠学习记忆能力及氨基酸类神经递质的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠学习记忆能力的影响及机制。[方法]40只Wistar大鼠随机分为5组:空白对照组、溶剂对照组和3个染毒组(分别为6.25、2.5和1mg/kg体重),连续腹腔染毒B[a]P13周(90d)。染毒结束后用Morris水迷宫测定大鼠的空间学习记忆能力,用免疫组化法观察其大脑皮层、海马内γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)阳性神经元表达。[结果]在Morris水迷宫试验中,高、中剂量组寻找平台的潜伏期较对照组延长(P﹤0.05),末次跨平台次数和在目标区域游泳时间所占比例较对照组明显减少(P﹤0.05),各暴露组Glu、GABA阳性平均光密度与对照组比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]苯并[a]芘可能通过影响大鼠海马和大脑皮质Glu和GABA含量,使大鼠学习记忆能力降低。     

苯并[a]芘对小鼠神经毒性的光镜、电镜及行为学研究

目的：研究苯并[a]芘对小鼠神经系统的损伤。方法：将50只昆明小鼠分为5组，每组10只，染毒组用苯并[a]芘的植物油溶剂进行腹腔注射处理，每次剂量分别为7．8，3．2，1．3mg/kg，每周4次，溶剂对照组用植物油溶剂作平行处理；空白对照组不施加处理因素。实验中观察一般情况，于实验第21，35，49，63天各进行1次行为学实验，实验10周后取小鼠脑组织，脊髓与坐骨神经制作光镜及电镜切片并观察。结果：发现苯并[a]芘染毒组光镜及电镜下可见明显的神经组织损伤，行为学测试中游泳实验记分较对照组低，而溶剂对照组及空白对照组组织结构未见异常，行为学实验正常，结论：苯并[a]芘具有神经毒性。     

苯并[a]芘对大鼠海马神经元形态学的影响

目的研究苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠海马形态学和突触的影响。方法初断乳雄性Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、溶剂对照组和3个染毒组(分别为6.25、2.5和1mg/kg体重),连续腹腔染毒13周(90d)。在染毒结束后,用电镜和光镜观察海马形态学改变。结果 HE染色对照组和B[a]P暴露各组大鼠海马神经元形态结构未见明显异常,电镜仅高剂量组偶有线粒体肿胀和核浓缩现象出现。高剂量组神经元突触PSD厚度和突触活性区长度均明显小于对照组和低剂量组(P﹤0.05),突触界面半径明显大于对照组和低剂量组(P﹤0.05)。结论低剂量B[a]P暴露对海马神经元形态和超微结构无明显影响,但B[a]P可能引起突触形态学的改变,降低突触的传递效率,因而影响学习记忆能力。     

苯并[a]芘单独以及与雌二醇联合染毒对小鼠肺组织雌激素受体-β表达的影响

目的研究苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,B[a]P)单独以及与雌二醇联合染毒对小鼠肺组织雌激素受体-β(estrogen receptor,ER-β)表达的影响,探讨雌激素在B[a]P所致小鼠肺癌中的作用。方法雌性昆明种小鼠125只,随机分为5组,每组25只,正常对照组(橄榄油灌胃和皮下注射)、雌二醇组(900μg/kg雌二醇)、B[a]P组(75μmol/kgB[a]P),B[a]P+高剂量雌二醇组(75μmol/kgB[a]P和900μg/kg雌二醇)和B[a]P+低剂量雌二醇组(75μmol/kgB[a]P和300μg/kg雌二醇),B[a]P灌胃,雌二醇皮下注射,灌胃和注射每周一次,持续8周,之后给予8周的恢复期,共16周。手术切除全肺,采用实时定量PCR(Realtime-PCR)和蛋白质印迹(Westernblotting)技术测定小鼠肺组织中ER-β的表达水平。结果B[a]P组和B[a]P+低剂量雌二醇组ER-β基因和蛋白的表达量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雌二醇组ER-β基因表达高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。B[a]P+高剂量雌二醇组和...     

婴幼儿奶粉中苯并[a]芘检测技术研究及含量调查

目的建立婴幼儿奶粉中苯并[a]芘检测技术,并对市售奶粉中苯并[a]芘含量进行调查分析。方法婴幼儿奶粉在碱性条件下用乙醚-石油醚(1∶1,V/V)提取,然后用1.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液皂化,固相萃取柱净化后,经DB-EUPAH色谱柱(20 m×0.18 mm×0.14μm)分离后气相色谱质谱法检测,D12-苯并[a]芘内标定量。结果当婴幼儿奶粉中苯并[a]芘加标0.3、1.0和5.0μg/kg时,平均回收率分别为116.7%、86.0%、96.4%,相对标准偏差为10.5%、4.2%和4.4%(n=6)。方法定量限为0.3μg/kg,检出限为0.1μg/kg,采用本方法对市售的40份国产及进口婴幼儿奶粉进行测定,苯并[a]芘含量范围为<0.1~0.25μg/kg,检出率为32.5%。结论本方法简便快速准确,净化效果好,灵敏度高,满足婴幼儿奶粉中苯并[a]芘检测要求。目前市售婴幼儿奶粉中苯并[a]芘含量处于较低水平。     

苯并[a]芘在大鼠脑组织中分布动态观察

目的观察[14C]标记苯并[a]芘在大鼠脑内的分布。方法将100只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组尾静脉注射[14C]标记苯并[a]芘3.7×105Bq/kg,对照组注射等量生理盐水;在注射后1,6,12,24和48 h用光镜放射自显影法观察苯并[a]芘在脑内的分布情况。结果与对照组比较,实验组大鼠脑组织注药后1 h即有苯并[a]芘银粒出现,随着时间的增加,银粒数也逐渐增加,24 h达高峰,48 h明显减少,注射后1,6,12,24,48 h银粒数分别为(17.68±1.79),(22.67±2.15),(25.79±2.55),(32.33±2.78),(18.01±1.68)粒,差异有统计学意义(F=69.67,P0.01);银粒在脑中分布不均匀,注药后1 h主要集中在海马,6 h主要集中于大脑皮层,12 h则分布于纹状体;各时相脑组织中神经元银粒数明显高于神经胶质细胞(P0.05)。结论苯并[a]芘在各脑区的分布不均匀,24 h达到高峰,神经元细胞可能是苯并[a]芘靶细胞。     

运用彗星试验检测麝香酮对苯并(a)芘致DNA损伤的影响

[目的]研究麝香酮在体内试验条件下 ,对苯并(a)芘致小鼠肝和肺细胞核DNA损伤的影响。[方法]SENCAR雄性成年小鼠灌胃 ,分别单独给予苯并(a)芘125、250、500mg/(kg·bw·d)和用麝香酮250、500mg/(kg·bw·d)预处理后再给予苯并(a)芘125mg/(kg·bw·d) ,处死动物后分离小鼠肝和肺组织细胞核做彗星测试 ,采用CCD成像分析系统分析彗星 ,取尾相 (olivertailmoment,OTM)值判断DNA损伤强度。[结果]苯并(a)芘各浓度组均出现小鼠肝和肺细胞OTM值的明显增加 ,高浓度麝香酮[500mg/(kg·bw·d)]可引起小鼠肝细胞OTM值的轻度增加。用高浓度麝香酮预处理小鼠后再给予苯并(a)芘 ,所观察到的肝、肺的DNA损伤 (肝OTM值为7.6、肺为11)较之苯并(a)芘单独染毒引起的DNA损伤(肝OTM值为5.1、肺为6.9)增加更明显。[结论]麝香酮能明显增强苯并(a)芘所致的DNA损伤作用     

油炸面制品中的苯并[a]芘的高效液相色谱荧光测定法

目的建立索氏提取法-SPE净化-高效液相色谱仪-荧光检测器检测油炸面制品中苯并[a]芘及多环芳烃的检测方法。方法油炸面制品经过粉碎,用正己烷经索氏提取器提取样品中的油脂,用中性氧化铝固相萃取柱净化提取油脂中的苯并[a]芘,净化后的样品处理液用Waters PHA 4.6×250mm色谱柱分离,为了达到良好的分离效果,使用乙腈:水梯度洗脱,流速1.5 ml/min,柱温30℃。在不同时间改变荧光检测器的激发波长及发射波长,提高检出限,用外标法定量。结果苯并[a]芘在0.01~0.5μg/ml范围内线性关系良好,r=0.999 2,检出限0.014μg/kg,加标回收率为74.7%~86.2%,测定了2013年西安市市售油炸制品中苯并[a]芘的含量为0.027~54.64μg/kg。结论该方法检出限低,灵敏度高,简便易于操作,适用于油炸面制品中苯并[a]芘的测定。     

磷酸化Rb在苯并[a]芘致皮质神经元凋亡中的作用

目的探讨磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白（phospho-retinoblastoma protein,p-Rb）在苯并[a]芘致神经元凋亡过程中的作用。方法用CCK-8试剂检测细胞活性;Annexin—V／PI双染法检测细胞凋亡率,免疫荧光细胞化学染色观察p．Rb表达,免疫印记法（Western-blot）检测p—Rb的表达情况。结果与对照组相比,各染毒组神经元活性降低（P〈0．05）,凋亡率增高（P〈0．05）,p-Rb表达量增高（P〈0．05）,2μmol／L组加入抑制剂后细胞活性增强（P〈0．05）,凋亡率下降（P〈0．05）,p—Rb阳性细胞数减少（P〈0．05）,p-Rb表达量降低（P〈0．05）。结论苯并[a]芘可引起磷酸化Rb水平升高,是苯并[a]芘致神经元凋亡的可能机制。     

苯并[a]芘对体外培养大鼠皮层神经元HSP70表达的影响

目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外培养大鼠皮层神经元热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠皮层神经元,用0、0.1、0.5 、1、5和10μmol/L浓度的B[a]P染毒24h观察剂量-效应关系;用0、0.5和5μmol/L浓度的B[a]P染毒24、48和72h观察时效关系.培养液中均添...     

B(a)P对鲫鱼全脑NO、NOS水平的影响

目的　探讨苯并 (a)芘 [B(a)P]对鲫鱼全脑一氧化氮 (NO)和一氧化氮合酶 (NOS)的影响及水生态毒理学机制 ,同时为苯并 (a)芘的水污染监测探寻灵敏简便的亚致死指标。方法　设立空白对照、溶剂对照、3× 1 0 -4～ 3×1 0 -1 mg/LB(a)P处理组共 6个实验组 ,分别于染毒后 1 ,3,6和 1 2d取鲫鱼全脑进行检测。 结果　全脑一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶 (NOS)水平与苯并 (a)芘存在着剂量及染毒时间依赖关系。结论　引起体内NOS活性升高及NO的过量产生是苯并 (a)芘在鲫鱼体内发挥毒性的机制之一。     

邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘长期联合暴露对大鼠的精子发育毒性

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和苯并[a]芘(B[a]P)长期联合作用的雄性生殖毒性。方法将32只健康雄性SPF级SD断乳大鼠,随机分为4组,分别用玉米油、B[a]P1mg/kg、DBP50mg/kg、DBP50mg/kg+B[a]P1mg/kg隔日灌胃染毒,90d后处死,取睾丸、附睾等脏器称重并计算脏器比,分离生精细胞,用流式细胞计数检测生精细胞周期的变化,光镜下进行睾丸形态学观察和精子检查,取心脏血用化学发光法检测血清睾酮和黄体生成素含量。结果精子数、精子活动度各组间差异无统计学意义。与对照组比较,B[a]P与DBP单独染毒未产生影响,两者联合染毒可使附睾脏体比下降(P0.05)、睾酮浓度下降(P0.05)。与对照组比较,B[a]P与DBP单独和联合染毒均可使生精小管横截面积显著下降(P0.05);B[a]P与DBP两者联合染毒以及B[a]P单独染毒可使4倍体细胞增加(P0.05)、单倍体细胞与4倍体细胞比值下降(P0.05),B[a]P与DBP两者联合染毒以及DBP单独染毒精子畸形率增加(P0.05),B[a]P与DBP两者联合染毒生精细胞中单倍体细胞减少(P0.05)。结论用单独暴露不引起雄性大鼠出现明显精子发育毒性的DBP和B[a]P的剂量联合染毒大鼠,其对大鼠精子发育的联合作用主要表现为协同效应,提示在评价水中有机物浓度的生殖健康风险时应考虑毒物的联合效应和亚临床改变下的影响,不能仅依靠单一毒物的毒理学研究和流行病学调查。     

苯并[a]芘慢性染毒对大鼠学习记忆能力的影响

目的探究苯并[a]芘(B[a]P)慢性染毒对SD大鼠学习记忆能力的影响。方法将60只SD大鼠随机分为溶剂对照组及B[a]P染毒组(B[a]P低剂量染毒组、中剂量染毒组和高剂量染毒组),对溶剂对照组大鼠腹腔注射植物油,对染毒组大鼠腹腔注射不同剂量B[a]P,连续注射10周。染毒结束后,采用Morris水迷宫实验对大鼠学习记忆能力进行测试。结果 B[a]P染毒组多数大鼠在研究期间均有异常行为表现。定向导航实验中,各组大鼠的平均逃避潜伏期随着实验天数的增加而缩短,且在同一天内,各组大鼠的平均逃避潜伏期比较,差异均有统计学意义(P0.01)。其中,溶剂对照组大鼠的平均逃避潜伏期明显短于B[a]P染毒组大鼠,且在实验的前4天,随着染毒剂量的增加,大鼠的平均逃避潜伏期越长,差异均有统计学意义(P0.05)。在空间探索实验中,各组大鼠第1次找到原平台位置所用时间、穿越原平台位置次数及在原平台象限的停留时间比较,差异均有统计学意义(P0.01)。其中,溶剂对照组大鼠第1次找到原平台位置所用时间短于B[a]P染毒组大鼠,穿越原平台位置次数多于B[a]P染毒组大鼠,在原平台象限的停留时间长于B[a]P染毒组大鼠,且随着染毒剂量的增加,大鼠第1次找到原平台位置所用时间越长,穿越原平台位置次数越少,在原平台象限的停留时间越短,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 B[a]P慢性染毒对大鼠的学习记忆能力有损害作用,且大鼠的学习记忆能力随B[a]P染毒剂量增加呈逐渐降低趋势,表明B[a]P对大鼠学习记忆能力的损害存在一定的剂量效应关系。     

苯并[a]芘对大鼠海马形态学的影响

目的对大鼠进行苯并[a]芘(B[a]P)急性染毒后用光镜和电镜观察其海马组织的形态学改变,从而探究B[a]P对大鼠海马神经细胞的影响。方法将50只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和实验组(n=40),其中实验组又按大鼠染毒后的处死时间分为5组(染毒后1h组、染毒后1d组、染毒后2d组、染毒后3d组、染毒后5d组),每组8只。对实验组大鼠尾静脉注射B[a]P,对照组大鼠尾静脉注射相同剂量的生理盐水。染毒结束后,分别在不同的特定时间点取下大鼠的海马组织在光镜和电镜下进行观察。结果与对照组相比,实验组大鼠B[a]P急性染毒后出现了易受惊、易兴奋、易激惹、感觉迟钝、反应低下等异常表现。各组大鼠海马组织光镜观察结果显示,实验组大鼠海马神经细胞数量及形态与对照组大鼠比较,没有明显变化。而各组大鼠海马组织电镜观察结果显示,实验组大鼠的海马神经细胞出现了胞体浓缩变性、细胞核皱缩、粗面内质网扩张、线粒体肿胀等。结论 B[a]P急性染毒对大鼠海马神经细胞具有损伤作用。     

苯并(a)芘对大鼠学习记忆行为及海马NOS和NO的影响

[目的]探讨不同剂量苯并[a]芘对大鼠学习记忆能力的影响及其机制。[方法]将40只Wistar幼鼠随机分为5组,空白对照组、溶剂对照组、3个染毒组(浓度分别为1.0、2.5和6.25mg/kg体重),连续腹腔染毒13周(90d)。染毒结束后用Morris水迷宫测定大鼠的空间学习记忆能力,测定海马组织中NOS活性和NO含量。[结果]BaP暴露各组大鼠寻找平台的平均逃避潜伏期比对照组明显延长,末次跨台次数明显减少(P﹤0.05),BaP暴露各组大鼠海马NOS活性和NO含量均低于对照组(P﹤0.05)。[结论]长期BaP暴露使大鼠空间学习记忆能力降低,其机制可能与BaP抑制NOS活性,影响海马NO含量,从而使LTP的诱导和维持受损有关。     

卟啉对卷烟烟气中3,4-苯并[a]芘的截留作用分析

目的探讨卟啉对卷烟主流烟气中3,4-苯并[a]芘的截留作用及其作用机制。方法在卷烟滤嘴中分别加入2.0、4.0、8.0μg/支卟啉,采用气相色谱-质谱联用法测定主流烟气中3,4-苯并[a]芘的含量,采用荧光猝灭法测定卟啉与3,4-苯并[a]芘的相互作用。结果卷烟主流烟气中的3,4-苯并[a]芘含量随着卟啉加入量的增加而降低,最高降低率可达33.10%。卟啉与3,4-苯并[a]芘发生了相互作用、得出了线性关系良好的猝灭方程及基本处于105数量级的结合系数。结论卟啉对卷烟主流烟气中的3,4-苯并[a]芘有明显的截留效果。     

苯并[a]芘亚急性染毒对雄性Wistar大鼠心血管的影响

目的探讨苯并[a]芘(B[a]P)腹腔注射亚急性染毒对雄性Wistar大鼠心血管的影响。方法将10~11周SPF级雄性Wistar大鼠40只按体重随机分为空白对照组,溶剂对照组,低、中、高剂量染毒组(B[a]P浓度分别为1.0、2.5和6.25 mg/kg),每组8只。溶剂对照组给予1.0 mL/kg的橄榄油,空白对照组不做任何处理,连续28天。染毒结束后用Prospect 3.0小动物超声成像仪和BL-410生物机能实验系统观察其左心室结构功能和血流动力学改变。HE染色观察大鼠胸主动脉和左心室病理变化。结果染毒后各组大鼠射血分数(ejection fraction, EF)、左室短轴缩短率(fractinanal shortening, FS)和左室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure, LVEDP)总体差异有统计学意义(H=11.497,P=0.022;H=11.422,P=0.022;H=10.104,P=0.039),中剂量组EF及FS低于溶剂组(调整后P<0.05),高剂量组大鼠LVEDP高于溶剂组(调整后P<0.05)。中、高剂量组胸主动脉HE染色显示血管内膜部分缺失,部分内皮细胞脱落,内膜下胶原暴露,中膜层间隙较大;中、高剂量组左室横纹模糊不清,肌纤维减少断裂或消失,心肌间隙增宽,偶见炎症细胞或有心肌间隙渗血现象。结论苯并[a]芘可致雄性Wistar大鼠心血管功能和内皮发生损伤。