成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细胞分泌的特异性基质蛋白是成牙本质细胞最为重要的表型[2 ] 。但是两者均有一定的复杂性 ,首先 ,成牙本质细胞形态经过一系列变化过程 ,最终才极化为成熟细胞。而随着分子生物学技术的进展 ,人们对牙本质特异蛋白的认识不断深入 ,业已进入分子水平 ,但仍有许多问题尚…     

新生大鼠成牙本质细胞及牙本质形成的光、电镜观察

目的:探讨成牙本质细胞的发育变化以及牙本质的结构发育特点.方法:取不同日龄新生大鼠的下颌切牙牙胚进行光、电镜观察.结果:成牙本质细胞由低柱状变为高柱状,并发生极化,细胞器渐增多,有分泌颗粒出现,细胞突起逐渐形成;形成的前期牙本质和牙本质在6～9 d达最厚,且胶原纤维较丰富而密集,牙本质小管多;成牙本质细胞突起贯穿前期牙本质和牙本质,并进入牙釉质中.结论:0～9 d日龄大鼠的下颌切牙牙胚正处于牙体组织的分泌形成期,是研究牙齿发育过程的很好的动物模型.     

过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响

目的:观察过量氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞显微、亚显微结构的改变。方法:选择30只Wister大鼠,随机分为两组,每组15只。Ⅰ组为对照组,蒸馏水灌胃。Ⅱ组为实验组,20 mg/(kg.d)氟化钠水灌胃。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、透射电镜技术观察过量氟对大鼠切牙形态、成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响。结果:实验组切牙牙釉质牙本质厚度明显变薄,髓腔内侧前期牙本质宽于对照组,球间牙本质增多。釉质生长线、釉柱横纹明显,牙本质生长线明显。透射电镜观察实验组大鼠牙髓成牙本质细胞体积较小,细胞器减少,一些细胞呈现凋亡迹象。结论:过量的氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞分化和分泌基质都受一定程度的阻遏,成牙本质细胞细胞器减少,细胞凋亡。     

人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化

目的 建立成牙本质细胞样细胞体外培养体系,观察体外培养的牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞周期的变化.方法 利用组织块酶解法培养人牙髓细胞并进行鉴定,使用矿化诱导液诱导其向成牙本质细胞样细胞分化.对细胞增殖情况使用流式细胞仪进行细胞周期测定.结果 ①获得的牙髓细胞均为波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证明为中胚层来源的细胞.②诱导分化的牙髓细胞在2周左右进入复层生长期;3周左右开始有细胞结节形成,周围细胞呈放射状排列,部分细胞出现细长突起并呈极性排列;4周左右细胞团中央Von Kossa染色为阳性.③在诱导开始后1周,细胞处于活跃的增殖期,以后细胞增殖变慢,3周后多数细胞处于G0G1期.结论 实验成功建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能,诱导分化后细胞增殖变慢,是研究成牙本质细胞的较好模型.     

热休克蛋白27在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的：研究内毒素（LPS）诱导大鼠牙髓炎模型中HSP27在不同时间的动态表达及定位情况，观察HSP27在牙髓炎中的表达特点，推测它在牙髓炎发生、发展中的意义。方法：通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织连续进行切片，同时超敏免疫组化分析。结果：1d组HSP27在成牙本质细胞呈中度阳性表达，成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈阳性表达，3、5、7d组中HSP27在成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞表达减少，2周以后，成牙本质细胞、成牙本质细胞突、修复性牙本质和牙髓成纤维细胞可见HSP27阳性表达，3、4周以后，成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达，5周以后，牙髓组织变性、坏死，呈均质弱阳性染色。结论：HSP27在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞，限制炎症发展，在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

骨连结蛋白在大鼠正常牙髓和牙髓修复中的基因表达

目的 :利用原位杂交技术 ,观察骨连结蛋白 (osteonectin ,ON)在大鼠正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征。方法 :在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察 3d和 15d后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛 (Digoxigenin)。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记 ,DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果 :正常牙髓组织中 ,ON基因表达于牙髓成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞内。ON在备洞 3d后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。 15d后 ,可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达ON。结论 :在牙髓修复过程中 ,ON在牙髓修复过程中通过自分泌途径 ,参与了修复性牙本质的形成和矿化     

强气流吹干牙本质对成牙本质细胞影响的实验研究

目的:利用强度不同气流吹干制备完全的深龋洞后充填窝洞,研究强气流吹干牙本质对成牙本质细胞的影响。方法:选取20颗健康成人第三磨牙,表现为无对颌或是阻生齿,均未患有牙体牙周疾患。将选取的20颗牙齿分别制备洞型致剩余牙本质厚度约0.25mm,将20颗牙齿随机分为2组,一组使用轻到中度强度气流吹干窝洞后进行充填作为对照组,另一组使用强气流。显微图像分析系统计算台盼兰染色率以判断强气流对成牙本质细胞的影响,并做统计学分析。结果:利用强气流吹干窝洞可造成龋洞对应髓室顶或髓室壁的成牙本质细胞及其突起萎缩、坏死,周围区域成牙本质细胞形态良好。结论:使用强气流吹干切割完全的牙本质可伤害成牙本质细胞,临床治疗深龋应避免使用强气流吹干生活牙本质。     

巢蛋白在大鼠牙齿发育过程中表达的免疫组化研究

目的:探讨巢蛋白(Nestin)在大鼠牙齿发育过程中的表达模式和可能作用。方法:制备大鼠牙齿发育各阶段标本,采用SP法进行巢蛋白的免疫组织化学染色。结果:巢蛋白主要表达于功能性成牙本质细胞。结论:巢蛋白参与人牙齿的发育过程,特别是成牙本质细胞分化和基质分泌。     

乳牙牙本质小管管壁纤维与管内膜样结构的电镜观察

目的观察乳牙牙本质小管内膜样结构,探讨其结构形态与周围组织的关系及相应功能.方法运用扫描及透射电镜对16颗乳牙牙本质小管及其管壁纤维进行观察.结果乳牙牙本质小管壁基质纤维的排列既与小管平行又相互交织成网.牙本质经过酸处理后,发现在小管管壁与成牙本质细胞突起之间,有一层呈管状膜样结构存在.此结构可能由未被钙化的或钙化不全的管壁基质纤维和成牙本质细胞突起的分枝组成.结论管状膜样结构可能参与调节牙本质小管管壁的矿化,继而阻止牙本质小管因过度钙化而引起的闭锁.     

ACVR1对成牙本质细胞极性及牙本质形成的作用

目的 研究Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素A受体1(ACVR1)调节小鼠成牙本质细胞极性及促进牙本质形成的作用机制.方法 通过Cre-loxP系统,以Osterix为启动子激活Cre重组酶,敲除小鼠牙源性间充质细胞的Acvr1基因.于小鼠出生后21 d收集标本,观察成牙本质细胞形态、排列及牙本质的形态;免疫荧光染...     

肝细胞生长因子在大鼠修复性牙本质形成过程中的表达研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在大鼠修复性牙本质形成过程中的作用.方法 以窝洞预备形成大鼠修复性牙本质模型,免疫组织化学染色法检测HGF在窝洞预备后3 d、15 d、30 d的大鼠牙髓组织中的表达,采用积分光密度值(IOD)定量修复性牙本质形成不同阶段HGF的表达.结论 窝洞预备后3 d,HGF在大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中呈强阳性表达(IOD为8.995±0.943);窝洞预备后15 d,HGF在两种细胞的表达仍呈阳性(IOD为5.624±0.951), 但弱于3 d组(P＜0.01);30 d组(4.073±0.127)和正常对照组(4.279±0.348)大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中HGF均呈弱阳性表达,两者间差异无统计学意义.结论 HGF参与了牙髓损伤早期修复及修复性牙本质形成的过程.     

钠钙交换体1型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达

目的:探讨钠钙交换体1(NCX1)型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达,进一步解释牙髓组织的修复和传感功能。方法:选取就诊患者因正畸减数或阻生拔出的新鲜健康第三磨牙24颗。取牙髓行牙本质涎磷蛋白抗体染色、改良Bielschowsky银染色以分别定位成牙本质细胞层、神经组织;用特异性抗体染色分析NCX1在人牙髓组织成牙本质细胞层、神经组织中的表达情况。结果:免疫组化染色显示,人牙髓成牙本质细胞胞体和神经组织的NCX1型通道蛋白均为阳性表达。Image-Pro Plus 6.0半定量分析显示,牙冠部和牙根部上段成牙本质细胞中的NCX1型通道蛋白表达水平分别为0.152±0.023、0.135±0.020,两者差异无统计学意义(t=1.425,P=0.352)。结论:人牙髓组织成牙本质细胞层及神经组织中均存在明显的NCX1型通道蛋白表达,其在牙冠部及牙根部上段牙本质细胞中的表达差异不明显。     

三种髓腔表面状况对牙髓细胞附着和分化影响的比较

目的　观察牙髓细胞在不同表面状况与牙本质基质的反应 ,了解牙本质的基质成分对牙髓细胞附着和分化的影响。方法　用半管状的牙根作为培养井 ,经过刮除成牙本质细胞后随机分成 4组 ,每组 6块牙片。对照组为只放入不含细胞的培养液 ;前期牙本质组 :在前期牙本质表面植入牙髓细胞 ;牙本质组 :磨除前期牙本质后再植入牙髓细胞 ;牙本质脱钙组 :磨除前期牙本质并用EDTA处理后植入牙髓细胞。细胞培养 6天后用组织学方法观察牙髓细胞在髓腔面上的附着和分化情况 ,评价不同髓腔表面状况对牙髓细胞附着和分化的影响。结果　牙髓细胞在牙本质脱钙组的牙片上附着效果最好 ,其次是前期牙本质组 ,牙本质组最差 ,对照组无细胞可见。而附着细胞基本上都可以看到有单一、细长的细胞突伸入到牙本质小管内 ,可以看作是成牙本质细胞样细胞表型分化。结论　牙本质经过EDTA脱钙处理后 ,可能暴露了陷于牙本质中的生长因子 ,因而牙髓细胞的附着和分化效果比在前期牙本质上好 ;机械磨除前期牙本质和部分牙本质 ,若不作适宜的化学处理 ,留下的沾污层一方面不利于生长因子的暴露 ,另一方面沾污层防碍了细胞的附着。     

体外诱导牙髓干细胞成牙本质向分化的研究进展

牙髓干细胞在体内牙髓组织特殊的微环境中,能保持干细胞未分化状态,有分化形成多种细胞的功能特性. 在某些条件下,牙髓干细胞可以向成牙本质样细胞方向分化. 目前众多研究表明,在体外培养下不同的诱导因子,可以作为调控器通过相关的信号通路在一定程度上参与调控牙髓干细胞成牙本质向分化和定向诱导. 本文对近年来诱导因子与牙髓干细胞成牙本质分化的关系研究做一综述.     

活髓治疗中盖髓材料的研究现状及方向

牙髓不仅可以通过成牙本质细胞和细胞突提供氧、营养物质以及牙本质液来保持牙本质的活力,还具有终生不断地形成牙本质的功能,因此,保存活髓是保证患牙健康的基础.活髓保存治疗的主要方法是盖髓术,盖髓术成功的组织学标志是牙本质桥的形成和牙髓组织修复正常.要使活髓保存治疗取得满意疗效,需要有良好的盖髓材料以便将牙髓与感染组织隔离,并为牙髓组织的自身修复提供良好的生物学环境.     

牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的建立牙髓牙本质复合体体外培养模型。方法取20~30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d。分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定。结果光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性。免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性。结论该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法。     

体外人牙髓细胞的连续培养

目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法，对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长，形成细胞结节，并可进一步钙化；与成牙本质细胞相似，它们具有高碱性磷酸酶活性，可合成Ⅰ型胶原，其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征，胞间基质中可见膜被基质小泡，某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化，此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖、分化的体外模型。     

转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型在大鼠牙髓炎中的表达

目的研究转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型（TGF—βSRⅠ、Ⅱ）在大鼠牙髓炎模型中在不同时间动态表达及定位情况；观察转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型在牙髓炎中表达特点，推测它在牙髓炎发生、发展中的意义．方法通过对内毒素（LPS）诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织连续进行切片，同时超敏免疫组化分析．结果1d组、3d组，TGF-βRⅠ、Ⅱ在成纤维细胞中均呈弱阳性表达，成牙本质细胞呈强阳性表达，至2周修复期为阳性表达．2周以后，成牙本质细胞，前期牙本质细胞呈阳性表达减弱．3周、4周以后，成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达．5周以后，牙髓组织变性、坏死，呈阴性染色．结论TGF—βRⅠ、Ⅱ在大鼠牙髓炎的损伤修复过程中具有重要作用．     

牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的 建立牙髓牙本质复合体体外培养模型.方法 取20～30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d.分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定.结果 光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性.免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性.结论 该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法.     

牙本质形成的研究进展

牙本质形成包括细胞分化、成牙本质细胞分泌细胞外基质及基质矿化。目前认为这一过程有很多因素参与调控，如特异性蛋白、骨形成蛋白(BMP)及多种生长因子。现就近年牙本质形成有关影响因素的报道作一综述。