壳多糖对增殖的血管平滑肌细胞[Ca~(2+)]i和[H~+]i的影响

目的 探讨壳多糖对血管平滑肌细胞[Ca~(2+)]i和[H~+]i的影响.方法 采用荧光探针标记法观察小牛血清对血管平滑肌细胞[Ca~(2+)]i和[H~+]i的影响,以及壳多糖对其的干预作用.结果 当NBS刺激血管平滑肌细胞后[Ca~(2+)]i浓度和细胞内pH均明显增加;而壳多糖与NBS合用时,胞内[Ca~(2+)]i浓度和pH降低明显降低.结论 壳多糖抑制小牛血清诱导的血管平滑肌细胞[Ca~(2+)]i浓度增加和pH上升,说明壳多糖抑制血管平滑肌细胞增殖可能与抑制Ca~(2+)动员有关.     

N-甲基小檗胺对依Ca~(2+)性内皮源松弛因子释放的影响

在无Ca~(2+)krebs-Henseleit液中,Ach诱发兔主动脉松弛受抑制,恢复Ca~(2+)后抑制解除。用NA0.5μmol/L诱发收缩反应,NMBA50、100μmol/L,Ver1、10μmol/L对肌条的Ach松弛均呈抑制,而且随剂量增加,抑制作用增强。结果提示兔主动脉EDRF释放与Ca~(2+)有关,NMBA及Ver对EDRF释放有抑制作用。     

异钩藤碱对离体兔主动脉条的作用

异钩藤碱(Isorhy),钩藤碱(Rhy)和维拉帕米(Ver)对KCl,CaCl_2和NA所致的兔胸主动脉条收缩呈非竞争性拮抗作用,Isorhy与Rhy的作用弱于Ver。三药对NA依赖Ca_(2 )性收缩均有明显抑制作用,但Isorhy与后两药不同,尚能抑制NA依赖外Ca~(2 )性收缩。本文提示Isorhy与Rhy和Ver相似,能阻断细胞膜上的PDC。此外。Isorhy松驰兔胸主动脉条的作用亦可能与阻断ROC有关。     

马钱子碱抗血小板聚集及其对凝血酶诱导血小板内游离钙的变化

①以Born和O′Brien法进行血小板聚集实验,可见马钱子碱(Brucine,B)和士的宁(Strychnine,S)各10~(-5)～10~(-3)mol/L明显抑制ADP、Epi和Thrombin诱导的人血小板聚集作用,呈剂量依赖性。②用Fura-2/AM检测B对Thrombin诱导人血小板内游离钙[Ca~(2+)]i的变化。结果:静息[Ca~(2+)]i值为111.14±11.71nmol/L(n=12)。Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i峰值为1015±36.38nmol/L。B10~(-4)、10~(-3)mol/L分别使Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i值下降至328.68±17.81和94.17±4.9nmol/L。在EGTA螯合血小板外钙[Ca~(2+)]o情况下,Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i峰值为218.55±56.2nmol/L与静息[Ca~(2+)]i相比具有非常显著差异(P<0.01),提示Thrombin促血小板内钙释放;B10~(-4)、10~(-3)mol/L分别使其[Ca~(2+)]i值下降至89.93±6.31和75.49±4.37nmol/L,上述结果提示:B抑制Thrombin的促外钙内流及内钙释放,呈剂量依赖性。     

淫羊藿对兔主动脉条收缩反应的影响

淫羊藿水取液使NE和KCl收缩兔主动脉条的量—效反应曲线均右移,并抑制最大效应。明显减弱NE收缩反应中内Ca~(2+)释放依赖性部分,对NE所引起的依赖细胞外Ca~(2+)的收缩比前者更强。提示淫羊藿水提取液可抑制细胞膜上电位依赖性Ca~(2+)通道,同时对受体控制性Ca~(2+)通道抑制作用更强。     

人参皂苷Rg_1对H_2O_2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca~(2+)变化的影响

目的研究人参皂苷Rg_1对H_2O_2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca~(2+)浓度变化的影响。方法以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg_1预处理细胞24 h,采用Ca~(2+)荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H_2O_2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca~(2+)]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡。结果 H_2O_2可诱导细胞内Ca~(2+)浓度增加(P0.01),并增加细胞凋亡率(P0.01)。不同浓度人参皂苷Rg_1可呈剂量依赖性的抑制H_2O_2诱导的HT22[Ca~(2+)]i增加(P0.01),抑制细胞凋亡(P0.01),以50μg/L的作用为最强(P0.01)。结论人参皂苷Rg_1可通过降低H_2O_2诱导的HT22细胞内Ca~(2+)水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡。     

原阿片碱对兔胸主动脉的松弛作用

目的研究原阿片碱对离体兔胸主动脉的松弛作用及其机制。方法应用血管平滑肌等张收缩的方法。结果原阿片碱呈浓度依赖性地松弛去氧肾上腺素和高钾预收缩的离体兔胸主动脉螺旋条,而且对二者的作用强度相当;该药使PE和高钾的量效曲线非平行右移,最大反应压低,呈非竞争性拮抗;在无钙液中,原阿片碱抑制去氧肾上腺素引起的内钙释放和复钙后血管条的收缩,却不影响咖啡因在无钙液中的收缩血管作用。结论原阿片碱不是典型的钙拮抗剂和竞争性α-受体阻断剂;其松弛兔胸主动脉平滑肌的作用与抑制受体中介的钙内流和钙释放有关。     

运动对小脑皮质和脊髓分离突触体膜流动性和突触体内游离Ca~(2+)的影响

采用超速离心技术分离制备突触体,结合DPH荧光偏振方法和fura-2荧光标记技术分析长期适量运动(跑转笼)对小脑皮质和脊髓分离突触本膜流动性、突触体内游离Ca~(2+)([Ca~(2+)]i的影响。以同年龄对照组心重/体重比率均值的2倍标准差作为运动有效标准。结果显示,和5月龄鼠比较,13月龄鼠小脑皮质和脊髓分离突触体膜流动性均无显著性差异,8mo运动训练后,突触体膜流动性升高(P<0.05)。在小脑,去极化状态(高K~+)下,13月龄鼠分离突触体[Ca~(2+)]i高于5月龄鼠(P<0.05),而静息状态下两者间无差异(P>0.05)。在脊髓,静息、去极化状态下分离突触体[Ca~(2+)]i在两个年龄对照组间无差异(P>0.05)。8mo运动训练后,小脑皮质和脊髓分离突触体在静息、去极化状态下的[Ca~(2+)]i均低于同年龄对照组,但无显著性差异(P>0.05)。结果表明,从青年开始的长期适量运动对突触体膜功能和Ca~(2+)调节系统具有一定的保护作用。     

过表达Junctate蛋白对小鼠心肌细胞肌浆网Ca~(2+)浓度调节的影响

目的:探讨过表达junctate蛋白后,小鼠心肌细胞肌浆网上钙通道对细胞内钙离子浓度调节的影响。方法:以正常表达junctate蛋白的小鼠(wild-type mice,WT)心肌细胞为WT组,以过表达junctate蛋白的转基因小鼠(transgenic mice,TG)心肌细胞为TG组,用离子荧光测定仪测定两组小鼠心肌细胞静息状态下的钙离子浓度,后再分别测定两组小鼠在给予咖啡因及氯化钾刺激后,心肌细胞内的钙离子浓度的变化情况,并测定咖啡因引起钙瞬变后的恢复时间。结果:静息状态下,TG组心肌细胞[Ca~(2+)]i为(77.6!8.8)nmol·L-1,显著低于WT组(144.2!10.6)nmol·L-1,(P<0.01);加入咖啡因后,TG组细胞内钙瞬变幅度显著低于WT组,且TG组钙瞬变后自峰值恢复到基础水平的时间较WT组明显延长(P<0.01);加入KCl后,两组细胞内[Ca~(2+)]i均瞬间增高,TG组心肌细胞内钙瞬变幅度明显大于WT组(P<0.01)。结论:过表达junctate蛋白会影响肌浆网对细胞内钙离子浓度的调节,其机制可能是过表达junctate蛋白会导致兰尼碱受体(Ryanodine receptor,RyR)功能上调、肌浆网Ca~(2+)-ATP酶(Sarcoplasmic-endoplasmic-reticulum Ca~(2+)-ATPase,SERCA)功能下调,并使肌浆网钙库储存量减少,最终导致静息状态及去极化状态下细胞内钙离子浓度异常。     

大鼠主动脉α_1肾上腺素受体收缩效应的两成分分析

本文观察大鼠主动脉a_1肾上腺素受体激动时引起的收缩效应,分析其时相特征、与细胞内Ca~(2+)动力学的关系以及受体亚型基础。结果显示收缩可分成快速相与持续相两种成分。无Ca~(2+)灌流可阻断大部分持续相收缩,但对快速相收缩的影响很小。两时相收缩受硝苯吡啶的影响都很小,但都受选择性a_(1B)受体拮抗剂CEC的显著抑制,且浓度—抑制曲线一致。上述结果提示快速相收缩主要由细胞内储存Ca~(2+)动员引起,持续相收缩主要由细胞外Ca~(2+)通过非双氢吡啶敏感性钙通道进入引起。大鼠主动脉中主要含a_(1B)受体,两种时相的收缩主要均为a_(1B)受体激动引起。     

槐果碱对肺癌A549细胞增殖凋亡的作用机制

目的 探讨槐果碱对肺癌细胞的体外抑制作用及可能的作用机制.方法 不同浓度(1、2、4、8、16、32、64 mmol/L)槐果碱处理肺癌细胞A549,MTT检测槐果碱对A549的IC50,选择适宜浓度的槐果碱处理肺癌细胞A549(槐果碱组),未作处理的A549细胞作为对照组,克隆形成实验和BrdU实验检测两组细胞增殖,TUNEL和流式细胞数检测两组细胞凋亡,Western blot检测增殖细胞核抗原(PC-NA)、MYC、Bax、Bcl-2和脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)和PTGDR2蛋白表达,A549细胞给与5 ng/ml PGD2激活剂处理(PGD2组),克隆形成实验、TUNEL实验和Western blot实验检测PGD2对A549细胞增殖和凋亡的影响.结果 槐果碱对A549的IC50为5.196 mmol/L.克隆形成和BrdU实验结果显示,5 mmol/L槐果碱处理的槐果碱组肺癌细胞A549细胞增殖低于对照组,凋亡高于对照组,PC-NA、MYC、Bcl-2蛋白表达低于对照组,Bax蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);槐果碱组L-PTGDS和PTGDR2蛋白表达高于对照组(P＜0.05),给予5 ng/ml PGD2激活剂处理的A549细胞增殖受到抑制,凋亡显著增加(P＜0.05).结论 槐果碱可以抑制肺癌细胞增殖,促进凋亡,激活PGD2/PTGDR2通路,从而抑制肺癌的发生.     

原阿片碱对兔胸主动脉的松驰作用

研究原阿片碱对离体兔胸主动脉的松驰作用及机机制。方法应用血管平滑肌等张收缩的方法。结果原阿片碱呈浓度依赖性地松驰去氧肾上腺素和高钾预收缩的离体免胸主动脉螺旋条,而且对二者的作用强度相当;该药使和高钾的量效曲线非平行右移,最大反应压低,呈非竞争性拮抗;在无钙液中,原阿片碱抑制去氧肾上腺素引起的内钙释放和复钙后血管条的收缩,却不影响咖啡因在无钙液中的收缩血管作用。结论原阿片碱不是典型的钙拮抗剂和竞争性     

钩藤碱对心血管系统部分药理作用研究

探讨钩藤碱对钙离子的拮抗作用以及对脑血流量和氧消耗的作用。方法观察钩藤碱对豚鼠心肌的兴奋性、功能性不应期、正阶梯现象的作用，以及对去甲肾上腺素诱发的兔主动脉条Ⅰ、Ⅱ相收缩的作用，同时观察钩藤碱对小鼠氧消耗和大鼠脑血流量的影响。结果钩藤碱能提高心肌兴奋性，延长功能性不应期，抑制正阶梯现象和兔主动脉条Ⅰ、Ⅱ相收缩；减慢小鼠氧消耗速度，对大鼠脑血流量无影响。结论钩藤碱具有许多钙拮抗剂的共同特点，提示其在抗心律失常方面会有一定作用。     

水飞蓟宾对兔离体门静脉和胸主动脉的作用

用兔离体门静脉和主动脉环标本,测定NA,KCI,CaCI_2引起收缩的累积量效曲线,silybin使3种激动剂引起的门静脉收缩的量效曲线右移,并使最大反应压低,IC_(50)分别为0.04,0.43和0.07 mmol/L,silybin对NA引起的主动脉收缩无明显作用。抑制KCI、CaCI_2收缩的IC_(50)分别为41.4和1.4 mmol/L,结果初步表明silybin的血管扩张作用与Ca~(2+)拮抗有关。     

TSH和Carbachol对甲状腺细胞内游离钙的动员作用

研究促甲状腺激素(TSH)和 Carbachol(Cch)对猪甲状腺细胞 Ca~(2+)的动员作用的结果表明,0.01～10mU/ml TSH 或10~(-5)～10~(-4)mol/L Cch 可引起甲状腺细胞[Ca~(2+)]急性升高.甲状腺细胞对 TSH 或 Cch 反应的敏感性在贴壁的单层细胞高于细胞悬液,在近汇合单层细胞高于汇合单层细胞。TSH 和 Cch 均能在无钙/EGTA 缓冲介质中刺激猪甲状腺细胞[Ca~(2+)]升高,提示此升高的[Ca~(2+)]源自细胞内储藏 Ca~(2+)的动员。     

重金属离子刺激兔主动脉条的收缩

实验研究了重金属离子Pb~(2+)和Cd~(2+)对家兔主动脉条等长收缩的影响。Pb~(2+)和Cd~(2+)都能模拟Ca~(2+)的作用,在低浓度时刺激血管平滑肌的收缩,而高浓度时表现阻遏作用,与分子模型实验所得的结果一致。为重金属离子对血管平滑肌的毒害作用提供了新的解释。     

槐果碱抗心律失常的电生理机制研究

目的探讨槐果碱对心肌细胞动作电位(action potentials,AP)及离子电流的电生理效应。方法将豚鼠心脏快速取出后通过心电图记录心脏对槐果碱的应答;采用常规微电极技术对豚鼠乳头状肌或兔窦房结细胞快反应及慢反应动作电位进行记录,研究槐果碱的相关效应;获取新生大鼠心室心肌细胞进行原代培养,采用膜片钳技术记录全细胞及单通道电流;采用穿孔膜片钳技术进行全细胞钙流记录。结果在异丙肾上腺素诱导后出现心动过速,而槐果碱(300μmol)加入后,心动过速或室颤现象消失,心电图提示出现正常心跳。对于豚鼠心室心肌细胞的快反应动作电位,槐果碱作用后,APD及动作电位的有效不应期延长,APA下降。对于窦房结的慢反应动作电位,槐果碱处理后,APA及Vmax均出现下降,且APD90也能够延长。结果显示槐果碱通过阻断I_(kr)而非I_(ks)实现对APD的延长。新生大鼠心室细胞的细胞电流实验结果显示10μmol/L槐果碱能够导致I_(Na)下降约18%。且槐果碱能够在全体细胞水平上降低慢内向电流,尾部电流(外向K+电流)也出现消失,相比于对照组,I_(CaL)在20 m V指令电位时,平均减少(33.2±11.7)%。结论槐果碱能够逆转异丙肾上腺素引起的心律失常,其作用机制为抑制Na离子、钙离子及钾离子电流。     

血浆中氧化槐果碱的气相色谱测定及其在兔体内的药代动力学

氧化槐果碱(oxysophocarpine)是从苦参(Sophora flavesecens Ait)中分离得到的一种生物碱。已报道的含量测定方法有薄层层析比色法和高效液相层析法。近年来临床发现苦参总碱有平喘、升高白细胞、抗炎及抗心律失     

槐胺碱的抗实验性心律失常作用

槐胺碱(20mg/kg)静脉注射可拮抗乌头碱(20μg/kg)、BaCl_2(4mg/kg)在大鼠所诱发的心律失常(P<0.05),拮抗氯仿-肾上腺素所致的兔心律失常。在豚鼠槐胺碱增加哇巴因诱发室早,室速、室颤及心跳停止所需要的用量。此药在10～20mg/kg腹腔注射还可减少氯仿所致的大鼠室颤,和乙酰胆碱-CaCl_2研致的房颤(扑),槐胺碱显著降低大鼠的心率并拮抗异丙肾上腺素的正性变速作用。     

依脉特灵对Ca^2＋所致小鼠离体子宫平滑肌收缩的拮抗作用

本文观察到IT对小鼠离体子宫平滑肌高K~+去极化后Ca~(2+)所致的收缩有显著抑制作用。CaCl_2量效曲线IT对其呈非竞争性拮抗。在无Ca~(2+)高K~+溶液中,IT10μM抑制OXY依赖细胞内Ca~(2+)引起的收缩,而IT50μM对依赖细胞内外Ca~(2+)所致子宫肌收缩均有抑制作用。Ver对小鼠离体子宫的作用,远较IT的强。但Ver较高浓度(59nM)只抑制依赖细胞内Ca~(2+)的收缩,对依赖细胞外Ca~(2+)的收缩影响甚少。IT与Vcr拮抗ca~(2+)的作用相似。IT为Ca~(2+)拮抗剂。