体外感染巨细胞病毒的胎盘滋养层细胞超微结构的变化

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)对胎盘滋养层细胞超微结构的影响。方法:取无菌胎盘组织分离提纯滋养层细胞,以含20%感染CMV患者血清的培养液感染滋养层细胞(实验组),同时用含20%正常人血清的培养液感染滋养层细胞作为阴性对照(对照组),以透射电子显微镜观察其超微结构变化。结果:实验组滋养层细胞肿胀,可见"猫头鹰眼细胞",细胞内观察到许多病毒颗粒样结构;溶酶体大量增生,可见到类似病毒核衣壳样小空泡;粗面内质网和高尔基复合体增生,线粒体增大。结论:CMV可通过感染胎盘滋养层细胞进而使胎儿发生宫内感染;CMV使胎盘滋养层细胞超微结构发生改变,影响其在母一胎界面的免疫调节,丧失了对胚胎的免疫保护。     

人胎盘滋养层细胞的分离和鉴定

目的:体外分离足月妊娠胎盘滋养层细胞,观察其形态学特点,检测人类白细胞抗原-E(HLA-E)在滋养层细胞的表达情况。方法:采用0.25%胰酶和胶原酶I联合消化法及Percoll密度梯度分离法分离人足月妊娠胎盘组织中滋养层细胞,光学显微镜观察分离出的细胞形态,透射电镜观察分离出的细胞超微结构;RT-PCR技术检测分离出的滋养层细胞HLA-E的表达。结果:光学显微镜下初分离的细胞呈大圆形,以单个核为主;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富,胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴。在分离的细胞上检测到HLA-E的表达。结论:采用胰酶和胶原酶I联合消化及Percoll密度梯度分离法可获得高纯度的滋养细胞,在透射电镜下可见到超微结构,同时检测到滋养层细胞上表达HLA-E。     

解脲支原体感染时早孕蜕膜组织的病理变化

目的:探讨解脲支原体感染对早孕蜕膜组织的影响。方法:采用培养法检测40例自然流产患者(实验组)及40例要求人工流产的健康妇女(对照组)宫颈分泌物的UU感染率,并将手术刮取的蜕膜组织立即送病理检查。随机选取实验组8例患者的蜕膜组织在电镜下进行细胞超微结构观察。结果:①实验组宫颈分泌物UU阳性率为52.5%(21/40),对照组为20%(8/40),两组间差异有统计学意义(P<0.01)。②实验组蜕膜组织病理诊断宫内感染率为47.5%(19/40),对照组为7.5%(3/40),两组间差异有统计学意义(P<0.01)。③实验组宫颈分泌物UU阳性者宫内感染率为76.2%(16/21);宫颈分泌物UU阴性者为15.8%(3/19),两组间差异有统计学意义(P<0.05)。④病理检查发现,蜕膜UU感染者,可见蜕膜水肿,细胞之间出现裂隙,间质弥散性淋巴细胞浸润。⑤电镜下可见,在合体滋养层细胞周围、胶原纤维之间以及绒毛膜细胞滋养层细胞膜上均可见大量UU颗粒,滋养层细胞浆呈空泡样变性,细胞内线粒体肿胀、内质网囊性扩张,染色质周边聚集,细胞肿胀坏死。结论:定植在女性下生殖道的UU可引起逆行感染,损伤早孕蜕膜组织,影响其正常功能而导致自然流产。     

人膜联蛋白Ⅴ在乙肝病毒感染胎盘中的作用研究

目的 检测人膜联蛋白Ⅴ在乙肝病毒感染胎盘中的表达,探讨其在乙肝宫内感染中的意义.方法 用SP法检测30例HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘和20例乙型肝炎病毒血清标志物阴性的正常足月胎盘人膜联蛋白Ⅴ的表达、分布,并进行定量分析.结果 实验组和对照组标本的绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞、毛细血管内皮细胞均可见棕黄色人膜联蛋白Ⅴ表达的阳性信号;乙型肝炎病毒感染胎盘中人膜联蛋白Ⅴ的表达由母面绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮细胞逐层递减;乙型肝炎病毒感染组和正常组人膜联蛋白Ⅴ比较,前者的平均灰度比后者明显增高,具有显著性差异(t=-2.558,P<0.05).结论 乙型肝炎病毒感染的胎盘组织人膜联蛋白Ⅴ的表达上调,人膜联蛋白Ⅴ可能作为受体介导了乙型肝炎病毒与胎盘组织细胞的内吞和摄入等过程,从而导致了乙型肝炎病毒对胎盘的感染.     

HBV母婴传播胎盘细胞感染体外模型建立

目的 研究胎盘滋养层细胞系Bewo被乙型肝炎病毒(HBV)感染的可能性,为HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究建立合适的体外模型.方法 高浓度HBV DNA阳性血清与Bewo细胞共培养,荧光定量PCR法检测培养上清中HBV DNA含量;免疫组织化学技术检测细胞爬片Bewo细胞中HBsAg的表达.结果 HBVDNA阳性血清与Bewo共培养1 d后及时清洗细胞,更换培养液后1,2,3 d,细胞培养上清液中HBV DNA含量为4.67×103,2.22×104,3.63×103;HBV DNA阳性血清与Bewo共培养2 d后及时清洗细胞,更换培养液后1,2,3 d,细胞培养上清液中HBV DNA含量为3.21×104,3.99×104,5.77×104.免疫组织化学技术检测细胞爬片Bewo细胞中HBsAg呈阳性表达.HBV DNA阳性血清与Bewo共培养对细胞形态无明显影响.结论 胎盘滋养层细胞系Bewo与HBV DNA阳性血清共孵育可被HBV直接感染,该细胞系可用于进行胎盘HBV感染机制的研究.     

乙型肝炎病毒感染Bewo细胞模型的建立

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)感染人胎盘滋养层细胞系Bewo的细胞模型,为HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究提供体外细胞模型。方法:选择人胎盘滋养层细胞系Bewo进行体外培养,用高浓度HBV DNA阳性血清(5×106/拷贝.ml-1)与Bewo细胞共培养48 h后,采用选择性PCR技术检测培养细胞中HBVrcDNA和HBVcccDNA。结果:HBV DNA阳性血清与Bewo共培养48 h,Bewo细胞中HBV rcDNA和HBV cccDNA均呈现阳性结果(243 bp和373 bp)。HBVDNA阳性血清与Bewo共培养对细胞形态无明显影响。结论:HBV能够直接感染人胎盘滋养层细胞系Bewo,该细胞系可用于进行HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究。     

胎盘滋养层细胞模型的建立及其应用

滋养层细胞是胎盘结构中体现其屏障作用最重要的细胞,与多种妊娠疾病的发生、发展有关.另外,大多数病毒可导致胎盘感染并波及胎儿,因此滋养层细胞与宫内传播也有关.为了阐明多种妊娠相关疾病的发病机制及病毒宫内传播的机制,目前众多研究者通过在体外建立滋养层细胞模型进行了大量有价值的研究,此文对相关的研究进展进行综述.     

复发性流产者妊娠早期E-钙粘素的表达及其与HPV感染的相关性

目的:探讨E-钙粘素(E-cadherin)在复发性流产者妊娠早期滋养层细胞中的表达及其与人乳头状瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法:采用免疫组织化学与PCR法分别检测34例复发性流产者(观察组)与41例正常早孕女性(对照组)妊娠早期滋养层细胞中E-cadherin的表达水平及HPV-DNA。结果:观察组滋养细胞中E-cadherin的表达低于对照组(P<0.001),HPV感染率(29.4%)则高于对照组(11.8%,P=0.039);HPV感染阳性的标本中,观察组E-cadherin的阳性表达(20%)也低于对照组(100%,P=0.015)。结论:妊娠早期滋养层细胞E-cadherin的异常表达可能与复发性流产的发生有关,而HPV可能参与这一过程。     

无血清培养液流感病毒分离效果分析

目的对比分析有无血清培养液流感病毒分离效果。方法收集流感哨点医院发病3天内流感样病例咽拭子720份,采用荧光定量PCR法检测流感病毒核酸及分型,犬肾细胞(MDCK)培养法进行病毒分离,细胞病变观察和微量血凝实验(HA)检测病毒是否分离成功并测定HA价。结果 720份标本中病毒核酸阳性130份,阳性率为18.06%。130份阳性标本,采用含血清培养液病毒分离阳性68份,阳性率为52.31%(68/130),其中H1N1亚型6份,H3N2亚型2份,BV亚型58份,BY亚型2份;无血清培养液病毒分离阳性100份,阳性率为76.92%(100/130),其中H1N1亚型12份,H3N2亚型21份,BV亚型63份,BY亚型4份。两种方法分离差异有统计学意义(χ2=17.23,P0.01),其中含血清培养液培养后无血凝滴度标本32份,用无血清培养液培养后血凝滴度在11～1256,且BV和BY亚型血凝滴度较高。结论无血清培养液较有血清培养液流感病毒分离效果更好。     

风疹病毒在兔脑神经细胞中的形态与形态发生

利用超薄切片电子显微镜技术,对风疹病毒(RV)地方株JR23和标准株GOS—10在兔脑神经细胞中的形态与形态发生及其引起的细胞超微结构变化进行了观察研究。结果表明,病毒感染6h后,细胞浆中开始出现病毒核心样颗粒。其特点是:电子致密度高,分布广泛,并有一定的聚集性,核周围常见。颗粒呈圆形,直径20～30nm。在这些颗粒较集中的区域可见到大量电子致密度均一、细布纹样条块状或环状结构,有时可见到其与核心样颗粒组装过程。有包膜的病毒颗粒出现较晚,呈球形,直径50～70nm。神经元中未见到完整病毒颗粒。被RV感染的细胞超微结构变化不明显,但可见到胞核胞浆比例明显增大,胞浆中可见散在的空泡。     

水痘病毒在感染HAV2BS细胞中形态变化

目的分析水痘病毒(VZV)在感染甲肝病毒(HAV)的二倍体成纤维细胞(2BS细胞)中的形态发生过程.方法将已感染甲肝病毒21 d后的2BS细胞感染水痘病毒(实验组),分别于不同时间收获细胞,用超薄切片和负染的方法制备电镜样品;同时以单独感染HAV、VZV的2BS细胞做对照,进行电镜观察.结果实验组2BS细胞中可见甲肝病毒和不同形态的水痘病毒.结论VZV可以再度感染已被HAV感染的2BS细胞并有完整的子代病毒产生;VZV在已感染HAV的2BS细胞中的增殖受到甲肝病毒干扰,增殖数量少于VZV单独感染2BS细胞中的子代病毒量,并且复制周期延长.     

巨细胞病毒的医院内传播

人巨细胞病毒(CMV)DNA基因组分子量最大(Mr150×10~6),与人类关系最复杂。该病毒广泛存在,几乎所有的人都曾感染。CMV感染的主要流行病学特征如下: 1.几乎所有体液(泪液、唾液、精液、宫颈分泌物和尿液等)均可含CMV,原发感染后尽管可有CMV抗体出现,但仍可持续排毒数周至数月。体液中CMV通常与细胞结合。 2.原发感染伴发的病毒血症约在2周内终止,但多达15％的血清抗体阳性而无病毒血症的供血员可将潜伏CMV传给受血者。 3.99％以上CMV感染无症状或产生轻症疾病。 4.排毒终止后,CMV可再活化且再次     

TORCH感染对人胎盘滋养细胞的影响及机制

目的研究TORCH感染对体外培养人胎盘滋养细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法采用复合酶消化法和Percoll密度梯度离心法分离纯化人胚胎滋养细胞,实验组采用TORCH即弓形虫(Tox)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒(HSV)分别感染人胎盘滋养细胞,对照组加入DMEM高糖培养基孵育;在24、48、72 h用MTT法检测细胞抑制率,应用流式细胞术分析TORCH感染对体外培养人胎盘滋养细胞凋亡及周期分布的影响以及免疫印迹法检测细胞分裂周期蛋白-6(Cell division cycle-6,Cdc-6)的表达水平。结果 TORCH感染体外培养的人胎盘滋养细胞后,实验组人胎盘滋养细胞增殖明显受到抑制并与感染时间相关,人胎盘滋养细胞凋亡率也显著增高,细胞周期主要表现为G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,Cdc-6蛋白的表达水平明显降低。结论 TORCH感染可以抑制人胎盘滋养细胞增殖、使人胎盘滋养细胞停滞在G1期诱导人胎盘滋养细胞凋亡,其可能与抑制Cdc-6蛋白的表达有关。     

Fas、Bcl-2与胎盘细胞凋亡的关系及在子痫前期发病中的作用

目的 探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨子痫前期的发病机制.方法 用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者20例,轻度子痫前期20例(试验组),同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测.结果 细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达.Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组(P＜0.05);在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见.试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P＜0.05).子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01).结论 子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关.     

输卵管妊娠绒毛滋养层细胞的体外培养与鉴定

目的建立输卵管妊娠绒毛滋养层细胞有效的培养与鉴定方法。方法通过胰酶消化法培养滋养细胞,差异贴壁法分离滋养细胞,通过光镜、电镜和免疫荧光细胞化学染色法对所培养的细胞进行形态和细胞骨架评价。结果倒置显微镜下可见细胞呈上皮样细胞形态;透射电镜、扫描电镜观察,细胞的超微结构具有典型滋养层细胞结构;直接免疫荧光双标记染色检测到角蛋白染色为阳性,波形蛋白为阴性。结论该法切实可行,可获得合乎实验要求的输卵管妊娠滋养细胞,可供后续实验研究。     

人胎盘组织和滋养层细胞膜联素V的检测

目的检测膜联素V(AnnexinV)在人胎盘组织的表达及其分布,探讨乙肝病毒(HepatitisBVirus,HBV)感染胎盘细胞的可能方式.方法收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织39例、血清学HBsAg阴性孕妇足月胎盘组织4例,将培养的滋养层细胞制成细胞爬片,用免疫组化方法检测胎盘组织和滋养层细胞中的Annexin V.随机选取7例胎盘组织采用免疫荧光标记方法结合激光共聚焦技术对Annexin V进行重测.结果Annexin V存在于人类胎盘组织中,位于滋养层细胞、间质细胞及绒毛毛细血管内皮细胞的胞浆中.结论胎盘中含有丰富的AnnexinV,推测其可能是乙肝病毒进入滋养层细胞并感染胎儿的潜在受体.     

胎儿生长受限孕妇胎盘病理改变与Fas及FasL表达的关系

目的:通过观察胎儿生长受限(FGR)孕妇胎盘病理改变及胎盘组织中Fas、FasL的表达,探讨Fas、FasL在病理妊娠中的作用。方法:在孕龄为37～42周的单胎孕妇中选择FGR者30例,用HE组织染色观察胎盘绒毛滋养细胞、合体滋养细胞结节增生情况及绒毛间质纤维化和绒毛血管病变情况,采用免疫组化技术检测胎盘组织中Fas、FasL的表达,并与相同孕龄新生儿出生体重正常者作比较。结果:FGR组中,有22例发生了明显的胎盘病理改变,占73.3%,其中绒毛间质纤维化及纤维素样坏死发生率为66.7%,合体滋养细胞结节增生发生率为46.7%,绒毛血管减少发生率为70.0%,细胞滋养细胞增生发生率为53.3%,明显高于对照组(P<0.01)。在FGR组胎盘组织绒毛滋养细胞和蜕膜细胞中,Fas的表达明显强于对照组(P<0.01),FasL的表达则明显弱于对照组(P<0.01)。结论:FGR时胎盘发生了明显的病理改变,FGR孕妇胎盘Fas的高表达、FasL的低表达使母胎易发生免疫排斥反应,导致胎盘组织产生免疫病理损伤,影响胎盘的血液供应,导致胎儿发育异常。     

新生儿先天性巨细胞病毒感染的研究进展

正巨细胞病毒(CMV)是全球最常见、危害最大且严重被忽视的新生儿先天性感染病原体,是新生儿中枢神经性耳聋和神经发育迟缓最主要的原因,全球新生儿先天性CMV感染的流行率总体为0.2%～2%[1]。新生儿发生先天性CMV感染后,约有15%～20%将出现永久性的生理缺陷,给社会带来较大的疾病负担。本文对先天性CMV感染的病原学、流行现状、临床表现、疾病负担和防治措施进行综合概述,旨在提高对新生儿先天性CMV感染的社会关注度。先天性CMV感染是指母亲在妊娠期内通过胎盘或脐血将病毒传给胎儿而导致的CMV感染[2-3],是宫内胎儿最常见的病毒感染,可导致新生儿中枢神经性耳聋和神经发育迟缓,甚至死亡。然而,过去先天性     

HBsAg阳性孕妇胎盘HBV感染状况及危险因素

目的　探讨HBsAg阳性孕妇胎盘乙型肝炎病毒 (HBV)感染状况及其危险因素。 方法　采用ELISA检测孕妇血清HBeAg ;巢式PCR检测孕妇及新生儿血清HBVDNA ;免疫组化ABC法检测胎盘中的HBsAg ;非条件Lo gistic回归模型分析胎盘HBV感染的危险因素。 结果　受检的 2 0 5例胎盘中有 4 1例存在不同程度的HBV感染 ,并且蜕膜细胞 (DC)、滋养层细胞 (TC)、绒毛间质细胞 (VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞 (VCEC)阳性率呈逐层下降趋势(趋势 χ2 =9 38,P <0 0 0 5 ) ,阳性率分别为 2 0 0 0 %(41 / 2 0 5 ) ,1 8 0 5 %(37/ 2 0 5 ) ,1 4 1 5 %(2 9/ 2 0 5 )和 1 0 2 4 %(2 1 /2 0 5 ) ;胎盘HBV感染的危险因素为产前注射高效价免疫球蛋白 (HBIG) 3次以上和母亲血清HBVDNA阳性 ,OR值分别为 0 2 1和 4 77。结论　HBV可感染胎盘各层细胞 ;HBV经胎盘及胎儿的主要途径是经血和 (或 )细胞传递方式实现 ;胎盘屏障在一定程度上对胎儿有保护作用 ;母亲血清HBVDNA阳性是胎盘感染的危险因素 ,产前注射HBIG可预防HBV胎盘感染 ,从而降低宫内感染的隐患。     

polyⅠ:C诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染的体外研究

目的:探讨体外polyⅠ:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用.方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyⅠ:C处理3天,同时设对照组.采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测细胞上清液HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,并以荧光定量RT - PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN -β水平.结果:与对照组比较,polyⅠ:C均可显著抑制Bewo细胞HBV复制(P＜0.01或0.05),但与2μgHBV重组质粒转染组比较,转染8μgHBV重组质粒组polyⅠ:C对HBV复制的抑制率显著下降(P＜0.01),且polyⅠ:C诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达及IFN -β水平显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:polyⅠ:C可诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染,但随着HBV感染量的增大,通过下调细胞TLR3 mRNA表达及IFN -β产生,其抗HBV感染的作用被显著削弱.