抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快速Ig亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果　经筛选获得 1株稳定分泌的抗rhEPO单抗的杂交瘤细胞株 (1D1)。亚型鉴定为IgG2b ,轻链为κ链 ,用Westernblot分析证实该单抗对rhEPO特异性识别。结论　成功获得 1株可分泌特异性识别rhEPO的单克隆抗体的杂交瘤     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的 研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法 采用重组人促红细胞生存素（ｒｈＥＰＯ）为抗原,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经细胞融合、ＥＬＩＳＡ筛选、有妻稀释亚克隆获得抗人ＥＰＯ杂交瘤,以免疫印迹和快速Ｉｇ亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果 经筛选获得１株稳定分泌的抗ｒｈＥＰＯ单抗的杂交瘤细胞株（１Ｄ１）。亚型鉴定为ＩｇＧ２ｂ,轻链为ｋ链,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析证实该单抗为ｒｈＥＰＯ特异性识别。结论 成功获得１株可分泌特异性识别ｒｈＥＰＯ的单克隆抗体的杂交瘤。     

抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗猪鼻支原体(M．hyorhinis,M.hy)的单抗隆抗体(monoclonal antibody,McAb)，为相关研究提供工具。方法：用灭活的猪鼻支原体免疫BALB／c小鼠，运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法。结果：经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体，该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化，结果显示，该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论：获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体，可为相关研究提供工具。     

重组人红细胞生成素治疗早产儿贫血

目的探讨重组人红细胞生成素治疗早产儿贫血的疗效。方法2005年1月至2007年5月收治48例早产儿贫血患儿，随机分为对照组（22例）和治疗组（26例）。对照组应用大剂量维生素治疗，同时补充铁剂，必要时输血，疗程6周。治疗组在对照组治疗基础上加皮下注射重组人红细胞生成素，隔天1次，每周600IU／kg，疗程6周。结果治疗后治疗组网织红细胞计数（Ret）较对照组明显升高，组间差异有统计学意义（P〈0．01），治疗期间两组惠儿血红蛋白（Hb）水平均逐渐下降，但治疗组较对照组下降明显缓慢，组间差异有统计学意义（P〈0．01），治疗组血清铁（SI）水平明显低于对照组，组间差异有统计学意义（P〈0．01），另外输血率治疗组明显低于对照组，组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论重组人红细胞生成素防治早产儿贫血具有较好疗效。     

酶标记抗人IgM单克隆抗体的制备及其初步鉴定与应用

用HRP以改良过碘酸钠法标记了6种国产抗人IgM单克隆抗体并进行了初步鉴定。选用高效价的HRP标记抗人IgM McAb,用ELISA间接夹心法检测病人血清中特异性IgM抗体,其特异性阳敏感性与采用HRP标记羊抗人μ链检测基本相同。     

重组人红细胞生成素治疗化疗相关性贫血临床观察

目的 观察重组人红细胞生成素(reecmbinant human erythropoietin，rhEPO)治疗肿瘤化疗诱发贫血的疗效及安全性。方法 46例化疗治疗诱发贫血的患者分为rhEPO治疗组(23例)和对照组(23例)。治疗组给予rhEPO。对照组不给rhEPO，其他治疗相同。观察rhEPO对血红蛋白、输血、生活质量的影响及副反应。结果 治疗组血红蛋白平均提高17．4g／L，而对照组无改变。治疗组KPS评分与对照组比较显著提高。结论 rhEPO是治疗肿瘤化疗诱发贫血的安全、有效药物，能提高血红蛋白水平，改善生活质量。     

重组人红细胞生成素治疗肾性贫血98例

我们以重组人红细胞生成素为主治疗肾性贫血９８例，现将其疗效及对血压影响报告如下，并探讨重组人红细胞生成素致血压升高的机制及防治对策。１临床资料９８例患者血红蛋白（Ｈｂ）均低于８０ｇ／Ｌ，其中男５３例，女４５例。年龄１４～７２岁，平均５７．９岁。原发病：慢性肾炎６１例，高血压肾病１８例，糖尿病肾病１１例，慢性肾盂肾炎６例，多囊肾２例。所有病例均合并慢性肾功能不全，且血肌酐均大于４４５μｍｏｌ／Ｌ。９３例行血液透析，５例腹膜透析。９８例病人重组人红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）剂量为每周每千克体重１００…     

重组人红细胞生成素治疗肾性贫血的临床分析

目的　观察重组人红细胞生成素 (RhEPO)对肾性贫血的治疗作用。方法　根据使用EPO剂量的不同将 39例慢性肾衰竭并血液透析病人分成 4组 ,观察治疗后 2、4、12个月时与治疗前 (0月 )相比红细胞数 (RBC)、红细胞比积 (Hct)及血红蛋白含量 (Hb)的变化。结果　 2 4例使用EPO10 0 - 15 0IU/ (kg·w) (6 0 0 0IU/w - 90 0 0IU/w) ,治疗后RBC、Hct、Hb较治疗前有显著升高 (P≤ 0 .0 0 1) ;5例使用EPO5 0IU/ (kg·w) (30 0 0IU/w) +间断输血患者 ,其RBC、Hct、Hb升高不显著 ;10例不用EPO而单纯输血患者 ,其RBC、Hct、Hb无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论　EPO能较好地纠正肾性贫血 ;单纯输血不能治疗肾性贫血     

重组人L型丙酮酸激酶N末端单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定.方法 以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此单克隆抗体特性进行鉴定.结果 筛选到两株能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的细胞株,亚类鉴定重链为IgGzb,轻链为kappa链.ELISA法测定腹水效价分别为1:409600和1:102400,抗体相对亲和力分别为3.54×108L/mol和2.72×108:L/mol.Western blot显示抗体能特异识别免疫原和人肝细胞株HL-7702中的天然丙酮酸激酶蛋白.免疫组化进一步显示了其在细胞及组织中的定位,均匀的分布于细胞的胞浆中.结论 成功制备了抗PK-N单克隆抗体.     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

抗钙调素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备及鉴定抗钙调素单克隆抗体。方法 以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原，采用常规免疫方法免疫BALB／C小鼠，杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)检测，应用硫酸铵盐析法和离子交换层析法进行抗体纯化。分别采用免疫印迹、免疫酶斑点法鉴定抗钙调素单克隆抗体的性质。结果 脾细胞与骨髓瘤细胞的融合率为85％。阳性克隆率为0．35％，获得两株动物钙调素单克隆抗体，抗体效价为1：1000，对钙调素有较强的专一性。结论 此研究制备出了高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体。     

Production and characterization of monoclonal antibody against recombinant human erythropoietin

Objective To produce specific monoclonal antibody (mAb) against recombinant human erythropoietin (rHuEPO) for development of highly efficient methods for erythropoietin detection in biological fluids. Methods rHuEPO was covalently coupled with bovine serum albumin (BSA) and the conjugate was used to immunize mice to produce specific mAb against rHuEPO based on hybridoma technology. The obtained F3-mAb was characterized by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), SDS-PAGE and Western blot. Results The isotype of F3-mAb was found to be IgM with an affinity constant of 2.1×108 L/mol. The competitive ELISA using the obtained IgM showed a broader linear range and lower detection limit compared with previous work. Conclusions The modification of rHuEPO was proved to be successful in generating required specific mAb with high avidity to rHuEPO.     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

重组人促红细胞生成素在COS-7细胞内表达的研究

目的：研究不同真核载体对人促红细胞生成素ｃＤＮＡ的表达效率。方法：人促红细胞生成素ｃＤＮＡ分别用真核表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＩ、ｐＡｄＣＩ进行重组，脂质体法转化ＣＯＳ ７细胞，以ＴＦ １细胞检测ＥＰＯ的表达活性。结果：感染ｐｃＤＮＡ３ ＥＰＯ，ｐｃＤＩ ＥＰＯ，和ｐＡｄＣＩ ＥＰＯ的ＣＯＳ ７细胞培养上清中人促红细胞生成素活性分别为０５×１０２，１５×１０３和２２×１０２。结论：已构建成可表达具生物活性的重组人促红细胞生成素的真核表达克隆，嵌合内含子序列可增强人促红细胞生成素ＣＤＮＡ的表达效率     

抗人双特异性蛋白磷酸化酶Dusp23单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高亲和力、高特异性的抗人双特异性磷酸化酶23(Dusp23)单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定,为Dusp23功能的研究奠定基础。方法以纯化的原核表达Dusp23为免疫原,免疫BALB/c小鼠,待免疫小鼠血清效价满足融合需要,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化建立可稳定分泌抗Dusp23单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将细胞株打入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,用ProteinG亲合层析柱纯化所得腹水获得纯化抗体,ELISA及Western-blot检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定单克隆抗体的亚型。利用纯化后的两株单克隆抗体对临床收集的肝癌组织标本进行免疫组化分析。结果筛选到2株(N012和N013)可以稳定分泌人双特异性磷酸化酶23(Dusp23)单克隆抗体的细胞株,并对其进行纯化和鉴定,两株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1:5120和1:2560,腹水效价分别为1:25600和1:12800,以肝癌细胞HepG2和重组Dusp23蛋白为抗原,利用纯化后的两株抗体Western-blot鉴定结果均在预期位置出现阳性条带。两株杂交瘤细胞分泌抗体的亚型鉴定N012和N013均为Ig...     

抵克力得预防重组人类促红细胞生成素诱发顽固性高血压和血栓症的临床研究

用抵克力得预防重组人类促红细胞生成素(rHuEPO)治疗尿毒症的血栓并发症共17例。并讨论其机理。证实药品改善了血小板聚集功能,能使rHuEPO导致的高血压与血栓症的不良作用得到改善。     

重组人促红细胞生成素治疗肾性贫血的疗效观察

目的观察国产rhEPO环尔博治疗肾性贫血的疗效,分析影响其疗效的部分因素。方法未行透析的肾性贫血患者46例采用环尔博5000U皮下注射2次／周治疗。治疗前及治疗期间每4周观察血常规、血清电解质、肾功能、血压的变化及不良反应,治疗前和治疗结束后观察甲状旁腺素（阴H）、C反应蛋白（CRP）。结果与治疗前相比患者的血红蛋白从第4周开始增加（P〈0．05或0．01）,并随着治疗的进行逐渐升高,而肾功能、电解质、血压等与治疗前相比差异无统计学意义（P〉0．05）。46例患者全部完成治疗,无脱落,其中显效28例,有效10例,无效8例。结论rhEPO治疗肾性贫血的疗效确定,炎症反应、甲状旁腺功能亢进对其疗效产生影响。