RNA干扰技术抑制宫颈癌细胞低氧诱导因子-1表达的研究

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,使用特异的靶向作用HIF-1基因的小干扰RNA(siRNA)作用于宫颈癌细胞株SiHa,以了解siRNA对HIF-1基因的特异性抑制作用.方法:设计合成针对HIF-1的四个siRNA,鉴定无误后均借助脂质体转染宫颈癌细胞株SiHa.检测转染前后常氧和低氧培养的SiHa细胞中mRNA和蛋白的表达变化.筛选出抑制率最高的siRNA.用筛选出的siRNA转染SiHa细胞,检测转染前后常氧和低氧培养的SiHa细胞中不同时间点mRNA和蛋白的表达变化,验证RNAi作用的特异性及时效性.结果:H2siRNA引起常氧和低氧培养的SiHa细胞中HIF-1基因表达水平的下降最显著(P<0.05);将H2siRNA转染常氧和低氧培养的SiHa细胞,转染后24、48、72及96h均可观察到HIF-1基因的显著降低,均以48h时靶基因表达水平的下降最显著(P<0.05),对应的非靶基因无明显抑制作用.结论:针对HIF-1构建的四个siRNA对HIF-1基因的干扰效率不同.本实验中,常氧及低氧培养SiHa细胞均以H2siRNA对HIF-1表达水平的降低作用最明显.将H2siRNA作用于SiHa细胞,可引起靶基因特异、高效性抑制,常氧及低氧条件下至少维持到转染后96h,且均以48h时基因表达水平的下降最显著.在SiHa细胞株,HIF-1 siRNA通过下调HIF-1发挥抑制宫颈癌细胞生长的作用,RNAi技术可望为宫颈癌提供一种新的特异性基因治疗方法.     

HIF-1α基因干扰对大鼠CBRH-7919肝癌细胞HIF-1α与VEGF表达影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞在缺氧状态下表达HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,构建3组特异性较强的HIF-1α siRNA表达载体,采用小分子RNA干扰技术沉默细胞HIF-1α的基因表达,分别利用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞HIF-1α和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:在不同浓度CoCl2模拟缺氧条件下,随着CoCl2浓度的增高及时间的推移,肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达(mRNA及蛋白水平)较常氧对照组(0 μmol/L CoCl2)显著增多,差异均有统计学意义,P＜0.05.应用3组不同HIF-1α和siRNA表达载体转染缺氧条件下的肝癌细胞后,细胞的HIF-1α和VEGF的基因(mRNA)表达量与未转染HIF-1α siRNA表达载体对照组相比较明显减少,同步检测两者的蛋白表达亦明显减少,与对照组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达,siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下诱导的VEGF表达.     

雷帕霉素对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α和糖酵解途径的影响

目的:观察雷帕霉素(Rapamycin)对人食管癌细胞TE1、TE13中HIF-1 α的抑制作用及糖酵解途径相关基因表达的影响;分析mTOR信号通路与糖酵解途径的关系.方法:分别取TE1、TE13细胞株,常氧及缺氧条件下分别予以Rapamycin作用后,将两株细胞各分为四组:①正常对照组,即未处理组(N);②缺氧处理组(H);③常氧Rapamycin处理组(N+R);(④缺氧Rapamycin处理组(H+R)(即雷帕霉素预处理1小时后缺氧培养).采用实时定量PCR检测细胞中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白及己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)、葡萄糖载体蛋白1(GLUT-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)等糖酵解相关基因mRNA的表达,Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA等糖酵解相关基因蛋白的表达.结果:缺氧处理后与正常对照组相比,HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1蛋白表达及mRNA明显增强,而LDHA表达无明显变化;Rapamycin预处理后,正常对照组及缺氧处理组HIF-1 α、HK-Ⅱ、GLUT-1的表达均明显降低,LDHA无明显变化.结论:常氧及缺氧条件下,雷帕霉素可抑制食管癌细胞HIF-1 α及糖酵解相关基因的表达,提示阻断mTOR通路可抑制食管肿瘤细胞的糖酵解途径.     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF—1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF—1α和血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法：设计针对HIF—1α RNA亚基模板序列的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF的表达的影响。RT-PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA水平，免疫组化和免疫印迹方法检测HIF-1α和VEGF蛋白表达情况。结果：与常氧组比较。单纯缺氧组及SODN缺氧组的HIF-1α转录水平未见明显改变。蛋白表达水平却随缺氧时间延长明显升高：而VEGF mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强。然而在ASODN缺氧组。HIF-1α、VEGFmRNA活性以及蛋白的表达水平明显减弱，且HIF-1α蛋白水平与VEGF转录活性有明显的相关性。结论：在缺氧环境下，转染HIF-1α反义寡核苷酸能够抑制HIF-1α活性。从而使VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显下降。     

缺氧诱导宫颈癌Hela细胞的生物学行为改变

[目的]研究缺氧引起的糖酵解改变对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。[方法]CoCl2化学诱导宫颈癌Hela细胞缺氧,将实验对象分为常氧组和缺氧组。用MTT法、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪、跨膜侵袭实验等方法观察两组细胞的增殖、克隆、凋亡和侵袭能力;用酶比色法检测细胞培养液上清中HKⅡ和乳酸值。免疫细胞化学法和Western blot法分别检测两组HIF-1α、GLUT1的表达,RT-PCR检测两组HIF-1α、GLUT1及HKⅡ基因表达水平。[结果]缺氧组与常氧组相比,缺氧组细胞生长增殖活跃、凋亡率下降、跨膜细胞数增加,差异有显著性意义(P<0.05)。缺氧组中HKⅡ和乳酸值较常氧组明显升高(P<0.05)。缺氧诱导后,HIF-1α基因表达水平无明显变化(P>0.05),蛋白表达水平明显升高(P<0.05),GLUT1基因和蛋白在缺氧诱导后表达水平都明显升高(P<0.05)。[结论]氧微环境下宫颈癌Hela细胞增殖、抗凋亡、侵袭能力加强,可能与缺氧诱导后HIF-1α蛋白不宜降解,细胞糖酵解能力加强有关。     

缺氧状态下人胰腺癌细胞对吉西他滨反应的实验研究

目的:观察缺氧状态对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响并分析其相关机制。方法:将人胰腺癌细胞SW1990分为常氧组、缺氧组、常氧+吉西他滨组和缺氧+吉西他滨组。MMT法检测各组细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Real-time PCR和Western blot分别检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR-1)mRNA和蛋白的表达。结果:与常氧+吉西他滨组相比,低氧+吉西他滨组的细胞增殖率明显增加,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);低氧组和低氧+吉西他滨组HIF-1α蛋白表达分别显著高于常氧组(P<0.05或P<0.01);与常氧组相比,低氧组和低氧+吉西他滨组的MDR1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:缺氧状态可增加人胰腺癌细胞SW1990对吉西他滨的化疗抵抗,其机制与缺氧环境可诱导HIF-1α和MDR1基因表达有关。     

乏氧条件下HIF-1α介导Hela宫颈癌细胞的放射敏感性

目的:探讨乏氧条件下,乏氧诱导因子HIF-1α对Hela宫颈癌细胞放射敏感性的影响以及初步作用机制.方法:MTT法分析不同组别宫颈癌细胞存活分数,流式细胞法(FCM)检测各组细胞的凋亡变化,RT-PCR和Western blot分别检验各组宫颈癌细胞的HIF-1α、VEGF和p53的mRNA和蛋白表达情况,siRNA干扰HIF-1α对宫颈癌放射敏感性的影响,以及对VEGF、p53表达的影响.结果:乏氧条件下通过诱导肿瘤细胞HIF-1α的高表达途径,提高VEGF表达,抑制p53表达来降低Hela宫颈癌细胞的放射敏感性.HIF-1α的siRNA转染联合照射后,在乏氧条件下MTT法显示细胞存活率较非转染组明显下降,流式细胞仪法显示细胞凋亡率明显上升.同时干扰HIF-1 α后明显抑制VEGF的表达,提高p53的表达.结论:抑制HIF-1 α可能通过减少VEGF及增加p53来提高Hela宫颈癌细胞的放射敏感性.     

Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl2和MK-2206的浓度,最后分成空白组、MK-2206组、CoCl2组、MK-2206+CoCl2组;Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力;RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平;Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的侵袭、迁移(P＜0.05),同时能够促进HIF-1α的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),但是低浓度范围内的CoCl2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P＞0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P＜0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P＜0.05),缺氧环境无明显作用;同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-Akt、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力,但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。     

雷帕霉素对人宫颈癌HeLa细胞增殖和HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测分别以不同浓度雷帕霉素处理的体外培养人宫颈癌HeLa细胞的抑制率,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测各组细胞HIF-1 α、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性;随雷帕霉素浓度增加细胞内HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达均呈下调趋势.结论 雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有抑制作用并呈剂量依赖性,雷帕霉素具有明显下调HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达的作用.     

乏氧条件下雷帕霉素对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨乏氧条件下雷帕霉素(RPM)对乳腺癌细胞的影响及其机制。方法 MTT法检测乏氧条件下RPM对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的抑制作用,采用定量RT-PCR和Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1α)、VEGF基因mRNA和蛋白表达。结果 缺氧条件下,RPM对MCF-7细胞生长有抑制作用;HIF-1α蛋白水平随着RPM浓度提高而降低(P＜0.01),而HIF-1α mRNA表达水平无明显变化;VEGF的转录和蛋白表达均随着RPM浓度升高抑制率增加(P＜0.01),呈剂量依赖性。结论 RPM能抑制乳腺癌的肿瘤缺氧反应,从而抑制肿瘤的生长和血管的生成。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乏氧宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对乏氧状态下人宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响。方法:应用不同浓度TSA作用经乏氧预处理的人宫颈癌HeLa细胞12、24、48和72 h,MTT法检测HeLa细胞的增殖率,计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)和IC10值;克隆形成实验检测TSA(IC10)作用24 h对乏氧HeLa细胞的放射增敏效应;免疫细胞化学法检测TSA(IC10)对HeLa细胞中乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响。结果:TSA对乏氧宫颈癌HeLa细胞的增殖率有明显的抑制作用,且随着TSA浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强。与乏氧照射组比较,TSA(IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h,可增加细胞的放射敏感度(P<0.05)。乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显高于常氧组细胞;与乏氧组比较,TSA(IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h后,细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达下调。结论:TSA可能通过抑制乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达而发挥放射增敏效应。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides,ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。方法：设计针对HIF-1α亚基的mRNA反义和正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides,SODN）,并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察不同时相5μmol/L的HIF-1αASODN对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α和p53 mRNA的转录水平,免疫组化SP法和免疫印迹（Western blot）检测HIF-1α和p53蛋白表达情况。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组及SODN缺氧组的蛋白表达水平随缺氧时间延长明显升高（P〈0.05）;而p53 mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强（P〈0.05）。在ASODN缺氧组,HIF-1α蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;p53 mRNA及其蛋白的表达水平也明显减弱（P〈0.05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型p53的突变使HIF-1α稳定表达。而ASODN明显抑制HIF-1α的表达,且使突变型p53的表达水平显著下降,这说明HIF-1α可能在缺氧诱导野生型p53突变方面有一定的作用。     

缺氧对骨肉瘤SaOS-2细胞系HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧条件下骨肉瘤SaOS-2细胞系缺氧诱导因子HIF-1α和血管生长因子VEGF表达的变化。方法：建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相(8、16、24h)HIF-1α和VEGF的表达。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA的转录水平，免疫组化(SP法)和免疫印迹(Western blot)检测HIF-1α蛋白表达情况，免疫组化和ELISA法检测细胞和培养上清液中VEGF蛋白表达。结果：缺氧处理后，HIF-1α mRNA转录水平没有明显改变，蛋白表达随缺氧时间延长而升高。VEGF mRNA以及蛋白的表达在缺氧条件下均显著增强。结论：骨肉瘤细胞系SaOS-2在缺氧条件下．缺氧诱导因子HIF-1α和血管牛长因子VEGF蛋白表达上调。     

siRNA沉默HIF-2α对缺氧培养的BGC-823胃癌细胞中VEGF表达的影响

目的:观察乏氧培养条件下胃腺癌细胞系BGC-823中HIF-2α和VEGF的表达,探讨HIF-2α在低氧条件下对胃癌血管生成的调控作用.方法:采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法分别检测低氧状态下HIF-2α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达.进一步采用化学合成小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)转染BGC-823细胞.观察转染后HIF-2 α沉默效果.结果:与常氧时比较,缺氧后BGC-823细胞HIF-2α、VEGF的mRNA水平稳定,而蛋白的表达水平均明显升高(P＜0.05),siRNA转染BGC-823后能够显著下调HIF-2α的基因表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制.结论:缺氧可促使BGC-823细胞HIF-2α在蛋白水平表达升高,并通过激活VEGF的机制调控胃癌血管生成,切断HIF-2α途径可能会有效阻止胃癌血管生成.     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的:研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响.方法:AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下(CoCl2 200μmol/L)48h后Western blot法测定A549细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组、AG490 50μmol/L、AG490 100μmol/L、CoCl2、CoCl2+AG49050μmol/L和CoCl2+AG490 100μmol/L组).IL-6 (3.85nmol/L)处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组,IL-6组).结果:JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显.缺氧条件下(CoCl2200μmol/L)能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著.IL-6能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.结论:在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达.JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用.     

缺氧条件下YC-1对人胰腺癌细胞VEGF和GPI基因的抑制效应

目的探讨缺氧条件下3-(5’-hydroxymethyl-2’-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)基因的调控作用及其机制。方法缺氧条件下体外培养胰腺癌PC-3细胞株,免疫细胞化学染色法检测常氧和缺氧条件下缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)的表达。半定量RT-PCR检测YC-1对PC-3细胞VEGF、GPI、HIF-1αmRNA表达的调节作用。Western blot检测YC-1对PC-3细胞HIF-1α蛋白表达的调节作用。MTT法检测YC-1对缺氧PC-3细胞恶性增殖的影响。结果缺氧条件下,HIF-1α主要表达于PC-3细胞胞核内。随着YC-1浓度升高,VEGF和GPI mRNA表达、HIF-1α蛋白表达逐渐受抑,并呈明显的剂量依赖性;实验组HIF- 1αmRNA均呈强表达,其表达水平不随YC-1作用浓度的升高而降低。缺氧条件下,实验组细胞增殖抑制率均增高,100μmol／L YC-1组细胞增殖抑制率达73．28%±2．01％。结论缺氧状态下,YC-1抑制人胰腺癌PC-3细胞VEGF和GPI基因转录与其抑制HIF-1α蛋白的表达有关,YC-1能够抑制PC-3细胞生长和增殖。     

缺氧及HIF-1α对结直肠癌上皮-间质转化及侵袭增殖的影响

目的 研究不同缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、锌指转录因子Snail及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在结直肠癌SW480细胞中的表达水平,以及它们对细胞的增殖凋亡和侵袭迁移力的影响,探讨三者在结直肠癌的缺氧及上皮间质转化中的作用及可能机制.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导细胞缺氧模型,实验分组:常氧组、低氧组和无氧组.采用MTT法检测结直肠癌SW480细胞的生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell小室法)检测细胞的侵袭迁移力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡及周期变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达.结果 MTT结果显示随CoCl2浓度的增加结直肠癌SW480细胞的增殖活性逐渐增加(P＜0.05);Transwell结果显示随缺氧程度的增加穿过基质膜和聚碳酸酯膜的细胞数逐渐增多,侵袭迁移率增加(P＜0.05);FCM检测结果显示与常氧组比较,无氧组和低氧组G0/G1期SW480细胞明显减少,G2/S期细胞明显增多,细胞凋亡率降低(P＜0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示低氧组、无氧组与常氧组比较,SW480细胞内HIF-1α和Snail mRNA与蛋白的表达增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),且HIF 1 α和Snail的表达呈显著正相关.HIF-1α、Snail与E-cadherin的表达均呈显著负相关(P＜0.05).结论 缺氧及HIF-1α可促进结直肠癌SW480细胞株的体外生长增殖活性,抑制其凋亡,增强其体外侵袭迁移能力,其机制可能是缺氧诱导HIF-1α表达上调直接作用于SW480细胞产生,亦可能是缺氧或HIF-1α表达上调通过促进Snail表达,抑制E-cadherin表达,间接导致EMT的发生发展而产生.     

雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞生长和对HIF-1α与VEGF表达影响的观察

目的:探讨mTOR抑制剂雷帕霉素与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对HIF-1α和VEGF表达的影响。方法:分别以雷帕霉素、顺铂及雷帕霉素联合顺铂处理体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测人宫颈癌Hela细胞的抑制率,金氏公式评价两药联合用药的效果,采用RT-PCR法、蛋白质印迹法检测各组细胞HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达。结果:雷帕霉素和顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,分别联合应用2种浓度雷帕霉素(10和20nmol/mL)与顺铂(0.25和0.5mg/mL)协同治疗指数q值均>1.15,两者有协同作用。雷帕霉素与顺铂联合用药HIF-1αmRNA的表达为0.242±0.048,单独用药雷帕霉素组为0.428±0.068,顺铂组为0.357±0.051;雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF mRNA的表达为0.498±0.093,单独用药雷帕霉素组为0.651±0.112,顺铂组为0.623±0.125,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P<0.05;雷帕霉素与顺铂联合用药组HIF-1α蛋白的表达为0.514±0.092,单独用药雷帕霉素组为0.625±0.132,顺铂组为0.635±0.120;雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF蛋白的表达为0.409±0.082,单独用药雷帕霉素组为0.650±0.114,顺铂组为0.623±0.102,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P<0.05。结论:单独及联合应用雷帕霉素与顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有抑制作用,两药联合应用有明显的协同作用,雷帕霉素联合顺铂具有明显下调HIF-1α、VEGF基因和蛋白表达的作用。     

HIF-1α基因表达沉默对鼻咽癌组织VEGF和CXCR4表达影响的研究

目的：探讨在乏氧条件下，HIF-1α、VEGF及CXCR4在鼻咽癌细胞中的表达，并探讨HIF-1α与VEGF和CXCR4的关系。方法：利用荧光定量PCR方法检测不同乏氧时相HIF-1α、VEGF及CXCR4mRNA表达。利用Westernbolt检测HIF-1α蛋白表达。构建特异性的HIF-1α慢病毒干扰载体，利用慢病毒感染鼻咽癌细胞，杀稻瘟菌素进行药物筛选，利用荧光定量PCR和Westernblot检测干扰效果。利用荧光定量PCR检测HIF-1α表达沉默后，鼻咽癌细胞VEGF和CXCR4的表达变化。结果：在乏氧条件下，鼻咽癌细胞CNE2HIF-1αmRNA表达稳定，蛋白表达增强，VEGF及CXCR4的mRNA表达均明显增强。利用特异性的HIF-1α慢病毒干扰鼻咽癌细胞CNE2，CNE2细胞中HIF-1α表达降低了81％，说明HIF-1α载体构建成功。HIF-1α表达沉默后，VEGF及CXCR4的表达水平也明显降低。结论：乏氧可以诱导鼻咽癌细胞HIF-1α、VEGF和CXCR4的表达，且VEGF和CXCR4的表达受HIF-1α的表达调控。     

缺氧时肝癌HepG2细胞HIF-1α对GLUT-1表达的影响及机制探讨

目的探讨缺氧状态下肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达对GLUT-1的影响。方法 HepG2人肝癌细胞株,以DMEM培养基加胎牛血清培养,分为常氧对照组(21%O2),缺氧组(1%O2),常氧加吲哚美辛组,缺氧加吲哚美辛组。收获细胞后,分别行免疫荧光法检测细胞内HIF-1α的表达和核转位;Western blot检测各组的HIF-1α、GLUT-1蛋白表达;RT-PCR检测各组的GLUT-1mRNA含量。结果缺氧时HIF-1α(蛋白:68.25±11.72)和GLUT-1(mRNA:0.7424±0.1127;蛋白:70.33±12.83)在肝癌HepG2细胞中的表达增高(P<0.05);缺氧时以吲哚美辛抑制HIF-1α蛋白(36.34±9.50)稳定和积聚后,GLUT-1 mRNA(0.3710±0.1016)及蛋白(38.46±12.20)表达受到抑制(P<0.05)。结论缺氧可以上调HIF-1α和GLUT-1在肝癌HepG2细胞中的表达;HIF-1α可以调控其下游靶基因GLUT-1的转录和表达,影响糖酵解和细胞能量的产生。