单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肺腺癌细胞的表达

肺癌是目前最常见和最难治的肿瘤之一 ,发病率和病死率都很高 ,易发生转移。肺癌治疗目前主要依靠传统的手术、放射治疗和化学治疗 ,其疗效较差。随着分子生物学技术的发展 ,基因治疗肿瘤成为可能。“自杀基因”的出现因其能彻底杀伤肿瘤细胞 ,因而受到广泛重视 ,被认为是最有希望成为临床肿瘤治疗的有效方法。单纯疱疹病毒胸苷激酶(ＨＳＶ ｔｋ)基因是肿瘤基因治疗中最具前景的“自杀基因”[1] ,实验研究显示 ,导入ＨＳＶ ｔｋ基因的肿瘤细胞联合抗病毒药物更昔洛韦 (ＧＣＶ)治疗 ,可有效地杀伤肿瘤细胞并可使小鼠体内实体瘤完全消退[2 ] …     

腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察构建的含胞嘧啶脱氨酶／单纯疱疹病毒－1－胸苷激酶（CD／TK）双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法：将含CD／TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3－5代的大鼠VSMCs。荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率。用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用。结果：单、双自杀基因组腺病毒均可100％感染VSMCs。当感染复数（M．0．I）为10时，双自杀基因组靶细胞的存活率仅10％，明显低于腺病毒（Ad）－TK（43％）和Ad-CD(64%)单基因组（P＜0．05）。当M．O．I≤20时双自杀基因能够对细胞产生最大（90％）杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能，而且双基因组所需前体药物的浓度（无环鸟苷0．1μg/ml,5－氟胞嘧啶10μg/ml)低于单基因组（无环鸟苷0．5μg/ml，5-氟胞嘧啶50μg/ml）。双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组。结论：双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因。     

逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨应用逆转录病毒载体介导单纯疮疹病毒－胸苷激酶（herpes simplex virus type Ⅰthymidine kinase gene,ＨＳＶ－ＴＫ）基因治疗实验性人胰腺癌细胞系８９８８的价值。方法 ＨＳＶ－ＴＫ被定向克隆入逆转录病毒载体pＭＮＤＭ的ＤＶ４０下游。重组逆转录病毒包装细胞ＰＡ３１７细胞,产生的重组病毒将ＨＳＶ－ＴＫ转入人胰腺癌细胞系８９８８细胞内。结果 Ｓorthern blot试验及药敏试验均证实ＨＳＶ－ＴＫ基因已整合至细     

逆转录病毒介导的HSV-tk/GCV对肝癌细胞的影响

目的观察单纯疮疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）／丙氧鸟苷（ＧＣＶ）自杀基因治疗系统在体内外对人肝癌的杀伤效应。方法构建携带ＨＳＶ－ｔｋ基因的逆转录病毒载体,将该重组逆转录病毒感染人肝癌细胞ＨＣＣ９２０４,筛选稳定表达ｔｋ的细胞克隆ＨＣＣ９２０４／ｔｋ,并测定其在体外对ＧＣＶ的敏感性;ＨＣＣ９２０４／ｔｋ细胞在裸鼠皮下成瘤,用ＧＣＶ治疗并观察疗效。结果ＧＣＶ在体外对ＨＣＣ９２０４／ｔｋ细胞有明显的杀伤作用和旁杀伤效应,裸鼠体内ｅｘｖｉｖｏ实验得到相似结果,在体内外对未转染细胞则无明显毒性．结论在ｉｎｖｉｔｒｏ水平（指完全体外）和ｅｘｖｉｖｏ水平（指一部分体外一部分体内）,表达ＨＳＶ－ｔｋ基因的肿瘤细胞均可被ＧＣＶ有效杀伤,逆转录病毒介导的ＨＳＶ—ｔｋ／ＧＣＶ自杀基因治疗系统有可能成为肝癌的有效治疗方法。     

重组单纯疱疹病毒-胸苷激酶和人白介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建

目的 松建含单纯疱疹病毒-胸苷激酶（HSV-tk）和人白介素-2（hIL-2）基因的痘苗病毒真核表达载体pMJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要的准备。方法 利用目的的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、DNA序列分析等多种基因工程技术,将纯化回收的HSV-tk和hIL-2分别与pMJ601进行连接、转化并鉴定。结果 分别用BamH I-HindⅢ和Sal I-BamH I酶切位点,将HSV-tk与hIL-2DNA成功地克隆到pMJ601真核表达载体。结论 重组HSV-tk hIL-2基因PMJ601的构建,为进一步研究胃癌的基因治疗打下坚实的基础。     

人单纯疱疹病毒-2型感染致豚鼠输卵管上皮细胞凋亡的研究

目的 探讨人单纯疱疹病毒-2型感染导致输卵管妊娠的机制. 方法 培养豚鼠原代输卵管上皮细胞,用人单纯疱疹病毒-2型感染,显微镜下观察输卵管上皮细胞的形态学变化,并用Western blot法检测细胞凋亡关键蛋白caspase-3的变化. 结果 豚鼠原代输卵管上皮细胞被人单纯疱疹病毒-2型感染后,显微镜下观察到典型的细胞凋亡特征,Western blot检测发现细胞凋亡关键蛋白caspase-3活化成两个亚基. 结论 人单纯疱疹病毒-2型感染后引起豚鼠输卵管上皮细胞凋亡,人单纯疱疹病毒-2型感染引起输卵管上皮细胞凋亡是输卵管妊娠的机制之一.     

水痘—带状疱疹病毒与单纯疱疹病毒—1对脑神经细胞的致病性

水痘-带状疱疹病毒(VZV)是一种常见病毒。资料显示至少有95%的成人感染。初次感染 VZV 以后,病毒可在部分机体内潜伏。当机体免疫功能受到破坏或抑制。病毒可从潜伏状态下复活,进而引起中枢神经系统的感染。临床 VZV 脑炎多见于免疫功能异常的患者。单纯疱疹病毒(HSV)为散发性病毒性脑炎的主要病原之一,易感人群与 VZV 感染存在一定差异。为了观察在没有体内免疫因素影响下,VZV 和 HSV 对脑神经组织的致病性。实验采用体外脑神经细胞感染,以比较两种病毒对中枢神经系统的致病特点。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎细胞凋亡与TGF-β1表达的关系

目的探讨小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎细胞凋亡与转化生长因子β1(TGF-β1)表达的关系.方法通过给BALB/C小鼠腹腔接种单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)诱发病毒性心肌炎(VMC),感染病毒3～35天,VMC检出率为91.67%.应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化技术检测VMC小鼠心肌细胞中凋亡细胞的出现情况及TGF-β1的表达情况.结果 78.33%感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞,71.67%有TGF-β1表达,二者之间分布区域一致.结论细胞凋亡可能参与HSV-1诱导的VMC发生、发展,而TGF-β1可能参与VMC细胞凋亡的调控.     

腺病毒介导的HSV-tk/GCV系统在hTERT启动子调控下治疗人膀胱癌的实验研究

目的观察人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因/丙氧鸟苷（GCV）系统在体外及荷瘤裸鼠体内对人膀胱癌的治疗作用。方法利用hTERT启动子及小鼠巨细胞病毒（CMV）启动子调控的携带HSV-tk基因的重组腺病毒（Ad-hTERT-HSV/tk与Ad-CMV-HSV/tk）分别感染人膀胱癌细胞253 J和人正常肺成纤维细胞MRC-5,加入GCV,MTT法观察受染细胞的存活率。建立人膀胱癌裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,A组（Ad-hTERT-HSV/tk＋GCV组）、B组（Ad-hTERT-HSV/tk＋PBS组）、C组（PBS＋GCV组）和D组（PBS对照组）,观察各组肿瘤生长状况、重要脏器病理变化及裸鼠存活情况。结果体外实验表明,应用GCV处理后,Ad-CMV-HSV/tk对253 J和MRC-5细胞均有杀伤作用,而Ad-hTERT-HSV/tk只对膀胱癌细胞253 J具有杀伤作用。动物实验显示,A组移植瘤的体积和瘤重低于其他3组（P〈0.01）。A组裸鼠平均存活期长于其他3组（P〈0.01）。结论 hTERT启动子调控的重组腺病毒介导HSV-tk/GCV系统是一种安全、有效且靶向性高的基因疗法。     

大肠癌基因治疗研究进展

大肠癌的基因治疗作为一种新的治疗手段,近年来倍受关注,其很多研究已进入临床阶段.大肠癌基因治疗的研究主要包括:自杀基因治疗、基因修复或置换治疗、反义基因治疗、免疫基因治疗及溶瘤病毒治疗等.此文就近期大肠癌的基因治疗研究结果和存在的问题作一综述.     

Adjuvant therapy for colorectal cancer

In spite of the improvements in surgical techniques and intensive care therapy, no appreciable improvement in the prognosis for patients with colorectal cancer has been made in recent years. Several types of adjuvant treatment, including radiotherapy, chemotherapy, and immunotherapy, have therefore been proposed and used in clinical trials, mainly in the United States and western Europe. The results obtained by the Gastrointestinal Group of the European Organization for Research and Treatment of Cancer (EORTC), using preoperative radiation therapy with 3450 rads, are reported here; this therapy results in a reduction in the number of local recurrences and also appears to prolong the five-year survival period, although a longer follow-up is required to confirm this. According to the Gastrointestinal Tumor Study Group (GITSG), postoperative radiation therapy with chemotherapy seems to prolong the tumor-free interval in stages B2 and C when compared to surgery alone. Nonspecific immunotherapy does not appear to improve surgical results either in terms of local recurrences or survival. Some clinical trials suggest that systemic polychemotherapy benefit subgroups of patients with colorectal cancer. Toxicity is still very high, however; 5-FU is the more active and safe single agent but, due to the low response rate, it appears essential to identify new, more active drugs. Particular attention has been focused recently on prophylactic infusion chemotherapy of the liver, and clinical trials are now being made by several groups, including the EORTC. Preliminary results seem to show a reduced incidence of liver metastases in patients infused with 5-FU after radical surgery. Adjuvant therapy in colorectal cancer patients undergoing radical surgery has so far given encouraging results. Future results are awaited with optimism, but they must be achieved through prospective clinical trials conducted by well-organized cooperative groups. European Organization for Research and Treatment of Cancer. Read at the International Cancer Congress, Budapest, Hungary, August 1986.     

bax基因对大肠癌细胞株HT-29作用的实验研究

目的 探索用双重腺病毒载体介导bax基因大肠癌进行基因治疗。方法 双重腺病毒载体介导bax表达，相关显微镜、MTT比色法、流式细胞仪观察bax基因对HT－29的作用，Western Blot检测Bax蛋白的表达。结果 Ad/Gt-bax能有效地引起HT－29形态学的改变，当加入Ad/PGK-GV16后，该作用更为显著，呈典型的凋亡形态学特征 ，其生长抑制率及凋亡诱导率分别为57.4%和28.2%，与Ad/GT-bax组的29.2%和12.6%相比，差异有显著性（P＜0．05）。Ad/GT-bax与Ad/PGK-GV16同时应用能起Bax蛋白大量表达,而单用Ad/GT-Bax，则Bax蛋白表达量较低。结论 bax基因具有有效诱导人大肠癌细胞株HT－29凋亡的作用。     

Biochemical tissue markers of human colorectal carcinoma

The potential therapeutic effects of differentiating agents on leukemic and solid tumor cells are being evaluated worldwide. These effects can be followed by morphologic as well as biochemical parameters. The enzymatic profile of four enzymes and the level of carcinoembryonic antigen were studied in 24 human colorectal carcinoma specimens and their adjacent uninvolved mucosa. The enzymes studied were thymidine kinase and 6-phosphogluconate dehydrogenase as markers of proliferation, and alkaline phosphatase and γ-glutamyl transpeptidase as markers of differentiation. A consistent finding was a marker increase in the activities of thymidine kinase and 6-phosphogluconate dehydrogenase in the tumor cells as compared with the adjacent normal mucosa. The activity of γ-glutamyl transpeptidase was not significantly different between tumor and uninvolved colon tissue. Alkaline phosphatase activity was markedly reduced in the tumor specimens. A relationship between the degree of differentiation and the degree of penetration and CEA expression was demonstrated in the tumor specimens as well as in their surrounding uninvolved mucosa.     

进展期结直肠癌新辅助治疗疗效评价方法的研究进展

新辅助治疗可使原发肿瘤或转移病灶缩小,降低肿瘤分期,已被认为是进展期结直肠癌(ACRC)的主要治疗方式。但由于肠道为空腔脏器,原发病灶准确测量困难,新辅助治疗后的疗效评估更加困难。因此,就结直肠癌而言,目前缺乏统一的、有针对性的、效果明显的评价系统和标准。本文就ACRC新辅助治疗目前疗效评价方法做一综述。     

去唾液酸糖蛋白-人端粒酶逆转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷的靶向促HepG2细胞凋亡作用及旁观者效应

目的 观察去唾液酸糖蛋白(AF)-pGL3-人端粒酶逆转录酶(hTERT)-胸苷激酶(TK)对肝癌细胞株HepG2细胞生长及凋亡的影响.方法 培养细胞并构建pGL3-hTERT-TK质粒、AF脂质体复合物后,转染HepG2细胞和L02细胞,通过单光子液闪计数仪,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和流式细胞仪观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响,以及其对自杀基因的旁观者效应.结果 在肝癌细胞HepG2中,TK基因可以被hTERT启动子驱动高效的表达,而不影响正常肝细胞L02的生长,AF通过识别去唾液酸糖蛋白受体结合到HepG2细胞表面,其携带的TK基因更易进入肝癌细胞,同时增强自杀基因TK的高效表达,在旁观者效应机制的参与下,肝癌细胞总的凋亡率达85%±3%,而正常肝细胞则仅为16%±2%.结论 AF-pGL3-hTERT-TK可以靶向攻击肝癌细胞,对正常肝细胞几乎无影响,其基因传递系统具备靶向治疗肝癌的潜力.     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肺癌基因治疗实验中的初步探讨

】