Sirt1功能的研究进展

在Sirtuin家族中Sirt1是沉默信息调节因子2(Sir2)同源性最高的同系物,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶.它参与糖脂代谢、胰岛素分泌,也在神经退行性疾病、心血管疾病、肿瘤疾病等方面发挥重要的作用.随着对其深入的研究,Sirt1有望成为治疗不同疾病新药物作用的靶点发挥作用.     

ABCA1基因多态性与2型糖尿病及口服降糖药物疗效的研究进展

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)是以ATP为能源的具有转运胆固醇功能的一类蛋白。有研究表明ABCA1与2型糖尿病发病及胰岛β细胞功能有关。口服降糖药物是临床上治疗2型糖尿病的有效手段之一,其机制大多是通过促进胰岛细胞分泌胰岛素或改善机体对胰岛素敏感度发挥作用。ABCA1基因多态性可能通过影响胰岛β细胞功能,从而导致口服降糖药物的疗效和不良反应在不同个体之间存在差异。本文综述ABCA1基因多态性对2型糖尿病及磺脲类药物和噻唑烷二酮类药物疗效的影响,为临床制定基因导向的个体化用药方案提供参考。     

胰腺α细胞向β细胞转分化研究进展

功能性胰岛β细胞数量的减少会导致血糖升高,研究发现,可通过增加功能性β细胞数量来改善高血糖。补充β细胞数量的途径有很多,其中包括诱导α细胞转分化为β细胞。了解胰腺β细胞的发育分化过程、α细胞转分化为β细胞相关转录因子变化情况以及现有的促进转分化相关途径,有助于寻找更多促进转分化作用靶点,从而为补充功能性β细胞找到新途径,为治疗糖尿病提供新思路。     

β细胞凋亡与1型糖尿病关系的研究进展

1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM),也称胰岛素依赖型糖尿病(insulin dependent-diabetes mellitus,IDDM),是一种T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病,表现为胰岛β细胞的选择性破坏.     

干细胞移植治疗1型糖尿病的研究进展

1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)是一种器官特异性的胰岛β细胞不可逆损伤而导致的自身免疫疾病,目前尚无有效的根治方法.每日注射外源胰岛素是1型糖尿病患者维持生命的主要方法.胰岛移植是目前治疗1型糖尿病的有效方法,但受到供体严重缺乏以及需要终身免疫抑制等的限制.利用干细胞诱导生成胰岛...     

Betatrophin与糖尿病的研究进展

Betatrophin是新近发现的分泌蛋白,其在小鼠肝脏、棕色脂肪以及白色脂肪等组织表达,而在人的肝脏组织中高效表达。目前,Betatrophin被认为是可以治疗甚至治愈糖尿病的潜在靶点。最近,相关研究表明,Betatrophin在小鼠的体内可促进胰岛β细胞增殖、提高糖耐量的作用。但是betatrophin在人类糖尿病的发生、发展过程中所起作用的大小目前尚不明确。因此,虽然Betatrophin被认为是目前潜在的具有临床上治愈糖尿病的可能,但是是否能在人类中实现医学界目前尚存在争议。     

1型糖尿病的分子免疫学研究进展

1型糖尿病是一种T细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病。在其发病中有许多免疫细胞参与，包括CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞、B淋巴细胞等，其中CD4^ T淋巴细胞起中心性作用，按其分泌细胞因子的不同大致分为Th1和Th2两亚群。许多研究表明，在胰岛B细胞的损伤、胰岛炎的加重、糖尿病的发生过程中，Th1细胞及细胞因子和Th2细胞及细胞因子起了重要的作用。     

GLP-1与糖尿病的研究进展

胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)是30个氨基酸的多肽,是目前所知最强的葡萄糖依赖型的胰岛素分泌促进激素.GLP-1是第一个被描述的肠促胰岛素(incretin),是一种消化时由胃肠道系统释放出来的物质,促进葡萄糖依赖性的胰岛素从胰腺β细胞中释放出来.不仅如此,GLP-1还具有降低血浆中的胰高血糖素水平,降低胃排空的速率,促进饱食感和刺激胰岛β细胞的增殖与分化等多种生理活性,这些特性使许多学者认为GLP-1可能成为治疗2型糖尿病比较理想的药物,因此成为糖尿病治疗新药物研究的热点.本文就GLP-1与糖尿病的关系作一综述.     

胰岛移植的研究进展

糖尿病是由多种原因引起的β细胞功能减退,致胰岛素分泌相对或绝对不足引发的糖代谢紊乱,最终导致全身多器官的损害。众所周知,胰岛素的应用虽明显改善了患者的糖代谢紊乱,但无法阻止糖尿病各种并发症的发生及发展,而在体内建立内源性的胰岛素分泌系统才能治愈糖尿病。全胰移植可有效治疗糖尿病,但因其手术创伤大、病死率高、免疫原性大等缺点不再受到人们的青睐,而胰岛移植具有操作简单、创伤小、并发症少等优点,近年来逐渐受到医学界的重视,成为又一新的研究热点。     

环状RNA在糖尿病中的研究进展

环状RNA(circRNA)是一种由外显子和(或)内含子共同组成的非编码RNA,其结构呈首尾相接的封闭环状,具有时空特异性、高度的进化保守性及稳定性、广泛性等生物学特征。circRNA具有海绵样吸附、调控基因的转录、与RNA结合蛋白相互作用以及参与蛋白质的翻译等多种生物学功能,可调节胰岛β细胞的功能参与糖尿病的发生、发展,并与糖尿病大血管病变、微血管病变和周围神经病变等并发症均有关。此外,circRNA亦可能作为糖尿病诊断和预测的潜在生物学标志物。     

银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)Sirt1,mRNA的表达及其意义

目的:从细胞凋亡角度探讨Sirt1在银屑病发病中的作用.方法:采用密度梯度离心法分离30例银屑病患者和10N健康对照者外周血单个核细胞,实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)法检测PBMC细胞组蛋白去乙酰化酶Sirt1 mRNA表达水平.结果:银屑病患者PBMC细胞Sirt1 mRNA表达水平较正常对照组明显增加.结论:推测银屑病的角质形成细胞增殖可能与凋亡抑制因子Sirt1关系密切.     

大黄素调节Sirt1表达改善脂肪细胞糖代谢的研究

目的研究大黄素对脂肪细胞葡萄糖代谢的影响及其机制。方法以分化成熟的脂肪细胞为研究对象,检测10μmol/L的大黄素对脂肪细胞葡萄糖代谢的影响。以流式细胞术检测脂肪细胞对2-NBDG荧光葡萄糖类似物的吸收;以免疫荧光-激光共聚焦技术检测葡萄糖转运蛋白4在细胞内的定位和表达;以qPCR检测Sirt1基因的mRNA的表达;以Western Blot检测Sirt1蛋白的表达。结果流式细胞术检测葡萄糖吸收实验结果表明,大黄素可显著促进成熟脂肪细胞对葡萄糖的吸收。经10μmol/L大黄素处理脂肪细胞3h后,葡萄糖的吸收量平均增加了46.01%(P0.05)。免疫荧光显示经大黄素处理的脂肪细胞的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)显著从细胞内膜泡转位至细胞膜表面(P0.01);同时,大黄素使Sirt1的基因表达与蛋白表达都显著增加(P0.05),这可能是大黄素改善脂肪细胞葡萄糖代谢的机制之一。结论大黄素可能通过调节Sirt1表达改善脂肪细胞的葡萄糖代谢。     

Sirt1在缺氧条件下对心肌细胞线粒体融合与分裂中的作用

目的 探讨缺氧条件下线粒体动态学变化及Sirt1在其中的作用.方法 ①收集2014年于新桥医院心血管外科行手术治疗的先心病患儿29例,其中非紫绀型先心病14例,紫绀型先心病15例,取术中所切除的右室流出道心肌组织为心肌标本,Western blot检测促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达情况.②将H9c2心肌细胞置入缺氧培养箱(94％N2,5％ CO2,1％ O2)中进行培养,检测缺氧0、2、4、8、12 h后促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1的表达水平.③将线粒体靶向质粒分别同空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒共转染H9c2细胞,常氧或缺氧培养箱中培养12 h后,激光共聚焦显微镜下观察线粒体融合、分裂情况;④运用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分别在H9c2细胞中过表达或干扰Sirt1后,将细胞置于缺氧培养箱中培养12 h,检测Drp1与Fis1表达水平;⑤分别转染空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒至H9c2细胞后,缺氧培养12 h,LDH试剂盒检测细胞毒性.结果 ①同非紫绀组相比,紫绀组心肌中Drp1与Fis1表达显著增高,Drp1相对灰度值:[(0.47±0.11)vs(0.76±0.12)、Fis1相对灰度值(0.53 ±0.02)vs (0.83 ±0.03),P＜0.05];②细胞水平研究结果显示Drp1与Fis1的蛋白表达随缺氧的时间的延长呈递增趋势;③激光共聚焦结果表明,Sirt1过表达后能够一定程度地缓解缺氧诱导的线粒体分裂(P＜0.05),而当Sirt1受到干扰后,缺氧所诱导的线粒体分裂水平明显提高(P＜0.05);④在缺氧条件下,过表达Sirt1能够抑制Drp1与Fis1蛋白表达水平(P＜0.05),而Sirt1被抑制后,Drp1与Fis1蛋白表达水平增加(对照组,过表达组,低表达组Drp1相对灰度值依次为[(0.47 ±0.02)vs(0.36±0.02) vs (0.78 ±0.04);Fis1相对灰度值依次为(0.64±0.02) vs (0.42±0.02) vs (0.80±0.04),P＜0.05];⑤Sirt1过表达能够降低缺氧刺激后H9c2心肌细胞的死亡率.结论 Sirt1可能通过调控促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达水平促进心肌细胞在缺氧条件下的适应.     

“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞凋亡中的作用

目的：初步研究“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞OCCM-30凋亡中的作用。方法：体外培养小鼠成牙骨质细胞,随机分为对照组、低氧组、低氧+Sirt1激活剂白藜芦醇组、低氧+自噬抑制剂3-MA组、低氧+白藜芦醇+Sirt1抑制剂ex527组、低氧+白藜芦醇+3-MA组,MDC染色观察自噬溶酶体变化;LC3Ⅱ免疫荧光检测自噬体变化;透射电镜观察自噬体;Western blot检测Sirt1、LC3Ⅱ、p62等蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同组间结果数据采用单因素方差分析,组间采用LSD-t分析。结果：低氧组较对照组自噬溶酶体含量（P=0.000）及自噬体数量（P=0.000）明显增加,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加（P=0.001）,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率增加（P=0.000）;低氧+白藜芦醇组较低氧组自噬溶酶体（P=0.019）及自噬体数量（P=0.000）、LC3Ⅱ蛋白表达（P=0.049）、Sirt1蛋白表达（P=0.000）明显增加,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率减少（P=0.021）;低氧+白藜芦醇+ex527组...     

人大肠癌细胞系HCT116中Sirt 1基因敲除细胞株的构建

目的利用AAV介导的体细胞基因敲除技术,在人大肠癌细胞系HCT116中对靶基因Sirt 1进行敲除,达到基因沉默的目的。方法构建Sirt1打靶载体,通过病毒包装、感染、药物筛选、PCR鉴定、Western blotting鉴定等步骤获得Sirt 1基因敲除的细胞株。结果经过筛选和鉴定后获得两个Sirt1-/-阳性克隆,成功构建HCT116 Sirt1-/-细胞系。结论通过体细胞敲除技术,我们成功地获得Sirt1敲除肠癌细胞株。     

冬虫夏草通过Sirt1发挥对HK2细胞缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：研究冬虫夏草(Cordyceps sinensis,CS)对缺血-再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)的HK2细 胞凋亡水平和Sirt1表达的影响,探讨CS对HK2细胞IRI的保护机制。方法：不同浓度CS(10,20,40,80,160, 320 mg/L)与HK2细胞共培养24 h,测定细胞增殖率,确定其最佳干预浓度;体外培养的HK2细胞用0.01 μmol/L 抗霉素A处理模拟缺血过程,2 h后恢复含血清培养基模拟再灌注过程。将HK2细胞分为对照组,I/R组,I/R+CS组 (160 mg/L),I/R+CS(160 mg/L)+sirtinol(25 μmol/L)组,24 h后提取各组细胞总RNA和蛋白。四甲基偶氮唑盐(MTT) 比色法检测细胞增殖;qRT-PCR及Western印迹检测Sirt1和凋亡相关基因(cleaved caspase-3)mRNA及蛋白表达的变化, AnnexinV-FITC/PI双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：CS 10~160 mg/L与HK2细胞作用24 h,对细胞增殖影 响不明显(P>0.05);当浓度增大到320 mg/L时,出现明显抑制HK2细胞增殖的现象(P<0.01)。与对照组相比,I/R组 Sirt1,cleaved caspase-3 mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01);相对于I/R组,I/R+CS组Sirt1 mRNA和蛋白水平增加(P<0.01),而cleaved caspase-3 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05)。给 予Sirt1抑制剂sirtinol后,I/R+CS+sirtinol(25 μmol/L)组Sirt1 mRNA和蛋白明显降低(P<0.05),cleaved caspase-3 mRNA和蛋 白表达明显升高(P<0.05),细胞凋亡率较I/R+CS组增加(P<0.05)。结论：CS对HK2细胞IRI具有保护作用,其机制可能 与CS促进Sirt1表达有关。     

姜黄素上调Sirt1表达预防对比剂急性肾损伤的实验研究

目的 按照对比剂肾病（contrast-induced nephropathy,CIN）的造模方法,建立对比剂急性肾损伤大鼠模型,使用姜黄素（curcumin,CUR）进行干预研究,探究姜黄素对低渗性非离子型对比剂碘海醇造成的大鼠急性肾损伤的保护作用及可能机制,以期为对比剂肾病的预防和治疗提供更多证据。方法 将30只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组（control group,CON组）、对比剂肾病组（contrast-media nephropathy group,CM组）及姜黄素干预组（curcumin group,CUR组）,每组各10只。CUR组大鼠连续给予姜黄素灌胃5天,其余两组大鼠给予相应体积溶剂灌胃。于造模48h后,检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平测定肾功能;HE染色观察肾脏病理变化并评估肾小管损伤程度;应用氧化应激指标检测试剂盒检测肾脏组织内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性及丙二醛（MDA）含量;免疫印迹（Western blot,WB）法检测各组大鼠Sirt1、NF-κB的表达水平。结果 与CON组相比,CM组血Scr、BUN水平显著升高,肾组织匀浆SOD活力、Sirt1表达水平均明显降低,肾组织MDA含量、NF-κB表达水平均明显增高,差异均有统计学意义（P<0.01）,且HE染色可见CM组大鼠肾脏肾小管损伤严重,髓质充血,肾小管结构破坏明显,上皮细胞刷状缘脱落、空泡变性、细胞坏死及蛋白质管型沉积等病理改变,肾小管损伤评分显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与CM组相比,CUR组Scr、BUN水平显著降低,肾组织匀浆SOD活力、Sirt1表达水平均明显升高,肾组织MDA含量、NF-κB表达水平均明显降低,差异均有统计学意义（P<0.05）,病理可见点状肾小管上皮细胞空泡变性,且表现为胞质内细小空泡,少量蛋白管型及髓质充血,肾小管损伤评分较CM组减低,且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 姜黄素能显著减轻对比剂对肾小管上皮细胞的损伤,姜黄素对CIN的保护作用可能是通过抗氧化应激、抗炎途径来完成的,姜黄素可能通过上调Sirt1的表达来改善对比剂所致的急性肾损伤。     

Sirt1抑制由ox-LDL诱导的人冠状动脉内皮细胞的炎症反应

目的:探讨Sirt1对动脉粥样硬化中人冠状动脉内皮细胞炎症反应的影响.方法:选取人冠状动脉内皮细胞,分别用不同浓度的ox-LDL诱导并筛选出最适浓度建立体外动脉粥样硬化细胞模型;将细胞分为正常对照组、空质粒对照组、空质粒+ox-LDL组、Sirt1过表达+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组;用荧光显微镜观察...     

Atoh1基因在癌症中的研究进展

癌症是由控制细胞生长增殖机制失常而引起的一种基因疾病。目前的治疗方法主要有手术、化疗、放疗、生物治疗、靶向治疗等。有些人的致癌基因比较活跃,在外界的影响下,容易患癌症。而有些人的DNA比较容易修复,患癌症的概率相对会小一些。Atoh1基因作为一种新发现的抑癌基因,能够控制细胞分化的最后步骤,确保细胞正确定型而不发生恶变。如果可以用化学药物有效控制Atoh1基因,它将是未来癌症治疗的利器。     

西达本胺对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及Notch1、Sirt1基因表达的影响研究

目的:通过研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺对Notch1、Sirt1基因表达的影响来探讨其对胃癌细胞株SGC-7901的体外抗增殖作用。方法:采用MTT法观察不同浓度西达本胺对SGC-7901细胞增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Sirt1基因表达情况,蛋白质印迹法检测Notch1蛋白表达情况。结果:西达本胺在体外可抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,呈浓度、时间依赖性;其可促进细胞凋亡,减少Sirt1基因的表达,下调Notch1蛋白的表达。结论:西达本胺可通过抑制Sirt1基因表达、下调Notch1蛋白的表达来抑制细胞增殖、促进细胞凋亡而发挥体外抗胃癌作用。