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分子标记中植物DNA提取方法的研究进展 总被引:8,自引:0,他引:8
自20世纪80年代初,分子生物学大量运用于植物研究领域后,DNA分子标记不仅在农业上对植物选种、育种和改良等方面的应用稳步增长,而且在中药资源、鉴定、栽培等方面也有着很好的发展前景.在一般情况下,DNA分子标记技术涉及的分子生物学原理比较简单,实验方法也不复杂,但熟练掌握、灵活运用,并有效地解决实验中出现的各种情况,仍有许多问题值得重视.其中,如何有效地提取高质量的植物DNA已成为生物化学研究的一个重要方面.DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作,如不能有效地完成DNA提取,那就无法进行分子生物学方面的实验.植物DNA的有效提取,根据不同研究需要,应保证结构的相应完整性;应尽量排除其他大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等);应保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子,尽可能少地降解.提取DNA的质量一般采用核酸蛋白质分析仪检测.植物DNA的有效提取,它是进行任何DNA工作的前提和基础,也是最关键的一步. 相似文献
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分子生物学技术已经广泛应用于生物学、基础医学、临床医学和预防医学等多个学科领域,人外周血DNA的提取是分子生物学的一项基础研究技术,从全血中提取高浓度、高纯度和高质量的DNA在实验研究中尤为重要[1~3].张宁等[4]提出的酚抽提法、甲酰胺裂解法以及异丙醇沉淀法是提取DNA最为经典的实验方法,但其操作繁琐,耗时较长,且所用试剂具有一定的毒性.目前,很多学者针对不同实验样品的传统DNA提取方法都提出了改良方法[5-7],应用试剂盒提取人外周血DNA被广泛应用于现在的实验研究,本文针对试剂盒提取人外周血DNA方法的操作过程以及其注意事项等展开讨论,以期为其他研究者提供参考. 相似文献
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本文概述了DNA疫苗研制和接种方法的研究现状,包括质粒载体和抗原基因的选择、DNA疫苗接种途径等,并介绍了有关DNA免疫接种实验研究的十二步自我帮助程序,从而为初涉该领域的研究人员提供了捷径. 相似文献
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文献报道的组织提取DNA的方法,大多操作步骤复杂,花费时间长。我们介绍一种“一步法”提取DNA,可明显提高从石蜡切片中提取DNA量,且不需要额外试剂或特殊仪器,花费时间短。1材料和方法1.1组织标本58份病理档案石蜡包埋组织块,在室温中保存直至被选用。1.2主要试剂、仪器DNA提取液“一步法”:变性缓冲液终浓度:1×PCR缓冲液,0.45%NP40,0.45%Tween20,100μg/ml PK。酚-氯仿提取法:10%SDS,10mg/ml PK,饱和酚,氯仿,醋酸钠等。Tag DNA聚合酶为上海生物工程技术有限公司产品,三磷酸去氧核糖核苷(dNTP)为北京TaQGENE公司产品,DNA… 相似文献
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不同种类中药材的DNA提取方法 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 根据不同种类中药材来选择DNA提取方法。方法 根据作者对各种药材鉴定的实践经验,结合国内外有关代表性的论文,进行归纳和整理。结果 分析了不同DNA提取方法适用范围和局限性。结论 根据药材种类、贮存时间,选取合适的提取方法和适当的样品量。 相似文献
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Methodological Studies on Genomic DNA Extraction and Purification from Plant Drug Materials 总被引:17,自引:0,他引:17
本文探讨了菊科9种植物和地胆草的4种对口商品药材基因组DNA提取与纯化的原理、方法通过对3种常用植物基因组DNA提取方法(CsCl梯度超速离心法、CTABCsCl梯度超速离心法和CTAB微量提取法)的条件摸索在DNA产率、纯度以及提取纯化过程中影响PCR扩增因子方面进行比较,认为CTAB微量提取法是植物类药材基因组DNA一种比较省时、有效、经济的提取方法 相似文献
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目的 比较筛选最适于贝母属药用贝母的总DNA提取方法。方法 利用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的SDS法提取贝母属药用贝母的总DNA;通过核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度和纯度;进行ISSR-PCR扩增检测所得总DNA质量。结果 3种方法均可提取出产量较高的基因组DNA,但试剂盒法相较提取的总DNA纯度最高,质量最好,并且均能扩增出丰富清晰的条带,稳定性高,操作简单耗时短。改良的CTAB法、SDS法提取的总DNA纯度、质量均次于试剂盒法,操作复杂耗时长,不适用于下游的分子生物学实验。结论 试剂盒法为贝母属药用贝母总DNA提取的最佳方法,其所得样品适用于PCR及其他分子生物学研究。 相似文献
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目的 以发菜为研究对象比较不同的提取DNA方法,筛选出了一种适合快速提取发菜DNA的方法。方法 分别利用自主研发的硅珠DNA纯化技术、细菌试DNA提取试剂盒和植物DNA提取试剂盒提取发菜基因组DNA。结果 本实验室开发的硅珠DNA提取纯化技术具有快速、无毒以及获得的发菜DNA纯度高等优势。通过PCR扩增和测序得到16S rRNA基因,利用Blast软件进行序列比对,与发菜同源性为99%。结论 本研究研制的发菜基因组DNA提取方法可用于发菜源性的分子鉴定。 相似文献
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白木香基因组DNA的提取及AFLP银染体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
用改良的CTAB法提取不同居群的白木香基因组DNA,通过优化AFLP技术中关键步骤的参数,建立适合白木香的AFLP银染反应体系。结果表明,改良的CTAB法提取的白木香基因组DNA纯度高,完整性好,满足AFLP分析的要求;250ng的基因组DNA用EcoRI和MseI37℃消化3h后可以被完全酶切,酶切产物和接头经16℃连接过夜后,用带有一个选择性碱基的引物和带有3个选择性碱基的引物分别进行预扩增和选择性扩增,扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,用AgNO3染色得到了清晰的指纹式样,为下一步的遗传分析奠定了基础。 相似文献
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目的:探讨高同型半胱氨酸血症(HHCY)和高胆固醇血症(HTC)联合作用对大鼠主动脉基因组DNA总甲基转移酶活力(DNMT)及总甲基化水平的影响.方法:44只健康清洁级成年Wistar雄性大鼠按2×2析因设计随机分为阴性对照组、高同型半胱氨酸(HCY)组、高总胆固醇(TC)组、高HCY+高TC组,每组11只.对照组给予普通大鼠饲料,其余各组给予相应的配方饲料.喂养3个月后心脏取血检测血清中HCY、TC等相关指标.提取主动脉基因组DNA检测基因组DNA总甲基化水平;提取主动脉核蛋白检测基因组DNA总甲基转移酶活力.结果:HHCY和HTC联合作用大鼠血清HCY较高,产生相可作用(P<0.01),表现为协同作用,而对大鼠血清TC、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)无交互作用.HHCY和HTC联合作用主动脉基因组DNA总甲基转移酶活力较高,产生相互作用(P<0.01),表现为协同作用,总基因组DNA甲基化水平降低,即去甲基化程度的增加,产生相互作用(P<0.01),表现为协同作用.结论:HHCY和HTC联合作用使得大鼠主动脉基因组DNA总DNMT活力增高,基因组DNA总甲基化水平降低,可能是AS发生发展的重要机制之一. 相似文献
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用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较 总被引:44,自引:1,他引:44
目的:比较4种用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA的制备方法,以寻求一种稳定、简便的DNA模板制备方法,用于毕赤酵母重组子的分析。方法:分别用玻璃珠法、煮沸法、煮—冻—煮法以及直接法制备毕赤酵母基因组DNA模板,在相同条件下进行PCR扩增并比较其差异。结果:煮—冻—煮法与玻璃珠法制备的模板进行PCR均可取得理想的实验结果。以煮沸法制备模板作PCR时结果受所用模板浓度的影内很大,稳定性较差。直接法(即直接用未经处理的菌体作模板)的PCR结果随机性较大,实验结果最不理想。结论:煮—冻—煮法所需时间少、费用低、操作简便而且结果稳定,是采用毕赤酵母表达系统进行PCR鉴定时制备模板DNA的首选方法。 相似文献
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Maruyama T Kamakura H Miyai M Komatsu K Kawasaki T Fujita M Shimada H Yamamoto Y Shibata T Goda Y 《Planta medica》2008,74(7):787-789
Shigoka (SGK), the rhizome of Eleutherococcus senticosus, is a traditional medicine used as a tonic in northeastern Asia and far eastern Russia. We analyzed the nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer (ITS) sequence of the medicine available on the Japanese and Chinese markets and found that at least 3 species were used as the source plant of the commercial SGKs and that only 70% of all samples was made from the correct species. Furthermore, we performed the quantitative determination of 3 marker compounds, eleutheroside B (EB), syringaresinol diglucoside (Syr), and isofraxidin (Iso) by ultraperformance liquid chromatography (UPLC)/mass spectrometry (MS). We found that EB and Iso are specific to the correct source plant of SGK. Of them, EB is thought to be the best marker compound for quality assurance of the SGK from the viewpoint of its pharmacological activity. 相似文献