组织工程化软骨构建的研究进展

背景：组织工程学方法为关节软骨缺损的修复提供了新的治疗模式,具有广阔的应用前景。目的：探究组织工程化软骨的构建方法、研究方向和应用前景。方法：检索中国期刊全文数据库（CNKI：1991至2011年）和WebofScience（1991至2011年）数据库,检索词分别为＂组织工程,软骨损伤,种子细胞,支架＂和＂TissueEngineering,CartilageDefects,SeedCell,Scaffolds＂,语言分别设为中文和英文。阅读文题和摘要进行筛选,选择具有原创性,论点论据可靠且分析全面,密切相关的文章,排除重复性研究以及质量较差文章。按纳入排除标准筛选后,共纳入30篇文章。结果与结论：组织工程化软骨多以各种种子细胞与不同的支架材料进行复合,且在软骨缺损修复中体现了较好的应用价值,但应用于临床还有许多具体问题需要解决。     

骨髓间充质干细胞体外构建工程化心肌组织的生存

背景：到目前为止,工程化心肌组织仍然面临很多的问题。研究证实,骨髓间充质干细胞可分化为心肌样细胞;聚乙交酯、聚己内酯为常用的人工高分子材料,生物相容性良好。目的：观察体外构建骨髓间充质干细胞-聚乙交酯-聚己内酯共聚物补片在正常心肌组织和梗死后心肌组织中的生长情况。方法：SD大鼠骨髓间充质干细胞采用贴壁分离筛选法进行分离、培养,选取第3代进行体外DAPI标记。制作骨髓间充质干细胞悬液（2×106/cm2）种植于聚乙交酯-聚己内酯共聚物上形成骨髓间充质干细胞-聚乙交酯-聚己内酯共聚物补片。培养48 h在电镜下观察;苏木精-伊红染色后在光学显微镜下观察。大鼠结扎左冠状动脉前降支制作心肌梗死模型。将补片植入到正常心肌组织和梗死后心肌组织培养5周,行病理学检查了解骨髓间充质干细胞在组织中的存活情况。结果与结论：光学显微镜和电镜观察结果示,骨髓间充质干细胞在聚乙交酯-聚己内酯共聚物支架中呈三维生长,细胞与支架黏附良好。在激光共聚焦显微镜下,对比观察补片植入正常心肌组织后第1周和第5周切片结果,同第1周相比,第5周的心肌组织内出现DAPI标记的骨髓间充质干细胞;心肌梗死区出现DAPI标记的骨髓间充质干细胞。苏木精-伊红染色结果示,梗死区出现骨髓间充质干细胞。提示骨髓间充质干细胞在聚乙交酯-聚己内酯共聚物支架上贴附生长,黏附良好。骨髓间充质干细胞-聚乙交酯-聚己内酯共聚物补片可用于心肌组织修复。     

丝素蛋白支架材料复合骨髓间充质干细胞构建组织工程化软骨

背景：一些研究已证明丝素蛋白是细胞立体培养的良好支架。目的：拟观察丝素蛋白作为支架材料复合骨髓间充质干细胞修复关节软骨缺损的可行性。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-08/2007-11在江苏省血吸寄生虫病防治研究所完成。材料：新西兰大白兔27只,雌雄不拘,体质量1.5~2.0kg,制备关节全层软骨缺损模型;丝素蛋白材料由苏州大学材料学院李明忠教授提供。方法：分离培养并定向诱导兔骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞,与丝素蛋白膜材料复合培养,建立兔膝关节股骨髁间软骨缺损。27只大白兔随机抽签法分为3组,每组9只。复合组植入细胞/丝素蛋白材料复合物;丝素蛋白组植入单纯丝素蛋白材料,空白组不行任何植入。主要观察指标：扫描电镜观察细胞在材料上的生长情况;4,8,12周时取材观察软骨缺损修复情况。结果：骨髓间充质干细胞诱导后在材料上生长良好。骨髓间充质干细胞与丝素蛋白复合8周后,在兔膝关节内即形成软骨样细胞,且细胞外基质非常丰富,12周后与周围软骨色泽相近,表面光整,支架材料基本吸收,未见明显退变和淋巴细胞或白细胞浸润,所有标本均未见丝素蛋白残留。丝素蛋白组呈纤维软骨样修复,空白组基本没有修复。结论：用丝素蛋白复合骨髓间充质干细胞可形成透明软骨修复动物膝关节全层软骨缺损,显示了丝素蛋白材料作为关节软骨组织工程支架材料的良好生物相容性。     

猪小肠与犬食管脱细胞基质（ECM）构建组织工程化人工食管的比较研究

背景骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有多向分化潜能,来源广泛、分离方便、增殖迅速,是目前公认的组织工程最佳种子细胞;脱细胞基质膜（ECM）有良好的组织相容性,充足的孔隙率,利于种子细胞的附着、增殖,并诱导细胞沿“模具”的性状生长、分化,是组织工程的理想支架材料。目的为比较研究骨髓间充质干细胞在体外在不同的支架材料上复合生长情况,分别与猪小肠脱细胞基质（IECM）;犬自体食管脱细胞基质（EECM）和人工补片（ePTFE）做对比研究。方法使用物理方法和化学方法制备ECM,扫描电镜观察其表面结构。体外提取分离培养犬骨髓间充质干细胞,做流式细胞学鉴定后,取第三代BMSCs分别与IECM、EECM、ePTFE复合培养,HE染色和扫描电镜观察。结果 ECM为白色菲薄,半透明的膜状物,扫描电镜可见其清晰的纤维网状结构,具有良好的立体三维空间结构,并且之间相互连通。BMSCs经流式细胞学鉴定CD29、CD44、CD90、CD105表达率几乎100%,而CD34、CD45几乎不表达。BMSCs与载体支架复合培养15d后,做HE染色切片观察,细胞与IECM、EECM复合生长率良好,与ePTFE较差。结论复合培养后的IECM组与EECM组生物性状较为接近,同时IECM的来源更加广泛,是组织工程化人工食管支架材料的更好选择。     

组织工程化脂肪的构建与应用

背景:软组织缺损的修复是整形外科的重要难题,而目前用于临床治疗的各种方案都存在一定缺陷.目的:对脂肪组织工程的研究现状进行相应的探讨,分析目前所采用方案的缺陷,并对其将来可能的临床应用进行相应展望.方法:以adipose tissue engineering,mesenchymal stem cells,derived from adipose tissue为检索词,检索Medline数据库(1991-01/2009-05);以脂肪,组织工程,间充质干细胞为检索词,检索中国期刊全文数据库(1991-01/2009-05).文献检索语种限制为英文和中文.纳入与组织工程化脂肪组织构建相关的内容,排除重复研究.结果与结论:计算机初检得到342篇文献,根据纳入排除标准,对33篇进行分析.在探索软组织缺损治疗方法的过程中发现:组织工程技术能以少量种子细胞,经体外扩增后与生物材料复合,修复较大的组织或器官缺损,重建生理功能,为真正实现无损伤修复组织缺损和真正意义上的形态、结构与功能重建开辟了新的途径.当前已有多种成功构建脂肪组织的策略用于治疗软组织缺损,这将给填充脂肪组织修复软组织缺损开辟广阔的天空.     

利用c-kit^＋骨髓间充质干细胞与心脏脱细胞骨架共培育心肌组织

背景：研究发现c-kit阳性骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞,可能成为理想的种子细胞。 目的：验证利用c-kit^＋骨髓间充质干细胞及心脏脱细胞骨架培育心肌组织的可行性。 方法：取成年大鼠心脏脱细胞后备用。取大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第8代后行c-kit富集,采用5μmol/L的5氮杂胞苷诱导2周后行二氢吡啶受体α2富集,然后继续培养行心肌分化鉴定或种植于心脏脱细胞骨架内行心肌组织培养。6周后,利用心肌细胞特异性蛋白表达及动作电位鉴定心肌细胞分化,利用免疫荧光染色分析新生心肌组织结构。 结果与结论：第2次富集6周后,约60%的骨髓间充质干细胞表达心肌肌钙蛋白T、GATA结合蛋白4、连接蛋白43,电生理分析显示这些细胞可产生心肌细胞样动作电位,证实 c-kit^＋骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞,种植于脱细胞心脏骨架后可形成排列有序的心肌组织。     

动态反应器构建组织工程化血管的初步实验研究

目的 以自行设计的旋转细胞培养器和动态反应器比较静态和动态培养条件下细胞增殖的差异,以期为体外构建组织工程化血管提供依据.方法 将兔骨髓间充质干细胞种植在氧等离子体辐照10 min聚氨酯膜制成的管状支架上进行细胞培养,比较静态和动态种植、静态和动态培养细胞增殖率的差异.结果 自制的旋转培养器、动态反应器工作状态稳定;培养第7,14,28天动态培养组光密度值均高于静态培养组(P＜0.01);培养28 d甲苯胺蓝染色及扫描电子显微镜观察显示,动态培养组细胞增殖数较静态培养组多、生长更致密,且有顺培养液流动方向排列的趋势.结论 动态细胞的种植与培养优于静态.自制的旋转培养器、动态反应器可用于初步的动态培养实验,但仍有待改进.     

组织工程化皮肤的血管构建

组织工程化皮肤的三维结构有3个要素,即细胞、支架和血液供应,其中血液供应对于皮肤的维持和移植最为重要.组织工程化皮肤的血管构建技术涉及多个方面,如接种血管形成的种子细胞,进而促进血管结构的形成.间充质干细胞是多潜能干细胞,因其具有独特的生物学特性,所以成为皮肤组织工程中重要的种子细胞;此外通过释放各种调控因子如血管内皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板衍生性生长因子等也可以促进血管的形成.     

兔骨髓间充质干细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性

目的:探索以骨髓间充质干细胞为种子细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性。方法:实验于2004-11/2006-03在中山大学第二附属医院医学科研中心完成。①参照张金明等报道的方法,制备脱细胞尿道海绵体-尿道基质,并行组织学检查观察脱细胞效果。②分离兔骨髓间充质干细胞,鉴定其表型,体外培养增殖后种植于兔脱细胞尿道海绵体-尿道基质上。③48只兔随机均分为实验组、对照组,每组24只。实验组用种植有干细胞的脱细胞基质即组织工程尿道修复部分切除的兔海绵体尿道,对照组组仅用脱细胞基质修复。④术后观察动物排尿情况,并于术后1,2,4,8,12,24周切取标本,看有无狭窄及腔面一般性状并行组织学检查,比较两者差异。结果:两组共48只兔全部进入结果分析。①自行制备的组织工程支架和种子细胞鉴定结果:所制备脱细胞基质质地柔软,镜下未见细胞成份;分离培养的细胞表型为CD45阴性,CD166,CD29,CD105阳性,符合骨髓间充质干细胞特征。②术后动物及标本一般观察:实验组术后2周时发现1例尿瘘;对照组2周时发现1例尿瘘,8,12,24周时分别发现各1例尿道狭窄。其余实验动物在拔除导尿管后排尿通畅。③两组兔再造尿道组织学检查结果:实验组自术后2周开始,组织学检查见血管和平滑肌逐渐增多;24周时,尿道腔面光滑,可见和正常尿道海绵体类似的组织结构。对照组自2周起可见血管,4周起可见平滑肌再生,24周时血管和平滑肌形成仍较少,较多纤维瘢痕,且无窦样组织形成,再造尿道腔面不如实验组光滑。结论:以骨髓间充质干细胞为种子细胞,脱细胞尿道海绵体为基质,构建组织工程化尿道海绵体,移植修复兔海绵体尿道缺损,可形成类似于正常尿道海绵体的组织结构。     

骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养在组织工程化软骨中的研究进展

关节软骨几乎不能自我修复,而组织工程的发展为关节软骨的修复提供了可能,但目前没有任何种子细胞能完全满足组织工程化软骨的要求。骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养作为种子细胞,是目前组织工程研究的热点,现就骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养研究现状作一综述。     

组织工程气管重建相关临床问答

1 同种异体气管移植治疗失败的原因? 自1950年Ferguson首次报告同种异体气管移植的动物实验以来,人们对气管移植进行了大量的研究探索.     

关于组织工程化软骨的临床问答

1组织工程软骨目前是否已经在临床应用？组织工程软骨、组织工程骨和组织工程皮肤等在美国、德国、英国、法国、荷兰、意大利等国家都有多种产品上市。目前FDA批准了6种组织工程皮肤产品，如Apligraf、Dermagraft、OrCell等，以及一种组织工程软骨Carticel，还有多种产品处于临床试验之中。组织工程软骨还在新加坡、澳大利亚、德国等进入了临床试验或试用。欧盟、中国等也批准类似的组织工程皮肤和软骨产品。     

组织工程化角膜相关问题临床问答

1人工角膜植入的适应证以及常见的并发症？ 人工角膜植入治疗适用于异体角膜移植因发生排斥反应而失败的双眼角膜混浊性失明的患者，包括严重的化学烧伤、热烧伤以及Steven—Johnson综合征等各种病因所致的严重角膜血管翳的患者。治疗前应通过超声波检查视网膜及玻璃体情况，排除视网膜脱离、视神经萎缩等疾病。由于人工角膜植入治疗在晚期常会出现严重的并发症，因此能用角膜移植治疗的患者则不宜选用人工角膜植入治疗。单眼角膜混浊性失明，另一眼视力良好者也不宜选用此手术。有青光眼者治疗前应控制眼压后方安排手术。     

组织工程化血管相关问题临床问答

1 表面内皮化对人造血管材料血液相容性的作用? 人造血管材料表面内皮化的表面主要是指伪内膜化表面或内皮细胞和高分子的杂化表面.     

关于组织工程皮肤的临床问答

1 组织工程皮肤的生物学特点？ 组织工程皮肤是用组织工程方法对所取组织进行消化、分离成表皮细胞和成纤维细胞,并对其分别培养和扩增,达到一定细胞数量后重组成的皮肤组织。     

肾移植相关临床问题的问答

1 活体肾移植供者筛选应注意哪些事项? 活体肾移植供者筛查的首要目的是确保捐赠者的医疗安全性和社会适应性,尽管供肾切取术比较安全,但对一个健康个体实施非治疗性的侵袭性手术,仍然违背了医学伦理学上的绝对无害原则.     

异种肝移植的临床问答

1 异种肝移植类型主要有哪些? 异种肝移植主要包括3种类型: (1)原位肝移植主要用于永久性肝脏取代或移植前过渡性治疗.     

有关生物人工肝膜材料的一些问题

1 人工肝膜材料的基本要求? 出于安全考虑,大多数生物反应器采用膜材料将肝细胞与血液相隔离.无论是平板型还是中空纤维型膜材料血液透析器,都已被证实具有运送氧气和血液中溶质成分的能力,并且具有良好的血液、血浆生物相容性.     

人工种植牙材料的临床问答

1适宜人工种植牙的材料？ 牙种植体又称人工牙根,通过外科手术将其植入人体缺牙部位的颌骨内,愈合后在其上部修复假牙的装置。种植义齿修复后,能全面恢复牙颌缺损病人的咀嚼、语言等功能,其咀嚼效率可达正常人的60%-90%。     

口腔组织工程相关问题临床问答①

1 髁突运动中参考点和参考平面的确定方法? 前参考点用特制的定位尺确定,该点位于中切牙或侧切牙切缘上方43 mm处,前牙缺失患者位于上唇下缘上方43 mm处,记录前参考点距内眦点的距离.