三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖模型细胞周期相关蛋白表达的影响

目的研究三七总皂苷(TPNS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖细胞周期相关蛋白表达的影响。方法以血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠VSMC,观察含药血浆对VSMC增殖的影响,以免疫荧光流式细胞术测定增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期相关蛋白的表达。结果血小板衍生生长因子(PDGF)剌激VSMC后,VSMC PCNA、VSMC细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达增强,细胞周期抑制因子P21蛋白表达下调。阿托伐他汀含药血浆和TPNS含药血浆均可抑制PDGF诱导的VSMC PCNA、cyclinD1和CDK4蛋白表达增强及P21蛋白表达下调。TPNS与阿托伐他汀比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF剌激VSMC后,可促进细胞周期转化,细胞增殖加快。阿托伐他汀、TPNS可抑制PDGF诱导的VSMC增殖,其作用可能是通过抑制了细胞周期相关调节蛋白的表达,从而抑制了VSMC细胞周期转化和增殖。     

补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷对大鼠血管内膜损伤后主动脉内膜增生和增殖细胞核抗原表达的影响

目的：探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷类对大鼠血管内膜损伤后主动脉内膜增生和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达的影响。方法：用国产2.0F球囊导管建立大鼠主动脉内皮剥脱模型,术后第1天开始灌胃给药,术后第15天取胸主动脉血管损伤段测定内膜增生程度及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果：剥脱术后第15天,模型组大鼠主动脉内膜出现显著增生。与假手术组比较,术后各组中膜增生不明显（P〉0.05）,内膜增生明显（P〈0.01）。生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组和阿伐他汀组血管内膜增生程度轻于模型组（P〈0.01）。模型组PCNA表达高于假手术组（P〈0.01）。生物碱组、苷组、阿托伐他汀组PCNA表达高于假手术组（P〈0.05,P〈0.01）,但均低于模型组（P〈0.01）。补阳还五汤原方组大鼠PCNA表达高于假手术组（P〈0.01）,虽低于模型组,但差异无显著性意义（P〉0.05）。结论：补阳还五汤有效组分生物碱和苷类均可抑制血管内皮剥脱后的血管内膜增生,可能为补阳还五汤抗血管内膜增生的药效物质基础之一,其抗血管内膜增生的作用可能与降低PCNA表达有关。     

骨膜素在平滑肌细胞迁移和增殖中的作用及阿托伐他汀对其的影响

目的:观察体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)在TGF-β1刺激下骨膜素(periostin)的表达情况及其与平滑肌细胞迁移、增殖等的关系;观察阿托伐他汀对上述过程的影响并初步探讨其抑制periostin表达的分子机制。方法:采用组织块贴壁培养法进行血管平滑肌细胞的原代培养,取3～6代细胞用于实验。采用10 ng/mL TGF-β1刺激VSMC,并用不同浓度阿托伐他汀(0.1,1.0,10.0μmol/L)以及Rho激酶抑制剂Y-27632、甲羟戊酸(MVA)+10.0μmol/L阿托伐他汀干预,24 h后用RT-PCR及Western印迹法检测VSMC中periostin mRNA和蛋白的表达;用Boyden趋化小室测试细胞迁移情况,用MTT法测定细胞增殖情况。结果:大鼠VSMC在TGF-β1刺激下periostin蛋白表达明显增加(4.158±0.515 vs 0.385±0.031),且VSMC迁移数(25±4 vs 8±2)及增殖率(0.85±0.06 vs 0.32±0.03)明显增加,阿托伐他汀呈浓度依赖性抑制大鼠VSMC在TGF-β1诱导下的periostin表达及抑制VSMC的迁移率及增殖率;Rho激酶抑制剂Y-27632可明显降低大鼠VSMC在TGF-β1诱导下的periostin表达(2.082±0.245);加入MVA后,阿托伐他汀对TGF-β1促进大鼠VSMC中periostin表达的抑制作用明显降低(3.838±0.326)。结论:Periostin可促进大鼠VSMC的迁移和增殖,阿托伐他汀可能是通过抑制MVA等类异戊二烯的生成,阻断Rho/Rho激酶信号通路,进而抑制TGF-β1诱导的VSMC中periostin的表达。     

补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠动脉血栓形成纤溶相关指标的影响

目的研究补阳还五汤及其生物碱、苷两类有效部位对大鼠颈总动脉血栓形成纤溶相关指标的影响。方法将SD大鼠84只随机分为补阳还五汤原方组、生物碱组等7组。先给大鼠喂药后以FeCl3诱导左侧颈总动脉血栓形成,以发色底物法测定血浆组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)和纤溶酶原(PLG)活性,并测定血栓质量。结果①FeCl3可致颈总动脉血栓形成。补阳还五汤、生物碱、苷、抵克利得和低分子肝素均可使血栓质量减轻(P<0.05)。②模型组tPA和PLG活性均降低(P<0.05),PAI活性无显著变化(P>0.05)。与模型组比较,补阳还五汤原方可使血浆tPA、PLG活性升高(P<0.05),而生物碱和苷对tPA和PLG活性无影响。结论低分子肝素(LMWH)和抵克利得可抑制由FeCl3诱导的大鼠血栓形成,表明该模型与凝血功能亢进和血小板活化有关。补阳还五汤及其有效部位生物碱和苷也可抑制该模型血栓形成,原方可使血浆tPA活性和PLG活性升高,提示其作用与促进纤溶功能有关;而生物碱和苷对tPA、PAI和PLG无明显影响,表明其抗血栓作用不是通过促进纤溶而实现的,其作用可能与其它环节有关。     

补阳还五汤及其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后caspase表达的影响

目的研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织caspase-1、3、8表达的影响。方法采用颈内动脉线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)再灌注模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定缺血脑组织中caspase-1、3、8 mRNA的表达。结果脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组caspase-1、3、8表达较假手术组均显著增强(P<0.05)。生物碱组、苷组caspase-1表达显著低于模型组(P<0.05);补阳还五汤组、生物碱组、苷组、三七总皂苷组caspase-3与模型组比较均显著降低(P<0.05);生物碱组caspase-8表达较模型组显著降低(P<0.05)。三七总皂苷组caspase-8表达较假手术组显著增强(P<0.05)。结论补阳还五汤及其有效部位通过抑制缺血后脑组织caspase-1、3、8的表达,从而有可能对抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,保护缺血脑组织。     

补阳还五汤和其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后IL-1β及相关因子表达的影响

目的 研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素1β(IL-1β)及其相关因子mRNA表达的影响.方法 采用颈内动脉线栓法建立大鼠MACO再灌注模型,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定缺血脑组织IL-1β、IL-1R1、IL-1ra、ICAM-1 mRNA的表达.结果 脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组IL-1β、IL-1R1、IL-1ra和ICAM-1 mRNA表达较假手术组均显著增强(P＜0.05和P＜0.01).补阳还五汤组IL-1β表达显著高于假手术组(P＜0.05),而生物碱组和苷组较模型组有所降低;补阳还五汤组IL-1R1表达较模型组显著降低(P＜0.05),而生物碱组和苷组IL-1R1表达均显著高于假手术组(P＜0.05),与模型组接近.补阳还五汤组、生物碱组和苷组IL-1ra表达均显著高于假手术组(P＜0.05和P＜0.01).补阳还五汤组、生物碱组、苷组ICAM-1表达低于模型组(P＜0.05).结论 补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷通过抑制IL-1β、IL-1R1、ICAM-1 mRNA的表达,从而减少炎症因子及炎症介质的表达,对缺血脑组织起保护作用.各药对脑缺血后IL-1ra表达无影响.     

阿托伐他汀对IL-1β诱导的大鼠VSMC中CatS和NF—κB表达的影响

目的：观察阿托伐他汀对白介素-1β（Il-1β）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）中组织蛋白酶s（Cat s）和核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法：用Il-1β刺激SD大鼠VSMC中Cat S表达,加入不同浓度的阿托伐他汀进行干预,用细胞免疫化学和RT—PCR法检测Cat S和NF—κB表达。结果：与正常对照组相比,IL-1β使大鼠VSMC中NF-κB和CatS表达明显增加（P〈0．01）。阿托伐他汀可以呈剂量依赖性地抑制IL-1β所致的大鼠VSMC中CatS和NF-κB表达（P〈0．01）。结论：阿托伐他汀可以抑制IL-1β引起的大鼠VSMC中CatS和NF-κB表达,阿托伐他汀可能通过抑制NF-κB使Cat S表达减少。     

补阳还五汤有效部位对脑缺血再灌注大鼠IL-1β和ICAM-1表达的作用

目的探讨补阳还五汤有效部位对大脑局灶性脑缺血后再灌注大鼠脑组织IL-1β和ICAM—1表达的作用。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型，检测脑组织IL-1β和ICAM—1的表达。结果脑缺血2h再灌注46h后，模型组海马及髓质区IL-1β表达阳性细胞数显著增加（P〈0．05，P〈0．01），海马及皮质区ICAM—1表达阳性细胞数显著增多（P〈0．01，P〈0．05）；补阳还五汤有效部位生物碱可使髓质区IL-1β阳性细胞数显著减少（P〈0．01）；苷可使皮质区ICAM-1β阳性细胞数显著减少（P〈0．01）。结论脑缺血再灌注后，脑组织IL-1β和ICAM—1表达增加，补阳还五汤有效部位生物碱和苷可分别抑制髓质部位IL-1β蛋白表达及皮质区10w—1蛋白表达，提示生物碱和苷可能是补阳还五汤抗脑缺血后炎症反应的部分物质基础。     

淫羊藿苷与葛根素对血管平滑肌细胞周期影响的对比研究

目的:对比研究淫羊藿苷(icariin,ICA)与葛根素(puerarin)对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导增殖的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞周期及增殖指数(proliferation index,PI)的影响。方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA及葛根素共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化。结果:ICA与葛根素组G0/G1期细胞数增多,S期细胞数明显减少,PI显著降低,与HCY组相比,差异显著(P0.01);ICA作用效果与其浓度呈正相关,葛根素作用效果则与其浓度关系不大。结论:ICA与葛根素均具有抑制VSMC增殖的作用,细胞周期阻滞是ICA与葛根素抑制VSMC增殖的机制之一。     

气血并治方有效组分不同配伍对血管内皮细胞损伤条件培养基诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察气血并治方中有效组分D(主要为芍药苷)和E(主要为总黄酮)原方配伍、D和E优化配伍,对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞(VEC)损伤条件培养基引起血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用.方法将正常VSMC培养液、ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、辛伐他汀加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E原方配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E优化配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基分别作用于VSMC,采用MTT染色法检测VSMC生长状态,流式细胞仪测定VSMC细胞周期.结果与正常组相比较,VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,细胞增殖活性明显增加(P＜0.01)、S期细胞数增加;与VEC损伤条件培养基组相比较,气血并治方中有效组分D和E 原方配伍组(终浓度为1 mg/L)、D和E优化配伍组(终浓度为1 mg/L)细胞增殖活性明显降低(P＜0.01)、细胞周期S期细胞数减少,作用和阳性药辛伐他汀组相似.结论气血并治方有效组分不同配伍能有效地抑制VEC损伤条件培养基诱导VSMC增殖,气血并治方防治AS作用机理与此密切相关.     

阿托伐他汀对血管平滑肌细胞增殖和血红素氧化酶1表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的影响及对血红素氧化酶1（HO-1）表达的作用。方法采用酶消化法分离大鼠血管平滑肌细胞。取4－6代细胞用于实验,胰岛素样生长因子1（IGF-1）刺激血管平滑肌细胞增殖,以不同浓度（0、0.01、0.1、1和10μmol/L）阿托伐他汀、10μmol/L阿托伐他汀＋锌原卟啉Ⅸ（ZNPPⅨ）进行干预。采用四唑盐（MTT）比色法观察细胞的增殖。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量分析细胞HO-1 mRNA的表达。结果IGF-1可促进血管平滑肌细胞增殖,与空白组比较,IGF-1组细胞计数明显增加（P〈0.01）,随着阿托伐他汀浓度的提高,血管平滑肌细胞计数逐渐减少（P〈0.01）,加入ZNPPⅨ后血管平滑肌细胞增殖恢复。空白组和IGF-1组血管平滑肌细胞HO-1有少量表达,随着阿托伐他汀浓度的增加,HO-1的表达增强,呈剂量依赖性。与空白组和IGF-1组比较,0.01μmol/L组HO-1增加不明显,0.1μmol/L组HO-1开始有较明显增加,10μmol/L组HO-1表达达高峰（P〈0.01）。结论阿托伐他汀可抑制血管平滑肌细胞的增殖和诱导HO-1的表达。诱导HO-1表达是阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞增殖的机制之一。     

冠通方及其拆方含药血清对Ang Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨冠通方及其拆方对含药血清对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,阐析防治冠心病支架术后再狭窄的作用机理以寻找药物作用的靶点。方法：建立AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖模型;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察冠通方及其拆方对VSMC增殖的影响;并用免疫组化法观察冠通方及其拆方对大鼠VSMC表达的影响。结果：冠通方组及其拆方含药血清均可抑制大鼠VSMC的增殖（P〈0.05）;其中冠通方组作用结果最好（P〈0.01）;冠通方组、拆方3组与阴性组比较均有显著性差异（P〈0.01）;其中冠通方组的抑制VSMC的增殖最强（P〈0.01）;拆方3组其次（P〈0.05）;拆方1、2组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：冠通方能抑制血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖,其机制可能与降低VSMC中含量表达有关。     

藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响

目的：观察藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响。 方法：用不同浓度藤龙补中汤处理人结肠癌细胞LS174T和人结肠上皮细胞CRL-1790。用细胞计数检测试剂盒检测细胞增殖,平板法检测细胞克隆形成数目并计算抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,比色法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）、caspase-8和caspase-9的活性。 结果：与对照组比较,藤龙补中汤对人结肠上皮细胞CRL-1790增殖无明显影响;1 mg/mL藤龙补中汤作用72 h,2 mg/mL藤龙补中汤作用48、72 h,5~20 mg/mL藤龙补中汤作用24~72 h均可显著抑制LS174T细胞增殖;1~20 mg/mL藤龙补中汤可显著抑制LS174T细胞克隆形成;5~20 mg/mL藤龙补中汤可诱导LS174T细胞凋亡,使LS174T细胞阻滞在G0/G1期,增强LS174T细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9活性。 结论：藤龙补中汤可抑制结肠癌LS174T细胞增殖,阻滞LS174T细胞于G0/G1期,促进LS174T细胞凋亡;藤龙补中汤促LS174T细胞凋亡作用可能与增加caspase-3、caspase-8、caspase-9活性相关。     

血小板源生长因子-α受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨从血小板源生长因子－α（PDGF－α）受体水平阻断对肺血管平滑肌增殖的影响。方法：将组织贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞（VSMC）分别施加小、中、大剂量的受体结构域切除的PDGF－α受体腺病毒重组体Ad5CMV-PaRtr(ACP),通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察细胞不同时相的增殖曲线；采用流式细胞学技术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果：中、大浓度ACP对细胞增殖有明显抑制作用。中、大剂量ACP干预后，VSMC生长明显受抑，波峰减弱或消失，第7－9天生长曲线才呈现上升趋势。在中浓度的ACP作用下，加入PDGF－BB不能促进VSMC的增殖。ACP干预前后，VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化，以G0＋G1期细胞增多，S＋G2＋M期细胞减少为特征。与对照组相比，各组的G0＋G1期细胞均有显著升高（P＜0．05）。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G0＋G1期细胞有显著性差异（P＜0．05）。结论：ACP作为细胞增殖抑制剂，能在中、大剂量下明显抑制VSMC的增殖，可使G0／G1期细胞数明显增多，且与ACP有剂量依赖关系。     

盐酸小檗碱对血管平滑肌细胞增殖的干预研究

目的：探讨盐酸小檗碱对抑制血管平滑肌细胞增殖的干预机制。方法：分离培养大鼠血管平滑肌细胞（vascularsmoothmllsclecells,VSMC）,并分为实验组,对照组及空白组;MTT法选择盐酸小檗碱干预浓度;MTT法和[3H]-胸腺嘧啶核苷渗入法检测VSMC增殖率;Westernblotting方法检测ERKl／2、Akt的磷酸化蛋白的变化。结果：VSMC实验组细胞增殖率与对照组相比明显下调,P〈0．05;小檗碱干预后,VSMC细胞ERKl／2、Akt的磷酸化蛋白的表达明显下调,与对照组相比,P〈0．05。结论：盐酸小檗碱对血管平滑肌细胞的增殖有一定的抑制作用,可能与其抑制ERKl／2、Akt等的表达有关。     

罗格列酮对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究罗格列酮对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）生长的影响，从而探讨其对糖尿病血管并发症的作用及机制。方法利用组织贴块法体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞并分组给药，采用MTT比色法检测细胞生长活性；用Western blotting检测细胞增殖核抗原的表达；以流式细胞仪检测细胞周期的进程；RT—PCR检测MMP-2mRNA的水平。结果罗格列酮呈浓度依赖性抑制高糖诱导的大鼠VSMC的增殖；降低PCNA的表达（P〈0．05），明显降低细胞的S期数目百分比（P〈0．01），增加G0／G1期数目百分比（P〈0．01）；明显降低MMP-2mRNA（P〈0．01）的表达。结论从细胞分子水平说明罗格列酮可能通过降低PCNA的表达，阻止细胞进入S期，减少有丝分裂来发挥对高糖诱导的VSMC增殖的抑制作用，MMP-2在罗格列酮改善血管重构的过程中可能发挥了重要的作用。     

健骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖及PCNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察健骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖及PCNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响。方法:制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的成骨样细胞ROS17/2.8,MTT法检测细胞增殖,流氏细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测PCNA、Cyclin D1 mRNA表达。结果:与同浓度生理盐水血清组相比,中药血清组10%-30%浓度促细胞增殖均有显著性差异(P<0.05),其中浓度为20%时,两组间有非常显著性差异(P<0.01);中药血清组G0/G1期细胞比例明显低于同期生理盐水血清组,有非常显著性差异(P<0.01)。G2/M期、S期细胞比例及PI在干预48h时均高于同期生理盐水血清组,具非常显著性差异(P<0.01)。中药血清组较理盐水血清组PCNA、Cyclin D1 mRNA表达升高,组间有显著性差异(P<0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能促进成骨样细胞的增殖、提高PCNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

EGCG对血小板源性生长因子-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

 目的  研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对血小板源性生长因子-BB (platelet-derived growth factor BB, PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能的机制。方法  组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉VSMC, 用RTCA (real time cellular analysis)仪器检测EGCG (10、50、100 μmol/L)和Jak2特异性抑制剂AG490 (50 μmol/L)对PDGF-BB (10 ng/mL)诱导的VSMC增殖和迁移的影响; 运用 Western blot检测Jak2、Stat3、Cyclin D1蛋白质水平及Stat3磷酸化水平。结果  RTCA检测结果显示, 10~100 μmol/L的 EGCG及50 μmol/L的AG490均能抑制PDGF-BB诱导的VSMC的增殖和迁移(P＜0.001)。Western blot检测结果显示, 50 μmol/L的EGCG能明显下调PDGF-BB刺激上调的VSMC的Jak2、Stat3、Cyclin D1蛋白质水平及Stat3磷酸化(p-Stat3)水平(P＜0.001), 且与其他两个浓度组相比较下调更为明显(P＜0.001); 50 μmol/L的AG490也能明显下调上述蛋白质水平(P＜0.001), 且50 μmol/L 的EGCG下调Jak2、Stat3、p-Stat3 蛋白质水平与AG490组比较无明显差异。结论  EGCG抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和迁移可能通过抑制Jak2/ Stat3信号转导通路而实现。