造血干细胞诱导门脉耐受的研究

目的建立造血干细胞诱导门脉耐受模型，并探讨其机制．方法门静脉或尾静脉注射ＰＫＨ一２６标记或未标记的全异基因造血细胞，利用流式细胞技术等观察免疫耐受的建立与否、供体细胞表型、宿主肝胜十造血灶的形成及其来源等指标．结果当同基因或异基因全骨髓细胞（ＢＭＣ）或造血干细胞（ＨＳＣ）富含部分经尾静脉或门静脉注射后，均首先在肝脏聚集，且聚集在肝脏的细胞为ＷＧＡ＋的ＨＳＣ．在异基因ＢＭＣ门脉注射后ｄ１０，可在宿主肝脏中发现供体ＨＳＣ来源的造血灶形成，而尾静脉注射异基因ＢＭＣ组则几乎见不到造血灶的形成．进一步研究表明，以未标记Ｂ６ＢＭＣ通过足静脉免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，则随后移植的Ｂ６脾细胞被迅速排斥，而通过门静脉免疫，则可使随后移植的Ｂ６脾细胞长期存活．结论门脉注射异基因ＢＭＣ可诱导供体特异性耐受；在耐受诱导和维持中起关键作用的细胞为聚集在肝脏中的ＨＳＣ。     

胸腺内抗原注射抑制小鼠神经移植排斥反应

目的 探讨胸腺内注射异基因抗原在同种异基因神经移植免疫耐受中的作用。方法 自供体鼠C57BL/6(H—2b)的脾细胞中提取MIC(H—2^b)抗原，注入受体鼠Balb/c(H—2^b)胸腺内，两周后移植供体坐骨神经。共设4组：胸腺内注射组(Ⅰ组)、自体移植组(Ⅱ组)、异体移植组(Ⅲ组)和异体移植加用免疫抑制剂组(Ⅳ组)。移植后3周做单向混合淋巴细胞培养(MLC)，诱导迟发型超敏反应(DTH)。结果 I组小鼠淋巴细胞对供体淋巴细胞刺激的反应性减弱，DTH反应性降低。结论 胸腺内注射异基因H—2抗原可以诱导特异性神经移植耐受。     

供者特异性抗原经外周输注诱导免疫耐爱的研究

为探索诱恨免疫耐受的途径和方法,作者受用大鼠异位心脏（颈部）移植模型,经外周途径输注不同品系供者的不同生抗原,包括供体特异性输血（ＤＳＴ）、供体特异脾细胞９ＤＳＳＬ）、供体特异性骨髓细胞（ＤＳＢＭ）。结果显示：ＤＳＴ、ＤＳＳＬ和ＤＳＢＭ均能诱导受者对移植物产生特生免疫耐受,其中以脾细胞和骨髓细胞效果最好,平均移植物存活时间分别达到４２．９±６．６７和４０．３±１１．６天,混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）     

胸腺内注射异基因脾细胞对移植心存活的影响

将SD大鼠胸腺内预注射脾细胞抗原以诱导移植耐受，4～7d后行异位同种心脏移植，术后1周每天注射环抱素A10mg／kg。胸腺内牌细胞注射联合短期使用CsA组的移植心平均存活期较对照组显著延长，且抗原县为25X10’腺细胞来诱导耐受的效果较好。受体对供体靶细胞不表现出细胞介导的细胞毒作用。结果声明，经胸腺内注射异基因脾细胞，联合短期应用CSA能诱导免疫耐受，诱导耐受的抗原县以2.5X10’为好，且这种移植耐受是抗原特异性的，使移植物存活期明显延长。     

供者特异性抗原经外周输注诱导免疫耐受的研究

为探索诱导免疫耐受的途径和方法，作者采用大鼠异位心脏（颈部）移植模型，经外周途径输注不同品系供者的不同特异性抗原，包括供体特异性输血（ Ｄ Ｓ Ｔ）、供体特异性脾细胞（ Ｄ Ｓ Ｓ Ｌ）、供体特异性骨髓细胞（ Ｄ Ｓ Ｂ Ｍ）。结果显示： Ｄ Ｓ Ｔ、 Ｄ Ｓ Ｓ Ｌ和 Ｄ Ｓ Ｂ Ｍ 均能诱导受者对移植物产生特异性免疫耐受，其中以脾细胞和骨髓细胞效果最好，平均移植物存活时间分别达到 ４２９±６６７ 和 ４０３±１１６ 天。混合淋巴细胞反应（ Ｍ Ｌ Ｒ）和 Ｔ 亚群（ Ｃ Ｄ８＋ ）检测在一定程度上反映了机体 Ｔ 细胞免疫状态，有助于对耐受的评价。成分输注供者特异性抗原作为刺激抗原，可望成为较理想的临床耐受诱导途径。     

胸腺内供体脾细胞注射诱导大鼠皮肤移植免疫耐受

目的：观察非紫外线处理供体脾细胞经胸腺途径透导免疫耐受对同种异体移植皮瓣存活的影响。方法：将大鼠随机分成两组，每组１４只，对照组单纯作皮肤移植，实验组在移植前８ｄ作胸腺内脾细胞悬液注射。结果：实验组皮肤移植存活时间明显延长，红细胞免疫反应及迟发性超敏反应未见明显增强，与对照比较差异显著。结论：非紫外线处理供体脾细胞经胸腺途径也能诱导出较高程度的移植免疫耐受，ＭＨＣ－Ⅱ抗原并不影响耐受诱导。     

胸腺内注射异基因骨髓细胞诱导特异性免疫耐受的实验研究

目的:探索通过胸腺内注射异基因骨髓细胞加腹腔注射环磷酰胺,以小鼠皮肤移植为模型,诱导移植免疫耐受,为免疫耐受提供理论和实验依据.方法:提取供体B6小鼠(H-2b)骨髓细胞,注入受体BALB/C(H-2d)小鼠胸腺内,48 h后腹腔注射200 mg/kg的环磷酰胺,2周后移植供体小鼠(H-2b)和无关供体C3H(H-2k)小鼠皮肤.共设空白对照组、CP对照组、BM对照组、实验组、第三方供体组5个组.观察皮肤存活时间;皮肤移植2周后对受体小鼠作单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、脾细胞增值反应及迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)耐受状态的检测.结果:受体小鼠获得了对供体小鼠的特异性皮肤移植耐受,实验组移植皮肤平均存活时间(MST)为(22.00±2.51)d,对照组MST为(8.75±1.04)d,耐受的受体小鼠对第三供体C3H小鼠的移植皮肤仍正常排斥,MST为(10.25±1.91)d.单向混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应证明耐受的BALB/C小鼠对B6小鼠的脾细胞的反应性特异性降低,而仍保持对第三方供体C3H小鼠的免疫反应.耐受的受体小鼠脾细胞对丝裂原(ConA)的增殖反应在正常范围.结论:使用胸腺内注射供体异基因骨髓细胞,结合腹腔应用环磷酰胺的方法,可在成年动物诱导出对供体移植物的特异性免疫耐受,无非特异性免疫抑制.小鼠皮肤移植模型是观察免疫耐受状态的可靠动物模型.     

小鼠胸腺内注射异基因抗原诱导移植免疫耐受临床意义

目的:探讨小鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体异基因坐骨神经移植免疫耐受中的作用。方法:自供体小鼠C57BL/6的脾细胞中提取MHC抗原注入受体鼠Balb/c小鼠胸腺内,于2后周移植供体鼠坐骨神经。48只Balb/c小鼠随机分为4组,A组(胸腺内注射组)、B组(自体神经移植组)、C组(冷冻异体神经移植组)、D组(异体神经移植加用免疫抑制剂组)。于3周后进行电生理学、组织学、免疫学检测。结果:运动神经传导速度,A组(38.23m/s)与D组(36.39I彬S)相比无显著性差异(p>0.05),组织学、电镜、免疫学(混合淋巴细胞培养及迟发性超敏反应)检测结果均证实B组分别优于A组、D组、C组。结论:胸腺内注射异基因MHC抗原可诱导对异体坐骨神经移植的特异性免疫耐受。     

胸腺内注射异基因脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究

目的通过大鼠同种异体心脏异位移植,探讨胸腺内注射异基因脾细胞对移植心的影响.方法用供体脾细胞(SC)在心脏移植前21d预处理受体鼠,术后1周每日腹腔注射环孢素A(CsA)10mg/kg.检测移植心存活时间、混合淋巴细胞反应(MLR)及细胞介导的细胞毒试验(CML).结果胸腺注射脾细胞抗原联合短期应用CsA组的移植心平均存活时间较其他组显著延长(P＜0.05),移植心耐受的受体鼠中MLR增殖活跃,产生免疫耐受的受体鼠的T细胞对供体鼠的靶细胞无明显的细胞毒作用.结论胸腺内注射供体脾细胞抗原预处理受体同时联合短期应用CsA,可诱导产生移植心脏的免疫耐受,且诱导移植耐受的抗原量以2.5×107脾细胞为好.     

胸腺注射供体脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究

本实验采用大鼠腹部心脏移植模型，在移植前21天将供体脾细胞分别注射到受体的胸腺、脾脏、静脉、皮下，然后行异位心脏移植，术后1周每日腹腔注射环孢素A（CsA）10mg／kg。胸腺注射供体脾细胞联合应用CsA组移植心平均存活时间较其它组显著延长，受体对供体靶细胞没有出现细胞介导的细胞毒作用．结果表明：胸腺注射洪体脾细胞联合应用CsA能成功诱导免疫耐受，胸腺内特异性T细胞克隆消除可能与免疫耐受的形式有关．     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ     

成年小鼠中自反应T细胞的清除机制

目的研究成年小鼠自反应Ｔ细胞的清除机制,阐明成年小鼠自身耐受的发生方法胸腺摘除成年小鼠静脉注射ＭＬｓ＋的活化Ｂ细胞．在注射后不同时间点,利用流式细胞技术观察淋巴结中ＣＤＶβ６＋ＣＤＶβ８＋、ＣＤＶβ６＋、和ＣＤＶβ８＋细胞百分比的变化,局部ＧＶＨＲ和抗活化Ｂ细胞混合淋巴细胞反应．结果在胸腺摘除的成年小鼠中静脉注射ＭＬｓ＋的活化Ｂ细胞可诱导ＭＬｓ特异性免疫耐受．来源于ＣＤＦ１小鼠的脾脏Ｂ淋巴细胞经抗ＩｇＭ抗体加ＩＬ—４刺激,静脉注射给摘除胸腺的成年ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠（ＭＬ－Ｉｂ）后第７、１１、１５天,淋巴结中ＣＤＶβ６＋细胞显著减少,而ＣＤＶβ８＋细胞数无明显改变;在注射后第３无ＣＤＶβ６＋细胞增加,但对ＭＬＳ抗原的反应性明显低于对照组．结论自反应Ｔ细胞不但在胸腺被排除或功能性“排除”,而且在外周通过同样的机制维持自身耐受．     

照射与非照射方法诱导小鼠皮肤移植耐受

目的：比较不同方法诱导移植耐受的效果,探讨有临床应用前景的非照射耐受诱导方法。方法：分别以主要组织相容性抗原（ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘ,ＭＨＣ）完全不同的雄性ＢＡＬＢ／ｃ和雌性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠作为皮肤移植的供体和受体,移植前对受体小鼠单独或联合应用５Ｇｙ全身照射、０．１ｍｌ抗淋巴细胞血清注射、３×１０７供体骨髓细胞静脉输注、每千克体重１５０ｍｇ环磷酰胺腹腔注射。结果：各实验组的皮肤移植物存活时间均较对照组明显延长,混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应也表现为供体特异性降低。移植前应用抗淋巴细胞血清、骨髓输注和皮肤移植后注射环磷酰胺可以延长移植物存活时间,平均存活２３．６ｄ,取得与全身照射后输入供体骨髓相似的耐受诱导效果（平均２０．４ｄ）。结论：采用比较温和的非照射的预处理方法,在不应用免疫抑制剂的情况下,也可获得一定程度的免疫耐受,达到延长移植物存活的目的。     

血清IL-2水平在大鼠心脏移植术后早期急性排斥反应诊断中的意义

大鼠同种异体心脏异位移植模型实验动物分为：对照组、 Ａ Ｌ Ｓ 组、 Ｃｓ Ａ 组及不用药组,分别于术后２ 、４ 、６ 天应用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测定受体大鼠血清 Ｉ Ｌ－ ２ 水平,并于处死后行病理组织学检查。其中 Ａ Ｌ Ｓ 组为受体胸腺内注射供体脾细胞及腹腔注射 Ａ Ｌ Ｓ（ 抗淋巴细胞血清） 移植组。实验结果：不用药组的 Ｉ Ｌ－ ２ 水平较对照组、 Ａ Ｌ Ｓ 组、 Ｃｓ Ａ 组明显增高。病理组织学检查不用药组的排斥反应明显高于其它３ 组。结论：受体胸腺内注射供体脾细胞同时腹腔内注射 Ａ Ｌ Ｓ可诱导产生同种异体心脏移植免疫耐受。在心脏同种异体移植排斥反应中,受体血清 Ｉ Ｌ－ ２ 水平的增高可作为诊断心脏同种异体移植术后早期急性排斥反应的一个有效指标。     

诱导免疫耐受抑制小鼠异体坐骨神经移植排斥反应的实验研究

目的 探讨胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的作用。方法 自供体C57BL／6小鼠脾细胞中提取MHC抗原，注入受体Balb/c小鼠胸腺内，2周后移植供体C57BL／6小鼠坐骨神经。同时另设4组对照组，即自体神经移植组，异体神经移植组，冷冻后异体神经移植组，应用免疫抑制剂异体神经移植组；3周后进行神经电生理检查、组织学的检测。结果 实验组优于异体神经移植组及冷冻后异体神经移植组；接近于自体神经移植组及应用免疫抑制剂异体神经移植组。结论 胸腺内注射供体MHC抗原可诱导特异性坐骨神经移植耐受。     

混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受的实验研究

目的通过建立混合胸腺移植模型,对混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受及其机制进行初步研究.方法混合胎胸腺移植3个月后,进行异基因皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4 CD25 T细胞的百分率,利用免疫组化观察宿主骨髓源细胞在胸腺移植物内的分布情况.利用脾细胞过继转移,观察对异种供体抗原已产生耐受的受者脾细胞,能否将耐受状态过继转移至正常BALB/c小鼠.结果混合胸腺移植3个月后,受体外周血白细胞中CD4 CD25 T细胞的百分率为(2.83±0.20)% ,与正常BALB/c小鼠相比,相差不显著.免疫组化染色显示,在移植胸腺内宿主源MHC-Ⅱ分子阳性细胞主要位于髓质,并具有典型树突样外观.将对F344大鼠皮肤已产生耐受的脾细胞,过继转移至免疫健全的BALB/c小鼠,可特异延长胸腺供体来源的F344大鼠皮肤移植物的平均存活时间.结论通过胸腺移植诱导的免疫耐受,主要是以胸腺内的中枢排除机制以及调节性T细胞的免疫抑制作用为主,而且此种耐受具有一定的"可转传性".     

胸腺内注射异基因抗原延长移植皮片存活期

目的　探讨胸腺内注射异基因抗原在延长移植皮片存活期中的作用。方法　经破碎、超速离心、透析等步骤自C5 7BL/ 6小鼠脾细胞提取MHC(H 2 )抗原 ,注射到Balb/c受体小鼠胸腺内 ,1周后移植供体C5 7BL/ 6皮肤。共设实验组、第三供体组、对照组、无处理组 4组。结果　实验组皮肤移植物存活时间大于 70天 ,第三供体组为(13 4± 1 42 )天 ,对照组为 (12 6± 1 6 9)天 ,无处理对照组为 (5 6± 1 2 6 )天。实验组与对照组相比有显著性意义 (P<0 0 1)。结论　经胸腺注射异基因MHC抗原能诱导特异性皮肤移植耐受     

照射与非照射方法诱导小鼠皮肤移植耐受

目的：比较不同方法诱导移植耐受的效果,探讨有临床应用前景的非照射耐受诱导方法。方法：分别以主要组织相容性抗原完全不同的雄性ＢＡＬＢ／ｃ和雌性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠作为皮肤移植的供体和受体,移植前对受体小鼠单独或联合应用５Ｇｙ全身照射,０．１ｍｌ抗淋巴细胞血清注射、３×１０＾７供体骨髓细胞静脉输注,每千克体重１５０ｍｇ环磷酰胺腹腔注射。结果：各实验组的皮肤移植物存活时间均较对照组明显延长,混合淋巴细胞反     

脂质体包裹可溶性蛋白质抗原诱导特异性CTL的研究

目的：搪塞用可溶性蛋白质抗原诱导特异性ＣＴＬ的途径。方法：用冻融－超声法制备包裹可溶性鸡卵蛋白（ＯＶＡ）和ＣＡ－Ｈｂ３蛋白质抗原的阳离子脂质体，并借助脂南体将抗的导入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞胞浆内，以此细胞经尾静脉免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，取体内初致敏脾细胞，在体外以渗透方式导入ＯＶＡ或ＣＡ－Ｈｂ３抗原的脾细胞再刺激，诱导特异性ＣＴＬ，并进行Ｉ类途径阻断实验和ＭＨＣＩ类分子中和实验，结果：脂质体成功     

胸腺内供体脾细胞注射诱导大鼠皮肤移植免疫耐受

观察非紫外线处理供体脾细胞经胸腺途径诱导免疫耐受对同种异体移植皮瓣存活的影响。方法：将大鼠随机分成两组，每组１４只，对照组单纯作皮肤移植，实验组在移植前８ｄ作胸腺内脾细胞悬液注射。结果：实验组皮肤移植存活时间明显延长，红细胞免疫反应及迟发性超敏反应未见明显增强，与对照比较差异显著。