抗人肝细胞肝癌单抗的产生及体内定位研究

本文用临床肝癌手术标本,制备成细胞悬液,三次免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC法筛选单抗(肿瘤组织低温石蜡切片)。获得两株选择性较好的杂交癌-HH10、HD_2。抗体亚类为IgG_1。1.组织化学染色;肝癌阳性例数HH10 37/50;HD_(12)30/50。     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

本文报告应用人体手术切除的肝癌新鲜标本制备细胞悬液免疫近交系BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合。抗体检测采用酒精或中性福尔马林固定,石蜡包埋的肝癌组织和癌周肝组织制作复合抗原片,应用ABC免疫组化技术。 本研究共进行了10次融合,计40×96孔,其中1778孔有杂交瘤生长,检出与肝癌相关性较明显者8孔,其中1孔经重复检测证实与抗原片肝组织无交叉,经连续克隆化达100％阳性,该株抗体定名为Ab20,经琼脂双扩测定为小鼠IgM型。用此抗体在常规福尔马林固定、石蜡切片组织进行了相应抗原的免疫组化定位。结果为:肝癌29/35(阳性/总例数,下同),癌旁肝组织 2/24,肝硬化1/11,正常肝组织0/6,11～20周龄胚胎肝0/5,30～40周龄胎儿     

分泌抗H_(815)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

制备兔抗正常615小鼠肝癌细胞免疫血清,以此处理615小鼠肝癌细胞用处理过的瘤细胞免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0融合,以间接免疫荧光法和细胞ELISA二种方法检测,建立两株分泌抗615小鼠肝癌细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615小鼠的肝、脾、肺、肾、脑、心肌、横纹肌、胸腺组织细胞和多     

抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术     

抗肝癌大鼠单克隆抗体3A5的特性及其平阳霉素偶联物的抗肿瘤活性

以人肝癌BEL－7402细胞免疫LOU／C大鼠，取其脾细胞与大鼠IR983F骨髓瘤细胞融合，获得稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体3A5杂交瘤细胞株。ELISA交叉反应检测3A5对人肝癌BEL－7402、7721和Q3细胞皆呈强阳性，对人胚肺2BS细胞、人口腔鳞癌KB细胞和小鼠正常肝细胞等呈阴性。免疫电镜研究显示，肝癌细胞对单抗3A5胶体金粒的内化为44％，而B细胞为185，平均每个肝癌细胞含有金颗粒族数为0．89，KB细胞为0．22，相差4倍，肝癌细胞对胶体金颗粒的内化能被预先加入的单抗3A5特异性地封闭，将单抗3A5与平阳霉不进行偶联，用克隆生成法观察偶联物和游离平阳霉素对肿瘤细胞的杀伤作用，当药物与细胞接触为1小时，单抗3A5与平阳霉素偶联物对肝癌细胞有选择性杀伤作用，按IC50比较，偶联物对靶细胞肝癌细胞的杀伤作用（IC50＝0．0075μgmol/L)比对非靶细胞KB细胞的作用（IC50＝0．70μmol/L）约强100倍，偶联物对靶细胞的作用比游离平阳霉素（IC50＝0．31μmol/L)约强50倍。     

抗鸡巴氐杆菌荚膜抗原及菌体表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用美国标准菌株×75(5:A)、P1059(8:A)制备荚膜A型抗原及×75和P1059菌体抗原,分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞分别与Sp 2/O、NS-1、NS-0骨髓瘤细胞融合,用ELISA检测建立了抗荚膜A型杂交瘤细胞系2株(1B_1、2B_7),抗×75菌体表面抗原的杂交瘤细胞株13株(1A_7、1A_6、1D_4、1D_(10)、2B_5、2A_3、3C_1、5C_3、2C_2、1B_5、1A_4、3D_6、4A_7),抗P1059菌体表面抗原的杂交瘤细胞株1株(3B_7)。     

抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究

本文用肝癌手术标本,制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC染色法筛选单克隆抗体,获得特异性较好的杂交瘤-HAb_(18),抗体亚类为小鼠IgG1,抗原经亲和层析获得,分子量为60KD,过碘酸-Schiffs染色阴性,脂蛋白电泳阴性,PI:8.2。肝癌免疫组化染色阳性率为75％。     

人生长激素的生物素—新和素放大酶联免疫法的建立

为建立有生物素和亲和素放大系统的人血清生长激素 (hGH)酶联免疫分析法 (BA ELISA) ,以微量的GH抗原免疫BALB/C小鼠 ,利用杂交瘤技术制备出 2 9株分泌抗hGH单克隆抗体 (MCA)的杂交瘤株。选择最佳配对MCA ,利用亲和素与生物素高亲和力的特性 ,建立了血清hGH双位点的BA ELISA法。我们的MCA滴度为 (0 5～ 5 0 0 )× 10 4,亲和常数Ka =(0 13～ 1 40 )× 10 10 L/mol。血清hGH的ELISA的灵敏度为 0 0 4± 0 0 1μg/L ;在血清中分别加入 1,2 5 ,5 μg/L的hGH ,其回收率为 90 7%～ 10 7 6 % (平均为 10 1 2 0 %± 0 0 3 % ) ;hGH含量为 2 8、10 0、2 9 8μg/L的血清批内、批间变异系数分别为 4 9%、3 8%、7 9%和 6 2 %、3 5 %、9 5 % ;用本法测定了正常儿童、生长激素缺乏症 (GHD)患儿和活动性肢端肥大症患者空腹血清hGH水平 ,分别为 1 87± 3 0、0 30± 0 42和 8 71± 6 95 μg/L。上述结果表明 ,本ELISA方法灵敏、特异、稳定、准确 ,能确切反映hGH分泌功能 ,在诸多方面均优于RIA。     

抗口腔鳞癌单克隆抗体ASC_5的制备与特异性分析

用舌鳞癌Tca8113细胞免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞P_3U_1进行融合,经筛选和克隆化后,获得分泌抗口腔鳞癌单克隆抗体的杂交瘤ASC_5。经ELISA检测,ASC_8单抗与Tea 8113细胞有反应,与Hela细胞有交叉反应,与肺癌、肝癌、胃癌、K_(562)细     

抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定

目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

胃癌单克隆抗体的研制及其对胃癌活检组织印片细胞的免疫细胞化学反应性

用体外培养的人胃癌细胞脾内免疫BALB/c小鼠,将致敏脾细胞和小鼠SP2/0细胞融合,获得小鼠杂交瘤细胞。用间接免疫荧光法初筛,将初筛克隆扩增后,用正常组织及新鲜肿瘤组织冰冻切片做免疫组化染色,测定其抗体的反应性。然后用有限稀释法克隆3～5     

抗人胃癌单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人胃癌细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用国内胃癌细胞株GGC-81-40免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag融合,经ELISA法和IFS法筛选,获得了5个产生抗人胃癌细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系。这些杂交瘤细胞系具有双亲代生物学性质,现已传代培养一年多,染色体数为103～105条,免疫球蛋白分型:二株分泌的单抗为IgG_1,其它三株为IgM。它们均分泌高效价的抗体,ELISA测定效价为10~(-5) ,IFS效价为1:500;细胞结合试验与GGC-81-40呈现强阳性反应,但不与正常骨髓细胞,扁桃体T、B细胞以及外周血细胞反应。     

抗大肠杆菌_(506)株36kD蛋白单抗的制备及其在人精子上的免疫定位

用纯化的36kD蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以PEG进行细胞融合,融合率为86％。采用ELISA筛选出杂交瘤细胞阳性孔。经过4～7次有限稀释克隆化,共获得7株能稳定分泌36kD相应MCAb的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔,测定腹水McAb的效价为1:5×10~3～1:1×10~5,抗体亚型均为IgG1。用荧光显微镜观察,结果发现EC2作用的人精子头颈部出现明显荧光反应,提示共同抗原存在于人精子头颈部。这些结果有助于进一步探讨细菌感染引起男性不育的机制以及研制细菌避孕疫苗等工作。     

抗恶性疟单抗独特型决定簇的第二单克隆抗体的制备和鉴定

本文以分泌抗恶性疟疾红内期抗体的小鼠杂交瘤细胞系94D1诱生的腹水,通过Protein A-Sepharose cL-4B亲和层析法,纯化IgG,并以此作为免疫原皮下多点免疫Wistar大鼠。加强免疫后3天取脾与小鼠Sp2/0瘤细胞进行异种间的细胞融合,经间接ELISA法检测筛选和5次克隆化,最终得到一株生长稳定,连续分泌特异抗体的异种杂交瘤细胞系41RF5。经过多次冷冻和复苏以及体外连续传代培养6个月,其稳定性与小鼠×小鼠杂交瘤细胞相近。选择8株单抗和Sp2/0 IgG作为包被抗原,即6株抗恶性疟单抗:21E3、92D4(IgG2b)、93A3(IgG_1)、94B5(IgG_1)、94C_3(IgG_1)和94D1(IgG2b),1株抗猪尾猴疟原虫(Plas mc-dium inui)红内期单抗32A12(IgG_1)和1株抗登革热Ⅲ型病毒单抗215D3(Ig-G2b),用间接ELISA法对41RF5特异性进行鉴定,结果显示,41RF5单抗只与94D1呈阳性反应,与其余各种包被抗原均呈阴性反应,表明41RF5具有良好的抗94D1单抗独特型决定簇的特异性,41RF5培养上清中特异的抗体效价为1:1,28O。     

分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文用斯氏肺吸虫代谢抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,首次成功地获得了2株分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞D_1—3B_4和G_2—3C_4。 在培养皿中收集斯氏肺吸虫代谢产物,经透析、浓缩,测蛋白含量为2.4mg/ml。用此抗原(0.1ml)与等量福氏完全佐剂经腹腔及皮下免疫BALB/c小鼠,每隔3周一次,共三次。末次免疫后10天用单纯代谢抗原0.1ml注入尾静脉一次,融合前3天再从尾静脉加强免疫一次。取对数生长期的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞以1:5比例混合,用     

抗人胃癌单克隆抗体的制备及反应性研究

用国内胃癌细胞系GGC-81-40免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag~(14)融合,经ELISA和IF法筛选,获得了5株产生抗人胃癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系,称GMG_1系列(GMG_1:1D_(1-1);1D_(1-2);1A_2;4D_6;5B_(10))。现已传代培养     

抗血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇的单克隆抗体

<正> 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫BALB/c 小鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞按 Kennett 方法作细胞融合,用有限稀释法克隆化2～3次后,建立一株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(A6-B6),其培养上清经浓缩后作免疫球蛋白亚类签定为 IgM,杂交瘤诱生的小鼠腹水经 SEA 免疫     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

椒蒿提取物对病毒性心肌炎心肌保护作用的研究

椒蒿为菊科植物 ,民间常作为野菜采食 ,中药认为有抗风寒作用。本文所用的椒蒿提取物含茴香脑 5 6 %。用提取物对病毒性心肌炎的动物模型进行了研究 ,旨在探讨其心肌保护作用。柯萨奇B3 病毒 (CVB3 )Nancy株 ,在Vero细胞上增殖后 ,TCID50 为 10 9;BALB/c雄性小鼠 4～ 6周龄 ,体重 12± 2g,16 0只。分为 6组 ,A组 :为正常对照组 ,取10只小鼠 ,腹腔注射 0 1ml不含病毒的Eagle′sMEM液。其余 15 0只小鼠随机等分为 5组 ,每组 30只 ,分别腹腔接种0 .1ml病毒液 ,建立病毒性心肌炎 (VMC)模型。B组 :病毒模型对照组 ;C组 :黄芪治疗组 ;…