提高腹水瘤单克隆抗体产率的方法

以小鼠致敏的脾细胞与骨髓瘤细胞融合而获得的杂交瘤细胞株,在组织相容的小鼠体内可迅速生长而形成腹水瘤,并可分泌特异性单克隆抗体(McAb)。一只荷瘤小鼠可产生10～20mgMcAb,其代价仅相当于从培养上清液中分离等量单克隆抗体的一小部份。这类杂交瘤大多数来源于BALB/c系小鼠的骨髓瘤细胞及脾细胞。作者报道用BALB/c系小鼠与一种远交系小鼠杂交,繁育出体形大而价格便宜的杂交一代(F_1),用以产生腹水瘤,并制备特异性单克隆抗体。用60日龄雄性BALB/c系小鼠与同龄的封闭群SW/HPB系雌性鼠同居10天。该BALB/c系雄鼠可再与另外的SW/HPB系雄鼠交配。幼鼠21日龄断奶。定期测定BALB/c系和(BALB/c×SW/HPB)F_1小鼠的体重增长。对两种性别的F_1小鼠所产生的腹     

Friend鼠白血病病毒对BALB/c小鼠和KM小鼠的影响

目的：探讨Friend鼠白血病病毒（FLV）对BALB/c和KM小鼠体质量、胸腺和脾脏的影响。方法：以齐多夫定片（AZT）作为阳性药物,用FLV攻击BALB/c和KM小鼠,观察各鼠系的体质量、胸腺和脾脏变化情况。结果：FLV能引起BALB/c和KM小鼠脾肿大,各鼠系脾指数与正常鼠脾指数差异有统计学意义（P〈0.01）。AZT对BALB/c和KM小鼠具有明显的抑制脾肿大作用（P〈0.05）。各鼠系小鼠的体质量和胸腺变化差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：FLV对KM小鼠体质量、胸腺和脾脏的影响程度相当于BALB/c小鼠。     

BALB/c小鼠胚胎皮肤无瘢痕愈合相关基因的筛选与克隆

目的在已构建成年小鼠和小鼠胚胎皮肤差异表达的c DNA文库基础上,通过双向抑制性消减杂交筛选BALB/c小鼠胚胎皮肤无瘢痕愈合相关基因。方法应用双向抑制性消减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)技术,筛选BALB/c小鼠胚胎皮肤与BALB/c成年小鼠皮肤c DNA片段。结果获得16个在鼠胚皮肤中特异表达的无瘢痕愈合相关基因的c DNA片段,7个在成鼠皮肤中特异表达的无瘢痕愈合相关基因的c DNA片段。其中有2个新发现与无瘢痕愈合相关基因未见文献报道。结论研究证实确有部分基因在鼠胚皮肤和成鼠皮肤中分别特异表达,这种差异表达极有可能是哺乳动物胚胎皮肤无瘢痕愈合的分子生物学基础。     

清洁级BALB/cA系小鼠的生长与繁育

BALB/c系小鼠是近交系小鼠,1913年Bagg获得白化株,MacDowell于1923年开始作近交培育,至26代后(1932年),Snall将其正式命名为BALB/c。BALB/c系小鼠,其乳腺肿瘤发生率低,但对乳腺肿瘤病毒敏感,并有自发性高血压症,动脉硬化症和对放射线极度敏感等特性,己被广泛用于生物学和医学研究。对BALB/c系小鼠的生长和繁育的研究,国外己有不少资料。但国内报道的资料,尤其是清洁级以上BALB/c系小鼠的生长和繁育资料还不多见。作者于1989年12月从日本实验动物中央研究所引进BALB/cA系小鼠3(?)3(?),从1990年8月～1991年7月对该品系进行规模性饲养观察,现将其生     

遗传背景在创伤反应异状性中的作用

目的观察BALB/c和C57BL/6小鼠间的创伤反应差异现象.方法以BALB/c和C57BL/6两近交系小鼠为研究对象,采用冲击波所致全身冲击伤模型,观察伤后即刻、1、6、24、72 h的动物死亡率和肺损伤严重度的病理形态学.结果在相同的冲击伤条件下,BALB/c和C57BL/6小鼠伤后72 h内的死亡率和肺损伤严重度的病理形态学有明显差异,BALB/c和C57BL/6小鼠的死亡率主要发生在伤后1 h内,但在同系动物内雌雄之间的死亡率和肺损伤程度并无明显差异.结论 BALB/c和C57BL/6两系小鼠间存在对冲击伤的创伤反应差异现象,这当中异质性可能与两系小鼠在遗传背景上的差异有关.     

微卫星DNA标记对BABL/c突变卷毛小鼠遗传特性的分析

目的利用微卫星DNA标记技术对BALB/c突变卷毛小鼠与正常BALB/c小鼠进行遗传检测,旨在分析BALB/c突变卷毛小鼠与正常小鼠之间存在的遗传差异。方法选取38个微卫星DNA位点结合荧光PCR技术和STR扫描基因型来检测BALB/c突变卷毛小鼠、无毛小鼠与正常小鼠三个群体的遗传变异情况。结果 38个微卫星位点在BALB/c突变卷毛小鼠与正常小鼠之间有27个微卫星位点相同,有11个位点存在差异,其突变率为28.9%(11/38);BABL/c突变无毛小鼠与正常小鼠之间有30个位点完全相同,8个位点存在差异,其突变率为21.1%(8/38);而BABL/c突变卷毛小鼠与无毛小鼠间也有12个位点存在差异。结论 BALB/c突变卷毛小鼠的突变率较高,且明显高于无毛小鼠,证明了卷毛小鼠突变与无毛小鼠突变是两个完全不同的突变系,为今后研究和开发应用BALB/c突变卷毛小鼠提供可靠的理论数据。     

自制扩散匣的免疫隔离作用及匣内异基因瘤细胞的在体生长观察

目的 观察自制细胞扩散匣的免疫隔离作用及匣内异基因瘤细胞的在体生长情况。方法 通过PEG介导制备SP2/0-BALB／c小鼠脾细胞杂交细胞。注入BALB／c小鼠和C57BL／6(B6)小鼠腹腔，观察腹水产生和瘤体形成，了解杂交细胞MHC抗原携带情况。再将含杂交细胞的微孔膜扩散匣分别植入BALB／c和B6小鼠腹腔，观察匣内细胞生存情况。结果 腹腔注射杂交细胞后2个月内，BALB／c小鼠产生血性腹水，或形成瘤体，B6小鼠未见腹水产生和瘤体形成。腹腔植入杂交瘤细胞扩散匣后30d和101d，两组动物体内扩散匣均被大网膜或肠系膜包裹，外壁可见新生血管，匣内形成瘤体，但不能充满整个匣腔。结论 SP2／0细胞与BALB／c小鼠脾细胞融合后可转变为携带BALB／c品系MHC抗原的永生细胞，在异基因宿主(B6小鼠)体内不能存活。自制微孔膜扩散匣能有效起到免疫隔离作用。微孔膜外表面能够形成新的营养血管，支持匣内细胞长期生存与增殖。     

HCG单克隆抗体的一种简便、快速纯化方法

本文介绍的是采用羟磷灰石柱层析从BALB/c小鼠腹水中纯化HCG单克隆抗体的方法。由于该方法直接从腹水中纯化相应的单克隆抗体,与目前应用的其它纯化单克隆抗体的方法比较有简便易行,快速的特点,且纯化的抗体生物活性可靠,纯度较高,同时抗体损失小。该方法同样适用于从BALB/c小鼠腹水中及杂交瘤细胞培养上清液中纯化其它的单克隆抗体。     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

近年来有关肝癌单克隆抗体(McAb)的研究国内外均有报告,其免疫原皆为体外建立的人肝癌细胞株,作者应用手术切除的新鲜肝癌标本制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓     

应用α-珠蛋白3′-HVR探针进行小鼠的DNA指纹分析

目的:探讨3′-HVR探针及Southern杂交技术应用于实验小鼠遗传质量监测的可行性.方法:采用人源α-珠蛋白3′-HVR探针,应用ECL试剂盒,以HRP标记进行Southern杂交,以化学发光法进行检测,对5种近交系小鼠(BALB/c、DBA/2、T739、TA1、615)、1种封闭群小鼠(KM)及2种免疫缺陷小鼠(BALB/c-nu/nu及C.B-17SCID)进行DNA指纹分析.结果:其不同近交小鼠的DNA指纹图各异,而同种近交系的不同个体的DNA指纹图相同,封闭群KM小鼠不同个体之间的DNA指纹图存在一定差异.BALB/c-nu/nu小鼠、CB-17SCID小鼠不同个体之间的DNA指纹图相同,并且与BALB/c小鼠的一致.结论:该探针及其Southern杂交技术可用于实验小鼠的遗传质量监测.     

C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠对脓毒症反应的差异

目的 探讨C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力.方法 C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立小鼠脓毒症模型.术后6h,每组随机选出5只,Bio-plex悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4,IL-5、IL-10、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的浓度.剩余小鼠用于1周存活率分析.结果 两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%.C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c小鼠脓毒症组存活率为50%.C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c小鼠脓毒症组(P＜0.05).与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高.而BALB/c小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加.结论 C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感.     

在使用杂交瘤技术制备纯化单克隆抗体中应用BALB/c小鼠的几点体会

自 1975年英国剑桥大学分子生物学研究室的Kohler和Milstein创立杂交瘤单克隆抗体技术以来 ,该技术的应用和推广为所有制备和使用特异性抗体的研究提供了全新的手段和制剂[1] 。采用何品系的动物进行免疫 ,是获得高质量单克隆抗体的一个关键。我们在使用杂交瘤技术制备纯化的单克隆抗体过程中 ,多次应用了BALB c品系的小鼠 ,并对不同周龄和性别的小鼠产生单克隆抗体的能力进行了对比观察 ,现将体会介绍如下。1　材料与方法1.1　实验动物　北京种 7～ 13周龄BALB c小鼠 ,按 7～ 8周龄、9～ 10周龄、11～ 13周龄分组。1.2　试剂　降植烷pr…     

鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗早孕因子（EPF）单克隆抗体,纯化并进行鉴定。方法用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析。结果筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10^-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位。SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性。结论成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础。     

不同剂量GA对 BALB/c和C57BL/6小鼠创伤耐受能力的影响

目的观察BALB/c和C57BL/6两品系小鼠的创伤耐受能力差异与热休克蛋白90(HSP90)的关系。方法观察在正常情况下和给予HSP90特异阻断剂格尔德霉素(geldanam ycin,GA)后,二品系小鼠在全身冲击伤(whole-body blast injury,WBBI)时的整体死亡率和大体变化。结果WBBI后,C57BL/6小鼠的总体死亡率低于BALB/c小鼠(P<0.05),GA处理后C57BL/6小鼠的总体死亡率无明显变化,而BALB/c小鼠总体死亡率随GA剂量增加而增大(P<0.05)。结论两品系小鼠的HSP90对GA敏感性不同提示HSP90的差异可能是C57BL/6小鼠具有较强的创伤耐受能力的重要原因。     

抗人IgA单克隆抗体的定鉴

人 IgA免疫的 BALB/C 鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,以ELISA和PHA方法检测抗体,建立了两株对 IgA 的单克隆杂交细胞林39-1,2-9。本株单克隆抗体不与 IgG、IgM、κ及λ抗原反应,是对α链特异的,两株单克隆抗体分别属鼠 IgG2b和 IgG1亚类。     

BALB/c突变卷毛小鼠皮肤组织结构的分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠的皮肤组织结构与正常BALB/c小鼠之间是否存在突变差异。方法选择10 d、21 d、42 d和63 d四个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠每组各10只,观察两组小鼠被毛外观差异情况,取两小块皮肤组织,直接镜检毛囊结构和皮肤组织病理学检测。结果 BALB/c突变卷毛小鼠生长至10 d时被毛弯曲,能够与同日龄的正常小鼠加以鉴别。镜检观察21 d、42 d和63 d的BALB/c突变卷毛小鼠毛囊中毛发根数明显少于正常小鼠,被毛稀疏且毛发卷曲明显。皮肤组织病理学检测结果显示四个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠的毛囊数均显著少于正常小鼠。63 d的BALB/c突变卷毛小鼠处于生长期的毛囊中可见毛发弯曲的现象。结论 BALB/c突变卷毛小鼠的毛囊和皮肤组织结构与正常小鼠存在明显差异,说明其皮肤组织结构也发生了改变,这为今后研究突变卷毛小鼠的突变基因和模型应用提供了理论参考。     

LAMP2单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗-lamp2单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步鉴定.方法:根据已发表的文献通过人工合成多肽,并将此多肽分别连接KLH和BSA,以peptide-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠,取血清效价大于 1:10000 的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0 进行融合,以peptide-BSA包被,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测杂交瘤细胞的上清进行筛选;得到能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过鼠单克隆抗体亚类分型试剂盒鉴定单克隆抗体的亚类,采用免疫组化方法证明新制备的单克隆抗体能识别目的蛋白.结果:得到一株能稳定分泌抗-LAMP2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,应用免疫组化方法证明新制备的抗-LAMP2单克隆抗体能识别天然的 LAMP2;此单克隆抗体的亚类为.结论:杂交瘤细胞株能稳定分泌目的单克隆抗体;免疫组化方法证明新制备的单克隆抗体能识别自己天然的目的蛋白,为更好地研究LAMP2的生物学功能奠定了基础.     

应用单克隆抗体ELISA法检测人C——反应蛋白

本文应用亲和层析方法从肿瘤病人胸腹水中取高提纯度的CRP,经免疫Balb/c 小鼠获得鼠抗人(?)RP 单克隆抗体,将其与羊抗人CRP 多克隆抗体联合应用,建立了双抗体夹心酶联免疫吸附试验方法。此法检测CRP,可达到特异、敏感、快速、准确和稳定的目的。     

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。方法利用重组Derf1蛋白为免疫原,免疫BALB／c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western—blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Derf1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Derf1检测及纯化方法奠定了基础。     

分泌抗人C_4单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤

1975年Kohler和Milstein报告的淋巴细胞杂交瘤技术,为制备抗各种抗原决定簇的单克隆抗体提供了精确的手段。1983年我们运用杂交瘤技术,用提纯的人补体第4成分(C_4)免疫BALB/c小鼠,取其脾脏淋巴细胞与小鼠SP2/0—Ag14骨髓瘤细胞融合,获得了分泌抗人C_4单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤。