酸性神经磷脂酶及神经酰胺在吉西他滨诱导胰腺癌PANC-1细胞耐药中的作用

目的 建立对吉西他滨耐药的胰腺癌PANC-1/Gem细胞株,检测诱导耐药前后该细胞株生物学特性的变化.探讨吉西他滨诱导胰腺癌耐约的可能机制.方法 通过逐渐增加培养基中吉西他滨的浓度,建屯对吉西他滨耐药的胰腺癌PANC-1/Gem细胞株,TUNEL染色检测细胞株凋亡,MTT方法 检测胰腺癌PANC-1和胰腺癌PANC-1/Gem细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和耐药指数(RI),Western印迹法检测酸性神经磷脂酶表达变化、二酰基甘油激酶(diacylglycerol kinase,DAGK)法检测神经酰胺含量变化.结果 经过24周成功诱导出对吉西他滨耐药的胰腺癌PANC-1/Gem细胞株,吉西他滨对PANC-1和PANC-1/Gem细胞的IC_(50)值分别为:亲本(8.13±0.85)μg/ml,24周(285.40±34.83)μg/ml,与亲本细胞相比耐药倍数为35.10倍,且凋亡率降低.Western印迹检测发现吉西他滨诱导24周的胰腺癌细胞PANC-1/Gem酸性神经磷脂酶的表达低于亲本细胞.两组细胞的神经酰胺含量分别为:亲本(364.95±46.11)pmol/mg protein,24周(120.61±20.07)pmol/mgprotein.结论 酸性神经磷脂酶的表达降低,导致神经酰胺含量减少可能是胰腺癌PANC-1细胞株对吉西他滨产生耐药的机制之一.     

胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药物敏感性的实验研究

目的 探讨胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的敏感性.方法 FACS技术分选人胰腺癌PANC-1细胞;RT-PCR技术检测分选PANC-1细胞中CD133、ABCG2、Notch1的表达情况;MTT法检测分选细胞对抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶和吉西他滨的耐药性.建立分选细胞的移植瘤模型,随机分为吉西他滨治疗组(n=3)和对照组(n=3),观察肿瘤生长情况,作CD133免疫组化染色.结果PANC-1细胞中含有SP亚群.SP细胞CD133、ABCG2、Notch1的mRNA的表达明显上调,non-SP细胞的表达量显著低于前者.在吉西他滨的干预下,SP细胞和non-SP细胞的OD值差异有统计学意义.而5-氟尿嘧啶的干预(10 μg/ml和100 μg/ml)则没有显著差异.移植肿瘤治疗组中CD133阳性细胞明显多于对照组(P=0.001).结论胰腺癌中存在SP亚群细胞.胰腺癌PANC-1的成瘤能力是由其中的SP亚群细胞决定的,而并非所有胰腺癌PANC-1细胞.胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药吉西他滨具有较高耐药性.     

胰腺星状细胞通过白细胞介素-22影响胰腺癌侵袭转移及化疗耐药的研究

目的探讨具有不同白细胞介素-22(IL-22)表达水平的胰腺星状细胞(PSC)对胰腺癌细胞侵袭转移及化疗耐药的影响。方法将人原代胰腺癌间质PSC细胞与胰腺癌PANC-1细胞共培养后检测IL-22的表达及胰腺癌细胞的生长增殖能力、迁移和侵袭能力变化;构建稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行体外共培养, 检测PANC-1细胞的生长增殖、迁移和侵袭能力;利用稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行体外共培养后检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况;将含有不同表达水平的胰腺癌间质PSC细胞与胰腺癌PANC-1细胞体外共培养并加入不同浓度梯度的吉他西滨培养72 h后检测细胞存活率, 计算细胞耐受吉他西滨的半数抑制浓度(IC50);将稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行混合后种植于裸鼠皮下, 40 d后处理裸鼠取出肿瘤并绘制肿瘤生长曲线, 比较两组细胞的成瘤能力。采用t检验分析各组间差异的显著性。结果单纯PANC...     

叉头框蛋白O3在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞的影响

目的分析叉头框蛋白O3(FOXO3)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞运动和增殖的影响。方法检索LinkedOmics数据库胰腺癌患者胰腺癌和癌旁组织FOXO3表达。Western印迹和实时定量聚合酶链反应检测胰腺癌细胞系和人胰腺星状细胞HPSC中FOXO3表达。选择低表达FOXO3的PANC-1、MIAPaCa-2胰腺癌细胞, 分别转染FOXO3过表达质粒和阴性对照质粒。克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和细胞周期检测各组胰腺癌细胞运动和增殖能力。结果 LinkedOmics数据库中, 64例胰腺癌患者癌组织中FOXO3蛋白相对表达水平明显低于癌旁组织(t=8.36, P<0.001)。PANC-1细胞过表达FOXO3后细胞克隆数为(30.0±6.6)个(40倍视野下计数), 低于阴性对照细胞的(92.7±6.7)个, 差异有统计学意义(t=11.54, P<0.001)。PANC-1和MIAPaCa-2在上调FOXO3表达后细胞划痕修复率较对照组显著下降。Transwell实验PANC-1细胞FOXO3过表达后(每个100倍视野下)穿膜数(21.0±6...     

凋亡抑制蛋白2在胰腺癌中的表达及其与化疗耐药的关系

目的 观察细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)在胰腺癌组织中的表达,探讨c-IAP2表达与胰腺癌细胞对化疗药物耐药性的关系.方法 收集胰腺癌标本32例,应用免疫组织化学染色法观察c-IAP2在胰腺癌及癌旁正常胰腺组织中的表达;体外培养胰腺癌细胞PANC-1,间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株PANC-1对吉西他滨(Gem)的耐药,噻唑蓝(MTT)检测处理前后细胞对Gem的药物敏感性,免疫荧光和免疫印迹检测c-IAP2蛋白表达水平.结果 c-IAP2在胰腺癌组织均有表达(32/32,100.0%)、癌旁正常胰腺组织(8/18,44.4%)中有表达,胰腺癌表达水平显著强于癌旁正常胰腺组织.c-IAP2的表达强度在不同分化程度的肿瘤组织中的差异有统计学意义(P<0.05).药物培养3个月后,PANC-1对Gem的半数有效浓度(IC50)由(6.03±0.27)mg/L升高至(41.60±1.14)mg/L(P<0.05),免疫荧光和免疫印迹结果显示耐药亚株c-LAP2蛋白表达水平较亲本株升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 C-IAP2在胰腺癌分化程度和对吉西他滨耐药过程中有一定作用.     

胰腺癌细胞株化疗敏感性与胸苷酸合成酶蛋白表达的关系

目的 探讨胸苷酸合成酶(TS)在胰腺癌细胞中的表达及其蛋白表达水平与胰腺癌细胞化疗敏感性的关系.方法 利用CCK-8试剂盒检测7株胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、SU86.86、T3M4、PANC-1与COLO357)对5-氟脲嘧啶(5-Fu)的化疗敏感性,应用Western blot检测其TS蛋白表达.结果 细胞株AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、SU86.86、T3M4中TS蛋白表达水平低(低TS表达组),而PANC-1与COLO357中TS蛋白表达水平较高(高TS表达组),低TS表达组的细胞在低中高3个不同药物浓度下对5-Fu抑制率分别为0.683±0.131、0.769±0.114与0.836±0.094.同浓度下高TS表达组的细胞对5-Fu抑制率分别为0.370±0.157、0.548±0.018与0.638±0.020.TS蛋白表达低的细胞对5-Fu化疗敏感性明显高于TS表达高的细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在胰腺癌细胞株中,TS蛋白表达水平与其对5-Fu的化疗敏感性密切相关.     

黑色素瘤缺乏因子2通过磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、凋亡的作用机制

目的探讨黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)对胰腺癌恶性细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过慢病毒转染技术构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1, 并分别通过定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证AIM2的mRNA及蛋白水平。通过BrdU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、细胞凋亡以及细胞周期实验检测过表达AIM2对胰腺癌细胞株功能的影响。通过转录组测序探究AIM2在胰腺癌中的作用机制并进行验证, 使用基因表达差异分析评估多组样本之间的差异, 组间差异采用t检验分析。结果慢病毒转染可成功构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株。BrdU增殖实验结果表明, BxPC-3和PANC-1细胞LV-AIM2-OE组的增殖能力显著低于LV-NC组(吸光度值:0.502±0.006比0.543±0.005、0.956±0.032比1.235±0.091, t=5.568、2.903, P<0.05);划痕及Transwell实验结果表明, 过表达AIM2后BxPC-3、PANC-1细胞的迁移[(51.960±4...     

IGHG1在胰腺癌中表达及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨IgG1重链(IGHG1)编码基因在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞(PANC-1)增殖、迁移及侵袭的影响。方法选取2018年6月至2020年12月期间在湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院进行手术治疗的65例胰腺癌患者, 手术取癌组织及癌旁正常组织, 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胰腺癌组织及癌旁组织IGHG1 mRNA表达水平, 分析IGHG1表达与胰腺癌临床病理特征的相关性;将PANC-1细胞分为对照组、IGHG1阴性对照组(si-NC)和干扰IGHG1表达组(si-IGHG1), 分别检测PANC-1细胞IGHG1 mRNA表达、增殖、迁移、侵袭与凋亡, 及上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及Bax、Bcl-2、caspase3蛋白表达。结果胰腺癌组织中IGHG1 mRNA表达水平为(2.47±0.23), 显著高于癌旁组织的(1.03±0.12)(P<0.05), IGHG1表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴转移有关(P<0.05);与正常组HPDE细胞mRNA(1.05±0.14)及蛋白(...     

微小RNA-125b靶向调控乳腺癌易感基因相关蛋白1调节胰腺癌细胞增殖及侵袭

目的探究微小RNA(miR)-125b可否通过调节乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)调节胰腺癌细胞的发生与发展进程, 探讨其在胰腺癌中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测2018年1月至2020年12月21例在我科接受手术患者的胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞系中miR-125b和其靶蛋白的表达水平。通过细胞克隆实验、流式细胞凋亡检测技术、划痕实验以及细胞侵袭实验检测转染前后胰腺癌细胞增殖、凋亡、细胞迁移和侵袭能力, 组间比较采用t检验。结果 miR-125b在胰腺癌组织中的表达显著上调(2.48±0.46比0.68±0.15, t=13.991, P<0.01)。过表达miR-125b组的BAP1的表达明显低于对照组(465.57±11.28比933.80±15.46, t=5.894, P<0.01)。过表达miR-125b组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组(214.56±8.45比78.43±5.15, t=3.482, P<0.01)。过表达BAP1组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显...     

胰腺癌细胞Panc-1中AKT2基因表达对吉西他滨敏感性的影响

目的 探讨胰腺癌细胞Panc-1中AKT2基因表达对吉西他滨敏感性的影响.方法 体外将AKT2特异性shRNA表达载体pAKT2-shRNA转染胰癌细胞株Panc-1.应用RT-PCR、Western blot检测转染shRNA后Panc-1细胞AKT2基因和蛋白的表达变化,应用MTT法检测干扰AKT2后Panc-1细胞对吉西他滨敏感性的变化.结果 转染pAKT2-shRNA后Panc-1细胞AKT2基因和蛋白的表达水平明显下降;吉西他滨对Panc-1细胞的半数抑制量从(1.96±0.22) mg/L降到(0.24±0.03)mg/L,Panc-1细胞对吉西他滨的敏感性明显增加.结论 用pAKT2-shRNA抑制AKT2基因表达,能增加人胰癌细胞株Panc-1对吉西他滨的敏感性.     

碳水化合物磺基转移酶11对胰腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制

目的观察碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)在胰腺癌组织中表达, 对胰腺癌细胞的增殖、侵袭等生物学行为的影响, 并探讨其作用机制。方法收集经手术切除的胰腺癌组织标本30例, 免疫组织化学法检测组织中CHST11的表达。采用RNA干扰技术敲低胰腺癌细胞株PANC-1、AsPc-1中CHST11的表达, 通过蛋白质印迹法(Western blot)实验筛选出转染效率最高的一条小干扰RNA(siRNA)进行后续实验。将实验分为CHST11-siRNA组和阴性对照组(NC组), 细胞增殖实验(CCK-8法)、原位缺口末端标记法(TUNEL)方法、Transwell小室法分别检测敲降CHST11对PANC-1、AsPc-1细胞株增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot实验检测敲降CHST11对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)激活水平的影响。定性资料使用χ2检验, 定量资料采取独立样本t检验或单因素方差分析。结果 CHST11在胰腺癌组织中阳性检出率(43%)高于正常组织(16%), 差异有统计学意义(...     

真核翻译起始因子4γ1通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路促进胰腺癌细胞增殖的机制

目的检测真核翻译起始因子4γ1(EIF4G1)在胰腺癌中的表达, 并探究其促进胰腺癌细胞增殖的相关机制。方法利用在线数据库分析EIF4G1在肿瘤中的表达量与预后意义;实时荧光定量聚合酶链式反应检测人胰腺癌细胞系的EIF4G1表达水平。慢病毒转染构建EIF4G1低表达细胞系, 分别为敲减#1, 敲减#2与对照;慢病毒转染构建EIF4G1过表达细胞系, 为过表达与空载;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与克隆形成实验检测胰腺癌的增殖能力;蛋白印迹法检测EIF4G1敲减后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号(mTOR)通路的变化, 组间比较选择t检验。结果多个数据库显示EIF4G1在胰腺癌中表达量升高, 与胰腺癌的不良预后有关;低表达组PANC-1在第5天的吸光度显著低于对照组(0.85±0.03、0.92±0.05比1.35±0.04, t=22.160、14.670, P<0.01);低表达组PA-TU-8988T在第5天的吸光度显著低于对照组(1.00±0.05、0.99±0.04比1.99±0.07, t=26.740、29.390, P<0.01);低表达组PANC-1的克隆形成数...     

靶向Survivin的siRNA联合吉西他滨抑制胰腺癌细胞增殖

目的 构建靶向Survivin基因的siRNA真核表达载体,观察其对吉西他滨化疗抑制胰腺癌Pane-1细胞增殖的影响.方法 构建靶向Survivin基因的siRNA真核表达载体psiRNA-Survivin,行酶切和测序鉴定.用重组质粒转染Pane-1细胞并筛选稳定转染的细胞株,绘制细胞生长曲线.采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Survivin的mRNA和蛋白表达变化.以吉西他滨分别作用于对照组和转染组Panc-1细胞24 h,噻唑蓝(MTY)比色法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 酶切和测序鉴定表明,成功构建了psiRNA-Survivin重组质粒.重组质粒稳定转染胰腺癌细胞株后,Survivin的mRNA和蛋白表达分别下调了79.2%和83.6%(P<0.05),生长曲线明显变平缓,并能显著增强吉西他滨对Panc-1细胞的增殖抑制[(24.6±4.5)%/(38.7±5.2)%]和凋亡诱导作用[(16.7±2.5)%/(26.8±3.4)%,P<0.05).结论 构建Survivin的siRNA表达载体可明显下调Survivin的表达,抑制Panc-1细胞增殖,并能提高细胞对吉西他滨的化疗敏感性.     

Survivin反义寡核苷酸诱导胰腺癌细胞凋亡并增加吉西他滨的化疗敏感性

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸转染对胰腺癌BxPC 3细胞系SurvivinmRNA的表达及细胞增殖、凋亡和对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法用脂质体瞬时转染法介导Survivin反义硫代磷酸寡核苷酸处理胰腺癌BxPC 3细胞后用RT PCR检测SurvivinmRNA的表达 ,四唑氮蓝法检测细胞的相对存活率 ,用流式细胞仪和透射电镜检测其对BxPC 3细胞的凋亡诱导作用。结果Survivin反义寡核苷酸作用于BxPC 3细胞后 ,细胞的存活率呈剂量和时间依赖性 ,其中 2 4h的IC50 值为 4 0 0nmol/L ,在此浓度和时间下 ,Survivin反义寡核苷酸可明显降低SurvivinmR NA的表达 ,细胞凋亡率为 (2 5± 3) %。在透射电镜下BxPC 3细胞可呈凋亡的早期改变。Survivin反义寡核苷酸和吉西他滨的联合实验组与单独应用吉西他滨组相比 ,在 4 8h和 72h可使细胞的存活率分别降低 2 76和 4 5 8倍。结论Survivin反义寡核苷酸可诱导胰腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖并增强吉西他滨的化疗敏感性。     

含三方基序54调控胰腺癌增殖、侵袭和转移的机制

目的探讨含三方基序54(TRIM54)在胰腺癌中的调控机制。方法胰腺癌细胞株(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)和正常胰腺上皮导管细胞(HPDE)株购自美国模式培养物集存库(ATCC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TRIM54在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)和胰腺导管腺癌(PDAC)细胞中的表达。通过转染质粒(shRNA)敲低TRIM54的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力。Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本t检验, 多组样本之间的比较采用方差分析。结果通过RT-PCR检测, HPDE中TRIM54信使RNA(mRNA)表达水平明显低于胰腺癌细胞(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)(1.00±0.02比2.05±0.04比1.37±0.03比1.62±0.02比3.18±0.10比3.59±0.07, F=1 042.04, P<0.05)。Western b...     

肿瘤相关中性粒细胞释放APRIL对胰腺癌细胞增殖活性的影响

目的研究胰腺癌微环境中肿瘤相关中性粒细胞(tumor associated neutrophil,TAN)释放增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)对胰腺癌细胞增殖的影响。方法①采用ELISA法检测HL-60细胞分化产生的类中性粒细胞和TAN的APRIL表达。②采用蛋白印迹法验证胰腺癌PANC-1细胞中APRIL受体B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)和跨膜激活剂及钙调亲环素配基相互作用因子(transmembrane activator and CAML interactor,TACI)的表达。③将胰腺癌PANC-1细胞与TAN进行共培养,并分为PANC-1对照组(简称对照组)、PANC-1+TAN处理组(简称PANC-1+TAN组)、PANC-1+TAN+APRIL抗体处理组(简称PANC-1+TAN+APRIL组)和PANC-1+人工重组APRIL蛋白(rAPRIL)处理组(简称PANC-1+rAPRIL组),采用CCK8法测定TAN释放APRIL对PANC-1细胞增殖活性的影响。结果①TAN细胞组培养基中APRIL含量高于中性粒细胞组[(556.20±84.38) pg/mL比(377.17±57.07)pg/mL,P=0.038]。②PANC-1细胞表达APRIL的受体BCMA和TACI。③PANC-1+TAN组和PANC-1+rAPRIL组的PANC-1细胞活性[(126.80±1.42)%、(168.95±12.54)%]明显高于对照组[(100±0.00)%,P=0.034、P0.001],PANC-1+TAN组的PANC-1细胞活性显著高于PANC-1+TAN+APRIL组[(86.29±12.20)%,P=0.003]而显著低于PANC-1+rAPRIL组(P=0.002),PANC-1+rAPRIL组PANC-1细胞活性显著高于PANC-1+TAN+APRIL抗体组(P0.001)。结论胰腺癌微环境下TAN释放APRIL增加,进而促进胰腺癌PANC-1细胞的增殖活性,为胰腺癌进展的机制研究和治疗方法的探索提供了新的思路。     

大黄素提高胰腺癌细胞化疗敏感性的机制研究

目的 探讨大黄素能否提高胰腺癌细胞化疗敏感性及其作用机制.方法 设立对照组(正常人皮肤成纤维细胞/胰腺癌BXPC-3细胞),顺铂组(5 mg/L),吉西他滨组(0.5 μmol/L),大黄素与顺铂联合组(50 μmol/L、5 mg/L),大黄素与吉西他滨联合组(50 μmol/L、0.5 μmol/L).应用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测不同细胞株中多药耐药相关蛋白1(MRP1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和P-糖蛋白(P-gp)mRNA的表达.采用t检验比较两组差异.结果 顺铂组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为62.44%±3.42%和27.10%±4.24%,大黄素与顺铂联合组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为30.53%±0.05%和66.33%±9.37%,两组比较,差异有统计学意义(t=13.20,5.35,P<0.05).吉西他滨组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为79.82%±2.83%和13.48%±1.65%,大黄素与吉西他滨联合组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为45.65%±2.46%和62.74%±10.18%,两组比较,差异有统计学意义(t=12.89,8.28,P<0.05).顺铂组和大黄素与顺铂联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较,差异无统计学意义(t=2.08,P>0.05).吉西他滨组和大黄素与吉西他滨联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较,差异无统计学意义(t=0.64,P>0.05).在胰腺癌BXPC-3细胞中,只能检测到MRP1 mRNA的表达,未能检测到MRP2、BCRP、P-gp mRNA的表达.顺铂组胰腺癌BXPC-3细胞的MRP1 mRNA表达水平显著降低,而大黄素与顺铂联合组胰腺癌BXPC-3细胞的MRP1 mRNA表达水平则进一步下调.结论 大黄素能够提高胰腺癌细胞对顺铂的敏感性,其机制与下调的MRP1 mRNA表达有关.     

乳香胶联合吉西他滨对人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及机制初探

目的 研究乳香胶联合吉西他滨对体内、外培养的人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及相关机制.方法 四唑氮蓝还原法检测BxPc-3细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡(PI单染色法).Western blot检测不同浓度的乳香胶联合吉西他滨(两药联合组)用药后BxPc-3细胞内测核转录因子-κB(NF-κB) p65亚基以及NF-κB抑制蛋白IkB、凋亡调节蛋白Bcl 2和Bax的表达水平的变化.建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,监测移植瘤体积变化.结果 两药联合组选择乳香胶(40 mg/L)和吉西他滨(10 mg/L)处理72 h后,抑制人胰腺癌细胞株BxPc-3细胞的作用显著优于单独使用(P＜0.01);凋亡比例(45.13±4.01)明显高于乳香胶组或吉西他滨组(P＜0.01)和对照组(5.07±1.37,P＜0.01);乳香胶或两药联合可抑制NF-κB的活性;对人胰腺癌BxPc-3细胞作用48 h后,Bcl-2的蛋白表达明显低于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).而IkB和Bax蛋白的表达显著高于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).与对照组比较,乳香胶或两药联合组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长(P＜0.05).结论 乳香胶可通过抑制NF-κB的活性,增加IkB和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2的蛋白表达,发挥抗肿瘤作用,并增强吉西他滨的药效.     

钙调蛋白2调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的探讨钙调蛋白2(CALM2)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA2.0)对癌症基因组图谱(TCGA)和基因型组织表达(GTEx)数据库中的179例胰腺癌和171例癌旁组织中CALM2基因的表达使用方差分析(ANOVA)进行差异分析, 对89例高表达CALM2的胰腺癌患者和89例低表达CALM2的胰腺癌患者分别绘制Kaplan-Meier曲线, 使用log-rank检验进行预后分析。采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染人源胰腺癌细胞系SW1990和ASPC1, 建立对照组和CALM2敲低组细胞系;采用慢病毒包被质粒感染人源胰腺癌细胞系BxPC-3, 建立对照组和CALM2过表达组细胞系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达CALM2后细胞内CALM2的mRNA和蛋白表达水平。采用克隆形成和皮下注射裸鼠荷瘤实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞增殖能力的影响, 采用划痕愈合实验和Transwell实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力的...     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin基因表达的研究

目的:探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin表达与化疗耐药的关系。方法:胰腺癌细胞株PANC-1用1640液培养，吉西他滨的浓度为1 μg /mL及10 μg/mL，运用RT-PCR和Western blot检测survivin的表达。分析细胞中survivin的表达水平与化疗耐药的关系。结果:用1 μg/mL及10 μg/mL浓度的吉西他滨作用胰腺癌细胞株24 h和48 h，survivin mRNA水平分别上升了(1.34±0.12) 倍,(2.40±0.17)倍和(3.33±0.20)倍,(4.41±0.18)倍;蛋白水平上升了(1.20±0.07)倍,(1.48±0.19)倍和(2.90±0.04)倍,(4.50±0.20)倍，差异有显著性意义(P＜0.05)。结论:胰腺癌细胞株的化疗耐药可能通过吉西他滨的作用上调survivin的表达而增强。