miR-125靶向SMAD4抑制脂多糖诱导的人结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化

目的 观察脂多糖(LPS)对正常结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化的影响,探索miR-125和SMAD4在细胞转化过程中的作用和机制.方法 以人正常结肠上皮细胞系HCoEpiCs为研究对象,用CCK-8法探索LPS的最佳刺激浓度;用LPS连续刺激HCoEpiCs细胞40代并检测细胞周期相关基因cyclinD1、癌基因c-myc...     

黄芩苷调节巨噬细胞极化减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的 研究黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用,并探讨该作用与肺巨噬细胞M1/M2表型极化及其介导炎症的相关机制.方法 将60只SD大鼠分为6组:正常对照组、LPS组、(10、50、100)mg/kg黄芩苷联合LPS处理组、地塞米松(DEX)处理组.除正常对照组外,其余组采用气管滴注LPS建立AL...     

活化蛋白C耐受研究的新进展

血栓性疾病是一类涉及多因素、多基因的疾病 ,常见于遗传基因方面的缺陷 ,并由获得性因素和环境因素的激发作用而形成。活化蛋白C(APC)耐受是迄今所知引起静脉血栓形成 (VT)的最主要原因 ,在遗传性APC耐受的研究中 ,除FVLeiden突变外 ,因子V的基因多态性是可能导致APC耐受的重要因素。FVLeiden突变与基因多态性的发生有人种及地区的差异。此外 ,一些国家地区的APC耐受归因于获得性APC耐受 ,生理或病理因素所产生的获得性APC耐受是个体发生血栓和高凝状态的重要原因。     

蓝玉簪颗粒抑制脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生及相关机制研究

目的:探讨蓝玉簪颗粒对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(AM)内TNFα-表达及可能作用机制。方法:分离纯化AM,应用ELISA法检测蓝玉簪颗粒对LPS诱导的大鼠AM培养上清中的TNFα-水平的影响,应用Western blot方法检测大鼠AM内TNFα-及pERK蛋白表达水平,同时应用ERK拮抗剂(PD98059)观察AM内TNFα-蛋白表达。结果:蓝玉簪颗粒可剂量依赖的降低由于LPS刺激导致的AM培养上清内TNFα-含量升高;蓝玉簪(100 mg/L)颗粒可显著降低由于LPS刺激导致的AM细胞内pERK及TNFα-蛋白表达升高;ERK特异性抑制剂(PD98059 30 mol/L)及蓝玉簪颗粒干预,蓝玉簪颗粒+PD98059干预后,我们发现与LPS刺激组相比,大鼠AM中TNFα-表达显著降低。结论:蓝玉簪颗粒可以抑制LPS诱导AM TNFα-表达,其作用的机制之一可能与蓝玉簪抑制细胞外信号转导通路有关。     

白杨素对大鼠脓毒症相关急性肺损伤的作用和可能机制

目的应用白杨素对大鼠急性肺损伤(ALI)进行干预,探讨白杨素对脓毒症相关ALI的作用和可能机制。方法 72只Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS造模组、白杨素高剂量组(C-H,30mg/kg)和白杨素低剂量组(C-L,10mg/kg),每组18只大鼠。各组大鼠进行右肺上叶切除,行病理组织学检查;中叶切除,进行肺组织湿/干重(W/D)的重量比。采用免疫组化法、Western blot法和Real-time-PCR法检测肺组织HMGB1的蛋白和m RNA表达水平。结果与正常对照组相比,LPS诱导ALI组的W/D比值较高(0.05),应用白杨素治疗后,W/D比值显著降低(0.05)。与对照组相比,ALI组大鼠光镜下可见肺泡壁的增厚,肺水肿及肺泡塌陷,严重出血且有明显的炎性细胞浸润,经白杨素治疗后,炎性减轻。ALI组大鼠肺组织HMGB1蛋白和m RNA表达水平显著高于对照组(0.05),而C-H和C-L组比ALI组明显减少(0.05)。结论白杨素对ALI大鼠肺脏的保护作用可能与抑制炎症细胞因子HMGB1的表达相关。     

Lnc-MALAT1减轻miR-217抑制 LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎性反应

目的 探究长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lnc-MALAT1)在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞系(AMOs)炎性反应中的调控机制.方法 LPS处理AMOs建立细胞损伤模型,用脂质体法分别将pcDNA、pcDNA-MALAT1、miR-NC、miR-217 mimics、pcDNA-MALAT1与miR...     

活化蛋白C对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响研究

目的：观察不同剂量活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用。方法:将培养成功的HUVECs通过LPS（1 mg/L）孵育诱导细胞凋亡模型，并给予APC（10 μg/L）或APC（50 μg/L）建立药物治疗组，同时设立正常对照细胞组和单独LPS（1 mg/L）诱导细胞凋亡组。应用电镜观察细胞超微结构；DNA ladder与TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡情况；Annexin-Ⅴ/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。同时采用MTT法测定细胞存活率和Western blotting测定增殖细胞核抗原（PCNA），以观察细胞的增殖变化。结果:通过细胞形态，DNA ladder和TUNEL荧光染色发现单独LPS诱导组的细胞可见明显的凋亡现象，而通过APC治疗组的细胞凋亡改变明显减轻和细胞凋亡率下降，同时细胞存活率和PCNA表达率增高，尤其在50 μg/L时，与单独LPS诱导组细胞比较差异显著（P<0.05）。结论:APC拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡并促进细胞的增殖，发挥保护细胞的作用。     

桔梗皂苷D经NF-κB通路抑制炎症及氧化应激反应减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制.方法:将42只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、低剂量桔梗皂苷D组、高剂量桔梗皂苷D组和地塞米松组,每组7只.除假手术组和桔梗皂苷D对照组外,其余各组以气道滴注脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型.观察造模前后大鼠一般情况.造模2...     

miR-195缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应

目的探讨miR-195对脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分成空白对照组、脂多糖组(LPS)、LPS+miR-NC组、LPS+miR-195组;RT-PCR检测转染后miR-195表达量;ELISA检测心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI);流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核形的变化;Western blot检测氧化应激相关蛋白表达(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α);试剂盒检测氧化应激标记物SOD活性;ELISA检测炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)。结果与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组miR-195表达量、氧化应激标记物水平(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α)、抗氧化酶SOD活性均显著升高(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI)、细胞凋亡率、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)均显著降低(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-...     

Ficolin通过激活补体加重poly(I:C)联合LPS诱导的急性肺脏损伤北大核心CSCD

目的:探究纤维胶凝素(ficolin)在poly(I:C)联合LPS刺激诱导的急性肺损伤中的作用及机制。方法:6~8周龄SPF级C57BL/6小鼠和ficolin基因敲除小鼠分别随机分组,连续2 d滴鼻50μg/d poly(I:C),然后50μg/d滴鼻LPS 1 d,构建poly(I:C)和LPS联合刺激诱导的急性肺损伤小鼠模型,单独刺激或滴鼻PBS为对照组;HE染色检测肺组织病理变化;流式细胞术检测每组小鼠肺组织中性粒细胞和巨噬细胞的比例变化;Western blot检测每组小鼠肺组织和RAW264.7细胞中C3的表达变化和活化情况。结果:成功建立了poly(I:C)联合LPS刺激诱导的急性肺损伤小鼠模型。联合刺激组小鼠肺脏病理损伤加重,肺泡融合和弥漫性损伤,大量炎症细胞浸润;其中中性粒细胞和间质巨噬细胞比例显著提高,肺泡巨噬细胞比例显著降低。联合刺激增加小鼠肺组织和RAW264.7细胞中补体C3的表达和酶解活化,而敲除ficolin可明显降低联合刺激诱导的C3活化,并减少间质巨噬细胞募集和肺泡巨噬细胞耗竭,改善急性肺损伤。结论:Ficolin可通过激活补体加重poly(I:C)联合LPS刺激介导的肺脏炎症和急性肺损伤,是重症肺炎潜在的治疗靶点。     

氢硫酸钠抑制脂多糖引起的A549细胞损伤

目的观察氢硫酸钠(Na HS)对脂多糖(LPS)诱导的A549肺癌细胞损伤的影响并探讨其可能机制。方法 A549细胞分为对照组、LPS处理组、Na HS处理组和LPS联合Na HS处理组。处理24 h后,采用ELISA测定培养液中C反应蛋白(CRP)的含量;MTT法与乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤情况;测定A549细胞单层模型的跨上皮电阻(TER)值;免疫荧光染色法测定A549细胞中闭锁小带蛋白1(ZO-1)的分布情况。结果对照组与Na HS处理组比较,CRP的水平、TER值、细胞活力和ZO-1表达与分布情况无显著性差异;与对照组相比,LPS处理组中的CRP水平明显升高、TER值显著减少、细胞活力下降、细胞膜ZO-1表达减少且边界不清;与LPS处理组相比,LPS联合Na HS处理组中的CRP水平明显降低、TER值增加、细胞活力增加,ZO-1在细胞膜处的表达增强且分布情况部分恢复。结论 Na HS通过增强A549细胞活力、降低CRP水平、增加TER值并增加ZO-1表达抑制LPS诱导的肺损伤。     

雷帕霉素对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用及可能机制研究

目的 探讨雷帕霉素对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤的保护作用及可能机制.方法 将90只大鼠随机分为对照组、LPS组和雷帕霉素处理组.HE染色观察肺组织病理学改变.酶联免疫吸附方法检测血清IL-6、IL-10和TNF-α的表达.硫代巴比妥酸方法、黄嘌呤氧化酶方法和酶促反应谷胱甘肽消耗方法分别测定血清MDA、SOD和GSH...     

晚期内体/溶酶体适配蛋白2(LAMTOR2)基因缺失加重肺炎克雷伯菌引起的小鼠脓毒症

目的 建立肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)感染肝组织晚期内体/溶酶体适配蛋白2(LAMTOR2)基因条件敲除小鼠模型,初步探究LAMTOR2基因在K.pneumoniae感染引起肝脓毒症过程中的作用及机制。方法 繁育获得肝脏LAMTOR2基因条件性敲除小鼠(LAMTOR2^flox/flox;Alb-Cre⁺)和同窝阴性对照组小鼠(LAMTOR2^flox/flox)。提取实验组和对照组小鼠的肝组织,利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测LAMTOR2的mRNA和蛋白表达水平确定LAMTOR2在肝组织的敲除效果。实验组和对照组小鼠分别感染K.pneumoniae,观察24、 36、 48、 72h的小鼠生存率,HE染色观察肝组织病变情况;利用实时荧光定量PCR检测实验组和对照组小鼠感染K.pneumoniae 24 h后肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和CXC趋化因子配体1(CXCL1)的mRNA的表达水平。结果 成功获得肝组织LAMTOR2基因条件性敲除小鼠;与对照组...     

miR-491通过下调Xklp2靶蛋白(TPX2)表达抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的探讨miR-491在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法实时定量PCR检测miR-491在肝癌及癌旁组织中的表达,MTT法检测MHCC-97H细胞的增殖,TranswellTM实验检测MHCC-97H细胞的侵袭及迁移,Western blot法及免疫组织化学染色检测miR-491下游潜在靶点Xklp2靶蛋白(TPX2)的表达。结果 miR-491在肝癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织;肝癌组织中miR-491低表达与肿瘤大小、TNM分期、门静脉侵犯及Edmondson分级显著相关;低表达miR-491患者3年生存率明显低于高表达组;miR-491可显著抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移,并下调TPX2的蛋白水平;miR-491低表达组TPX2蛋白水平明显高于miR-491高表达组,相关性分析显示肝癌组织中miR-491与TPX2蛋白表达呈显著负相关。结论 miR-491在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-491抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的作用可能与下调TPX2表达有关。     

过表达miR-30a抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化

目的探讨miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C2C12成骨分化中的作用。方法 BMP9条件培养基处理间充质干细胞C2C12诱导成骨分化,用real-time PCR连续检测miR-30家族成员的mRNA。用BMP9条件培养基作用Ad-mmu-miR-30a预处理的C2C12细胞,通过ALP染色和活性检测来反映早期成骨指标ALP的表达、分别在mRNA水平和蛋白水平检测中期成骨指标(OCN)的表达、用钙盐沉积来检测晚期成骨分化,用流式细胞术和MTT检测C2C12细胞的周期与增殖。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中的作用机制。结果 miR-30家族中,只有miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中表达下调,miR-30a过表达后,通过靶基因Runx2使BMP9诱导成骨分化能力减弱,ALP的表达下降(P0.05),OCN蛋白水平和mRNA水平也都表达下调(P0.05),钙盐沉积受到抑制。结论 miR-30a可以抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化。     

连接子蛋白43(Cx43)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞自噬

目的 探讨连接子蛋白43(Cx43)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)自噬中的作用。方法 采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光细胞化学染色鉴定原代VSMC, ox-LDL处理后,采用油红O染色鉴定泡沫细胞;Western blot法检测(0、 40、 80、 160)μg/mL ox-LDL处理0、 6、 12、 24 h, VSMC中微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达以及80μg/mLox-LDL干预24 h,Cx43蛋白的表达;将VSMC随机分为对照组、ox-LDL组和ox-LDL联合Cx43特异性阻断剂Gap26组,Western blot法检测各组细胞LC3、beclin 1的表达。结果 分离的细胞α-SMA阳性率达95%以上,与对照组相比,ox-LDL处理的细胞油红O阳性细胞明显增加,ox-LDL呈浓度依赖及时间依赖地降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达,Cx43蛋白的表达明显升高;给予Gap26后,可上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达。结论 Cx43抑制ox-LDL引起的自噬。     

miR-21靶向CCL20及PDCD4对脓毒症大鼠心肌中细胞凋亡及炎症反应的调节作用

目的:研究miR-21靶向CC趋化因子配体20(CCL20)及程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对脓毒症大鼠心肌中细胞凋亡及炎症反应的调节作用.方法:成年雄性SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组、脓毒症+NC组、脓毒症+miR-21组,后三组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型,尾静脉注射NC mimic或miR-21 mim...     

miR-101-3p通过靶向抑制斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)促进巨噬细胞对人肝癌细胞的吞噬作用

目的 探究miR-101-3p能否促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3人肝癌细胞的吞噬作用及其机制。方法 通过慢病毒包装、感染和抗性筛选,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记并过表达miR-101-3p的HCCLM3人肝癌细胞稳转系(HCCLM3^GFP-miR-101-3p),同时使用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞贴壁分化为M0型巨噬细胞。将两者共培养24 h后收集细胞,运用荧光激活细胞分选法(FACS)检测巨噬细胞吞噬效率。实时定量PCR检测斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)、钙网蛋白(CRT)的mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测CRT的表达和分布,Western blot法检测STC1、 CRT的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p与靶基因的靶向调控关系。结果 过表达miR-101-3p促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3肝癌细胞的吞噬作用,miR-101-3p通过靶向STC1进而上调HCCLM3细胞膜表面CRT的表达。结论 miR-101-3p通过靶向抑制STC1进而促进HCCLM3细胞膜表面CRT的表达,增强巨噬细胞对肝癌细胞的吞噬作用...     

HSP70调控Bcl-2表达抑制脓毒症大鼠肺血管内皮细胞损伤的机制研究

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)调控B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达抑制脓毒症大鼠肺血管内皮细胞损伤的机制。方法 SD大鼠30只随机分为对照组、脓毒症组、干预组,每组10只,脓毒症组腹腔注射20 mg/kg内毒素,干预组尾静脉注射溶于15 mL林格液的800μg重组质粒pcDNA3.1-HSP70,48 h后腹腔注射20 mg/kg内毒素;对照组腹腔注射等量生理盐水。24 h后采血检测各组大鼠血清IL-6、TNF-α水平,采血后将各组大鼠处死取其肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,检测各组大鼠肺血管内皮细胞凋亡率,检测各组大鼠肺血管内皮细胞中HSP70、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示干预组大鼠肺组织病理改变较模型组明显改善。脓毒症组大鼠肺血管内皮细胞凋亡率及血清IL-6、TNF-α水平显著高于对照组(P0.05);干预组大鼠肺血管内皮细胞凋亡率及血清IL-6、TNF-α水平显著低于脓毒症组(P0.05);脓毒症组大鼠肺血管内皮细胞中HSP70、Bax、Bcl-2蛋白表达水平显著高于对照组(P0.05);干预组大鼠肺血管内皮细胞中HSP70、Bcl-2蛋白表达水平显著高于脓毒症组(P0.05);干预组大鼠肺血管内皮细胞中Bax表达水平显著低于脓毒症组(P0.05);干预组大鼠肺血管内皮细胞凋亡率及IL-6、TNF-α、HSP70、Bax、Bcl-2水平较对照组差异有统计学意义(P0.05)。结论 HSP70可能通过下调Bax及上调Bcl-2表达,减轻脓毒症大鼠炎症反应,减少肺血管内皮细胞凋亡,抑制肺血管内皮细胞损伤,从而起到保护肺血管内皮细胞的作用,这可能成为脓毒症肺损伤治疗的新靶点。