Runx3敲减抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs向成骨分化

目的研究Runx3敲减对BMP9诱导的小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs成骨分化的作用。方法 BMP9腺病毒感染iMEFs,用Western blot检测内源性Runx3蛋白的表达。Runx3干扰腺病毒ad-siRunx3和BMP9条件培养基共同处理iMEFs,用碱性磷酸(ALP)染色和活性定量测定检测成骨早期指标ALP;用茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;用RT-PCR检测成骨相关基因Id1、Id2、Id3和Runx2,用Western blot检测成骨相关蛋白Dlx5;用SBE荧光素酶报告质粒检测smad1/5/8的转录活性。结果 BMP9可以使Runx3表达降低(P0.05);干扰Runx3可以抑制早期成骨指标ALP活性(P0.05)和晚期成骨指标钙盐沉积;ad-siRunx3抑制BMP9诱导的成骨相关转录因子Id1、Id2、Id3和Runx2基因的表达(P0.05)及DLX5蛋白的表达(P0.05)。结论敲减Runx3可以抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞向成骨分化。     

LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化

目的研究脂多糖(LPS)激活的Toll样受体4(TLR4)信号对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞(i MEFs)成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4/NF-κB信号通路的激活;LPS,BAY11-7082和BMP9处理iMEFs,ALP染色和活性检测i MEFs早期成骨分化能力;茜素红S染色检测晚期成骨分化能力;半定量PCR和Western blot检测晚期成骨基因OCN和OPN表达;Western blot检测Smad1/5/8磷酸化水平;半定量PCR和Western blot检测成骨关键转录因子Runx2和Dlx5的表达。结果 LPS成功激活TLR4/NF-κB信号通路;LPS抑制BMP9诱导的ALP染色和活性(P0.01)、钙盐沉积、OCN的mRNA和蛋白质表达(P0.05)、OPN的mRNA(P0.01)和蛋白质(P0.05)表达、Smad1/5/8信号通路激活(P0.01)、Runx2的mRNA和蛋白质表达(P0.05)、Dlx5的mRNA(P0.01)和蛋白质(P0.05)表达,BAY11-7082可以部分逆转LPS的抑制作用(P0.05)。结论 LPS激活TLR4可以通过NF-κB信号通路抑制BMP9诱导的iMEFs成骨分化。     

miR-25-3p下调ADAM10表达阻断Notch信号通路抑制P19细胞向心肌细胞分化

目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、 5、 10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4 (GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10 d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率; Western blot法检测GATA4、 cTnT、 ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、 Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、 Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果 P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、 5、 10天过程中, GATA4、 cTnT、 ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、 cTnT、 ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、 Hes1、 Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。     

BMP9调控Notch、TLR4信号通路诱导主动脉瓣间质细胞成骨样分化北大核心CSCD

目的：探究骨形态发生蛋白9(BMP9)调控Notch、Toll样受体-4(TLR4)信号通路诱导主动脉瓣膜间质细胞（AVICs）成骨样分化的作用机制。方法：将患者分为非钙化性主动脉瓣疾病（non-CAVD）组和CAVD组，免疫组化和Western blot检测患者BMP9、Runx2蛋白表达水平。取健康家猪主动脉瓣叶并分离AVICs，免疫荧光染色对其进行表型鉴定；采用BMP9干扰载体及BMP9腺病毒处理AVICs，分为对照组（control组）、干扰对照组（si-control）组、si-BMP9组、携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组腺病毒（Ad）组（Ad-GFP组）和Ad-BMP9组，并建立体外AVICs钙化模型；采用碱性磷酸酶（ALP）染色、雄激素受体（AR）染色检测细胞早期和晚期的成骨分化能力；qRT-PCR检测Runx2、骨桥蛋白（OPN）、骨钙蛋白（OCN） mRNA表达；Western blot检测Runx2、OPN、OCN、BMP9、Notch2、Notch胞内域（NICD）、发状分裂相关增强子1(Hes1)、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果：与non-CAVD组相比，CAVD组中BMP9和Runx2蛋白明显升高（P<0.05）。原代猪AVICs分离成功，其中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Vimentin呈阳性表达，血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1,CD31)呈阴性表达。敲减BMP9后，AVICs中BMP9、Runx2、OCN、OPN mRNA水平、早期及晚期成骨分化能力及BMP9、Runx2、OCN、OPN、Notch2、NICD、Hes1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均下降（P<0.05）；过表达BMP9后，AVICs中BMP9、Runx2、OCN、OPN mRNA水平，早期及晚期成骨分化能力，BMP9、Runx2、OCN、OPN、Notch2、NICD、Hes1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均升高（P<0.05）。结论：BMP9能够促进AVICs的成骨样分化，这一作用机制可能与Notch和TLR4信号通路的激活有关。     

bFGF2抑制BMP9诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2向成骨细胞分化

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)对于骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响,并探讨其机制.方法 用BMP9和FGF2重组腺病毒感染C3H10T1/2细胞,测定成骨早期标志物碱性磷酸酶(ALP)活性变化,茜素红S染色观察成骨晚期标志物钙盐沉积,pl2SBE-luc荧光素酶报告基因活性检测,Western blot检测经典信号通路smadl/5/8和成骨关键转录因子RUNX2的变化,以及晚期成骨标志物骨钙素(OCN)的表达.结果 FGF2抑制了BMP9诱导的早期成骨指标ALP和晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素的表达,抑制了经典的BMPs-Smad信号通路,抑制了成骨关键的转录因子Runx2的表达.结论 FGF2可抑制BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化.     

Th17/Treg失衡在肺炎支原体肺炎患儿中的作用及其机制

目的：探讨Th17/Treg失衡在肺炎支原体肺炎患儿中的作用及其机制。方法：纳入2013年6月至2015年1月我院收治的60例肺炎支原体肺炎急性期患儿和30例同期体检的健康儿童为研究对象。流式细胞术分析两组儿童外周血Th17和Treg的百分率,ELISA分析Th17和Treg特异性细胞因子IL-17和IL-10的分泌水平,定量PCR测定Th17和Treg特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平,以及Notch信号分子(Notch1,Hes1和Hey1)的表达水平。结果：与健康儿童相比,肺炎支原体肺炎急性期患儿外周血的Th17的百分率,IL-17分泌水平以及特异性转录因子RORγt的表达水平均明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05),而急性期患儿外周血的Treg的百分率,IL-10分泌水平以及特异性转录因子Foxp3的表达水平均较健康儿童明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。进一步分析显示急性期患儿Notch1、Hes1和Hey1的表达水平均明显高于健康儿童,其差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：Th17/Treg失衡参与儿童支原体肺炎的发生发展,Notch信号通路可能通过调节免疫细胞分化和细胞因子分泌参与Th17/Treg失衡。     

敲低Runt相关转录因子3(RUNX3)抑制低氧诱导的内皮细胞间质转分化

目的探讨敲减Runt相关转录因子3(RUNX3)对低氧诱导人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)向间质转分化的影响及具体机制。方法低氧条件下培养HCMEC,使用RUNX3干扰慢病毒敲减HCMEC中的RUNX3基因,应用反转录PCR检测内皮细胞间质转分化(EndoMT)相关基因CD31、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异蛋白1(FSP-1)以及RUNX3的mRNA表达,应用Western blot法检测CD31、α-SMA、RUNX3、转化生长因子β2(TGF-β2)、Smad2/3、p-Smad2/3以及Notch-1、Hes1、Hey1蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色检测CD31、α-SMA的表达和定位。结果低氧能够诱导HCMEC发生EndoMT;低氧时TGF-β2、Smad2/3、p-Smad2/3以及Notch-1、Hes1、Hey1蛋白均上调;而RUNX3敲减后TGF-β2以及Notch-1蛋白水平增高,然而Smad2/3、p-Smad2/3以及Hes1、Hey1蛋白水平均不同程度下调。结论 RUNX3敲减可减轻低氧诱导的EndoMT,可能是通过部分抑制TGF-β及Notch信号通路。     

锌指蛋白3调节骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化

背景：骨形态发生蛋白2是参与骨骼生长发育和修复的重要因子,近年来的研究发现锌指蛋白3参与调节转化生长因子β信号的转导,该研究以此为基础开展研究。目的：探讨抑制锌指蛋白3对骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。方法：以小鼠间充质干细胞系C3H10T1/2细胞为研究对象,设置绿色荧光蛋白、骨形态发生蛋白2、锌指蛋白3、骨形态发生蛋白2+锌指蛋白3重组腺病毒转染组,增强骨形态发生蛋白2表达,抑制锌指蛋白3表达。采用碱性磷酸酶染色检测碱性磷酸酶的表达;RT-qPCR检测骨形态发生蛋白2、锌指蛋白3及成骨、成血管标志物mRNA转录水平;免疫组织化学染色检测Ⅰ型胶原、血管内皮生长因子及内皮黏蛋白表达水平;茜素红染色及半定量分析检测钙盐沉积水平;裸鼠皮下成骨实验检测异位骨块形成情况。结果与结论：(1)骨形态发生蛋白2重组腺病毒能诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,与骨形态发生蛋白重组腺病毒组比较,骨形态发生蛋白2+锌指蛋白3重组腺病毒组成骨标志物碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、成骨细胞特异性转录因子、骨钙素、Runt相关转录因子2及成血管标志物神经轴突导向因子、血管内皮生长因子、血管性血...     

过表达SHOX2对BMP 9诱导的 小鼠间充质干细胞系C3H10T1/2成骨分化的影响

目的 研究矮小身材同源框2(SHOX2)对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的小鼠间充质干细胞系C3H10T1/2成骨分化的影响.方法 构建SHOX2重组腺病毒(Ad-SHOX2),实验分为对照(NC)组、Ad-SHOX2组、BMP9组和BMP9+Ad-SHOX2组.碱性磷酸酶(ALP)评估早期成骨;钙盐沉积检测晚期成骨...     

肠上皮Depdc5/mTORC1信号轴调控小鼠小肠上皮稳态

目的 探讨Depdc5敲除介导的mTORC1信号通路持续激活对小鼠肠道上皮稳态的调控作用。方法 将小鼠分为4组,Depdc5^flox/flox组(对照组)、Depdc5^flox/flox:Villin-Cre组(IKO组)、rapamycin-Depdc5^flox/flox组(rap-Ctrl组)、rapamycin-Depdc5^flox/flox:Villin-Cre组(rap-IKO组),每组各5只。Western blot检测肠道上皮DEPDC5蛋白表达及mTORC1下游分子S6的磷酸化(PS6)水平。RT-qPCR检测小肠组织中不同类型细胞标记基因Dclk1、Trpm5、Muc2 mRNA的表达。苏木精-伊红染色(HE染色)对组织形态学进行检查。免疫组化染色(IHC)检测簇细胞、潘氏细胞、增殖细胞的数目。阿尔新蓝染色法检测杯状细胞的数目。结果 IKO组小鼠小肠和结肠组织中PS6蛋白表达为0.957±0.028高于对照组的0.598±0.041(P<0.05),并且IKO组小鼠小肠上皮不...     

GLIS家族锌指蛋白2(GLIS2)负调控Wnt/β-catenin通路抑制人骨髓间充质干细胞的成骨分化

目的 探究人类基因GLIS家族锌指蛋白2(GLIS2)对Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路调控作用，及对人骨髓间充质干细胞(BMMSC)分化的影响。方法 培养人BMMSC,随机分为空白组、成骨诱导组、腺病毒GLIS2基因过表达(ad-GLIS2)组、 ad-GLIS2阴性对照、 GLIS2基因敲低(si-GLIS2)组、 si-GLIS2阴性对照(si-NC)组。反转录PCR检测GLIS2 mRNA表达判定转染情况，对硝基苯磷酸苯二钠(PNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色法检测钙化结节形成判定其成骨特性；T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)报告试剂盒检测细胞内Wnt/β-catenin通路激活情况；Western blot法检测GLIS2、 Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)、成骨细胞特异性转录因子(osterix)表达。谷胱甘肽巯基转移酶沉降(GST-pulldown)实验验证GLIS2与β-catenin二者相互作用关系。结果 与空白组相比，成骨诱导组BMMSC的ALP活性及钙化结节形成增强，Wnt/β-catenin通路活性及成...     

白细胞介素34(IL-34)促进大鼠根尖牙乳头干细胞增殖并向成牙成骨分化

目的 探究白细胞介素34(IL-34)对大鼠根尖牙乳头干细胞(SCAP)成牙、成骨分化的影响。方法 采用酶消化法分离培养大鼠SCAP,实时荧光定量PCR检测IL-34在大鼠SCAP中的表达。采用噻唑蓝(MTT)法分析不同浓度IL-34对大鼠SCAP增殖活性的影响。茜素红染色观察矿化情况，划痕实验检测增殖能力，实时荧光定量PCR检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、 Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)的表达。应用Western blot法检测ALP、 DSPP、 RUNX2、 OSX蛋白的表达。结果 IL-34促进大鼠SCAP增殖的最大剂量为100 ng/mL,茜素红染色显示IL-34能够促进SCAP的矿化。100 ng/mL IL-34处理显著提高成骨相关基因ALP、 DSPP、 RUNX2、 OSX的表达。结论 IL-34能够促进大鼠SCAP的增殖并向成牙/成骨分化。     

Shh促进BMP9诱导的小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化

目的 观察Shh蛋白对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的小鼠间充质干细胞(MSCs) C3H10T1/2成骨分化的影响,并初步探讨其作用机制.方法 Shh腺病毒和BMP9作用于C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)检测ALP变化,茜素红S染色检测钙盐沉积,RT-PCR检测Shh、BMP9、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)以及成骨相关基因Id1、Id2、Id3、CTGF和Runx2的表达,Western blot检测OPN、OCN、Runx2、DLX5和p-Smad1/5/8的蛋白水平,荧光素酶报告基因检测Smad1/5/8的转录活性.结果 Shh不影响BMP9的表达,但可增强由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞早晚期成骨分化(P＜0.05),并促进BMP9诱导的成骨相关基因的表达(P＜0.05);Shh促进了BMP9诱导的Smad荧光素酶活性(P＜0.05),但对其磷酸化并无影响.结论 Shh可促进BMP9诱导的小鼠C3H10T1/2细胞的成骨分化.     

骨碎补总黄酮干预Notch信号通路影响骨重建过程中成血管-成骨耦联

背景:骨缺损是骨科临床的难题,骨碎补总黄酮对骨缺损治疗有确切疗效,但是其具体机制尚不明确。目的:基于Notch信号通路探讨骨碎补总黄酮在骨重建过程中对血管生成和骨形成的影响。方法:48只SD大鼠随机分为模型组、中药组、中药+DAPT组、DAPT组,每组12只。构建大鼠股骨缺损模型,分别给予中药骨碎补总黄酮和Notch通路阻滞剂DAPT干预,干预12周后通过X射线片、Micro-CT和苏木精-伊红染色观察骨缺损的成骨情况,免疫组化检测骨组织中血管内皮生长因子、CD31、Hes1、骨形态发生蛋白2、Notch1蛋白的表达。结果与结论:①X射线片、Micro-CT和苏木精-伊红染色显示中药组的成骨效果明显优于其他3组;②免疫组化检测显示中药组骨形态发生蛋白2、血管内皮生长因子、CD31、Hes1、Notch1平均吸光度值较模型组明显增多(P<0.05);中药+DAPT组血管内皮生长因子、Hes1、骨形态发生蛋白2的平均吸光度值大于DAPT组(P<0.05),但CD31和Notch1表达组间差异无显著性意义;③结果表明,骨碎补总黄酮通过激活Notch通路促进骨重建过程中成血管-成骨耦联,从而促进骨修复。     

条件性敲除骨髓间充质干细胞中3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1基因后的成骨细胞分化

背景:国内外对于3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK-1)的研究主要集中在内分泌和肿瘤学等学科领域,在骨科学中关于其对成骨分化的影响尚未有系统研究与报道。目的:通过使用稳定表达cre酶的腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)转染PDK-1^flox/flox小鼠骨髓间充质干细胞,观察PDK-1在成骨细胞分化中的作用。方法:体外培养获得来源于纯合子PDK-1^flox/flox小鼠的骨髓间充质干细胞,设立对照组、空载病毒组(pHBAd-EGFP)和pHBAd-cre-EGFP组,对照组仅用成骨细胞诱导培养基诱导培养骨髓间充质干细胞,空载病毒组使用pHBAd-EGFP转染骨髓间充质干细胞,pHBAd-cre-EGFP组使用含Cre重组酶的重组腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)干扰骨髓间充质干细胞中的PDK-1基因,然后进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性、茜素红染色和qPCR检测成骨相关基因表达来评价各组成骨细胞的分化成熟情况。结果与结论:pHB...     

低氧及HIF－1α基因转染对HepG2细胞基因表达谱的影响

 目的：应用基因芯片技术,研究缺氧及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因转染对HepG2细胞基因表达谱的影响。方法: 以常氧对照腺病毒(Ad-GFP)转染组（CC组）为对照组,常氧HIF-1α腺病毒(Ad-HIF)转染组（CH组）、低氧对照腺病毒(Ad-GFP)转染组（HC组）、低氧(2%O₂, 24 h) HIF-1α腺病毒(Ad-HIF)转染组（HH组）为实验组,提取HepG2细胞的总RNA,反转录成Cy3和Cy5标记的cDNA探针,与定制的包含1 628个能量代谢相关基因的cDNA芯片进行杂交,筛选出实验组与对照组差异表达基因并进行分析。结果: 与常氧对照腺病毒转染组相比较,常氧HIF-1α腺病毒转染组3个基因表达下调;低氧对照腺病毒转染组10个基因表达上调;低氧HIF-1α腺病毒转染组6个基因表达上调、1个基因表达下调。这些差异表达基因编码蛋白的功能涉及能量代谢、信号转导、细胞凋亡、转录和HIF-1调节、生物转化、酸碱平衡调节、细胞黏附分子等方面。结论: 低氧可以上调HepG2细胞能量代谢相关基因表达,HIF-1的转录调节作用可能是其重要环节。     

Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对AECII细胞增殖与分化的影响

目的:探讨Notch1/Hes1信号通路能否通过调控CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达从而影响肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的增殖与分化功能。方法:体外培养人AECⅡ,将细胞随机分为对照组、激活剂组(加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)和抑制剂组(加入Notch通路抑制剂DAPT 10μmol/L),于干预后24 h收获各组细胞。采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;细胞计数检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及分化。结果:与对照组相比,激活剂组Notch1、Hes1和C/EBPα的mRNA和蛋白表达显著增加(P0.05),促进AECⅡ从S期进入G_2/M期,增殖增加而分化减少(P0.05);抑制剂组Notch1、Hes1和C/EBPαmRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),AECⅡ被阻滞于G_0/G_1期,增殖减少而分化增加(P0.05)。结论:Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECⅡ增殖与分化。     

下调骨细胞TGF-β/Smad4信号可抑制小鼠BMSCs成骨及破骨分化

目的检测骨细胞TGF-β/Smad4信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和破骨分化的作用,并初步探讨其相关机制。方法用条件性基因敲减Cre/loxp技术特异性敲减骨细胞Smad4,获得下调骨细胞TGF-β/Smad4信号通路的小鼠;体外分离骨细胞并与野生型小鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(alizarin red)染色检测早期成骨分化和晚期钙盐沉积,酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞;real-time PCR检测成骨分化特异标志物Runx2、Osterix(OSX)、ALP、osteocalcin和破骨分化特异标志物RANKL和OPG的mRNA表达水平。Western blot检测成骨分化特异标志物Runx2和osteocalcin和破骨分化特异标志物RANK蛋白表达水平。结果下调骨细胞TGF-β/Smad4信号能够抑制BMSCs成骨转录因子Runx2、Osterix(P0.01)、成骨分化特异标志物ALP和osteocalcin(P0.01)以及破骨分化特异标志物RANK(P0.01)的表达;增加破骨分化抑制物OPG的表达(P0.05);而RANKL的表达无明显变化;最终下调了RANKL/OPG的比值(P0.05)。结论终末分化的骨细胞调控骨的代谢,下调其TGF-β/Smad4信号可抑制BMSCs成骨和破骨细胞的分化。     

Notch信号通路在骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的动态表达特征

目的　探寻Notch信号通路对BM-MSCs向肝细胞分化的影响机制。 方法　诱导BM-MSCs分化成肝细胞。当BM-MSCs分化至第0、7、11、21天时,反向斑点杂交实验检测Notch信号通路中的关键基因的mRNA表达水平。建立加入Jagged1上调信号通路的对照组RT-PCR技术绘制出BM-MSCs分化状态分子表达谱与正常情况下对比。 结果　BM-MSCs分化进行至第21天,反向斑点杂交检测到的关键基因的mRNA表达水平低于第0、7、11天。加入Jagged1后Notch信号通路被激活,导致下游基因Hes1 和 Hey1的被表达。BM-MSCs分化过程中Albumin未被检测到。 结论　本研究的结果表明Notch信号通路在BMMSCs分化成肝细胞过程进行调控是必需的,但是分化必须在信号通路下调的情况下才能进行下去。     

果蝇Hey蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

正Hey基因属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bH LH)转录因子超家族,具有bH LH结构域、Orange结构域和C末端的YRPW保守四肽。哺乳动物的Hey基因通常作为Notch信号通路的靶基因,参与心血管系统形成、神经发生、骨骼和骨骼肌发育等[1]。Hey2基因敲除小鼠出现明显