叶酸通过下调ERK1/2信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探讨叶酸(folic acid,FA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:取SD大鼠的主动脉,采用组织贴块法培养VSMCs,随机分组进行实验。采用CCK-8和Ed U法检测叶酸对VSMCs活力和增殖能力的影响。采用划痕实验和Transwell法检测叶酸对VSMCs迁移和侵袭的影响。采用Western blot法检测细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白表达以及血小板源性生长因子受体(PDGFR)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的磷酸化水平。结果:叶酸抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导的VSMCs的活力,并呈浓度依赖性(P0.05)。叶酸抑制PDGF诱导的VSMCs的迁移,并呈浓度依赖性(P0.05)。叶酸降低PCNA表达和PDGFR磷酸化水平,并抑制PDGF激活的ERK1/2信号通路。结论:叶酸降低PDGF诱导的VSMCs PCNA和p-PDGFR蛋白水平,下调ERK1/2信号通路,从而抑制VSMCs的增殖和迁移。     

牛痘相关激酶1在小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及机制

目的：探讨牛痘相关激酶1(vaccinia-related kinase 1, VRK1)在小鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs）增殖及迁移中的作用及机制。方法：培养小鼠肺动脉平滑肌细胞系,细胞传至第3代至第5代细胞进行后续实验。在低氧条件下检测不同低氧时间干预后PASMC中VRK1蛋白水平的变化。为探究VRK1在低氧所致PASMCs增殖和迁移中的作用,通过携带Vrk1特异短发夹RNA(Vrk1 short hairpin RNA,sh Vrk1)或相关阴性对照RNA(shCon)的慢病毒转染PASMCs,将转染后的PASMCs分别进行常氧、低氧处理,Western blot检测VRK1和β-catenin蛋白水平变化,采用Ki-67细胞免疫荧光染色法检测PASMCs的增殖活性,划痕实验检测PASMCs的迁移能力。加入40μmol/L SKL2001恢复β-catenin活性后再次检测上述指标。结果：与常氧组相比,低氧处理24 h和36 h后PASMCs中VRK1蛋白表达水平升高（P<0.01）。常氧培...     

活性氧和ERK1/2信号通路在缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用

目的：研究缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）内活性氧（ROS）水平的变化,ROS对细胞外信号调节激酶（ERK）1/2蛋白表达的影响以及ROS和ERK1/2在PASMCs增殖和凋亡关系失衡中的作用。方法: 原代培养正常大鼠PASMCs,选用第2-3代用于实验。分别在常氧及缺氧条件下用ROS清除剂tiron、ERK1/2抑制剂PD98059进行分组干预。通过NBT还原法和DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS,免疫荧光法检测磷酸化- ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达,MTT比色法和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的免疫细胞化学法检测细胞增殖,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果: (1)缺氧组细胞内ROS水平明显高于对照组（P<0.01）;(2)缺氧组的增殖活性与对照组相比显著增高（P<0.01）,而凋亡率显著降低（P<0.01）,使用tiron后能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖（P<0.05）,而凋亡率却明显升高（P<0.01）;(3)缺氧组p-ERK1/2蛋白表达显著高于对照组（P<0.01）,使用tiron后缺氧诱导的p-ERK1/2表达被显著抑制（P<0.01）;(4)使用PD98059也能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖（P<0.05）,而凋亡率也明显升高（P<0.01）,缺氧下同时使用PD98059和tiron与单用tiron相比,对细胞增殖和凋亡的影响均无明显差异（P>0.05）。结论: 缺氧时PASMCs中生成增多的ROS通过活化下游ERK1/2信号通路,促进PASMCs增殖并抑制凋亡,从而在缺氧性肺动脉重建过程中发挥重要作用。     

PM2.5通过p38 MAPK信号通路影响血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:研究细颗粒物(PM2.5)对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,以及p38 MAPK信号通路在其中的作用。方法:体外培养人血管平滑肌细胞,分为对照组和不同浓度PM2.5染毒组,分别用PBS及6.25、12.5和25 mg/L的PM2.5作用于细胞,用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的变化,用划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移能力,然后根据结果选取PM2.5最强作用浓度染毒细胞,在不同时点用Western blot法检测p38MAPK信号分子的磷酸化改变,并观察用特异性抑制剂阻断p38 MAPK信号后细胞在PM2.5刺激下的增殖和迁移情况。结果:与对照组比较,PM2.5染毒可明显促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力,在设定的浓度范围内以12.5 mg/L浓度组的作用最为明显(P<0.05)。Western blot结果显示,12.5 mg/L PM2.5染毒可上调血管平滑肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平;而加入p38 MAPK抑制剂SB203580预处理后,PM2.5诱导的细胞增殖和迁移明显受到抑制,说明p38 MAPK可能介导PM2.5的毒性作用。结论:PM...     

低氧致肺动脉平滑肌细胞增殖及其作用机制初探

目的和方法：实验采用ＰＤＧＦ生物活性检测法，流式细胞术，「＾３Ｈ」－ＴｄＲ掺入以及细胞免疫线化等方法探讨了低氧状态下，血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）及其受体与肺动产滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）增殖间的相互关系。结果：低氧可以增强ＰＤＧＦ的活性，上调ＰＧＦ受体促进ＰＡＳＭＣ增殖以ＰＤＧＦ作为刺激嘲一步促进低氧的促增殖作用。结论：低氧状态下，ＰＡＳＭＣ的ＰＤＧＦ及其受体进一步活化，从而增强了ＰＤＧＦ自分泌、旁     

黄芪皂苷Ⅱ通过阻断NOX/ROS/AKT/mTOR信号通路抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增生

目的 探讨黄芪皂苷Ⅱ(AS-II)对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)过度增生的抑制作用及相关机制.方法 将大鼠原代PASMC分为常氧组、低氧组、低氧联合(20、40、80)μmol/L AS-Ⅱ处理组、低氧联合还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)抑制剂VAS2870处理组,在常氧(210 mL/L O...     

辣椒素抑制自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的 研究辣椒素(CAP)是否可以改善自发性高血压大鼠(SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BASMC)的增殖迁移。方法 体外培养SHR及Wistar京都(WKY)大鼠原代BASMC,随机均分为对照组(WKY组)、 SHR组、 CAP处理的SHR组。通过CCK-8法选取CAP处理浓度;Transwell^TM小室实验和划痕实验检测各组BASMC的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色检测BASMC中的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分布;Western blot法检测BASMC的OPN、 PCNA蛋白水平。结果 与WKY组相比,SHR组BASMC增殖和迁移能力增强,经CAP处理后,细胞增殖和迁移能力降低;OPN表达在BASMC胞质和胞核,PCNA主要表达在胞核,与WKY组相比,SHR组OPN、 PCNA表达及蛋白水平增强,经CAP处理后,其OPN、 PCNA表达及蛋白水平明显降低。结论 CAP可降低SHR来源的BASMC的增殖和迁移。     

大黄素对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和cyclin D1表达的影响,探讨大黄素抑制平滑肌细胞增殖的作用机制。方法 取对数增长期的平滑肌细胞同步于G0期,药物组:加入含37.5mg·L-1大黄素10％胎牛血清的培养液,对照组:仅加入10％胎牛血清的培养液;作用12、24、36、48 h后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期时相和cyclin D1表达的测定。结果 与对照组比较,药物组在各相同时间点C0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,且随着时间的延长差值增大,cyclin D1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期。结论 大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调,cyclin D1表达,从而阻滞细胞周期进程。     

L-精氨酸对高肺血流量大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

探讨L－精氨酸（L－Arginine,L-Arg）对高肺血流量所致肺动脉高压平滑肌细胞增殖与凋亡的干预作用。18只雄性SD大鼠随机分为对照组、分流组和分流＋L精氨酸（L－Arg）组。对分流组和分流＋L－Arg组大鼠行腹主动脉－下腔静脉分流术。观察术后11周大鼠肺动脉平均压（mPAP)和右心室肥厚的改变，采用免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞PCNA和Fas的表达，并通过原位缺口末端标记方法（TUNEL）检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡。结果表明分流组大鼠mPAP、右心室（RV）与左心室加室间隔（LV＋S）的比值，肺中、小型动脉平滑肌细胞增殖指数（PI），凋亡指数（AI），PI／AI比值明显高于对照组大鼠（P＜0．05），同时，分流后肺动脉平滑肌细胞Fas表达增高。然后，分流＋L－精氨酸组大鼠mPAP、RV／LV＋S明显低于分流组（P＜0．05及0．01）。并且L－Arg减少了肺中、小型动脉平滑肌细胞的增殖，促进了凋亡（P＜0．01），wviycL-Arg组大鼠PI／AI比值较分流组明显降低（P＜0．01），同时，L－Arg使分流大鼠肺平滑肌细胞Fas表达明显增强。以上结果提示，L－精氨酸通过抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖，促进其凋亡，从而对同肺血流量所致肺动脉高压的形成有重要的调节作用。     

结缔组织生长因子siRNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)siRNA对CTGF表达及对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法培养大鼠血管平滑肌细胞,用脂质体法将抗CTGF483siRNA进行转染,Western blot法检测转染效果,MTT法及划痕实验测定对VSMC增殖和迁移的影响。结果转染CTGF483siRNA组的CTGF表达明显低于未转染组,MTT法显示转染CTGF483siRNA后VSMCs增殖减慢,划痕试验证实转染CTGF483siRNA后VSMCs迁移受到抑制。结论CTGFsiRNA可以抑制VSMC增殖和迁移,有望为颈动脉粥样硬化性缺血性脑血管病的预防和治疗新靶点。     

虫草素通过激活AMPK和MAPK信号通路抑制脂代谢抑制人胃癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨虫草素对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用及其分子机制。方法 用(0、 25、 50、 100)μmol/L虫草素处理MGC-803细胞、(0、 5、 25、 50)μmol/L虫草素处理HGC-27细胞48 h。采用噻唑蓝(MTT)法和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)法检测细胞增殖,集落形成实验检测细胞集落形成能力,划痕实验和Transwell^TM小室实验检测细胞迁移能力;Hoechst33342染色观察染色质凝集情况,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测胃癌细胞凋亡;Western blot法检测脂代谢相关蛋白固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、上皮间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail、 Slug,基质金属蛋白酶2(MMP2)、 MMP9,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化的AMPK(p-AMPK)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋...     

钙敏感受体通过PI3K信号通路介导缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:探讨钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的信号转导途径。方法:Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠PASMCs。通过缺氧培养箱内(93%N₂、2%O₂、5%CO₂)培养24h的方法复制细胞缺氧模型。应用Western blotting分析不同处理情况下细胞周期素D1(cyclin D1)及磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)在PASMCs中的表达;采用流式细胞术检测不同处理因素对细胞增殖周期及增殖指数的影响,应用BrdU掺入法分析不同处理因素对细胞DNA合成的影响。结果:缺氧引起PASMCs的cyclin D1及p-Akt表达水平上调,增加BrdU掺入量、S期细胞数量和细胞增殖指数,GdCl₃能够放大缺氧的作用,但上述效应可以被LY294002抑制。结论:CaSR通过PI3K/Akt信号通路参与缺氧诱导的大鼠PASMCs增殖。     

基于AMPK/mTOR信号通路的细胞自噬对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨在低氧高二氧化碳(hypoxia and hypercapnia,HH)条件下,基于AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的细胞自噬的变化及其对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡的影响。方法：以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后随机分为5组：正常对照(normal control,N)组、模型组(HH组)、溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(D组)、AMPK激动剂阿卡地新(acadesine;5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside,AICAR)组(AI组)和AMPK抑制剂dorsomorphin(compound C,CC)组(CC组)。N组置于常氧环境(21%O₂、5%CO₂和74%N2)下培养24 h,其余4组预先...     

IL-38拮抗RhoA/ROCK信号抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探究白细胞介素(IL)-38对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用和机制。方法将人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)随机分成4组:对照组(不进行任何处理)、PDGF-BB组(加入20 ng/ml重组人PDGF-BB蛋白处理24 h)、PDGF-BB+空质粒组(转染pcDNA3.1空质粒48 h后加入20 ng/ml重组人PDGF-BB蛋白处理24 h)和PDGF-BB+IL-38组(转染pcDNA3.1-IL-38质粒48 h后加入20 ng/ml重组人PDGF-BB蛋白刺激24 h)。MTT法检测细胞活力、Transwell检测细胞迁移、Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、RhoA、Rho相关蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2、肌球蛋白磷酸酶靶标亚基1(MYPT1)和磷酸化MYPT(p-MYPT)蛋白水平的表达。结果与对照组相比,PDGF-BB组中细胞活力,迁移细胞数目,PCNA、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达和p-MYPT/MYPT1的值均增加,差异均具有统计学意义(均P0.05);与PDGFBB组相比,PDGF-BB+空质粒组中这些指标变化无统计学意义(均P0.05);与PDGF-BB+空质粒组相比,PDGF-BB+IL-38组中细胞活力,迁移细胞数目,PCNA、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达和p-MYPT/MYPT1的值均降低,差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论 IL-38能够减弱PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,这种作用可能是通过抑制RhoA/ROCK通路活化发挥作用的。     

露蜂房蛋白抑制大鼠支气管平滑肌细胞增殖的可能机制

目的 观察露蜂房蛋白[NVP(1)]对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法 用原代细胞培养，MTT法, 流式细胞术和免疫印迹法（Western- blotting）检测细胞增殖。结果 6.4×10-3g/L的NVP(1)明显抑制支气管平滑肌细胞增殖，并且阻断在细胞周期的G1期(对照组G1期为64.6％，NVP(1)处理组为90.5％) 。NVP(1)能增强细胞周期蛋白激酶抑制剂（p21）蛋白的表达，降低细胞周期蛋白激酶（cdk2）蛋白的表达。结论NVP(1)阻断支气管平滑肌细胞增殖于细胞周期的G1期。     

低氧对小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及经典型蛋白激酶C表达的影响

目的:原代培养小鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）,探讨低氧对PASMC增殖及经典型蛋白激酶C（cPKC）各亚型表达的影响。方法:原代培养小鼠远端PASMC,实验用4~8代传代细胞。采用免疫印迹、免疫荧光技术检测PASMC中cPKC各亚型的表达情况。将PASMC分为常氧组和低氧组,分别置于普通培养箱（5% CO ...     

Src/Stat3通路在高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖及迁移中的作用

目的:探讨Src酪氨酸激酶(Src)/信号转导子和转录激活子3(Stat3)在高糖(HG)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用。方法:首先将VSMC细胞株A7R5与HG(10~40 mmol/L)共同孵育24h,MTT法及EdU染色检测VSMCs增殖,Transwell小室检测VSMCs迁移,Western blot检测p-Src、Src、p-Stat3和Stat3的蛋白水平。q PCR检测Stat3靶基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Myc、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。为了进一步证实Src在高糖诱导VSMCs增殖和迁移中的作用,将HG与Src抑制剂saracatinib(100 nmol/L)共同孵育24 h,观察Src对HG诱导VSMCs增殖、迁移及Stat3激活的影响。结果:HG能浓度依赖性地促进VSMCs的增殖及迁移并激活Src和Stat3,上调Stat3靶基因cyclin D1、Myc、MMP2及MMP9的表达。抑制Src激活可抑制HG诱导的VSMCs增殖及Stat3的激活,同时下调cyclin D1及Myc的表达。结论:Src/Stat3通路可能在HG诱导的VSMCs增殖及迁移中发挥重要作用。     

山柰酚-3-O-芸香糖苷对血管平滑肌细胞增殖、迁移及TGFBR1信号通路活化的影响

目的:探索山柰酚-3-O-芸香糖苷(KR)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及转化生长因子β受体1(TGFBR1)信号通路活化的影响。方法:将KR(10、20和40μmol/L)孵育大鼠VSMC细胞系A7R5 24 h,或将40μmol/L KR孵育A7 R5细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,Transwell小室实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;分子对接技术探索KR与TGFBR1之间的相互关系,Western blot检测TGFBR1及其下游的Smad2和Smad3的激活情况。结果 :KR剂量和时间依赖性地降低细胞活力,剂量依赖性地减少Ed U染色阳性细胞数量,降低迁移细胞数量,减少迁移相关蛋白MMP2和MMP9的表达(P0.05)。KR与TGFBR1发生分子对接的结合力为-9.804 kcal/mol,与TGBFR1的SER-280、ARG-215、ASP-290和LYS-335氨基酸残基形成氢键连接。KR剂量依赖性地降低TGFBR1及其下游Smad2和Smad3的激活(P0.05)。结论:KR能抑制VSMC的增殖和迁移,其机制可能与抑制TGFBR1信号通路相关。     

α1-肾上腺素受体在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨肾上腺素α₁受体(α₁AR)及β₂受体(β₂AR)在缺氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用及分子机制。方法: 用贴块法培养新生牛肺动脉平滑肌细胞至第6代,并作免疫组化染色鉴定。细胞在6.6% O₂环境中常压缺氧6、12、24 h,用 -TdR掺入法反映DNA合成测定PASMCs的增殖,用Fura-2/AM测定胞内Ca²⁺浓度。用Northern blotting法观察PASMCs的c-fos、c-myc基因表达和α₁AR mRNA、β₂AR mRNA的变化。加用不同的受体激动剂和抑制剂,探讨α₁AR被激活和抑制后,以及β₂AR激活后对上述变化的影响。结果: 单纯缺氧,PASMCs DNA合成即明显增加,α₁AR激活后,增加更明显;而α₁AR抑制后,明显降低(P<0.01)。β₂AR激活时无明显变化。缺氧后胞内游离钙浓度也增高(P<0.01),PASMCs上c-fos和c-myc基因表达增强(P<0.05),α₁AR mRNA和β₂AR mRNA水平均显著增高(P<0.01)。结论: 结果提示缺氧刺激PASMCs,使胞内钙浓度增加,c-fos和c-myc基因表达增强,引起PASMCs增殖,这一增殖是通过α₁AR介导的,但β₂AR不起主要作用。缺氧时α₁AR增多,既促进肺血管收缩,又加强细胞增殖,在缺氧性肺血管收缩和肺血管重建导致的肺动脉高压中起一定的作用