新型重组异种骨移植与其同带血循骨膜联合移植治疗兔骨缺损

目的：探讨新型重组异种骨－复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB)移值及其与带血循骨膜联合移植,修复节段性骨缺损的效果,方法：将基因重组人BMP2（rhBMP2)与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成rhBMP2／BCB,并采用桡骨干1.5cm缺损动物模型,通过线,生物力学,骨密度,组织学等检测手段,对单纯rhBMP／2BCB移植方法及其与带血循骨膜联合移植方法进行对比研究,结果：（1）单纯rhBNP2/BCB移植,可在16wk使节段性骨缺损基本修复,其机制与过程与重组合异种相似;（2）rhBMP2／BCB与带血循骨联合移植,双用8wk即可修复骨损损,其修复机制与骨膜联合移植,仅用8wk即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制,结论：上述二种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以rhBMP2／BCB与带血循骨膜联合移植较为理想,该方法同时具有良好的骨生成,骨传导和骨诱导作用。     

重组合异种骨移植局部白细胞介素-8 mRNA和蛋白质的表达

目的：探讨在重组合异种骨(RBX)移植局部白细胞介素—8(IL-8)mRNA和蛋白质的表达规律．方法：将重组人骨形成蛋白(rhBMP2)复合于牛松质骨中制成RBX并植入小鼠股部肌肉内，于术后4，7，14和21d取材，应用原位杂交和免疫组织化学技术检测植骨局部IL-8 mRNA及蛋白的表达与细胞定位．标准对照组动物植入单纯牛松质骨，并另设空白对照．结果：术后4，7，14和21d，实验组和标难对照组动物植骨局部均可检测到IL—8mRNA及蛋白的表达．叫主要定位于单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和成纤维细胞以及部分软骨细胞、成骨细胞和新生骨髓中部分骨髓细胞．结论：在RBX移植局部多种细胞表达IL—8，提示RBX可能通过新生骨中的多种细胞成分表达IL—8，参与异种骨移植的局部免疫反应。     

复合rhBMP2的异种骨的研制及成骨活性

目的：研制新型具有诱导成骨活性的异种骨植骨材料。方法：在重组合异种骨（RBX）基础上,以基因重组人BMP2（rhBMP2）取代从牛皮质骨中提取的牛BMP,与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB）,并采用小鼠股部肌袋模型,通过组织学、骨计量学方法检测rhBMP2/BCB的诱导成骨活性。结果：实验组（rhBMP2/BCB组）术后7d在小鼠肌袋可诱导软骨生成,14d形成纺织骨,21d改建成板状骨并形成大量骨髓;对照组（BCB组）于术后各时间点均未见有软骨成骨形成。实验组的碱性磷酸酶活性和钙含量均高于对照组,有非常显性差异（P＜0．01）。结论：rhBMP2/BCB具有较好的骨诱导能力,是一种较理想的植骨材料。     

维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠的效果及机理

目的　观察维甲酸诱导雌性大鼠骨质疏松模型的效果 ,并分析其机理。方法　 SD雌性大鼠用维甲酸80 mg/ (kg· d)连续灌胃 15 d,于停药后 0、30和 6 0 d,测量血清 Ca、P、BGP、E2 、IGF- 1、AKP和 TRAP含量、骨组织中胶原和蛋白多糖成分的含量和 BMD,并观察股骨骨形态计量学和骺板软骨组织学变化。结果　大鼠维甲酸诱导 15 d后 ,血清 E2 和 BGP水平下降 ,AKP、TRAP活性增高 ,BMD下降 ;股骨松质骨和皮质骨骨量减少 ,骺板软骨细胞数量减少。停药后 30 d维甲酸组松质骨和皮质骨仍表现骨量减少 ,血清 AKP虽较前降低仍显著高于正常组 ;骺板软骨细胞数量增加 ,血清 BGP升高 ,但仍明显低于正常组 ;血 Ca显著升高 ;停药后 6 0 d维甲酸组股骨松质骨骨量依然显著减少 ,但皮质骨骨量、血清 Ca、BGP、AKP、TRAP含量和 BMD等两组大鼠无明显差异。结论　维甲酸诱导骨质疏松大鼠模型的近期效果好 ,远期效果较差 ;骨量丢失松质骨比皮质骨明显而持久。     

兔骨髓基质细胞在去抗原牛松质骨载体上生长状态的观察

目的 牛松质骨具有天然的多孔结构,微孔规则,相互贯通,是骨组织工程载体的选择之一。本研究观察了体外状态下表面不加修饰的去抗原牛松质骨载体的生物相容性,为骨组织工程研究寻找新的载体提供实验依据。方法 将牛四肢骨干骺端松质骨锯成0．6～0．8cm^3的松质骨块,经过反复水洗(40～50℃)、脱脂、超声振荡、离心、脱蛋白过程,清除牛松质骨内的细胞成份、油脂、骨髓组织及残留血液。选择孔隙直径约为300～700μm,孔隙均匀的骨块,风干后再经砂轮仔细打磨精修,制成约0．5cm^3的去抗原牛松质骨骨块。用兔骨髓基质细胞与载体复合,体外培养7、14d行扫描电镜观察了解细胞的生长情况。结果 1．去抗原牛松质骨载体表面干涩不平,洞沟遍布;2．培养第一周的载体壁上,细胞较少,形态不规则,大小不一,散在于孔壁上,细胞分布不均,无突起伸展贴壁,并可见有细胞死亡后崩解的碎片散在于细胞之间。培养第二周载体孔壁上细胞数量更少,提示有细胞死亡并脱落。结论 体外状态下表面不加修饰的去抗原牛松质骨载体不适于MSC贴壁生长。     

成骨细胞复合去抗原异种松质骨再造骨组织的实验研究

目的:用胶原修饰去抗原牛松质骨载体表面,与成骨细胞复合进行体内异体移植,观察体内成骨效果,探讨其临床应用价值.方法:新鲜牛松质骨经脱脂、H2O2浸渍及部分脱钙处理,制成去抗原牛松质骨载体(antigen-extracted massive bovine cancellous bone carrier,MBC).载体表面经胶原处理后,与兔骨膜成骨细胞复合后体外共同培养,4 w后将复合材料进行异体桡骨移植,于移植后2 w、4 w、8 w和16 w取材,经HE染色观察.结果:植入2 w时,复合材料表面及孔内有成骨组织细胞黏附生长,材料周围可见大量软骨细胞分化,炎症反应不明显;4 w时有新骨成熟成岛状分布;8 w时有骨板形成;到16 w时,骨缺损就已完全修复,MBC部分降解,但在新骨中仍能见到残留体.结论:MBC载体表面经胶原处理后与成骨细胞的生物相容性更强,该材料复合成骨细胞后移植显示出了良好的骨诱导性和成骨活性及生物可降解性,有一定的临床应用价值.     

骨缺损区不同移植物对胫骨平台生物力学性能的影响

目的 比较胫骨平台骨缺损区植入自体带双层皮质骨的松质骨条或自体松质骨颗粒对兔胫骨平台生物力学性能的影响.方法 选择健康中国白兔24只,12～13月龄.将24只实验动物制成右膝胫骨平台负重区骨缺损模型后,随机分成A、B两组,每组12只,A组骨缺损区植入自体带双层皮质骨的松质骨条,周围再植入少量松质骨,B组植入自体松质骨颗粒.12周后处死所有动物,取材后进行大体观察,并进行生物力学测试. 结果 A组术后胫骨关节面均无塌陷,B组术后2例发生胫骨平台塌陷.生物力学测试A组胫骨平台生物力学性能显著高于B组.结论 自体带双层皮质骨的松质骨条植骨修复兔胫骨平台骨缺损区,术后抗塌陷性明显高于自体松质骨颗粒.     

去抗原异种松质骨移植的免疫反应研究

料,因存在剧烈的免疫排斥反应,而限制了其在临床的应用。第四军医大学西京医院骨科罗卓荆等采用经植入物体内致敏的淋巴细胞体外二次刺激增殖实验、酶联免疫吸附实验及组织学观察的方法,研究了大块型及颗粒型两种去抗原处理的牛松质骨在植入BALB/c小鼠体内后的细胞、体液免疫及局部组织反应。 结果表明,未经去抗原处理的新鲜牛松质骨在植入早期即可检测到小鼠脾淋巴细胞的增     

大块异种脱细胞骨基质的制备及生物相容性研究

目的：探讨大块异种脱细胞骨基质的制备及生物相容性,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。方法：取牛股骨下端松质骨切割制作4.0 cm×2.0 cm×1.0 cm大小的骨块,用10%NaCl和0.5%曲拉通X-100联合脱细胞处理,分为48 h、72 h、96 h三个时间段;处理后的大块异种脱细胞骨基质行HE染色、Masson染色及扫描电镜观察,观察大块异种脱细胞骨基质的脱细胞程度;用处理后的大块脱细胞骨基质制作浸提液,行急性毒性实验、热源实验,观察大块异种脱细胞骨基质有没有毒性反应及热源性;用处理后的大块异种脱细胞骨基质材料与SD大鼠骨髓间充质干细胞体外复合培养,观察细胞生长、细胞增殖及蛋白质含量测定。结果：4.0 cm×2.0 cm×1.0 cm骨块经过10%NaCl和0.5%曲拉通X-100联合处理72 h组及96 h组的异种脱细胞骨基质经HE染色及扫描电镜观察未见细胞成分,Masson染色观察胶原纤维基本结构未被破坏,材料浸提液急性毒性实验、热源实验符合规定标准,且骨髓间充质干细胞能够贴附在异种脱细胞骨基质孔隙内生长,细胞生长及蛋白合成功能不受异种脱细胞骨基质的影响。结论：大块异种脱细胞骨基质具有良好的生物相容性,可作为骨缺损修复的支架材料。     

复合rhBMP2的异种骨(rhBMP2/BCB)与骨膜联合移植修复兔桡骨节段性骨缺损

目的：探讨复合基因重组人BMP2的异种骨(rhBMP2/BCB)移植及其与骨膜联合移植修复节段性骨缺损的效果.方法：将rhBMP2与去抗原牛松质骨载体(BCB)复合，制成rhBMP2/BCB；并采用兔桡骨干1.5 cm缺损的动物模型，通过X线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段，比较单纯rhBMP2/BCB移植、rhBMP2/BCB与带血运骨膜联合移植及rhBMP2/BCB与游离骨膜联合移植修复节段性骨缺损的疗效.结果：(1)单纯rhBMP2/BCB移植，可在16 wk使节段性骨缺损基本修复，其修复机制与过程和重组异种骨相似；(2)rhBMP2/BCB与带血运骨膜联合移植，8 wk即可修复骨缺损，其修复机制与骨折修复相仿，包括膜内成骨和软骨成骨两种机制；(3)rhBMP2/BCB与游离骨膜联合移植，在骨缺损修复早期(≤12 wk)，其成骨速度及成骨质与量均优于单纯rhBMP2/BCB移植，约在12 wk使骨缺损基本修复.结论：上述3种方法均可有效地修复节段性骨缺损，但以rhBMP2/BCB与带血运骨膜联合移植较为理想.该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用. (王小仲)     

Experiment study on combined free periosteum grafting and new reconstituted bone xenograft in repairing segmental defects

Segmental bone defects in long bones often pose achallenge tO their sMcal ~nt, and the vasculallzedperiosted po used either alone or in combination withother ~ materials has been Preferred as a uSeals solution to this Problems"'l. HOwever, the use Of vascularized graft has to resort to ndcrosuopcal tecboqUes, Whichmakes it difficult tO populallze this OPe~ in the graSsests level intitutions. We Pimeeded with combined useOf free Periosteum and new reconshtuted bine xenograft(NRBX) in re…     

H2O2处理大块牛松质骨后成分分析

目的：研究大块牛松质骨（MBCB)处理后的各种成分及高浓度H2O2消除异种骨抗原性机制,方法：采用干燥失重法及殖渣法检测经过系统去抗原处理后的大块异常骨的有机,无机质及水份含量,将25块大块新鲜牛松质骨均分为5组,分别用高浓度H2O2浸泡0,24,48,72和96h,采用氨基酸分析方法研究不同H2O2处理时间的骨块中羟脯氨酸,脯氨酸含量,结果：经处理后,MBCB为色白,并呈现出多孔样结构,扫描电镜观察,松质骨呈清晰的多孔结构,孔壁光滑,5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸的含量随有H2O2处理时间的延长均有同步下降的趋势,但各组间无显性差异（P＞0．05）,5组检测样品中18例氨基酸含量及氨基酸总量随着H2O2处理时间的延长亦有同步下降的趋势,仅0h与96h组间18种氨基酸以及总氨基酸含量有显性差异（P＜0．05）,其余各组间无显性差异（P＞0．05）,5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸在总氨基酸总量所占比例随差H2O2处理时间的延长无明显变化,各组间无显性差异（P＞0．05）,结论：大块异种骨经系统去抗原处理后,保持了一定的有机及无机质比列,即具有良好的力学特性又消除了其抗原性,提示高氧化剂引起蛋白质变性是消除大块异种骨抗原性的主要原因。     

血清IgG水平正常的系统性红斑狼疮临床特点

目的探讨血清免疫球蛋白G（IgG）水平正常的系统性红斑狼疮（SLE）的临床特点,提高对血清免疫球蛋白水平正常的SLE认识。方法回顾性分析259 例初诊SLE患者,比较血清IgG 水平正常组和血清IgG水平升高组的肾外临床表现,狼疮肾炎表现,血沉（ESR）、超敏C 反应蛋白（hs-CRP）、免疫学指标及系统性红斑狼疮疾病活动度（SLEDAI）评分的差别,分析血清IgG 水平与血清补体C3、C4 水平及SLEDAI 积分的相关性,并分析血清IgG水平与尿蛋白、尿IgG水平的相关性。结果①IgG 正常组非感染性发热、脱发、关节炎及贫血的发生率低于IgG 升高组（p <0.05）,而血小板减少的发生率高于IgG 升高组（ p<0.05）;②两组狼疮性肾炎发生率相似,但IgG 正常组的尿蛋白、尿IgG水平高于IgG 升高组（p <0.05）,IgG正常组肾病水平蛋白尿、血尿的发生率高于IgG 升高组（p <0.05）。尿蛋白水平、尿IgG 水平与血清IgG 水平呈负相关性（p <0.05）;③IgG 正常组的ESR、hs-CRP 水平低于IgG 升高组（p <0.01）。IgG 正常组血清IgG、IgA 及IgM 水平低于IgG 升高组（p <0.01）。IgG正常组ANA、dsDNA、sm、AnuA 阳性率低于IgG 升高组（p <0.05）。两组C3 水平、C3 下降发生率比较差异无统计学意义（p >0.05）,两组SLEDAI积分比较差异无统计学意义（p >0.05）。两组血清IgG 水平与C3、C4 水平及SLEDAI 评分无直线相关性（ p>0.05）。结论血清IgG 水平正常的活动性SLE 患者并不少见,其肾脏损害相对明显,而SLE相关的自身抗体阳性率较低。IgG 水平与狼疮疾病活动度不相关。     

婴幼儿重症肺炎支原体肺炎的临床和免疫功能研究

目的 探讨婴幼儿重症肺炎支原体肺炎（MPP）临床和免疫功能变化。方法 采用酶联免疫法（ELISA）检测35例MPP患儿肺炎支原体（MP）特异IgM、IgA，速率散射比浊法测定免疫球蛋白IgG及其亚类，荧光法检测T细胞亚群，并对临床表现和实验室结果进行分析，选取同期健康婴幼儿42例作为对照组。结果 重症MPP组患儿的CD3^＋、CD4^＋细胞数，CD4^＋／CD8^＋和C3含量小于对照儿，而IgA、IgM、循环免疫复合物（CIC）、CD8^＋细胞数高于对照儿，差别有非常显著性意义（P〈0．01）．IgG及亚类间差别无显著性意义（P〉0．05）。结论 重症MP感染患儿免疫功能的变化主要表现为CD3^＋、CD4^＋受抑，免疫功能低下可能是导致其发病的原因之一。     

去抗原牛松质骨块/bBMP复合材料修复兔长骨骨缺损

探讨大块异种骨的制备及其在修复节段性骨缺损中的作用。方法将大块的牛松质骨制备成消除抗原性的载体,与牛骨形态发性蛋白（ＢＭＰ）组合构成去抗原牛松质骨块／ｂＢＭＰ复合材料,采用兔桡骨１５ｍｍ节段性骨缺损模型,研究去抗原质骨块／ｂＢＭＰ复合材料在修复骨缺损中的作用。     

BMP、VEGF复合异种骨修复大段骨缺损的实验研究

目的　探讨骨形态发生蛋白 (BMP)结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF)修复兔桡骨大段骨缺损的效果。方法　以聚乙烯吡咯啉酮 (PVP)作为VEGF的可溶性载体 ,以小牛松质骨为固体载体 ,制成小牛松质骨 BMP PVP VEGF、小牛松质骨 PVP BMP、小牛松质骨 PVP VEGF以及小牛松质骨 PVP载体 4种复合物 ,分别植入兔桡骨中段 15mm骨缺损处 ,在术后3,8,12周 ,通过大体解剖、X线片、病理组织切片、生物力学测试等方法观察各组骨愈合、力学强度。结果　在术后 3,8,12周 ,病理组织切片及X线片显示骨缺损修复程度小牛松质骨 BMP PVP VEGF组明显优于其余 3组。生物力学测试显示术后 12周小牛松质骨 BMP PVP VEGF组抗扭转强度明显优于其余 3组 ,近似于正常骨。结论　BMP和VEGF联用有明显促进骨缺损修复的作用 ,效果明显优于单纯应用BMP、VEGF和松质骨载体。     

重组合异种骨移植同源抗原刺激对脾细胞上清液中IL-2的影响

为探讨重组合异种骨（RBX）移植对机体免疫功能的影响，以RBX、牛BMP、经处理的同源松质骨粒、羟基磷灰石移植建立4组BALB／C小鼠股后肌袋模型．术后2、7、14、28、42天杀鼠取脾细胞．留取上清液．3H-TdR掺入法时体内植骨及体外同源抗原刺激后IL-2生物学活性进行了研究．结果表明：①RBX（BMP）移植后2天IL－2一过性升高；②术后7、14天IL-2水平显著降低；③体外抗原刺激各时间点3H-TdR掺入cpm值明显降低，且与抗原量呈剂量依赖关系．上述结果提示，RBX移植对T淋巴细胞和IL－2诱导CTLL增殖有明显的抑制效应，可能对IL-2也有直接的抑制作用．作者认为，本研究对用RBX移植后既能成骨及不发生明显免疫排异的机理是一种有意义的探讨，为临床使用提供了免疫学上的依据．     

感染性骨不连伴大段骨缺损的治疗

目的 探讨颗粒状松质骨移植治疗感染性骨不连伴大段骨缺损的效果.方法 对19例(20个部位)感染性骨不连伴大段骨缺损患者进行清创、外固定、颗粒状松质骨移植方法 治疗,其中自体骨移植14例(15个部位),异体骨移植5例.结果 平均随访32.7个月(20～56个月).5例异体骨移植患者均无感染复发,其中3例获得骨愈合,外固定指数是(2.22±0.84)个月/cm;2例发生骨不连,再次手术取自体松质骨植骨获得骨愈合.14例(15个部位)自体骨移植患者,2例(2个部位,13.3%)感染复发导致植入骨吸收骨不连,接受再次清创自体骨移植获得骨连接、感染消灭;12例(13个部位,86.7%)骨愈合患者,外固定指数是(1.96±0.74)个月/cm.共3例(4个部位)发生再骨折,分别接受石膏固定、外固定支架及内固定获得骨愈合.结论感染性骨不连伴大段骨缺损采用自体颗粒状松质骨移植是合适的;异体骨移植骨不连发生率高、外固定时间长,应慎用.