应用单抗GCF-5观察骨巨细胞瘤细胞成分

采用免疫细胞化学和免疫电镜方法,以我室制备的抗骨巨细胞瘤(GCT)肿瘤细胞的单克隆抗体GCF-5,对41例GCT及其它肿瘤细胞进行观察,结果表明:41例中的35例GCT标本与GCF-5结合呈阳性反应;除1例骨肉瘤细胞系(OS-732)细胞为阳性反应外,其它骨肿瘤均为阴性反应。经免疫金染色后电镜下,在阳性细胞表面可见金颗粒,证明GCF-5抗体是抗细胞表面抗原的单克隆抗体,GCF-5与GCT中部分基质细胞(STC)结合,除与一些双核细胞和核数少的多核巨细胞(MGC)结合外,与绝大多数的MGC不发生反应,但能与GCT体外培养、多次传代后的MGC发生反应。均支持本作者以前的观点,即GCT中的MGC与STC各自包含两种截然不同的细胞成分:肿瘤细胞和与肿瘤免疫有关的细胞,仅肿瘤细胞成分能在体外培养中生长、增殖。     

脊柱骨巨细胞瘤的病理研究

本文对7例脊柱原发性骨巨细胞瘤(GCT)进行了光镜(LM),组化和免疫组化研究,其中2例进行了电镜(EM)观察。LM和EM显示GCT由单个核细胞(MC)和多核巨细胞(MGC)组成。MC包括成纤维细胞(FB)、组织细胞(HC)、原始间叶细胞、中间型细胞、黄色瘤细胞和肌纤维母细胞(MFB),并见原始间叶细胞过渡为不同分化的FB和HC。MGC由MC融合而成,多数为HC型,少数为兼有FB和HC的混合型。我们认为GCT起源于原始间叶细胞;HC、FB和MFB属肿瘤性细胞,MGC属反应性细胞。     

微丝在体外培养四种不同细胞表达的形态观察

【目的】探讨微丝在4种不同细胞内的形态分布。【方法】体外培养人胃低分化粘液腺癌(MGC80 3)细胞系、人肝癌(SMMC772 1)细胞系、原代培养人皮肤成纤维细胞(HSF)和大鼠骨髓间充质干细胞(MSC) ;用考马斯亮蓝显示四种细胞内的微丝,通过光学显微镜观察微丝分布的状态。【结果】MGC80 3细胞系和人肝癌SMMC772 1细胞系内,微丝较细且均匀分布,原代培养的HSF和MSC细胞内微丝较为粗大,分布不均匀。【结论】微丝分布与细胞的粘附状态和细胞形态有密切关系。     

复方莪术对MGC80—3胃癌细胞的影响

采用MTT比色分析,~3H—TdR掺入及电镜观察复方莪术对MGC80—3胃癌细胞的影响。结果发现复方莪术能明显杀伤人低分化胃腺癌MGC80—3细胞,较低浓度即呈现明显细胞毒效应,IC_(50)为1∶150稀释度。~3H—TdR掺入试验表明:复方莪术能明显抑制MGC80—3胃癌细胞DNA的合成,掺入抑制率为78.5%。透射电镜下发现实验组细胞膜破裂,胞浆消失,呈裸核。     

两种培养基的培养体系对CIK细胞增殖和功能的影响

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖情况,检测CIK细胞的表面分子表型和体外对白血病细胞K562的杀伤作用.方法 通过用H3培养基培养的分别来源于脐带血和患者自体外周血分离的单个核细胞(PBMC),添加重组人γ干扰素(IFN-γ)与CD3单抗,体外诱导CIK细胞,在培养的第7天分别加入H3培养基和T551培养基继续诱导培养至14 d.计数观察CIK细胞增殖能力,流式检测细胞表面CD3、CD56的表达情况,CCK8法检测两组培养基条件下对白血病细胞K562的杀伤效果.结果 动态计数及表型分析结果表明,H3及H3+T551培养的CIK细胞扩增倍数(包括脐带血CIK总细胞数和自体CIK总细胞数)在第14天均分别达到76.9倍、62.3倍;两种培养条件下脐带血CIK细胞中CD3+ CD56+双阳性细胞含量分别是(16.70±2.72)％和(10.80±2.59)％,自体CIK细胞中CD3+ CD56+双阳性细胞含量分别是(11.23±6.64)％和(10.70±6.42)％;体外杀瘤实验表明,当效靶比为5∶1时,H3培养的脐带血CIK细胞杀伤率达到(33.50±9.99)％,显著高于H3+T551培养脐带血CIK细胞的(20.3±6.76)％,差异有统计学意义(P=0.011),而H3和H3+T551培养的自体CIK细胞杀伤率分别是(59.67±27.59)％和(42.13±19.47)％,差异无统计学意义(P=0.080).结论 H3培养的脐带血和自体CIK细胞具有较强的体外抗白血病癌细胞活性,可应用于临床上白血病的过继性免疫治疗.     

水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞系MGC803增殖的分子机制

目的 探讨水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞MGC803细胞的生长增殖的分子机制.方法 体外缺氧条件下体外培养胃癌细胞系MGC803,用不同浓度水飞蓟宾处理后,采用MTT检测水飞蓟宾对MGC803细胞增殖的影响,Western blot检测Akt的磷酸化.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)的分泌情况.结果 0~250μmol/L蓟宾可显著抑制胃癌细胞MGC803增殖,但0~100μmol/L水飞蓟宾对Akt磷酸化以及VEGF分泌无明显影响,而250μmol/L水飞蓟宾可诱导MGC803细胞磷酸化并抑制VEGF分泌.结论 水飞蓟宾可能通过影响PI3K/Akt磷酸化以及VEGF的分泌而发挥抗肿瘤活性.     

索拉非尼对胃癌细胞MGC80-3抑制作用实验研究

目的：探讨索拉非尼对体外培养人胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的作用以及作用机制。方法采用二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT法)检测不同浓度索拉非尼作用人胃癌MGC80-3细胞的抑制作用;AnnexinV/PI双染法观察药物处理后细胞凋亡率变化。结果索拉非尼对人胃癌MGC80-3细胞增殖具有明显抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(孕<0.05)。结论索拉非尼能够诱导细胞凋亡,并随浓度增高凋亡率增加。     

虫草类的免疫药理研究 Ⅴ.蝙蝠蛾拟青霉人工发酵培养物对小鼠T细胞及其亚群功能的影响

采用(~3H)-TdR(胸腺嘧啶核苷)掺入法,观察了蝙蝠蛾拟青霉人工发酵培养物(简称拟青霉)对小鼠T细胞及其亚群功能的影响。结果拟青霉能显著抑制小鼠淋巴细胞转化反应;在体外能显著增强刀豆索A(ConA)诱导的小鼠抑制性T细胞的功能,无淋巴细胞毒性作用;在体内显著增强自发性抑制性T细胞的功能。结果提示拟青霉能选择性地作用于Ts细胞亚群而发挥免疫调节作用。     

大葱提取液抗人胃癌作用的细胞周期特点

目的观察大葱提取液抗胃癌作用的细胞周期特点。方法将大葱提取液作用于体外培养的人胃癌细胞MGC803后,采用电镜观察MGC803细胞超微结构变化;应用流式细胞仪分析MGC803细胞DNA含量及周期分布,检测其分化与凋亡情况。结果(1)透射电镜下观察:大葱作用后的癌细胞细胞膜完整,出现分化和凋亡的形态学变化。(2)流式细胞仪检测:1.25%大葱提取液作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h,凋亡率分别为0.6%、1.6%、6.1%、13.5%,二倍体比例分别为0%、0.3%、35.8%、93.9%;1.25%、2.5%、5.0%、10.0%大葱提取液作用24h,凋亡率分别为0.6%、4.1%、6.2%、24.9%,二倍体比例分别为0%、10.6%、34.7%、72.2%。低浓度组以诱导分化作用为主,高浓度组同时可诱导细胞凋亡,呈剂量和时间依赖性。实验组细胞随大葱液浓度和作用时间增加,异倍体细胞比例逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加。DNA含量出现二倍体峰和亚二倍体峰~凋亡峰。大葱提取液抑制胃癌细胞可发生在G0/G1期、S期和G2/M期,无周期特异性。结论大葱提取液能明显抑制体外培养的胃癌细胞生长增殖,既可诱导胃癌细胞分化,又可诱导胃癌细胞凋亡,抗癌作用无周期特异性。     

血小板衍生性生长因子对体外培养人肾小球系膜细胞生长的影响

为观察血小板衍生性生长因子(PDGF)对体外培养的人肾小球系膜细胞生长、基质合成和分泌以及c-myc癌基因表达的影响,在培养液中掺入5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU),采用BrdU单克隆抗体免疫组化法检测肾小球系膜细胞的增殖情况;采用~3H脯氨酸掺入酶消化法测定肾     

壁虎粗多肽对3种消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的 探讨壁虎粗多肽(GCPS)对消化道肿瘤细胞体外增殖的抑制作用.方法 用不同浓度 (0.375、0.75、1.0、1.5、3.0 mg/mL) 的GCPS处理食管癌细胞EC109、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC803,于24、48、72 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,并使用MTT法观察GCPS对3种人消化道肿瘤细胞增殖的影响.结果 与空白对照组比较,在倒置显微镜下可观察到GCPS作用24、48、72 h后的细胞形态有不同程度的改变.MTT法结果显示GCPS具有抑制人消化道肿瘤细胞增殖作用,且作用呈浓度和时间依赖性;48 h后GCPS作用于上述3种细胞的IC50为1.1、1.2 和1.6 mg/mL.结论 壁虎粗多肽可抑制HepG2、EC109和MGC803这3种消化道肿瘤细胞增殖.     

重楼总皂苷对人胃癌MNK45和MGC803细胞增殖的影响

目的观察重楼总皂苷(Rhizoma paridis total saponins,RPTS)对人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖的影响。方法设定5个不同浓度(5、10、20、40、80μg/ml)RPTS处理两种细胞24、48、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定MNK-45细胞和MGC80-3细胞增殖抑制率;设定浓度为10μg/ml处理两种细胞24h,采用吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双染观察细胞形态学变化;设定浓度为10、20μg/ml处理两种细胞6h,用流式细胞仪测定细胞周期。结果 5～80μg/mlRPTS对MNK-45和MGC80-3细胞增殖均具有显著的抑制作用(P<0.05,或P<0.01),且药物剂量越大、作用时间越长,其抑制作用越强(P<0.01);在相同药物浓度及相同作用时间下,RPTS对MNN-45细胞增殖的抑制作用较对MGC80-3作用显著增强(P<0.01);RPTS作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;RPTS使MNK-45细胞增殖被阻滞于G0/G1期,使MGC80-3细胞增殖被阻滞于S期。结论 RPTS能抑制人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖,诱导两种肿瘤细胞凋亡,影响两种肿瘤细胞周期时相的分布,但对两种肿瘤细胞株的抑制作用和对细胞周期时相的影响存在差异。     

~3H—TdR掺入法研究细胞内DNA代谢的动态过程

胸腺嘧啶核苷(Thymidine以下简称TdR)是DNA合成所需要的特异前身物,细胞的增殖速率与TdR掺入DNA的速率基本一致。~3H标记的化合物~3H—TdR可以取代正常底物TdR被细胞无选择地吸收,并掺入细胞的代谢产物DNA中。利用这一原理,本文取20±2g雄性昆明     

引种巴西甘薯叶抗肿瘤活性部位的筛选

目的：提取巴西甘薯叶不同极性部位(SM,SM-A,SM-B),进行抗肿瘤活性及剂量相关性研究。方法： 以体外培养的人肝癌细胞Hep3B、肺癌细胞A549、胃癌细胞MGC803为研究对象,MTS法分别测定不同极性部位 SM,SM-A,SM-B对以上各细胞株增殖活性的影响。结果：SM,SM-A,SM-B对3种肿瘤细胞均有一定的抑制作用; SM-B活性最强,对上述各肿瘤细胞的抑制活性表现为MGC803>A549>Hep3B,其IC50分别为15.17 mg/L(P<0.05), 72.64 mg/L(P<0.05)和165.47 mg/L (P<0.05)。结论：巴西甘薯叶具有一定的抗肿瘤活性,SM-B为主要活性部位。     

~3H—TdR掺入法测定淋巴细胞转化在肿瘤分患者的初步观察

末梢血T淋巴细胞的体外培养,在特异性抗元或非特异性刺激物(如PHA)的刺激下,可以转化为淋巴母细胞,DNA和RNA合成明显增多。~3H—TdR是DNA合成的前体物,而DNA又是淋巴细胞转化的物质基础。在淋巴细胞培养中投入~3H—TdR,经一定时间孵育后,测定~3H—TdR掺入细胞中多少,客观地从细胞复制DNA能力的大小而精确地判定淋巴细胞转化的程度,以此来测定机体的细胞免疫功能。本文应用同位素掺入法对正常人和部分肿瘤病人作微量血液淋巴细胞转化试验,同时对PHA的体内(皮试)及体外(淋转)试验作比较。     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对NF-κB p65表达的影响

目的研究环孢素A(CsA)诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡作用以及对NF-κB p65表达的影响。方法倒置显微镜观察CsA高剂量(5、10、15、20μmol/L)组与CsA低剂量(1、2、4、8μmol/L)组处理MGC80-3细胞24 h后细胞形态变化;MTT比色法分别检测两剂量组处理24 h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,以细胞生长抑制率≤5%评价CsA的非毒性剂量;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测CsA高、低剂量组处理后的细胞凋亡率;Western blot法检测CsA高、低剂量组细胞内NF-κB p65的表达。结果 CsA低剂量组处理MGC80-3细胞24 h后显微镜下见细胞生长状况良好,CsA高剂量组见多数细胞生长贴壁不牢、皱缩变圆及坏死脱落的现象。CsA高剂量组对MGC80-3细胞增殖有抑制作用,而CsA低剂量组显示在4μmol/L浓度范围以下对细胞增殖无明显抑制作用。FCM检测表明CsA低剂量组诱导细胞凋亡率与空白组相比差异无显著性,随药物作用剂量增加CsA高剂量组诱导细胞凋亡作用增强。Western blot法表明CsA高剂量组作用后NF-κB p65表达逐渐降低(P<0.05,P<0.01),而CsA低剂量组NF-κB p65的表达基本不变。结论 CsA诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡作用与药物作用浓度呈剂量效应关系,CsA可能通过抑制NF-κB信号通路诱导MGC80-3细胞凋亡。     

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞糖酵解的影响

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)对胃癌细胞糖酵解的影响及分子机制。方法 通过检测胃黏膜上皮细胞GES-1与6种胃癌细胞(MKN28、AGS、HGC27、MGC803、MKN45、NCI-N87)的葡萄糖消耗速率和乳酸产量,确定GES-1和两种胃癌细胞MKN28、AGS为后续研究对象。将GES-1、MKN28和AGS细胞分别与H.pylori(H.pylori-HVS、H.pylori-26695、H.pylori-△cagA)共培养,构建H.pylori急性和慢性感染的细胞模型,将未感染H.pylori的3种细胞设置为对照组。在所有细胞模型中检测葡萄糖消耗、乳酸生成和葡萄糖摄取,并且通过Western blotting检测糖酵解关键酶的蛋白表达水平。结果 与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,多种胃癌细胞(AGS、HGC27、MGC803、MKN45、NCI-N87)中葡萄糖消耗和乳酸生成上调,差异均有统计学意义(P均<0.001)。与未感染H.pylori的对照组细胞比较,H.pylori急性感染不影响GES-1和两种胃癌细胞MKN28、AGS的葡萄糖摄取和乳酸生成,差异...     

福尔奔胶囊对人成骨肉瘤细胞HOS TE85增殖及Ⅰ型胶原产生的影响

目的　通过体外培养的人成骨肉瘤细胞HOSTE85 ,观察福尔奔胶囊 (Fullbone)对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原产生的影响。方法　在体外培养的人成骨肉瘤细胞HOSTE85培养液中 ,加入Full bone (1～ 10 0 0 0 μg/L) ,分别培养 2 4、4 8、72、96h ,于结束培养前 6h ,加入3H -脱氧胸腺嘧啶检测细胞增殖 ;或于细胞开始培养时 ,加入3H -脯氨酸检测Ⅰ型胶原产生。结果　在 4 8、72h ,Fullbone明显抑制细胞增殖 ,量效关系显著 ;在 4 8、72、96h ,Fullbone明显刺激细胞Ⅰ型胶原产生 ,量效关系显著。结论　Fullbone对人成骨肉瘤细胞HOSTE85增殖具有抑制作用 ,对Ⅰ型胶原产生具有促进作用 ,这可能是其临床治疗更年期骨质疏松的作用机理。     

巨噬细胞刺激人胃癌MGC803细胞生长与促血管生成活性的研究

目的:研究人白血病单核巨噬细胞THP-1对人胃低分化黏液腺癌MGC803细胞生长与促血管生成因子VEGF表达的影响.方法:通过流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,RT-PCR检测MGC803细胞VEGF表达情况.结果:免疫细胞化学分析发现,与对照组比较,处理组VEGF表达明显增强,其中以非直接联合培养组为最强;RT-PCR检测发现,MGC803细胞能表达VEGF mRNA 4种剪切体VEG F121、VEGF145、VEGF165、VEG189;各处理组4种剪切体表达均有增强,且都以非直接联合培养为最强.流式细胞仪检测处理组MGC803细胞S期细胞百分比均有增加,其中以非直接联合培养组最高.结论:THP-1细胞条件培养基处理、与THP-1细胞非直接联合培养能促进MGC803细胞的增殖活性及细胞周期G1-S期转变.MGC803细胞能表达VEGFmRNA的4种剪切体;THP-1细胞条件培养基处理、与THP-1细胞非直接联合培养能促进MGC803细胞VEGF表达.     

吐温化合物对人胃癌MGC803细胞生长的影响

目的　研究吐温化合物对人胃癌MGC80 3细胞生长的影响 ,确定诱导分化剂二烯丙基二硫 (DADS)的溶媒。方法　采用MTT比色、生长曲线分析、细胞活力检测和流式细胞仪观察溶媒Tween2 0、Tween 80与二烯炳基二硫 (DADS)对MGC80 3细胞生长的影响。结果　Tween 80稀释浓度由 1 0 0 0倍～ 1 60 0 0倍时 ,其他浓度组均具有抑制作用 ,并呈浓度依赖性 (IR 6.2 %～ 92 .6% ,P <0 .0 5 )。Tween2 0稀释浓度由 5 0 0 0倍～ 30 0 0 0倍时 ,均对MGC80 3细胞具有促生长作用 (PR 3.6%～ 1 6.1 % ,P <0 .0 5 )。Tween 80稀释浓度 32 0 0 0倍对MGC80 3细胞生长、生长曲线、细胞群体倍增时间、细胞周期均无影响 ,与对照组、DADS处理组细胞存活率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而以此作为溶媒的不同浓度DADS具有抑制MGC80 3细胞生长的效果 ,与对照组和Tween 80组的差异均具有显著性 (P <0 .0 5 ) ,抑制率呈现时间 -效应依赖关系 (P <0 .0 5 ) ,对细胞群体倍增时间延长 (P <0 .0 5 ) ,并且可阻滞MGC80 3细胞于G2 /M期。结论　Tween 80具有抑制MGC80 3细胞生长作用 ,而Tween2 0对MGC80 3细胞具有促生长作用。选择Tween 80稀释浓度 32 0 0 0作为DADS溶媒 ,用于DADS对人胃癌MGC80 3细胞影响的研究比较合适。