HSPB1对H2O2诱导大鼠心肌细胞损伤中线粒体膜电位的影响

目的:观察热休克蛋白B1(heatshockproteinB1,HSPB1)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤过程中线粒体膜电位(DY)的影响,从线粒体水平阐明HSPB1保护心肌细胞抗氧化损伤机制。方法:以本室建立的稳定转染人HSPB1的大鼠心肌细胞系H9c2(HSPB1H9c2)和空载体转染的H9c2(CON)为实验对象,300μmol/LH2O2刺激2、4和8h后,倒置光学显微镜观察细胞形态学变化,荧光探针JC鄄1测定线粒体膜电位。结果:HSPB1高表达显著抑制了H2O2诱导的典型凋亡形态学改变;HSPB1高表达使线粒体膜电位升高42%以上(P<0.001);HSPB1高表达显著抑制线粒体膜电位下降,H2O2刺激2、4、8h后,HSPB1H9c2和CON的线粒体膜电位分别降至刺激前的69.5%和66.5%(P<0.05),74.4%和67.0%(P<0.05),70.7%和58.1%(P<0.05)。结论:HSPB1有效抑制了氧化应激诱导的以凋亡为主的细胞损伤和线粒体膜电位丧失,提示线粒体膜电位的稳定可能参与了HSPB1抗心肌细胞的氧化损伤机制。     

氯化镉诱导大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡的作用机制

目的：研究不同浓度氯化镉（CdCl₂）引起大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡及机制。方法：将培养的大鼠心肌细胞H9c2分为阴性对照组和镉处理组,阴性对照组为DMEM培养液,镉处理组分别暴露于 5﹑10﹑30﹑50和80 μmol•L^-1 CdCl₂ 作用6、12和24 h,采用MTT法检测细胞存活率;Annexin Ⅴ-FITC/ propidium iodide (PI)流式细胞技术(FCM)、丫啶橙（AO）/ 溴化乙啶（EB）双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果：镉处理组细胞存活率随着剂量的加大及时间延长明显下降,与阴性对照比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）;CdCl₂可引起H9c2细胞凋亡,各剂量组凋亡率明显高于阴性对照组（P<0.001）,各剂量组之间凋亡率差异无显著性（P>0.05）;AO/EB 染色镜下可见H9c2细胞呈典型早期凋亡形态学改变。结论：H9c2 细胞对CdCl₂的作用较敏感,低剂量﹑短时间作用即可引起细胞凋亡,但 H9c2 细胞对CdCl₂有一定耐受性。     

川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖中CaM和CaN活性的影响

目的探讨不同浓度川芎嗪在不同作用时间内对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的VSMCs(VSMCs)增殖的抑制作用.方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对VSMCs中钙调蛋白(CaM)和钙调神经磷酸酶(CaN)活性影响.结果成功建立AngⅡ诱导的VSMCs增殖模型,川芎嗪各组CaM和CaN活性随川芎嗪的浓度和作用时间的延长而显著下降(P＜0.01).结论川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖的抑制作用有剂量和时间依赖性,其抑制机制可能与其干预CaN依赖的信号转导途径有关.     

黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

【目的】探讨黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能机制。【方法】将H9c2心肌细胞分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+黄芪注射液组。以AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡为模型。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术测定细胞凋亡情况;三磷酸腺苷（ATP）比色/荧光法检测细胞中ATP含量的变化;钙离子荧光探针（Fura-2AM）法检测细胞内钙离子含量;实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)及葡萄糖调节蛋白75(GRP75)基因的表达;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞VDAC1、Mfn2、GRP75的蛋白表达。【结果】与对照组比较,AngⅡ组细胞凋亡率,ATP含量,钙含量,Mfn2、GRP75 mRNA表达水平,VDAC1、Mfn2、GRP75蛋白表达水平升高,VDAC1 m RNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）;与AngⅡ组比较,AngⅡ+黄芪注射液组细胞凋亡率,ATP含量,钙含量,Mfn2、GRP75 m RNA表达水平,VDAC1...     

ALP小分子抑制剂对脑神经胶质瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨ALP小分子抑制剂对脑神经胶质瘤细胞凋亡作用的影响。方法:采用JC-1染色检测线粒体膜电位的变化及流式细胞术法检测C6脑神经胶质瘤细胞凋亡率。结果:ALP小分子抑制剂对C6脑神经胶质瘤细胞具有明显的抑制作用,并在48 h作用最为明显。荧光显微镜下观察:ALP小分子抑制剂抑素(2 000μg/ml)治疗组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低;细胞凋亡率明显增加分别与空白对照及ALP小分子抑制剂(1 000μl/ml)治疗组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ALP小分子抑制剂可能通过降低细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长作用。     

JNK抑制剂对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 观察特异性JNK抑制剂对H2O2诱导凋亡的培养乳鼠心肌细胞的保护作用，探讨热休克蛋白70（HSPT0）对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法 培养大鼠乳鼠心肌细胞，随机分为4组，即正常对照组、H2O2损伤组、热休克组和JNK抑制剂组。应用免疫组化技术检测HSP70的表达；用透射电镜观察心肌细胞超微结构变化；用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡百分率。结果 热休克预处理后HSP70在细胞浆内大量表达。JNK抑制剂明显抑制心肌细胞的凋亡率。结论 热应激预适应和JNK抑制剂对心肌细胞都具有保护作用，其保护机制可能与热应激时HSP70在心肌细胞内大量表达从而抑制了JNK的信号转导有关。     

丹红注射液抗H9c2细胞凋亡的作用机制研究

[目的]从线粒体损伤角度研究丹红注射对异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响。[方法]培养H9c2细胞,分为对照组、10 μmol/L ISO模型组,10 μmol/L ISO和20、200 μL/L丹红注射液组。按相应给药时间后采用流式细胞术检测细胞凋亡,明确药物对细胞凋亡的作用。活细胞荧光成像仪检测细胞线粒体膜电位变化、激光共聚焦检测细胞内活性氧簇（ROS）的产生、Fluo-3 AM ester荧光染料染色检测细胞内钙离子浓度研究丹红注射液抗心肌细胞凋亡的相关作用机制。[结果]与对照组（1.33%±0.42%）相比,ISO显著上升细胞凋亡率（5.13%±0.15%）（P<0.01）;与ISO组比较,20、200 μL/L丹红注射液后,细胞凋亡率分别下降为（4.23%±0.15%）和（2.37%±0.38%）。与对照组相比,给予ISO后细胞内线粒体膜电位去极化程度显著增加,为对照的（151.76%±16.01%）（P<0.01）,20、200 μL/L丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内线粒体膜去极化,分别为对照的（121.07%±11.53%）和（117.15%±12.91%）。此外,丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内ROS浓度及钙离子浓度的升高,差异具有统计学意义。[结论]丹红注射液可通过抑制ISO引起的细胞内线粒体膜电位去极化、降低细胞内ROS和钙离子浓度而发挥其抗H9c2细胞凋亡作用。     

Quercetin in combating H2O2 induced early cell apoptosis and mitochondrial damage to normal human keratinocytes

Background Oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of epidermal diseases. This study aimed to investigate the effects of quercetin on the anti-oxidative response and on mitochondrial protection in cultured normal human keratinocytes. Methods Cultured HaCaT cells were treated with different concentrations of H202 （0, 50, 100, 250, 500 pmol/L） for different periods of time （0.5, 1, 2, 4 hours） to establish an oxidative stress model. The cultured HaCaT cells were randomly assigned to control, H2O2, and quercetin＋H2O2 groups. For the quercetin groups, the cells were treated with different concentrations of quercetin （0, 10, 25, 50 umol/L） before exposure to H2O2. Morphological changes of the cells were observed under an inverted microscope and an electron microscope. The cell viability was detected by the MIF method. The cell apoptosis （AnnexinV/propidium iodide double stain） and mitochondrial membrane potential （△ψm） changes were detected by flow cytometry. Results An oxidative stress model of HaCaT cells was established under a suitable concentration （250 umol/L） and treated time of H2O2 （2 hours）. The cell viability and △ψm decreased in a concentration-dependent and time-dependent manner while the percentage of apoptotic cells significantly increased in the H2O2 groups compared with the control group （P 〈0.05）. The cell viability and △ψm of the quercetin treated group increased （P 〈0.05） and the percentage of apoptotic cells decreased at concentrations of 1-50 umol/L quercetin （P 〈0.01） compared with H2O2 treated group. Conclusion Quercetin can relieve the cell damage and apoptosis from H2O2 induced injury to HaCaT cells by anti-oxidation and mitochondrial protection.     

葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。     

姜黄素氧化损伤线粒体诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 探讨姜黄素诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的机制.方法 80 μmol/L姜黄素作用于肝癌细胞后,用流式细胞仪检测细胞过氧化氢(H2O2)、线粒体膜电位和细胞亚二倍体凋亡峰情况;比较姜黄素组和预处理组(姜黄素联合过氧化氢酶)线粒体膜电位和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况.结果 80 μmol/L姜黄素作用于肝癌细胞1、2、3 h后检测H2O2分别为(13.49±3.23)%、(52.43±6.04)%、(48.21±7.18)%,以2 h时间点最高.细胞线粒体膜电位在6、12 h分别为(59.68±4.47)%、(29.83±6.22)%,差异有统计学意义(P＜0.01).细胞亚二倍体凋亡峰     

山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制.方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化.结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及Bax mRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系.结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关.     

红景天苷对H2O2诱导子鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨红景天苷对H2O2诱导子鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法在原代培养的SD大鼠子鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量红景天苷（10、30、90μg／m1）对心肌细胞凋亡率、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响。结果红景天苷可以减少心肌细胞凋亡率,降低MDA和LDH含量,增加SOD活性。结论红景天苷对H2O2诱导的子鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化有关。     

虾青素对氧化应激诱导内皮祖细胞凋亡的保护作用

目的：探讨虾青素对体外氧化应激诱导的人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养人外周血单核细胞源的内皮祖细胞,分为对照组、模型组（叔丁基过氧化氢100μmol/L ）、虾青素＋叔丁基过氧化氢组[虾青素0．10、1．00、10．00 nmol/L预处理24 h后,分别使用叔丁基过氧化氢溶液（100μmol/L）连续培养6 h]。细胞存活率采用MTT法检测;细胞凋亡率采用DAPI染细胞检测;DCFH-DA法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species ,ROS）水平;JC-1法测定线粒体膜电位。结果与对照组比较,叔丁基过氧化氢（100μmol/L）能明显的造成内皮祖细胞的凋亡（P＜0．05）。虾青素可降低叔丁基过氧化氢引起的内皮祖细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少（P＜0．05）,线粒体膜电位增加。结论虾青素对叔丁基过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能有关。     

芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭的作用机制。方法H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组、模型组、芪苈强心组,后2组采用100μmol/L H2O2处理6 h造成心肌细胞损伤模型,芪苈强心组加入含药血清,3组继续培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖率。各组给药孵育48 h后,收集细胞,FCM方法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas/FasL mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芪苈强心组能增加H9C2细胞增殖活性,RT-RCR和Western blot方法结果显示芪苈强心组细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL表达明显下降,Bcl-2、Bcl-2/Bax明显上升。结论芪苈强心胶囊能下调Caspase-3、Fas/FasL表达,调节Bcl-2/Bax平衡,抑制心肌细胞凋亡,对心肌细胞起到一定的保护作用。     

Elabela对同型半胱氨酸诱导的H9C2细胞凋亡的影响与机制

目的探究多肽Elabela（ELA）对同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）诱导的H9C2细胞凋亡的作用及机制。方法采用CCK-8检测细胞活性,根据试验结果选择Elabela和Hcy的适宜浓度建立细胞实验模型。随机将细胞分成NC组（正常对照组）、ELA组、Hcy组、Hcy+ELA组。使用试剂盒检测ROS含量;利用TUNEL荧光染色和流式细胞术检测细胞的凋亡程度;通过Western印迹法检测H9C2细胞中PARP、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3蛋白以及MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。使用ERK特异性抑制剂U0126验证相关信号通路作用,检测细胞中凋亡相关蛋白的表达水平。结果与NC组相比,1mmol/L的Hcy处理使H9C2细胞活性明显下降（P<0.001）,而10μmol/L的Elabela显著逆转了Hcy诱导的H9C2细胞活性下降（P<0.001）。与Hcy处理组相比,Elabela的干预使细胞内ROS的产生减少,凋亡率下降,促凋亡蛋白cleaved-PARP、Bax、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平下调,而Bcl-2、p-ERK蛋白的表达水平上调,p-P38、p-JUNK蛋白的表达水平下调（均P<0.05）。与Hcy+ELA组相比,U0126的干预抑制了Elabela对H9C2细胞的保护作用,使细胞促凋亡相关蛋白的表达水平上调,而Bcl-2的表达水平下调（均P<0.05）。结论多肽Elabela可能通过调节ERK/MAPK信号通路抑制Hcy诱导的H9C2细胞的凋亡。