玉屏风散加味方干预COPD气道重塑相关细胞因子作用研究

目的探讨玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的调节作用。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、玉屏风散加味方高剂量组、玉屏风散加味方中剂量组、玉屏风散加味方低剂量组、阳性组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠采用被动吸烟加气管内注入LPS的方法复制COPD大鼠模型,玉屏风散加味方各组给予相应剂量玉屏风散加味方灌胃,阳性组给予罗红霉素胶囊溶液灌胃,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃。灌胃30 d后用ELISA方法测定大鼠肺泡灌洗液中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1水平,计算MMP-9/TIMP-1比值。结果模型组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显高于正常组(P均0.05),MMP-9/TIMP-1比值明显低于正常组(P0.05);玉屏风散加味方高、中剂量组及阳性组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显低于模型组(P均0.05),玉屏风散加味方高剂量组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显低于玉屏风散加味方低剂量组(P均0.05)。结论玉屏风散加味方可延缓COPD气道重塑病变,其干预COPD气道重塑的作用可能是通过调节气道局部细胞因子MMP-9、TIMP-1和TGF-β1表达实现的,且以高剂量效果最为明显。     

顺气化痰方对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症因子及基质金属蛋白酶的影响

目的观察顺气化痰方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清炎性因子及基质金属蛋白酶(MMP)的影响,探讨其治疗COPD的机制。方法将32只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、顺气化痰方高剂量组、顺气化痰方低剂量组,每组8只。除正常组外,其余组均通过气管注入脂多糖和熏烟方法建立COPD模型。造模成功后,顺气化痰方高、低剂量组分别给予顺气化痰方13.5 g/kg、0.9 g/kg灌胃,模型组、正常组给予纯净水灌胃,均连续灌胃30 d。末次灌胃后第2天股动脉取血检测炎性因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取右下肺组织进行HE染色病理观察,RT-PCR法检测肺组织中MMP-2、MMP-8mRNA表达情况。结果顺气化痰方高、低剂量组血清IL-8、TNF-α水平和肺组织中MMP-2 mRNA、MMP-8 mRNA表达水平均明显低于模型组(P均0.05),且顺气化痰方高剂量组各指标水平均明显低于顺气化痰方低剂量组(P均0.05)。HE染色显示模型组肺气肿明显,顺气化痰方高、低剂量组肺气肿情况明显轻于模型组。结论顺气化痰方可减轻COPD大鼠肺组织病理改变,可能与减轻气道炎症有关。     

利金方对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证大鼠IL-8及TNF-α表达的影响

目的 观察利金方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 将50只SPF级wistar大鼠随机分为空白组、模型组、补肺汤组、利金方高剂量组及利金方低剂量组,每组10只.采用复合因素造模法建立COPD大鼠模型.各药物组分别以相应剂量连续给药14d,检测各组大鼠血清和BALF中IL-8、TNF-α的含量,并通过HE染色和光镜观察气管、支气管及肺组织病理形态学改变.结果 模型组大鼠支气管内有明显慢性支气管炎特征性病理学改变,肺组织显示肺泡结构紊乱,肺泡壁变薄或破裂,肺泡呈囊状扩张,部分融合成肺大疱,符合COPD形态学诊断指标,大鼠血清及BALF中IL-8、TNF-α的含量明显升高;与模型组比较,利金方高、低剂量组和补肺汤组COPD大鼠气管、支气管及肺组织病理学改变均有所减轻,血清及BALF中IL-8、TNF-α的含量均明显下降;利金方高剂量组的病理学减轻程度优于利金方低剂量组和补肺汤组;利金方高剂量组血清及BALF中IL-8、TNF-α的含量较补肺汤组均明显下降.结论 利金方可以降低血及BALF中IL-8、TNF-α的表达,抑制气道炎症,从而达到治疗COPD的目的 .     

院内清肺汤对COPD模型大鼠肺组织炎症因子的影响

目的探讨中药对COPD大鼠动物模型肺组织IL-8、TNF-α的表达影响。方法运用烟熏联合内毒素构建COPD大鼠模型,用免疫荧光染色法检测大鼠肺组织中IL-8、TNF-α浓度。结果与正常组比较,模型组大鼠IL-8、TNF-α表达明显增高,有显著差异(P0.01);中药灌胃组大鼠肺组织IL-8、TNF-α表达变化明显(P0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组大鼠肺组织IL-8、TNF-α表达明显减少,差异显著(P0.01)。结论院内清肺汤可显著降低模型大鼠IL-8、TNF-α表达,对COPD的发生起到干预作用。     

金荞麦提取物对COPD大鼠血清炎症因子和NF-κB表达的影响

目的观察金荞麦提取物对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清炎症因子和核因子NF-κB的影响,探讨其治疗COPD的可能机制。方法采用改良烟熏法复制SD大鼠COPD模型,将造模成功大鼠随机分为模型组,金荞麦水提取物低、高剂量组,金荞麦醇提取物低、高剂量组,每组6只;另取6只正常大鼠作为正常组。正常组和模型组灌胃生理盐水,高剂量组给予水提物或醇提物10 g/kg(相当生药10倍)灌胃,低剂量组给予水提物或醇提物5 g/kg(相当生药5倍)灌胃,均1次/d,持续灌胃21 d。放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平,免疫组织化学法检测气管组织中核因子NF-κB表达情况。结果模型组血清TNF-α、IL-8、IL-6水平明显高于正常组(P均0.05);金荞麦水提物低剂量组、水提物高剂量组、醇提物低剂量组、醇提物高剂量组血清TNF-α、IL-8、IL-6水平均明显低于模型组(P均0.05);与金荞麦水提物同等剂量组比较,醇提物组下降更显著(P0.05)。模型组NF-κB表达阳性个数显著高于正常组(P0.05),金荞麦各提取物组NF-κB表达阳性个数明显低于模型组(P均0.05),其中金荞麦醇提物高剂量组NF-κB表达阳性个数最少。结论金荞麦水提物和醇提物均可下调NF-κB的表达,抑制COPD大鼠炎症反应,延缓COPD的发展。     

益气健脾方对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能及血清TNF-α和IL-8的影响

目的观察益气健脾方对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)水平的影响。方法按随机数字表法,将60只健康雄性SD大鼠分为正常组、模型组、地塞米松组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组10只。除正常组外,其余组均采用烟熏加气管内注射脂多糖的方法进行慢性阻塞性肺疾病大鼠造模。在第2次注射脂多糖后,地塞米松组给予地塞米松灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予相应剂量益气健脾方浓缩液灌胃,模型组给予等剂量生理盐水灌胃,每天1次,至烟熏结束。实验结束后,采用小动物肺功能测定仪测定各组大鼠肺功能,用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中TNF-α和IL-8水平。结果各造模组大鼠FEV0. 3/FVC均明显低于空白组(P均0. 05),地塞米松组和中药各剂量组FEV0. 3/FVC均明显高于模型组但仍低于空白组(P均0. 05),地塞米松组及中药各剂量组比较差异均无统计学意义(P均 0. 05)。各造模组大鼠血清IL-8、TNF-α水平均明显高于空白组(P均0. 05);地塞米松组、中药各剂量组大鼠血清IL-8、TNF-α水平均明显低于模型组(P均0. 05);地塞米松组及中药各剂量组大鼠血清IL-8水平比较差异均无统计学意义(P均 0. 05);地塞米松组、中药低剂量组大鼠血清TNF-α水平比较差异无统计学意义(P 0. 05);中药中剂量组、中药高剂量组大鼠血清TNF-α水平均明显低于地塞米松组(P均0. 05);中药各剂量组间大鼠血清TNF-α水平比较差异均无统计学意义(P均 0. 05)。结论益气健脾方能够降低慢性阻塞性肺疾病大鼠血清中TNF-α和IL-8水平,减轻气道炎症,改善肺功能。     

清肺方对博来霉素诱导的大鼠间质性肺炎的作用及机制

目的探讨清肺方对博莱霉素诱导的间质性肺炎大鼠的作用及其作用机制。方法选择清洁级SD大鼠48只,按照随机数字表法抽出8只作为正常组,其余大鼠通过气管内灌注博来霉素方法建立间质性肺炎模型。将造模后大鼠随机分为模型组、地塞米松组、清肺方高剂量组、清肺方中剂量组、清肺方低剂量组,每组8只。造模24 h后,清肺方高、中、低剂量组分别给予浓度为4.16 g/mL、2.08 g/mL、1.04 g/mL清肺方水煎液1 mL/100 g灌胃,均1次/d;地塞米松组给予浓度为0.1 mg/mL的地塞米松溶液0.875 mg/kg灌胃,每周2次;模型组及正常组均给予生理盐水1 mL/100 g灌胃,1次/d。各组均连续灌胃28 d。观察各组大鼠肺组织病理表现,检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果清肺方高、中、低剂量组大鼠肺组织纤维化程度均明显轻于模型组;模型组大鼠肺组织中HYP、TGF-β_1、TNF-α水平均明显高于正常组(P均0.05),清肺方高、中、低剂量组肺组织中HYP、TGF-β_1、TNF-α水平均明显低于模型组(P均0.05)。结论清肺方可明显减轻博来霉素诱导的间质性肺炎大鼠肺组织纤维化程度,机制可能与其抑制肺组织中TGF-β_1、TNF-α表达有关。     

玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道3种细菌的影响

目的:观察不同剂量玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌的影响,为玉屏风散加味方治疗COPD提供一定的实验依据。方法:Wistar大鼠通过气管滴注脂多糖(LPS)加烟熏的方法建立COPD大鼠模型,模型成功的大鼠随机分为模型组、玉屏风散加味方高、中、低剂量组(4.644,9.288,27.864 g·kg-1·d-1),另设正常组,每组10只。利用高通量测序分析每组3种细菌的含量,苏木素-伊红(HE)观察右肺组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量明显升高(P0.05),右肺组织病理学观察显示模型组大鼠右肺组织慢性炎症细胞增多和少量中性粒细胞浸润;与模型组比较,玉屏风散加味方低、中剂量组的流感嗜血杆菌含量均明显降低(P0.05),玉屏风散加味方高、中、低剂量组的肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量明显降低(P0.05,P0.01),大鼠右肺组织病变明显减轻。结论:玉屏风散加味方对COPD大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量有明显的降低作用,低剂量组对铜绿假单胞菌的作用更为明显,这可能是其治疗COPD的重要机制之一。     

金匮肾气丸合玉屏风散对COPD大鼠气道炎症和糖皮质激素受体调节机制的影响

目的:探讨金匮肾气丸联合玉屏风散对烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠糖皮质激素受体(GR)、去乙酰化酶2(HDAC2)、p65和白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组、对照组,每组各10只。除正常组外,其余各组大鼠均采用香烟暴露法建立COPD大鼠模型,模型组以含2%二甲基亚砜的无菌水灌胃,治疗组以金匮肾气丸合玉屏风散灌胃,对照组以地塞米松灌胃。观察大鼠肺脏组织病理变化,蛋白质免疫印迹法检测大鼠肺组织GR及p65变化,免疫组化法检测HDAC2,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-8、TNF-α的变化。结果:模型组气道及肺泡的结构变化与COPD肺组织病理表现相符。模型组大鼠HDAC2降低,治疗组以及对照组的表达量则有所回升。大鼠GR蛋白、p65蛋白表达量以及IL-8、TNF-α水平正常组与模型组比较,治疗组、对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论:吸烟及长期慢性气道炎症均有可能使GR、HDAC2降低,导致糖皮质激素抵抗的现象,补肾益气法能提高GR蛋白、HDAC2表达,改善糖皮质激素的抗炎作用,同时其也可改善COPD气道炎症的作用。     

玉屏风散加味方干预慢性阻塞性肺疾病气道重塑的探讨

目的:探究玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑病理形态的影响及其对相关细胞因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9),金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:SD大鼠48只,除正常组8只外,其余各组大鼠采用烟熏加脂多糖滴入叠加法复制COPD动物模型,造模成功的大鼠随机分为模型组,玉屏风散加味方高、中、低剂量组(30,10,5 g·kg-1),阳性药物组(罗红霉素胶囊),ig给药30 d后,取大鼠肺组织做病理切片,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)中的MMP-9,TIMP-1,TGF-β1的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织病理形态出现显著改变,支气管壁黏膜充血,水肿以肺泡巨噬细胞(AM),中性粒细胞(NEU),淋巴细胞(LYM),嗜酸性粒细胞(EOS)炎性细胞浸润较为明显,模型组MMP-9,TIMP-1,TGF-β1表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,玉屏风散加味方组大鼠肺组织纤毛倒伏、粘连、缺失;上皮细胞坏死、脱落;支气管壁黏膜充血、水肿以及AM,NEU炎性细胞浸润程度均有所改善,其中高剂量组较为明显(P0.05),玉屏风散加味方高、中剂量组下调细胞因子MMP-9,TIMP-1,TGF-β1表达水平明显(P0.05)。结论:玉屏风散加味方可影响COPD气道重塑的病理形态,下调MMP-9,TIMP-1和TGF-β1的过度表达,可能为该方药干预COPD气道重塑作用机制之一,且以高剂量效果最为明显。