复方苦参注射液对膀胱癌细胞增殖、侵袭的影响及相关机制分析

目的:探讨复方苦参注射液对膀胱癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)、细胞凋亡蛋白Caspase-3、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、干细胞标志物SOX-2及癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:选用人膀胱癌细胞株S637,分为对照组(等体积DMSO)及复方苦参注射液0.25、0.5、1.0 mg/m L组,CCK-8法检测各组细胞增殖情况,FCM检测细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭情况,RT-PCR检测VEGF、Caspase-3、HIF-1α及SOX-2 mRNA表达。结果:与对照组比较,复方苦参注射液各浓度组增殖率、侵袭能力及VEGF、HIF-1α、SOX-2 mRNA表达显著降低,凋亡率及Caspase-3 mRNA表达显著升高,且其作用呈浓度依赖性(P0.05)。结论:复方苦参注射液对膀胱肿瘤细胞的侵袭、增殖有抑制作用,其机制可能与降低VEGF、HIF-1α、SOX-2 mRNA表达,上调Caspase-3 mRNA表达有关。     

乏氧环境下益气养精方对肺癌细胞apelin分子表达的影响＊

目的 观察益气养精方对乏氧微环境下肺癌细胞中具有促进细胞增殖侵袭及血管形成的apelin/APJ信号通路的影响。方法 CoCl₂加入培养基模拟乏氧微环境，实验分组为乏氧组、常氧益气养精方组、乏氧益气养精方组及空白对照组，分别作用于人肺癌细胞株A549和H1975。采用CCK-8法和Transwell实验观察各组细胞的增殖、侵袭能力，RT-qPCR、Western Blot方法观察apelin/APJ信号通路相关因子VEGF、HIF-1α、PI3K等在各组干预细胞中的mRNA和蛋白表达。结果 CCK-8实验测得，缺氧环境能促进肺癌细胞增殖，益气养精方作用于A549、H1975的IC₅₀分别为为1 mg·mL^-1和0.5 mg·mL^-1，且在常氧和缺氧微环境中均能抑制肺癌细胞增殖。Transwell实验结果显示，益气养精方组下室面细胞数量明显少于对照组（P < 0.01），乏氧微环境中下室面细胞数明显多于对照组（P < 0.01），加入益气养精方后亦可见减少。RT-qPCR结果显示，益气养精方在乏氧微环境中能不同程度下调血管生成相关因子HIF-1α、VEGF、APJ及Apelin的表达（P < 0.05）。Western Blot检测发现，益气养精方在乏氧环境中能使相关因子（VEGF、PI3K、APJ）的表达量明显下调，具有统计学意义。结论 益气养精方在乏氧微环境中能抑制肺癌细胞的增殖和侵袭，同时能通过Apelin/APJ通路对血管生成相关因子VEGF、HIF-1a、PI3K等起到一定的下调作用。     

健脾益肾方对非小细胞肺癌细胞体外增殖凋亡作用的实验研究

目的:探讨健脾益肾方对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞体外增殖凋亡的作用。方法:人NSCLC细胞系A549分为四组:空白对照组(仅加入细胞培养液)、阴性对照组(加入细胞,不进行中药处理)、实验组(加细胞加中药处理)。荧光定量PCR和Western blot分别检测Survivin、Bcl-2和Caspase-3的mRNA和蛋白表达。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,阴性对照组细胞在24、48、72 h的吸光度值明显升高,细胞凋亡率下降,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量上调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);而健脾益肾方处理的实验组24、48、72 h的吸光度值均显著降低,细胞凋亡率显著上升,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量下调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量上调,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾益肾方可通过下调Survivin和Bcl-2、上调Caspase-3表达诱导NSCLC细胞凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖,进而抑制NSCLC的发展。     

益气除痰方通过抑制Akt信号通路诱导顺铂耐药肺癌细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的探讨益气除痰方诱导顺铂耐药肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法制备益气除痰方含药血清,采用Annexin V/PI双染结合流式细胞术检测益气除痰方对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP1细胞凋亡的影响。采用Caspase分光光度法检测试剂盒检测益气除痰方对A549/DDP细胞内Caspase-8和Caspase-3激酶活性的影响。采用Western blotting检测益气除痰方对A549/DDP细胞Akt/FoxO信号通道相关蛋白的影响。结果与空白血清对照组比较,A549/DDP细胞经不同浓度益气除痰方作用后,凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3激酶活性增强(P0.05),呈剂量依赖性效应。益气除痰方能明显抑制Akt的磷酸化(P0.05),随着剂量的增加,其抑制作用增强,而Akt总蛋白的水平基本未受影响;相对应FoxO3a蛋白磷酸化水平逐渐降低(P0.05),而Fox O3a总蛋白的水平基本未受影响;并且经益气除痰方作用后,FoxO3a下游的Bim的表达显著升高(P0.05),均呈现明显的剂量依赖性效用。结论益气除痰方可能通过抑制Akt/FoxO信号转导从而激活内源性凋亡通路,诱导肿瘤细胞凋亡,进而逆转肺癌细胞顺铂耐药。     

健脾益气方含药血清下调Vimentin蛋白水平对人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的研究健脾益气方下调Vimentin蛋白水平对肝癌细胞的影响,探讨健脾益气方防治肝癌的机制。方法利用TGF-β1诱导的人肝癌细胞SMMC-7721 EMT模型,采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%、15%、30%浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin、Caspase-3、PARP-1与Caspase-1蛋白表达的影响。结果与空白血清组比较,健脾中、高剂量组健脾益气方含药血清均可以降低肝癌细胞Vimentin和PARP-1蛋白表达量(P0.01),其下调程度与二者的裂解程度,及肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;并升高肝癌细胞Caspase-3、降低Caspase-1蛋白的表达(P0.01)。Vim裂解组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和早期凋亡率在各实验组中均为最高值,其肝癌细胞中各蛋白表达趋势与健脾组一致,但下调或上调程度更明显。Casp抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率在各实验组均为最低值,早期凋亡率在各实验组中也仅高于EMT模型组,两组间差异无统计学意义(P0.05);细胞中Caspase-3蛋白表达下调(P0.01),PARP-1表达上调(P0.01),Vimentin表达差异无统计学意义(P0.05),Vimentin和PARP-1无蛋白裂解片段出现。健脾各剂量组中以中剂量组效果最佳。结论 15%浓度的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的干预效果最佳。健脾益气方可能通过下调人肝癌细胞SMMC-7721中Vimentin蛋白的表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭、并诱导部分肝癌细胞凋亡;导致Vimentin蛋白下调的原因可能在于Caspase-3对它的裂解。此过程中,健脾益气方一方面利用Caspase-3/Vimentin裂解片段形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡,另一方面可能利用Vimentin水平的下调导致NLRP3/Caspase-1炎症信号通路减弱,干预肝癌炎症微环境。     

健脾益气方含药血清通过Caspase-3/Vimentin促进人肝癌MHCC-97H细胞凋亡

目的:观察健脾益气方含药血清对人MHCC-97H肝癌细胞凋亡的影响,探讨凋亡过程中波形蛋白(Vimentin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化及其意义。方法:采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%,15%,30%体积浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin,Caspase-3,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达的影响。结果:健脾益气方中、高剂量含药血清均可以降低MHCC-97H肝癌细胞中Vimentin蛋白表达(P0.01),其下调程度与肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;Vimentin裂解组细胞增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最高;Caspase抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最低。与空白血清组比较,健脾益气方中、高剂量组,Vimentin裂解组Caspase-3蛋白表达上调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达下调(P0.01),且PARP-1蛋白出现了裂解片段;Caspase抑制组Caspase-3表达下调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达无统计学差异,PARP-1无蛋白裂解片段出现。结论:15%的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞MHCC-97H的干预效果最佳,可能通过Caspase-3下调细胞中Vimentin蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭;同时可能利用Caspase-3/Vimentin形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡。     

活血醒脑方对颅脑损伤大鼠模型神经细胞凋亡的影响

目的:探究活血醒脑方对颅脑损伤大鼠模型神经细胞凋亡的影响。方法:选40只6周龄SPF级大鼠体质量200±30g,采用改良的Feeney's自由落体打击装置造重度颅脑损伤大鼠模型,并随机分为4组,空白对照组(control)、模型组(model)、低剂量活血醒脑方组(Low HXXNF)和高剂量活血醒脑方组(High HXXNF);使用TUNEL法原位检测损伤区神经细胞的凋亡情况;使用Western blot检测大鼠颅脑组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量;使用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:相比空白对照组,模型组大鼠神经细胞的凋亡数目、凋亡细胞指数(ACI)、Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2蛋白表达量显著增加,Bax蛋白表达量显著降低,且差异有统计学意义(P0.05);相比模型组,活血醒脑方组大鼠神经细胞的凋亡数目、凋亡细胞指数、Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2蛋白表达量显著降低,且高剂量活血醒脑方组上述指标显著低于低剂量活血醒脑方组,差异有统计学意义(P0.05),Bax蛋白表达量显著升高,且高剂量活血醒脑方组Bax蛋白表达量显著高于低剂量活血醒脑方组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:活血醒脑方可以通过调节细胞凋亡因子抑制颅脑损伤大鼠模型神经细胞凋亡,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。     

清脑滴丸下调HIF-1α/BNIP3表达拮抗氧糖剥夺/复氧诱导C6胶质细胞凋亡

目的研究清脑滴丸对氧糖剥夺诱导C6胶质细胞损伤的HIF-1α/BNIP3以及细胞凋亡的影响及机制。方法采用氧糖剥夺/复氧方法建立C6胶质细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组、清脑滴丸组。采用Western Blot法检测各组HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3蛋白表达,免疫荧光染色法观察各组HIF-1α、Cleaved Caspase-3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组细胞活力降低(P0.01),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达增加(P0.01,P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.01);与模型组比较,清脑滴丸1.25 g/L组细胞活力升高(P0.05),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达和细胞凋亡率均降低(P0.01,P0.05)。结论清脑滴丸抑制C6胶质细胞凋亡的作用机制可能与通过下调HIF-1α和BNIP3过表达,降低Cleaved Caspase-3表达有关。     

平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响

目的:研究平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代。诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞。将平目方拆方为益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组含药血清。MTT法观察平目方及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖活性的影响。Western blot检测平目方及其拆方对Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响。结果:1原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞。2MTT结果显示,平目方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中平目方(全方)组最为显著,益气+温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义。平目方(全方)组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P0.05),作用16 d后更为显著(P0.01),地塞米松组差异无统计学意义。3Western blot结果显示,与空白对照组相比,各治疗组除化痰祛瘀组外Caspase-3蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.01),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-8蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.05),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-9蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.01)。其中平目汤(全方)组最为显著,益气+化痰祛瘀组其次。结论:平目方可能通过抑制前脂肪细胞增殖,诱导Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用。     

隐丹参酮通过调节SIRT3/HIF-1α信号轴和线粒体自噬抑制MDA-MB-231细胞增殖迁移的研究

目的:研究隐丹参酮对MDA-MB-231细胞SIRT3/HIF-1α信号通路和线粒体自噬的影响,探讨隐丹参酮抑制MDA-MB-231细胞增殖和迁移的机制。方法:培养三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231),分为空白对照组及隐丹参酮低(5μmol/L)、中(10μmol/L)、高(20μmol/L)浓度组,Western blot检测各组细胞SIRT3、HIF-1α、VEGF、Parkin、PINK1蛋白表达;划痕实验检测各组细胞迁移率;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与空白对照组比较,隐丹参酮处理组SIRT3、Parkin、PINK1表达上调,HIF-1α、VEGF表达下调,MDA-MB-231迁移率显著降低,细胞凋亡率显著升高。结论:隐丹参酮可通过调节SIRT3/HIF-1α信号通路,促进线粒体自噬进而抑制MDA-MB-231细胞的增殖和迁移。     

大鼠红细胞免疫功能低下模型的研究

目的：研究红细胞免疫缺陷动物模型。方法：大鼠采用低硒饲料喂养13周，观察红细胞免疫功能以及氧化抗氧化功能的变化情况。结果：第8周时，模型组动物红细胞免疫功能发生紊乱，以E-C3bR和E-ACCR低下为主。至第13周时更为明显，红细胞免疫黏附功能明显下降，E-IC含量明显增高。与此同时，红细胞氧化和抗氧化功能也发生明显变化，SOD、GSH-PX活性下降，MDA含量上升。结论：13周时，该模型表现为明显的红细胞免疫功能缺陷。     

关于中医药影响世界的思考

笔者从中医哲学观点影响世界,中医人文思想影响世界,中医精湛医术影响世界,中医药教育科研影响世界,中医“治未病”理念引领新方向,以及如何扩大中医药影响力进行了深入的探讨和思考,引经据典来论证中医药是我国劳动人民的第五大发明,其成果为人类的健康、经济发展、社会进步和文化传播做出了突出的贡献,并在世界造成广泛的影响。     

氮酮对蟾酥中蟾毒内酯类成分透皮吸收的影响

目的 :研究氮酮对蟾酥中蟾毒内酯类成分体外渗透动力学的影响。方法 :以裸鼠皮肤为实验屏障 ,研究氮酮浓度分别为 0 % ,2 % ,4% ,6 % ,8% ,1 0 %时蟾毒内酯的透皮速率常数。结果 :氮酮浓度为 0 % ,2 % ,4% ,6 % ,8% ,1 0 %时蟾毒内酯的渗透速率常数分别为 81 .2 5 ,1 1 4 .92 ,1 69.63 ,1 96 .31 ,2 0 8.2 7,2 61 .35(μg/cm2 ·h)。结论 :氮酮可以促进蟾毒内酯的透皮吸收 ,在实验浓度范围内 ,氮酮浓度为 1 0 %时有最大的透皮速率常数。     

不同煎煮方法对清金宁气汤中黄酮类成分的影响研究

目的研究不同煎煮方法对清金宁气汤中黄酮类成分含量的影响。方法先采用HPD600型大孔树脂处理样品,以黄芩苷为对照品,在278 nm波长处测定吸收度。结果线性范围2.4~12μg/ml,回归方程为C=0.016A 0.0001,r=0.999 2,平均回收率99.1%。结论不同煎煮方法的清金宁气汤中黄酮类成分的含量具有差异。     

颈椎病的保守治疗机理研究探讨

就近年来颈椎病形成的机理研究和针灸、针刀、中药、手法治疗颈椎病的机理进行综述,并把传统医学与现代医学的思维进行融合,从多个直接或间接的角度对针灸、针刀、中药、手法治疗颈椎病的机理进行了探讨,并指出一些不足。     

观物取象思维方式对中医舌诊发展的影响浅论

与西医学相比较,中医舌诊显示出鲜明的特殊性。从甲骨文中对舌的最早记载,到秦汉时期舌诊的萌芽,从元代第一部舌诊专著的诞生,到明清时期对舌诊的极大发挥,中医舌诊经历了一个由简单到复杂,由零散到系统的发展过程,而观物取象的思维方式就是中医舌诊特殊性形成的根源之一。     

全面护理应用对胆结石手术后患者的影响

目的:观察全面护理对于胆结石术后患者的护理效果。方法:将96名患者随机分为观察组、对照组各48例。2组均给予手术治疗,术后观察组予以全面护理支持,对照组给予一般常规护理,观察2组术后恢复情况及术后并发症的发生情况。结果:观察组住院天数明显短于对照组(P0.05)。总满意率对照组为75.00%,观察组为95.83%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。并发症发生率观察组为31.25%,对照组为8.33%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:术后全面护理干预能缩短胆结石术后患者的恢复时间,减少术后并发症的发生。     

方剂药理研究临床应用体会

方剂是理法方药的组成部分、新的药理研究成果不断出现,方剂与现代药理研究相结合在临床应用中具有重要意义。1　传统组方的局限性前人已制定出大批的方剂,数千年来沿用已久,但这些方在临床中还需要据证立法组方选药,现今临床病种繁多,病情复杂,往往有不少的患者是经西药治疗无效或者是现代医学处理棘手的病人,更为难的是有些病人按传统的四诊八纲也很难进行辨证,这就给传统的立法和组方遣药带来困难,譬如急慢性肾炎治疗后只剩下蛋白尿或血尿、高脂血症、高粘血症、高血压、糖尿病等,往往无任何临床症状,传统组方有一定的局限性。2　中医临…     

针刺对中风早期患者认知功能影响的临床观察

将６０例病情已稳定的中风早期患者随机分成实验组和对照组,每组各３０例。两组病人在接受常规针灸治疗及一些康复训练和临床药物治疗的同时,试验组同时加取四神聪、本神、通里、照海、舌三针等穴。然后应用黄东锋根据我国中风患者的具体情况而制定的认知功能积分表,来评估针刺对中风早期患者认知功能的影响。结果显示：实验组经３～４个月的治疗后,认知功能显著改善,与对照组相比,改善非常明显（ Ｐ＜ ０． ０１）,说明针刺某些特定穴位能提高中风早期患者的认知功能。