抑癌基因PTEN介导的信号转导对乳腺癌生物性状的影响

目的探讨第10号染色体上缺失的与张力蛋白同源的基因(PTEN)对乳腺癌细胞生物性状的影响及其潜在机制。方法利用脂质体介导法将pBP-wt-PTEN、pBP-G129R-PTEN和pBP-G129E-PTEN质粒分别转染入PTEN基因缺失的乳腺癌细胞株ZR-75-1。通过侵袭实验比较pBP-wt-PTEN、pBP-G129R-PTEN和pBP-G129E质粒成功转染细胞和未经转染细胞之间的侵袭能力差异。免疫印迹试验(Western-blot)检测各组细胞的总酪氨酸激酶(FAK)和P397-FAK磷酸化水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞p53 mRNA水平,流式细胞术分析其凋亡率。结果pBP-wt-PTEN、pBP-G129R-PTEN和pBP-G129E-PTEN3种质粒转染侵袭抑制率分别为70.4%、6.9%和63.5%;pBP-wt-PTEN细胞P397-FAK水平比pBP-G129R-PTEN细胞低而与pBP-G129E-PTEN细胞差异无统计学意义(P>0.05)。pBP-wt-PTEN细胞p53 mRNA水平和凋亡率高于pBP-G129E-PTEN细胞,pBP-G129E-PTEN...     

骨肉瘤PTEN启动子特定区域甲基化的研究

目的:检测骨肉瘤组织中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)启动子特定区域的甲基化状态,初步探索PTEN在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法:应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法,检测并分析32例骨肉瘤患者的病理组织中及17名正常对照者的外周血中抑癌基因PTEN启动子003区域CpG岛的甲基化状态。结果:骨肉瘤好发于股骨远端(20.9%)、胫骨近端(20.9%)和肱骨远端(16.3%)。骨肉瘤组织中抑癌基因PTEN启动子003区域CpG_1、CpG_3.4、CpG_9、CpG_11.12,CpG_13和CpG_18.19.20的甲基化率高于其在正常人外周血样中的甲基化率(P<0.05)。结论:PTEN基因启动子高甲基化导致的PTEN基因失活可能参与了骨肉瘤的发生、发展。     

抑癌基因PTEN与乳腺癌的研究进展

抑癌基因PIEN是迄今发现的第一个有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，其杂合性丢失或突变与人类多种恶性肿瘤发生、发展及预后密切相关。PTEN在细胞的生长发育，信号传导和细胞凋亡过程中起重要作用。乳腺癌组织中抑癌基因PTEN的表达缺失可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关。     

外源性PTEN基因对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖、凋亡及侵袭的影响实验

目的观察外源性第10号染色体同源缺失磷酸酶和张力蛋白(PTEN)基因对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖、凋亡及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法取对数期SPC-A-1细胞转染重组腺病毒Ad-PTENGFP、Ad-GFP,分别设为PTEN组、空载组,并检测转染效率,另取不做处理为对照组。MTT法检测并对比各组细胞增殖情况; Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡情况; Transwell试验检测细胞侵袭能力;分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法检测并对比各组细胞中PTEN mRNA和蛋白、粘着斑激酶(FAK)、蛋白激酶B(AKT) mRNA表达情况及p FAK/FAK、p AKT/AKT。结果 FACS法检测重组腺病毒Ad-PTEN-GFP、Ad-GFP对SPC-A-1细胞转染效率分别为(82. 41±5. 46)%、(83. 02±6. 20)%。PENT组MTT试验不同时刻OD值显著低于对照组和空载组(P 0. 05),3组OD值均随时间延长呈显著升高趋势(P 0. 05); Hoechst 33342荧光染色发现,对照组和空载组细胞形态正常,呈弥散均匀荧光,PTEN组部分细胞核浓染,呈月牙形聚集、颗粒状荧光碎片,PENT组细胞凋亡率显著高于对照组和空载组(P 0. 05); PENT组细胞侵袭数目显著少于对照组和空载组(P 0. 05);对照组和空载组OD值、凋亡率及细胞侵袭数目比较差异均无显著性(P 0. 05);与对照组和空载组比较,PENT组PENT mRNA和蛋白相对表达量显著较高(P 0. 05),p AKT/AKT、p FAK/FAK显著较低(P 0. 05);对照组和空载组PENT mRNA和蛋白相对表达量、p AKT/AKT、p FAK/FAK、3组AKT、FAK mRNA相对表达量比较差异均无显著性(P 0. 05)。结论外源性PTEN基因可显著抑制SPC-A-1细胞增殖及侵袭,促进其凋亡,推测与抑制AKT/FAK信号通路有关。     

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法 将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果 转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P 0. 05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P 0. 05)。结论 在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。     

胃萎宁胶囊对萎缩性胃炎伴肠上皮化生抑癌基因蛋白表达的影响

目的：探讨胃萎宁胶囊对萎缩性胃炎伴肠上皮化生抑癌基因蛋白表达的影响。方法：经胃镜下活检病理证实的萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者40例,服用胃萎宁胶囊,4粒,每日3次,治疗60d后,行电子胃镜复查,并用免疫组化法检测治疗前后胃粘膜抑癌基因蛋白第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因（PTEN）和p16的表达。结果：治疗后胃黏膜抑癌基因蛋白PTEN的表达上调（P〈0．01）,抑癌基因蛋白p16的表达无显著差异（P〉0．05）。结论：上调抑癌基因蛋白PTEN的表达可能是胃萎宁胶囊治疗萎缩性胃炎伴肠上皮化生的部分机理。     

葡萄糖对INS-1细胞活性氧及PTEN表达的调控

目的：研究葡萄糖刺激胰岛口细胞后,是否通过活性氧（ROS）调控第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因（PTEN）表达而参与胰岛素分泌信号通路的调控。方法：用不同浓度葡萄糖和H2O2短时间干预胰岛细胞系（INS-1细胞）,分别检测细胞分泌胰岛素、细胞内ROS浓度及PTENmRNA表达。结果：（1）随着刺激的葡萄糖、H2O2浓度升高,INS-1细胞内ROS浓度和分泌的胰岛素逐渐升高。（2）随着葡萄糖刺激加大或H2O2浓度逐渐升高,INS-1细胞内PTENmRNA表达先受到抑制,但当刺激浓度超过一定范围后,抑制作用消失。结论：葡萄糖可能通过刺激胰岛细胞内ROS生成,以低浓度ROS作为信号分子抑制PTEN表达,成为调控胰岛素分泌的机制之一。     

PTEN、VEGF和MVD在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨第10染色体缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因（PTEN）、微血管密度（MVD）与血管内皮生长因子（VEGF）表达在大肠癌中的变化，以及与大肠癌临床病理的关系。方法采用免疫组织化学SP方法检测76例大肠癌组织中PTEN、VEGF表达，用CD34染色标记血管内皮细胞，对癌组织中MVD进行计数，分析各指标与大肠癌临床病理．学特征的关系。结果大肠癌组织中PTEN蛋白表达阳性率为44．74％（34／76），显著低于正常大肠黏膜组织的阳性率（P〈0．01）；VEGF阳性表达率为75．00％（57／76），MVD为34±7．8，显著高于正常大肠黏膜组织的阳性率（P〈0．01）；在肿瘤坏死区周围或肿瘤浸润边缘VEGF表达较强，MVD较密集。PTEN蛋白低表达和VEGF蛋白高表达及MVD与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、浆膜浸润、远处转移及TNM分期密切相关（均P〈0．01），而与肿瘤大小、组织病理学类型无关（均P〉0．05）。VEGF阳性表达组MVD显著高于阴性表达组（P〈0．01）。相关分析表明，PTEN和VEGF蛋白表达呈负相关（P〈0．05），MVD与VEGF呈正相关（P〈0．05）。结论PTEN和VEGF蛋白表达与大肠癌临床病理特征和生物学行为有密切关系，PTEN、VEGF表达和MVD与结直肠癌侵袭转移和预后有关，联合检测PTEN和VEGF蛋白的表达，可用于评估大肠癌侵袭转移能力，对大肠癌的预后判断具有一定的临床意义。     

抑癌基因PTEN的突变失活在肿瘤发生发展中的作用

PTEN是1997年发现的新的抑癌基因,具有双重特异性磷酸酶活性,故可通过磷酸化与去磷酸化的动态变化调节正常细胞的生长。PTEN基因的丢失可能会导致PIP3通路不正常激活,从而使细胞无节制的生长。本文从PTEN的发展、结构、作用底物、功能和抑癌机理以及PTEN缺失与肿瘤的关系方面对PTEN的研究做一综述。     

PTEN和MMP-2表达与肝细胞肝癌生长、侵袭及转移

目的 研究PTEN与MMP-2在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其临床病理意义.方法 应用组织芯片技术和免疫组织化学方法(SP法)检测114例HCC组织、71例癌旁组织和28例正常肝组织中PTEN和MMP-2的表达情况.结果 PTEN在HCC组织中的表达阳性率低于癌旁组织(58.8%vs.95.8%,P<0.01)和正常肝组织(58.8%vs.96.4%,P<0.01),PTEN的表达与HCC组织分级(P<0.05)和转移(P<0.01)有关,与患者年龄、性别、肿瘤长径、合并硬化、AFP水平和HBsAg状态无关(P均>0.05).MMP-2在HCC中表达阳性率高于癌旁组织(60.5%vs.38.0%,P<0.01)和正常肝组织(60.5%vs.7.1%,P<0.01),MMP-2表达与转移有关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤长径、合并硬化、组织分级、AFP水平和HBsAg状态无关(P均>0.05).在114例HCC癌组织中PTEN表达与MMP-2表达呈负相关关系(r＝-0.458,P＝0.000).结论 HCC中PTEN的失表达与MMP-2的过表达在肿瘤发生、发展、侵袭及转移过程中可能起重要作用.     

卵巢上皮性癌组织中与张力蛋白同源的第10染色体丢失的磷酸酶基因的表达及意义

目的 探讨与张力蛋白同源的第10染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)在卵巢上皮性癌组织中的表达,分析其与临床病理参数间的关系,并分析其与卵巢上皮性癌患者预后的关系.方法 应用免疫组织化学方法,检测10例正常卵巢组织(正常卵巢组),20例卵巢良性上皮性肿瘤(良性肿瘤组),60例卵巢上皮性癌组织(卵巢上皮癌组)中PTEN的表达.结果 PTEN在卵巢正常组、良性肿瘤组中的阳性表达率分别为100％ (10/10)、80％ (16/20),显著高于卵巢上皮癌组的53.3％ (32/60)(x2值分别为7.778、4.444,P均＜0.05);而良性肿瘤组和正常卵巢组比较差异无统计学意义(P＞0.05).PTEN蛋白表达与卵巢癌的临床分期、组织学分级、有无淋巴结转移和远处转移有关(x2值分别为4.339、6.465、3.896、10.452,P ＜0.01或P＜0.05),而与年龄、病理类型、有无腹水无关(x2值分别为0.004、0.388、1.057,P均＞0.05).结论 PTEN表达缺失与卵巢上皮性癌的发生、发展关系密切,对临床诊断、治疗及预后评价具有重要意义.     

骨桥蛋白、PTEN蛋白和C-met跨膜蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的:研究骨桥蛋白和PTEN蛋白和C-met跨膜蛋白在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:应用免疫组织化学法检测46例原发性细胞肝癌组织中骨桥蛋白和PTEN蛋白、C-met跨膜蛋白的表达情况.结果:肝细胞癌中骨桥蛋白、PTEN蛋白、C-met跨膜蛋白的阳性率分別为71.7%、37.0%、76.1%.骨桥蛋白、C-met跨膜蛋白的表达与肿块大小、分期有差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01),与年龄、分级差异无统计学意义(P>0.05); PTEN蛋白的表达与患者年龄、肿块大小、分级、分期均差异无统计学意义(P>0.05).结论:肝癌组织中骨桥蛋白、C-met跨膜蛋白的表达明显升高,PTEN蛋白的表达降低.检测以上3种蛋白可作为评估肝癌患者临床特征的客观指标.     

PTEN及其突变体可诱导慢病毒表达系统的构建

目的:构建可诱导表达野生型或突变型第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的慢病毒表达体系,为进一步研究PTEN与肿瘤间的关系提供理想的实验工具。方法:提取甲状腺癌、肺癌及其癌旁组织的RNA,经反转录后扩增PTEN片段,将其连接入慢病毒载体,与病毒包装质粒共转染人胚肾T细胞(293T)细胞,获得病毒。将其感染MDA-MB-231细胞,用嘌呤霉素筛选,获得稳定表达的细胞株。采用蛋白印迹法检测稳定转染的细胞株中PTEN基因的表达情况,用软琼脂克隆形成实验检测细胞株的克隆形成能力。结果:在甲状腺癌和肺癌中发现PTEN突变体;蛋白印迹检测结果证实野生型和突变型PTEN的慢病毒表达体系构建成功。突变型PTEN的克隆形成能力强于野生型PTEN。结论:发现了PTEN突变体,并成功构建了野生型和突变型PTEN基因的可诱导慢病毒表达体系,突变型PTEN不但有抑癌作用,还有致癌作用。     

恶性外周神经鞘瘤中PTEN表达及DNA倍体分析的意义

目的:通过检测第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因(PTEN)在恶性外周神经鞘瘤(malignant peripheral nerve sheath tumors,MPNST)中的表达,佐以流式细胞术对MPNST进行DNA倍体分析,研究两者与其临床生物学行为之间的关系。方法:对65例良、恶性外周神经肿瘤石蜡包埋组织应用免疫组化进行PTEN的检测,兼以流式细胞术行DNA倍体分析。结果:PTEN在良、恶性外周神经肿瘤中阳性表达有显著差异(χ2=17.628,P<0.001);PTEN阳性表达强度与MPNST的分化程度无相关性(rs=0.067,P=0.699)。MPNST发生异倍体4例,均为低异倍体(DI值<0.90);SPF、PI值在良、恶性外周神经肿瘤中有显著差别(χ2=28.674,P<0.001;χ2=23.730,P<0.001),且与MPNST病理组织学分级呈正相关(rs=0.418,P<0.01;rs=0.347,P<0.05);PTEN的阳性表达以及阳性表达强度与DNA倍体分析3项指标均无关联。结论:PTEN可以作为鉴别良、恶性外周神经肿瘤以及判断外周神经鞘瘤恶性程度高低的一个有价值的指标;异倍体的出现以及SPF、PI值的增高是判断MPNST恶性程度(演进与异质化)的重要标志。     

微卫星标志在检测白血病抑癌基因缺失中的应用

目的 用微卫星标记技术寻找与白血病发生相关的候选抑癌基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）扩增方法检测28例白血病患者11号染色体短臂四个微卫星位点的杂合性缺失频率。结果 18例急性白血病患者中，8例（44．4％）在11号染色体短臂上出现了至少1个位点的杂合性缺失（LOH）；10例慢性白血病患者中未检出所选位点的LOH。其中位点D11S1334（位于11p15.4-p15.2)的LOH率为27．8％（5／18），位点D11S1331（位于11p15.4-p15.1)的LOH率为22．2％（4／18）。位点D11S922（位于11p15.5)LOH率为22．2％（4／18），且有75％（3／4）的患者同时存在该位点与其它位点的改变。结论 在11p15.2-p15.5区域可能存在候选的抑癌基因。     

头颈部肿瘤多瘤抑制基因p16表达研究

目的探讨多瘤抑癌基因蛋白p16表达与原发性和继发性头颈部肿瘤生物学行为之间的关系。方法通过细针吸取及术中印片细胞学诊断病例获取标本,进行免疫细胞化学技术分析,检测220例头颈部良、恶性肿瘤及其他病变中p16蛋白表达水平,并对头颈部肿瘤组织学类型、分化程度的关系进行分析研究。结果 p16蛋白在头颈部良性病变的阳性表达率为84.63%,明显高于恶性肿瘤的表达率53.90%,差异有显著性（P〈0.05）。p16蛋白表达与恶性肿瘤的细胞分化程度有关,高分化肿瘤其表达水平明显高于低分化肿瘤,同时显示p16蛋白表达程度与头颈部肿瘤大小及有无转移均无明显关联。结论多瘤抑癌基因蛋白p16参与了肿瘤的发生及分化,检测p16蛋白表达水平,可能成为肿瘤诊断和预测预后的一项新指标。     

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡信号传导途径的研究

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)凋亡的信号传导途径。方法:利用葡萄糖诱导细胞凋亡:将不同浓度葡萄糖作用于HK-2细胞不同时间,并经透射电镜观察、流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞。采用抑制剂拮抗葡萄糖诱导凋亡:分别将不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(hypericin)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)抑制剂(apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME)作用于HK-2细胞30min,再加50mmol/L葡萄糖作用48h,后行FCM检测HK-2细胞凋亡情况。结果:50mmol/L葡萄糖作用48h可诱导HK-2细胞发生凋亡,并可通过透射电镜观察到凋亡小体,而FCM检测发现10-4mmol/Lhypericin、10-4mmol/L和10-6mmol/Lapopain、10-7mmol/Lgenistein、10-2mmol/LNAME可明显抑制葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡。结论:蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)都参与了葡萄糖诱导HK-2细胞凋亡的信号传导过程。