宫颈病变患者HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测的临床意义

目的:探讨宫颈病变患者人乳头状瘤病毒(HPV)DNA和HPV E6/E7 mRNA检测的临床意义。方法:将2015年1月至2017年1月在宜昌市第三人民医院进行阴道镜宫颈检查的200例患者分为宫颈上皮内瘤变低级别组(A组,n=67)、高级别组(B组,n=99)及宫颈癌组(C组,n=34),同时纳入妇科炎症组(D组,n=40),进行E6/E7蛋白免疫组化和HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测。结果:A、B、C组HPV DNA拷贝数、HPV E6/E7蛋白、DNA、mRNA阳性率均高于D组(均为P<0. 05),但A、B、C组的DNA阳性率及DNA拷贝数差异比较不显著(P>0. 05);A组、B组和C组患者的E6/E7 mRNA阳性率均高于D组(P<0. 05),且C、B组的HPV E6/E7 mRNA(阳性率、拷贝数)及蛋白均高于A组(P<0. 05);HPV E6/E7 mRNA检测特异度在低级别宫颈上皮内瘤变中稍低于HPV DNA,在高级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的特异度均相对更高。结论:HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈癌发生及发展的检测价值更高。     

宫颈癌妇女人乳头瘤病毒16E6/E7基因变异分析

目的了解宫颈癌妇女人乳头瘤病毒(HPV)16E6/E7基因变异的情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法从大量样本中筛选出HPV16阳性标本180例,其中宫颈癌患者100例,宫颈不典型增生患者50例,宫颈炎症患者30例,对宫颈脱落细胞样本采用PCR方法扩增HPV16 E6/E7基因,然后对反应产物采用DNA测序法获得基因序列,在GeneBank进行经BLAST分析,寻找变异位点。结果宫颈癌患者中E6核苷酸变异率为82.00%(82/100),明显高于宫颈不典型增生患者(=0.000)及宫颈炎患者(=0.000);宫颈癌HPV16E6最频繁的序列变异为T178G(60/100),其他常见变异为T350G、C335T/A442C、T178G/G39T,年轻宫颈癌组E6核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但两者T178G变异率存在明显差异(=0.000)。宫颈癌患者HPV16 E7核苷酸变异率为74.00%(74/100),明显高于宫颈不典型增生患者(=0.000)及宫颈炎患者(=0.000);E7最频繁序列变异为A647G 32.00%(32/100),其他常见的变异为A647G/C749T/T843C/T846C、A647G/C749T/T846C、C749T/C790T、A647G/C749T;年轻宫颈癌组E7核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但A647G变异率存在明显差别(=0.03)。结论宫颈癌患者明显存在HPV16E6E7核苷酸变异,HPVE6 T178G、E7 A647G可能与宫颈癌年轻化密切相关,故对该人群的检测并及时尽早采取干预措施。     

HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA在宫颈细胞学诊断分流中的应用

目的 比较人乳头瘤病毒(human papillomavirus; HPV)E6和E7 mRNA(E6/E7 mRNA)和HPV DNA检测在分流宫颈细胞学检查结果为意义不明确的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)患者中的应用价值。方法 选取2021年3月～2022年1月浙江省杭州市妇产科医院共300例液基细胞学诊断为ASCUS的就诊患者作为研究对象。其中150例ASCUS患者行HPV DNA二代杂交捕获(HC2)检测,另外150例ASCUS患者行HPV E6/E7 mRNA检测。300例均接受阴道镜活检和病理学检查,并以阴道镜活检的病理结果作为金标准,分析HPV DNA HC2检测以及HPVE6/E7 m RNA检测结果与宫颈病变病理分级的相关性。结果 150例ASCUS患者中HPV E6/E7 mRNA检测阳性122例,HPV DNA HC2检测阳性136例。HPV E6/E7 mRNA在ASCUS患者宫颈脱落细胞中的阳性率随宫颈病变程度增加而增加,且与宫颈病变病理结果密切相关(χ²=12.5,P=0.002)。与HPV DNA HC2检测相比,HPV E6/E7...     

宫颈癌HPV E6/R7 mRNA与血清SCCA CEA水平的相关性

目的 分析宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA与血清鳞状细胞癌抗原(SCCA)、癌胚抗原(CEA)水平的相关性.方法 选择2018年10月至2020年3月于河南省南阳市中心医院行宫颈病变筛查的178例可疑宫颈癌女性作为研究对象,均完成液基细胞学筛查及HPV E6/E7 mRNA检测,并采血测定SCCA、...     

人乳头瘤病毒早期癌蛋白E6/E7稳定表达细胞系的构建及其对Rab12表达的影响

目的 探究人乳头瘤病毒(HPV)编码的早期癌蛋白E6/E7对小GTP酶蛋白Rab12表达的影响。 方法 利用逆转录病毒包装系统获得含pBabe-Vector质粒和pBabe-16E7质粒的高滴度病毒颗粒,感染细胞,并用嘌呤霉素筛选获得稳定表达HPV16E7的UMSCC 10A-16E7细胞系,Western blotting检测E7相关蛋白p53和E2F1的表达变化,比较UMSCC 10A-Vector细胞系和UMSCC 10A-16E7细胞系的Rab12蛋白表达水平。用同样方法在HaCaT、RPE1细胞系中进一步验证。用siRNA干扰SiHa、Caski细胞(HPV-16阳性的宫颈癌细胞)中16E6/E7及HeLa细胞(HPV-18阳性的宫颈癌细胞)中18E6/E7的表达,通过Western blotting比较siRNA干扰前后E6和E7相关蛋白(E2F1、p53和Rab12)的表达差异。 结果 利用逆转录病毒包装系统成功构建稳定表达的细胞系,过表达E6/E7的细胞系中Rab12表达升高,干扰E6/E7的细胞系中Rab12的表达降低。 结论 HPV编码的早期癌蛋白E6/E7可调控Rab12的表达。     

人乳头瘤病毒16型E7DNA疫苗的构建及其诱导特异性淋巴细胞增殖的研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )E7DNA疫苗诱导机体特异性细胞免疫应答的情况。方法 :采用分子克隆技术 ,构建HPV16野生型E7基因的真核表达重组体 ,将其转化大肠杆菌JM10 9进行筛选 ,通过限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析 ,证明重组质粒中目的基因插入片段及载体DNA大小、方向、插入位点均正确 ,获得HPV16E7DNA疫苗 ,将E7DNA疫苗经皮内注射免疫动物 ,MTT比色法体外检测特异性淋巴细胞增殖反应。结果 :野生型E7DNA疫苗免疫组脾淋巴细胞在体外受到E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应。结论 :野生型E7DNA疫苗可诱导特异性的细胞免疫应答 ,皮内注射HPVDNA疫苗是一种简便有效的免疫接种途径     

HPV16E6和E7基因序列多态性与宫颈癌临床病理特征相关性

目的 探讨宫颈癌人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7转化基因序列多态性,及其与宫颈癌临床病理特征的相关性.方法 从77例宫颈癌组织中筛选出51例HPV16阳性标本,扩增E6及E7基因,PCR产物进行序列测定.应用DNAStar生物软件进行核苷酸和氨基酸序列的分析.结果 宫颈癌组织中HPV16 E6共测得6个突变位...     

HPV16嵌合型疫苗的构建及其免疫效应初探

目的 构建以碳末端锌指结构突变的E7基因为基础，融合HSP70的嵌合型DNA疫苗，检测其诱导的特异性T淋巴细胞增殖活性，初步评价此疫苗对HPV相关肿瘤的治疗作用。方法 利用PCR法定点突变E7基因碳末端的锌指结构，以其为基础融合热休克蛋白70，克隆入pcDNA．3．1-质粒构建嵌合型DNA疫苗。DNA测序，确认E7基因突变位点及DNA疫苗阅读框架。用脂质体法将pcd—E7-HSP转染A549细胞，经G418筛选后，提取RNA，RT—PCR检测E7基因表达。DNA疫苗免疫C57BL6小鼠。取其脾细胞与E7蛋白在体外共同培育，MTT法检测T淋巴细胞增殖活性。结果 E7基因突变位点及阅读框架均正确，E7基因可检测到表达。疫苗免疫后C57BL/6小鼠脾细胞增殖活跃。结论：E7基因锌指结构的突变及融合HSP70能够诱导特异性的细胞免疫应答。     

HPV 6b型E7基因与CRT基因真核融合表达质粒的构建

目的采用HPV 6b E7基因与钙网蛋白(Calretieulin,CRT)基因共连接方法,构建高特异性、能更加活化细胞免疫的HPVDNA疫苗。方法利用PCR技术分别获得HPV6bE7基因和CRT基因片段,与带GFP标记的真核表达质粒pCDNA 3．1 共连接。结果获得阳性重组表达质粒pCDNA 3．1 -GFP-HPV6b E7／CRT 180,经酶切鉴定及核酸序列测定证明真核融合表达质粒构建完成。结论HPV6b型E7基因与CRT基因真核融合表达质粒的成功构建为下一步建立高特异性、高效HPVDNA疫苗的研究打下基础。     

高危人乳头瘤病毒DNA及其E6／E7mRNA对宫颈病变的影响

目的：分析不同宫颈病变患者高危HPV DNA及其E6/E7mRNA在不同宫颈病变中的阳性率有无差异,评估mRNA拷贝数大小与病变等级的关系。方法采用聚合酶链反应-反向点杂交技术、原位杂交技术对101例宫颈脱落细胞标本（炎症组29例,低级别组29例,高级别组43例）进行HPV分型及高危 HPV E6/E7 mRNA拷贝数的检测。结果高危HPV DNA及其E6/E7mRNA在炎症组与低级别组、炎症组与高级别组中的阳性率均具有统计学差异（均P＜0.05）,其拷贝数的均值随着宫颈病变等级的上升而明显增加。结论高危HPV的感染及其E6/E7mRNA的表达与宫颈病变密切相关,E6/E7 mRNA拷贝数的大小影响宫颈病变的程度。两者结合将更有利于对宫颈病变的综合评估。     

HPVE6/E7mRNA和高危型HPVDNA检测在ASC-US患者中的临床应用研究

目的 分析并比较人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7mRNA和高危型HPV（HR-HPV）DNA检测在无明确诊断意义的不典型鳞状细胞（ASC-US）患者中的临床应用价值。方法 对160例薄层液基细胞学检查（TCT）诊断为ASC-US的患者进行HPVE6/E7mRNA和HR-HPVDNA的检测,并进行阴道镜检查和宫颈活检,结合病理学诊断结果进行统计学分析。结果（1）21～29岁年龄组HR-HPVDNA阳性率明显高于其他年龄组,差异有统计学意义（P＜0.05）;各年龄组HPVE6/E7mRNA的阳性率无统计学差异（P＞0.05）。（2）宫颈上皮内瘤变（CIN）II+级和CINIII+级的HPVE6/E7mRNA阳性率明显高于CINII－级,差异有统计学意义（P＜0.05）;CINII+级和CINIII+级的HR-HPVDNA阳性率亦明显高于CINII-级,差异有统计学意义（P＜0.05）;CINII+级和CINIII+级的HPVE6/E7mRNA阳性率和HR-HPVDNA阳性率均无统计学差异（均P＞0.05）。（3）HPVE6/E7mRNA检测诊断CINII+级的灵敏度为69.2%,低于HR-HPVDNA检测的80.8%,但差异无统计学意义（P＞0.05）;特异度为73.9%,明显高于HR-HPVDNA检测的61.9%,差异有统计学意义（P＜0.05）;根据ROC曲线可见HPVE6/E7mRNA检测诊断CINII+级的效能高于HR-HPVDNA检测。结论与HR-HPVDNA检测相比,HPVE6/E7mRNA检测用于ASC-US患者分流时是否需要进一步作阴道镜检查的判断更为确切。     

高危型HPVE6/E7mRNA检测对高级别宫颈病变的诊断价值

目的探讨高危型人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7mRNA检测对高级别宫颈病变的临床诊断价值。方法选取2014年8月至2015年3月在妇科门诊及住院的疑似宫颈病变患者311例,均行宫颈脱落细胞的薄层液基细胞学检查、HPVDNA分型检测和高危型HPVE6/E7mRNA检测,对其中任意一项或多项结果阳性者行阴道镜下宫颈活组织检查和组织病理学检查。以病理报告为金标准,进行统计学分析。结果慢性宫颈炎组中HPVDNA分型检测检出率（29.4%）高于高危型HPVE6/E7mRNA（17.5%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。高危型HPVE6/E7mRNA检测预测高级别宫颈病变的特异度（73.4%）高于HPVDNA分型检测（59.8%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。高危型HPVE6/E7mRNA检测诊断高级别宫颈病变ROC曲线下面积（0.816）大于HPVDNA分型检测（0.710）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论与HPVDNA分型检测相比,高危型HPVE6/E7mRNA检测预测高级别宫颈病变具有更好的特异度,其诊断效能更佳。     

HPVE6/E7mRNA和HPVDNA作为宫颈癌筛查分子标记物的比较研究

目的：探讨人乳头瘤病毒(HPV) DNA和HPV E6/E7 mRNA的两种检测标记物在宫颈癌筛查中的应用价值。方法选取2014年1月至2016年1月湛江廉江市人民医院妇产科收治的406例宫颈癌患者为研究对象,采用超薄液基细胞学检查(TCT)作为金标准。采用PCR法检测所有患者的HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA,并评价两种标记物对宫颈癌诊断的敏感性和特异性。结果406例患者中HPV DNA阳性率为47%(191/406),而HPV E6/E7 mRNA检测阳性率为31.2%(127/406),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);两种检测标记物所得结果的符合率为85.5%;在CIN1标本中,HPV DNA检测的敏感度和特异度分别为88.6%、75.8%,与HPV E6/E7 mRNA检测的86.9%、73.4%比较差异均无统计学意义(P>0.05);在CIN2标本中,HPV E6/E7 mRNA检测的特异性为90.5%,高于HPV DNA的79.8%,差异有统计学意义(P<0.05),但是敏感性为83.9%,明显低于HPV DNA的93.7%,差异有统计学意义(P<0.05);在CIN3标本中,HPV mRNA检测的敏感度和特异性分别为98.7%、85.9%,均高于HPV DNA的89.1%、78.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论检测HPV mRNA在宫颈癌患者的诊断方面比检测HPV DNA更具有优势。     

HPV16 E7"自杀性"DNA 疫苗的构建及其体外表达特性研究

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染BHK-21细胞,然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400 bp的目的基因片段,测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100%同源。免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实,pSCA/E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA/E7,该重组质粒可在BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡。     

派特灵宫颈用药对HPV E6/E7 mRNA表达的影响

目的探讨派特灵宫颈用药对人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA的影响及临床意义。方法选取2015年1月～2016年10月在我院行阴道镜下宫颈活检病理为CINⅢ及以下病变,并且HPV E6/E7 mRNA持续3个月阳性的患者198例,根据治疗方式不同归为非手术及手术组,两组再随机细分为派特灵用药组及对照组。非手术组共102例,其中用药组48例,对照组54例;手术组共96例,其中用药组46例,对照组50例。用药组予派特灵治疗1个疗程,对照组随访观察,于第6个月、9个月、12个月复查HPV E6/E7 mRNA。分析比较HPV E6/E7 mRNA转阴率、有效率及拷贝水平变化。结果非手术用药组第6、9、12个月转阴率分别为45.8%、62.5%、75.0%,有效率分别为81.3%、87.5%、89.6%,显著高于对照组(P0.05)。手术用药组第6、9、12个月转阴率分别为71.7%、80.4%、82.6%,有效率分别为84.8%、91.3%、89.1%,显著高于对照组(P0.05)。非手术用药组第6个月、9个月、12个月HPV E6/E7 mRNA拷贝水平下降幅度为56.8%、72.5%、71.5%,手术用药组HPV E6/E7 mRNA拷贝水平下降幅度为74.2%、82.8%、83.9%,均优于对照组(P0.05)。结论派特灵宫颈用药可以降低HPV E6/E7 mRNA拷贝水平,抑制E6/E7癌基因活性,降低宫颈癌发生风险。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

E6/E7 mRNA检测筛查妊娠期高危型人乳头瘤病毒感染的价值研究

背景妊娠期高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染及宫颈病变需要更为有效的诊断与分流管理措施,从而指导个性化诊疗,减少妊娠期非必要有创检查。目的将妊娠期HR-HPV感染E6/E7 mRNA检测与HR-HPV DNA检测进行比较,评估E6/E7 mRNA检测应用于妊娠期HR-HPV感染及宫颈病变的诊断价值。方法选取2016年1月至2019年1月在首都医科大学宣武医院妇产科建档定期产检的符合纳入标准的20~45岁育龄妊娠期女性为研究对象,分别进行薄层液基细胞学检测（TCT）及HR-HPV DNA检测,结果异常者进一步行阴道镜检查并取活组织送病理检查（以病理检查结果为金标准）,同时留取宫颈脱落细胞检测HR-HPV E6/E7 mRNA片段。病理检查结果为宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ级、CINⅢ级定义为宫颈高级别病变。结果本研究共调查20~45岁健康单胎妊娠女性1 058名,其中TCT结果异常和/或HPV 16、18亚型者118名,同意行阴道镜检测并成功获得病理检查结果者84名。在病理检查结果为CINⅠ及正常或炎症的女性中,HR-HPV E6/E7 mRNA检测阳性率均低于HR-HPV DNA检测（P<0.05）;在病理检查结果为CINⅡ级及CINⅢ级的女性中,HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA检测阳性率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。HR-HPV DNA预测宫颈高级别病变的灵敏度为89.7%（26/29）,特异度为21.8%（12/55）,阳性预测值为37.1%（26/69）,阴性预测值为75.0%（12/15）;HR-HPV E6/E7 mRNA预测宫颈高级别病变的灵敏度为65.5% （19/29）,特异度为54.5%（25/55）,阳性预测值为43.0%（19/44）,阴性预测值为75.0%（25/40）。McNemar配对χ2检验结果显示：HR-HPV E6/E7 mRNA预测宫颈高级别病变的灵敏度低于HR-HPV DNA,特异度高于HR-HPV DNA（P<0.05）。结论HR-HPV E6/E7 mRNA检测可以在一定程度上提高CINⅡ级及以上宫颈高级别病变的诊断特异度,因而可以考虑将HR-HPV E6/E7 mRNA检测应用于HR-HPV阳性病例的筛查分流管理,避免妊娠期非必要有创检查。