兔眼经瞳孔温热疗法阈值能量治疗的组织病理反应和细胞凋亡

目的:观察兔眼视网膜经瞳孔温热疗法(transpupillary thermotherapy,TTT)阈值能量照射后组织病理反应和细胞凋亡情况.方法:健康青紫兰兔20只,采用阈值能量对实验眼采用1.2mm光斑的810nm激光照射60s.采用眼底镜和眼底照相对光斑进行形态学研究,采用光镜和电镜的方法研究光斑的组织病理和超微结构的改变,采用TUNEL法、荧光素标记Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色流式细胞测定法观察视网膜细胞的凋亡.结果:TTT后1d可见视网膜轻度灰白色水肿,后视网膜逐渐出现色素沉着.组织病理学切片显示神经节细胞无显著性破坏.TUNEL染色可见视网膜全层均有细胞凋亡的发生,以内颗粒层为主,流式细胞双染测定显示以凋亡为主.结论:阈能级TTT照射未引起神经节细胞严重损伤,较安全,其作用机制以细胞凋亡为主.     

微脉冲半导体激光照射对正常大鼠视网膜损伤的观察

目的观察810 nm微脉冲半导体激光照射对正常棕色挪威大鼠（BN 大鼠）视网膜的损伤。方法使用不同能量及负载系数（duty cycle, D C）的810 nm微脉冲半导体激光对130只BN大鼠眼进行照射。分别于激光照射后第1、3、7、1 4、28 d进行彩色眼底照相、荧光素眼底血管造影及组织病理学观察，并检测热休克蛋白(HSP-70)在视网膜的表达情况，用TdT介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检查细胞凋亡 。结果阈值及阈上能量条件下，低DC时激光照射部位无光学显微镜下的组织病理学改变，高DC时出现可累及视网膜内核层组织的严重损伤；微脉冲半导体激光照 射后1 d大鼠视网膜内核层细胞HSP-70阳性表达细胞即较正常视网膜明显增加，3 d时达到高峰，以后逐渐下降，14 d时恢复近正常水平。HSP-70阳性细胞数量 随激光能量提高而增加。TUNEL染色可见激光照射部位凋亡细胞主要存在于视网膜色素上皮（RPE）层、外核层、内核层，甚至脉络膜层，其数量随激光能量增高而增多。在激光照射后第3 d，凋亡细胞数量最多。结论810 nm微脉冲半导体激光照射后，视网膜损伤程度与激光能量及DC呈正相关。低能量高负载系数（50 mW，50％）或高能量低负载系数（100 mW，5％～15％）时，损伤限于RPE层，避免了神经上皮层的损伤。激光照射后HSP-70高表达及细胞凋亡可能在组织损伤修复过程发挥重要作用。 （中华眼底病杂志，2008，24：122-126）     

经瞳孔温热疗法对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的研究低阈值经瞳孔温热疗法（TTT）对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞（RGC）是否具有保护作用。设计实验研究。研究对象BN大鼠。方法采用810nm二极管激光机对10只大鼠视网膜进行热刺激，照射光斑1．2mm，能量50mW，照射时间20s，干预后3d光镜下观察视网膜形态结构的改变，免疫组化方法检测HSP70、HSP27在视网膜组织表达。采用上述激光参数，照射视网膜后3d，制作急性高眼压模型（TTT＋I/R组，n=10），采用TUNEL法检测RGC层细胞凋亡数量，及计数高倍镜下RGC层细胞数，与未干预的急性高眼压模型组（I/R组，n=10）、单纯TTT干预组（TTT组）及正常对照组（n=6）进行比较。主要指标免疫组化染色RGC细胞数及RGC层细胞凋亡数。结果采用低阈值TTT可诱导BN大鼠视网膜神经节细胞HSP70及HSP27表达，且光镜下未出现明显视网膜脉络膜形态的改变。TTT＋I／R组RGC层细胞凋亡数量明显少于I／R组（P=0．048），且前者RGC层细胞数量明显多于后者（辟0．016）；TTT组与正常对照组比较RGC层细胞凋亡数量无显著性差异（P=0．882），但RGC层细胞数明显少于正常对照组（P=0．001）。结论低阈值TTT可诱导BN大鼠视网膜HSP70、HSP27表达，并在急性高眼压损伤下对大鼠RGC凋亡具有抑制作用。（眼科，2007,16：48—51）     

不同能量半导体激光对大鼠脉络膜新生血管形成的影响

目的 观察不同能量的半导体激光对诱导棕色挪威(BN)大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成的影响.方法 雄性BN大鼠42只随机分组,将其中的36只根据激射激光的功率不同平均分为3个实验组,其余6只作为正常对照组.采用810nm半导体激光光凝大鼠双眼视网膜,光斑直径75μm,曝光时间0.1s,激光功率分别为120、140和160mW,于光凝后1、7、14、21、28、56d进行荧光素眼底血管造影(FFA)和吲哚菁绿血管造影(ICGA)检查,随后于每个时间点每组各处死2只大鼠,摘除眼球在光学显微镜下检查CNV形成情况.结果 不同能量半导体激光光凝BN大鼠视网膜后7dCNV开始形成,21d达高峰,此时根据FFA和ICGA计算的3组CNV的成模率分别为51.3%、91.8%、88.3%及51.3%、92.7%、93.7%,56d时CNV有所减少.光凝后7d可见光凝斑周围炎性细胞增多,CNV形成;14d光凝斑增厚,色素细胞增生、移行;21d时140mW及160mW组多数光凝斑增厚,可见明显CNV;随后炎性细胞减少,胶原纤维增多,56d时仍可见CNV结构.结论 功率分别为120、140、160mW的810nm半导体激光均能成功诱导BN大鼠形成CNV,140mW组成模率高且受干扰因素少,是建立BN大鼠CNV模型比较理想的参数.     

不同激光强度经瞳孔温热疗法对色素兔视网膜细胞凋亡的影响

目的 观察不同激光能量的经瞳孔温热疗法（TTT）对色素兔视网膜的病理损伤及对细胞凋亡的影响。 方法 将14只有色家兔随机按不同激光能量分为空白组、50、70、90、110、130、150 mW组，每组2只兔4只眼行TTT治疗照射后,分别于24、48 h后取视网膜组织进行光学显微镜检查及用原位末端转移酶标记（TUNEL）技术和流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 直接检眼镜下激光反应斑颜色随能量增加由灰变白逐渐变浅，即由灰白——白——浓白，直径逐渐增大。苏木素 伊红（HE）染色：50~70 mW组光学显微镜下视网膜各层结构无明显改变；90~130 mW组视网膜结构完整,视锥、视杆细胞肿胀，内颗粒层可见少量的固缩核和细胞浆空泡化。以上能量组激光照射后24、48 h，光学显微镜下视网膜结构与空白对照组无明显差别。150 mW组激光照射后24 h视网膜组织各层肿胀、变性，感光细胞内外节部分缺失；而激光照射后48 h视网膜组织可见明显坏死，全层均可见细胞缺失。TUNEL检测结果显示，各能量组外颗粒层均可见阳性细胞，随激光能量的增加而增加，并逐渐累及内颗粒层和神经节细胞层。流式细胞仪检测结果显示，激光照射后24 h，各能量组均可见细胞凋亡峰。 结论 兔视网膜在能量为50~70 mW的TTT照射后，视网膜组织未见明显改变，但感光细胞凋亡显著增加。随着TTT激光能量增加，视网膜组织出现肿胀、变性甚至坏死。细胞凋亡逐渐累及内颗粒层和神经节细胞层。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 249-252)     

实验性脉络膜新生血管经瞳孔温热疗法后热休克蛋白70的表达及意义

目的 探讨热休克蛋白70（HSP70）在经瞳孔温热疗法（TTT）治疗脉络膜新生血管（CNV）中的作用及机制.方法 通过氪红激光眼底光凝诱导C57BL/6J小鼠30只（30只眼）产生CNV,6 d后,观察眼底荧光血管造影（FFA）,给予阈值上、阈值、阈值下TTT治疗及不治疗对照.正常C57BL/6J小鼠16只（16只眼）,给予相应阈值上、阈值、阈值下TTT治疗.TTT治疗后7 d,观察FFA,摘除眼球,做病理学检查和HSP70免疫组织化学检测.结果 C57BL/6J小鼠CNV进行TTT治疗后7 d,与未治疗对照组相比,阈值下和阈值TTT组CNV复合体明显变薄 阈值上TTT组CNV复合体未见明显变薄,新生血管腔无明显减少.正常眼和未经TTT治疗的CNV眼,HSP70阴性.实验性CNV和正常视网膜经TTT治疗后,HSP70免疫染色阳性可见于视网膜视锥视杆细胞层、外丛状层,染色范围取决于TTT能量大小.结论 阈值下TTT治疗CNV,眼底镜下视网膜尚无明显变化时,HSP70在视网膜已有表达.HSP70在TTT抑制CNV的形成中起重要作用.TTT的能量、热休克蛋白的表达与CNV减少,三者之间的关系有待量化以指导临床.     

577nm阈下微脉冲激光与577nm激光光凝对兔视网膜组织影响的比较

背景 近年来研究表明,577 nm阈下微脉冲激光治疗视网膜疾病可达到传统577 nm激光光凝的治疗作用且对视网膜组织损伤小,但其具体作用机制和敏感的靶细胞尚未完全阐明. 目的 探讨和比较577 nm阈下微脉冲激光与577 nm激光光凝视网膜后成年中华黑兔视网膜组织形态学变化,为577 nm阈下微脉冲激光光凝在临床上的应用提供依据.方法 采用抽签法按照视网膜光凝条件不同将26只中华黑兔分为正常对照组(2只)、577 nm激光组(6只)和阈下微脉冲激光组(18只),其中阈下微脉冲激光组按照激光工作负载率的不同亚分为9％、12％和15％阈下微脉冲激光组,每组各6只,正常对照组不做任何处理.光凝后行彩色眼底照相及OCT检查,摘取兔眼球壁行苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察兔脉络膜和视网膜组织结构的变化.结果 彩色眼底照相和OCT显示正常对照组兔眼视网膜组织结构清晰.9％阈下微脉冲激光组OCT扫描可见视网膜神经上皮层稍模糊;12％阈下微脉冲激光组光凝斑处视网膜神经上皮层轻度水肿,视网膜色素上皮(RPE)层稍模糊;15％阈下微脉冲激光组可见光凝斑处视网膜神经上皮层明显水肿,RPE层局限性隆起;各阈下微脉冲激光组彩色眼底照相均未见光凝斑.577 nm激光组兔眼彩色眼底照相可见灰白色光凝斑,OCT扫描层面可见视网膜呈多灶性隆起,视网膜各层组织结构模糊,伴浆液性神经上皮层脱离.视网膜组织病理学检查可见,与正常对照组兔眼相比,9％和12％阈下微脉冲激光组兔眼脉络膜血管变形或出血,但视细胞形态结构、双极细胞层和视网膜神经节细胞(RGC)层未见明显改变;15％阈下微脉冲激光组视细胞扁平状膜盘肿胀,双极细胞层和RGC层未见明显改变;577 nm激光组兔眼视细胞层、双极细胞层和RGC层结构紊乱,RPE层变薄.结论 577 nm阈下微脉冲激光对脉络膜层和RPE层具有高度选择性,视网膜光凝后对视网膜神经上皮层的损伤程度轻微,既可发挥治疗作用,又不损伤视网膜神经上皮;577 nm激光视网膜光凝可对视网膜全层造成损伤.     

经瞳孔温热疗法诱导大鼠热休克蛋白60在视盘中的表达

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）阈下刺激诱导大鼠视盘中热休克蛋白（HSP）60的表达,探讨TTT对视盘组织超微结构的影响。方法采用810nm二极管激光对12周龄的BN大鼠56只右眼视盘进行阈值下TTT照射,选择激光参数为光斑直径0.5mm、持续时间60s、能量60mW;另设8只正常大鼠为对照。实验鼠分别于TTT照射后24h、72h和1周过量麻醉处死,实验眼的视盘组织切片制备后应用免疫组织化学染色法鉴别BN大鼠视盘TTT照射后HSP60的表达;Western blot法对TTT干预后HSP60在视盘组织中的表达进行半定量分析,并以吸光度（A）值表示。透射电镜下观察TTT照射后1周实验眼视盘组织的超微结构变化。结果免疫组织化学染色显示,HSP60在正常大鼠视盘局部呈弱阳性表达,TTT干预后24h、72h及1周HSP60的阳性染色明显增强,72h最强;Western blot蛋白质表达半定量分析显示,HSP60在正常大鼠视盘中的表达量为21458.13±156.32,在TTT干预后24h、72h及1周表达量分别为46907.24±10099.20、61848.02±2714.49、40738.01±5670.12,较正常大鼠视盘中的表达量明显上调,差异均有统计学意义（t=0.002、t=0.000、t=0.001,P〈0.01）,72h表达最强。阈下TTT干预后1周透射电镜下可见视盘神经纤维轴索部分髓鞘板层离散,个别轴索神经微丝、微管有溶解现象,有轻度轴膜下水肿,但神经纤维密度无明显减少。结论 TTT阈下刺激可诱导大鼠视盘中HSP60的表达,并对正常组织的超微结构产生轻度影响。     

经瞳孔温热疗法后视网膜和脉络膜的细胞凋亡研究

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）对视网膜、脉络膜层细胞凋亡表达的影响。方法利用恒河猴做动物模型，于治疗后不同时间点摘除双眼。应用组织学及TUNNEL检测技术，研究TTT治疗与细胞凋亡的相互关系，及对视网膜、脉络膜的组织病理学影响。结果正常猴眼视网膜及脉络膜均未见细胞凋亡发生。TTT治疗后，可见光斑中央细胞坏死、周边细胞凋亡发生。1h至4周，均可见凋亡阳性细胞，4个月时，仍可见少量凋亡细胞存在。同时，TTT治疗可引起视网膜不同程度的组织病理学损害。结论TTT可引起视网膜组织病理学损害。局部温度的升高会诱导视网膜脉络膜细胞凋亡的产生，减少坏死和炎症的程度。     

氪激光诱导的大鼠脉络膜新生血管模型研究

目的 探讨氪激光创建棕色挪威(brown norway,BN)大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的可行性,为明确CNV的发生机制及防治研究奠定基础。方法 雄性BN大鼠33只(66只眼),取每只鼠一只眼作为实验眼,另一只眼为对照眼。用氪激光(波长为647nm)对大鼠实验眼视网膜进行光凝,激光功率、光凝斑直径和曝光时间分别为360mW、50μm及0．05s,每只眼10个光凝斑点。于光凝后3、7、14、21、28及56d行荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)和吲哚青绿血管造影(indocyanine green angiography,ICGA)检查后处死动物,摘除眼球制作标本,进行组织病理学及电镜观察。结果 光凝后7d出现CNV,21d达高峰,造模成功率为76．0％,FFA检查显示典型圆盘状荧光渗漏,ICGA检查可见CNV充盈,光镜和电镜下均可见视网膜下CNV形成。CNV厚度自光凝后7—21d逐渐增加,之后CNV厚度变化不显著。结论 氪激光损伤可以创建BN大鼠脉络膜新生血管模型,成模时间短,持续时间长,成模率高。     

经瞳孔温热疗法对大鼠视神经钳夹视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）阈下反应对BN大鼠视神经钳夹后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法采用阈下TTT对BN大鼠视网膜进行照射后3d,通过逆行标记RGCs的方法,对TTT＋视神经钳夹组（A组）、TTT＋假手术组（B组）、单纯视神经钳夹组（C组）和空白对照组（D组）在视神经钳夹后1、2、4周进行RGCs计数并比较;检测视网膜TTT阈下反应的热休克蛋白70（HSP70）表达;观察TTT阈下反应对视网膜的影响。结果视神经钳夹后4周,A组RGCs数显著高于C组（P=0.006）,而1周和2周时2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;各时间点B组和D组的RGCs数差异无统计学意义（P〉0.05）。视网膜经阈下TTT干预后,HSP70表达高于对照眼。阈下TTT照射能引起视网膜组织形态上的改变。结论阈下TTT可显著提高视神经钳夹4周后RGCs的存活数量;其保护机制可能与诱导视网膜内源性HSP70表达、启动内源性保护机制有关。     

Subthreshold transpupillary thermotherapy of the retina and experimental choroidal neovascularization in a rat model

PURPOSE: To study the effect of subthreshold transpupillary thermotherapy (TTT) on the retina and experimental choroidal neovascularization (CNV) in the rat. METHODS: Subthreshold TTT was performed on normal Brown Norway rats or those with krypton laser-induced CNV and appropriate controls with an 810-nm diode laser coupled to a slit lamp. At different intervals after TTT, fundus fluorescence angiography (FFA) and histopathological examinations were performed. Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling (TUNEL) was used to detect apoptosis. Immunohistochemistry was used to detect heat shock protein 70 (Hsp70) expression. RESULTS: In normal retina, edema and whitening was found on day 1 after TTT. Different degrees of hyperfluorescence could be seen on FFA. Obvious retina damage, especially in the outer layers, was observed by histology in all the lesions that appeared whitened. In the CNV there was congestion and less damage in the overlying retina than in normal retina on day 1 after TTT. Apoptosis was detected in all retinal layers and CNV lesions by TUNEL. In normal eyes, after TTT, Hsp70 expression was increased in the inner layers of the retina and some of the cells in the choroid. Hsp70 was also increased in laser-induced CNV. Two weeks after TTT, the CNV showed a tendency for fibrosis by Masson staining. FFA did not show much change in the CNV lesions 2 weeks after TTT. CONCLUSION: Subthreshold TTT has adverse effects on the overlying retina and thus is likely to cause significant functional and morphological long-term sequelae. Subthreshold TTT can cause apoptosis in laser-induced CNV in rats.     

恒河猴经瞳孔温热疗法与热休克蛋白相关研究

目的探讨恒河猴经瞳孔温热疗法（transpupillary thermotherapy，TTT）治疗后视网膜和脉络膜组织热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSPT0）表达。方法利用恒河猴做动物模型。于1TIrr治疗后不同时间点（1h、1d、1周、2周、1月、4月）摘除双眼固定。应用免疫组化技术，分析TTT治疗对猴眼视网膜和脉络膜组织HSP70的影响。结果TTT治疗后，于1d起，在强反应光斑边缘视网膜和脉络膜有HSP70的表达，4个月时仍有弱表达。弱反应光斑1d时，在视网膜全层及脉络膜均有HSP70表达，4个月时消失。同时,TTT治疗可以引起视网膜不同程度组织病理学的损害。结论TTT可以引起视网膜、脉络膜组织病理学损害。局部温度的升高会诱导视网膜、脉络膜内源性HSP70的产生，并且这种表达在激光治疗后1～4个月的猴眼中仍可以存在。     

532激光激发Erythrosin B建立大鼠视网膜静脉阻塞模型

目的：用光敏剂Erythrosin B激光诱导建造大鼠视网膜静脉阻塞模型,并观察该疾病模型的疾病过程以及组织学改变。 方法：分别于0,1,3h;1,2,4,7,14,21d对激光建模后的中央静脉阻塞（CRVO）和分支静脉阻塞（BRVO）大鼠模型行眼底观察、眼底照相和荧光造影。再分别于7,14,21d行视网膜组织切片检查。 结果：可以观察到CRVO组和BRVO组大鼠阻塞的静脉在造模后7d完全再灌注。视网膜出血和水肿在第4d最严重,到第14d时,造模组大鼠的视网膜都可观察到苍白水肿;第21d时,CRVO组视网膜内可观察到有黄色沉淀物。在BRVO组,视网膜出血局限于阻塞的静脉区域,但是视网膜水肿往往在一定程度波及到静脉未阻塞的象限。无论CRVO还是BRVO组,14d后都可以观察到显著的神经节细胞层细胞缺失。 结论：采用Erythrosin B作为光敏剂,532nm激光照射视网膜制备大鼠视网膜静脉阻塞模型血管阻塞可以持续7d。CRVO组和BRVO组都可以观察到显著的视网膜神经节细胞层细胞的缺失。该动物疾病模型稳定,可以为视网膜缺血和细胞凋亡的分子机制研究提供帮助。     

兔视网膜光凝术后组织形态学改变的动态观察

目的:研究532nm激光TsoⅢ级光斑光凝色素家兔视网膜后光凝斑组织形态改变的病理特征。方法:(1)18只色素家兔按光凝后观察时间1,3,7,14,21d及28d分为6组,每组3只。每只(双眼)用532nm激光TsoⅢ级光斑光凝色素家兔视网膜后极部30点(532nm,450mW,100μm,0.05s)。(2)光凝后不同观察时间点行荧光素眼底血管造影(fluorescence fundus angiography,FFA)观察光凝斑FFA特点;取光凝区眼球壁制作标本,进行光镜和透射电镜观察并定量分析视网膜光凝斑大小、视网膜细胞存活率的动态变化。结果:(1)荧光血管造影:光凝后3d,部分光凝斑为高荧光,荧光渗漏随时间延长逐步减轻,至光凝后14d,荧光渗漏基本消失。(2)组织病理学检查:光凝斑区域视网膜各层组织细胞结构破坏;光凝斑周围光感受器细胞的凋亡或坏死和神经节细胞的损伤;继后色素上皮细胞、M櫣ller细胞和成纤维细胞增生修复破坏区。(3)形态学定量指标:光凝后第1d视网膜光凝斑直径最大为116.4±9.6μm,比参照光斑(75μm)增大了55.2%,随后有下降的趋势,21d后为82.8±5.4μm趋于稳定。视网膜细胞存活率光凝后第1d最小为(29.5±4.2)%,随后有上升的趋势,21d为(48.2±4.4)%趋于稳定。结论:视网膜光凝TsoⅢ级光斑会导致光凝斑周围视网膜感觉神经细胞的非选择性、扩展性损伤。     

Effect of posterior sub-tenon administration of triamcinolone acetonide on leukocyte dynamics in rat retinal microcirculation after panretinal photocoagulation

PURPOSE: Macular edema is one of the serious side effects associated with panretinal photocoagulation (PRP). The inhibitory effect of triamcinolone acetonide (TA) on leukocyte-endothelial cell interactions in vivo after PRP was evaluated. METHODS: Argon laser photocoagulation was performed in one half of the retinas in male Brown Norway rats. Experimental rats were injected with 2 mg TA (50-microL volume) in the posterior sub-Tenon space, and the vehicle-treated rats were injected with the same amount of saline (50 microL) immediately after PRP. Untreated rats were used as the control. Leukocyte dynamics in retinal microcirculation and retinal vessel diameters were evaluated 1 day after laser photocoagulation with the use of acridine orange digital fluorography. Retinal thickness was evaluated with optical coherence tomography. RESULTS: The number of rolling leukocytes and accumulating leukocytes in the retina decreased by 66% in the TA-treated rats (P < 0.01) and by 24% (P < 0.05), respectively, compared with the number in the vehicle-treated rats. Retinal thickness in the vehicle-treated rats was significantly thicker than that in control rats 1 day after laser photocoagulation (P < 0.01). Retinal thickness in the TA-treated rats was significantly suppressed compared with that in the vehicle-treated rats (P < 0.05). CONCLUSIONS: Sub-Tenon administration of TA significantly suppressed leukocyte dynamics in rat retinal microcirculation and decreased retinal edema after laser photocoagulation. The results suggest that the suppression of leukocyte-endothelial cell interactions in retinal microcirculation may be one mechanism responsible for the therapeutic effect of sub-Tenon TA on postlaser retinal edema.     

Transpupillary thermotherapy for age-related macular degeneration: Principles and techniques

Transpupillary thermotherapy (TTT) is a subthreshold, low irradiance, long exposure duration, large spot size, infrared diode laser protocol. Retinal temperature increases in TTT for choroidal neovascularization (CNV) are substantially lower than those in conventional short-pulse photocoagulation, but they are maintained for 60 seconds to achieve therapeutic results. Treatment power is adjusted for retinal lesion size, chorioretinal pigmentation, macular elevation and media clarity. TTT uses 810-nm diode laser infrared radiation, which has no significant retinal phototoxicity. A parfocal laser delivery system is required to assure uniformity of irradiance across large diameter treatment spots. Relative contraindications for TTT include dense subretinal hemorrhage, prior focal photocoagulation and serous RPE detachment. Adverse events are rare, and include decreased vision and retinal arteriole occlusion. Randomized, prospective multi-center trials are underway to compare the results of TTT for occult CNV in age-related macular degeneration to the natural history of the disorder. Imaging, electrophysiologic or thermometric techniques may ultimately provide intra-operative or post-operative monitoring to assure the adequacy of TTT for CNV, despite the absence of ophthalmoscopically visible lesions.