庚型肝炎病毒的分子生物学研究进展

庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）为单股正链ＲＮＡ病毒，属黄病毒家族成员。ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）有许多相似之处，但又有其自身特点。本文对ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的基因组结构及变异、病毒多蛋白前体的加工、感染途径与致病性及检测方法等进行了综述，     

关于庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）致病性的研究进展

病毒性肝炎的病因除已知的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒，并除外其它相关病毒，如ＥＢ病毒，瘤疹病毒，尚有１０％～２０％的肝炎病因不明。１９９５年发现了一种新型肝炎病毒－庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ），随着对它与肝病致病的相关性研究，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ成为非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病因的一种可能的解释。ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ为单股正链 ＲＮＡ病毒基因组全长约为１０００个碱基。为了阐明ＨＧＶ的致病作用，ＨＧＶ与肝病的关系，ＨＧＶ在人体内的复制部位，以及ＨＧＶ与其它肝外疾病的关系成为研究的热点。从１９９５…     

HGV／GBV—C与HCV混合感染者HGV／GBV—C复制中间体的研究

目的 关于ＨＧＶ／ＢＧＶ－Ｃ组织亲和性的研究尚无结论性资料。我们研究了ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ与ＨＣＶ混合感染者ＰＢＭＣ和肝脏中ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ复制中间体（负链ＲＮＡ）的存在状况。方法 应用逆转录－巢式ＰＣＲ技术,检测了３２例肝炎患者ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ和ＨＶＣ正、负链ＲＮＡ。结果 有２６例ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ与ＨＣＶ混合感染者ＰＢＭＣ和肝脏中均未检测到ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ负链ＲＮＡ;而在９份ＰＢＭＣ和１５     

肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白大肠杆菌中的表达

目的 获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法 从重组质粒Ｉｗｑ２利用反应扩增出ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ３基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱导重组工程菌,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对重组蛋白进行鉴定。结果 酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧ     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

庚型肝炎病毒C型（GBV—C）多肽的抗原性研究及应用

应用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件分析ＧＢＶ－Ｃ的氨基酸序列，采用标准的Ｍｅｒｉｆｉｅｌｄ固相法和多中心同步多肽合成技术研究ＧＢＶ－Ｃ多肽抗原，应用抗原反应性好的ＮＳ３区Ｐ１和Ｐ１１多肽以及ＮＳ５区的Ｐ２２多肽研制抗ＧＢＶ－Ｃ检测试剂。９９例ＧＢＶ－ＣＲＮＡ阳性血清的抗ＧＢＶ－Ｃ阳性率为８１．８２％（８１／９９），１０００例单采浆献血员血样的抗ＧＢＶ－Ｃ阳性率为５．１０％（５１／１０００），抗ＧＢＶ－Ｃ阳性血样中的ＧＢＶ－ＣＲＮＡ阳性率为７０．５９％（３６／５１）。结果表明，Ｐ１，Ｐ１１和Ｐ２２可以用于抗ＧＢＶ－Ｃ检测试剂的开发。应尽快对献血员，尤其是献浆员进行抗ＧＢＶ－Ｃ的筛选。     

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录—巢式？…

目的 庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法 根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５‘－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶锭反应，并初步应用于１５３例标本。结果 该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感洒，扩增片段大小与设计相符。结论 该方法简便特异，适用     

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录-巢式聚合酶链反应方法

目的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５’－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶链反应，并初步应用于１５３例标本。结果该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异，适用于临床检测     

PT—PCR检测庚型肝炎病毒和GB病毒感染

ＨＧＶ和ＧＢＶ是近二年发现的新肝炎病毒，引起非Ａ￣Ｅ肝炎。目前实验室检测ＨＧＶ和ＧＢＶ感染主要靠ＲＴ－ＰＣＲ。本文就ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＧＶ和ＧＢＶ ＲＮＡ的临床标准处理、引物、扩增条件、产物检测和目前临床应用研究予以介绍。     

中国株庚型肝炎病毒C（GBV—C）感染的检测及部分核酸…

国内首次采用合成肽抗原筛查高危人群血液中的庚型肝炎病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）抗体。单采浆站供血者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为０．４４％（１１／２５００）；非甲－戊型肝炎患者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为６．６７％（２／３０）。抗体阳性血清再用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＧＢＶ－ＣＲＮＡ。部分扩增产物进行了核苷酸序列测定，其核苷酸序列与Ｓｉｍｏｎｓ等报道的ＧＢＶ－Ｃ序列同源性为８９．０９％到９２．４８％。该研究提示，ＧＢＶ－Ｃ可     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测     

丙型肝炎病毒的分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒的分子生物学研究进展王海林，金冬雁丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，１９９１年国际病毒命名委员会（ＩＣＴＶ）将其归为黄病毒科丙型肝炎病毒属［１］。众所周知，ＨＣＶ主要是经血和血制品传播的。据最近美国ＣＤＣ国际监督系统的一项调查表...     

831名健康青年庚型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒感染的调查

目的了解我国健康青年中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）和人免疫缺陷病毒的感染情况。方法采用酶联免疫法（ＥＩＡ）检测６省８３１名健康青年血清中的ＨＧＶ和ＨＩＶ抗体，对抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性的血清再用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果发现抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性率为２５３％（２１／８３１），２１例阳性者中ＨＧＶＲＮＡ阳性８例，两者符合率为３８１％；抗－ＨＩＶ均阴性。结论我国健康青年人群中确实存在ＨＧＶ感染。     

从我国5城市分离的10株GBV-CHGV基因型分析

最近研究表明〔１,２〕,世界各地分离的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ株间存在不同的基因型,即１型、２型和３型。上述分型所采用的核酸序列大多数来自非洲、欧美和日本等地,我国ＧＢＶＣ／ＨＧＶ分离株的基因型及其分布则报道较少。为此,本研究应用分子进化学方法对从我国５城市分离的１０株ＧＢＶＣ／ＨＧＶ５′ＵＴＲ部分序列进行基因分型。结果报道如下：材料与方法１－血清标本：ＨＧＶＲＮＡ阳性的血清标本共１０份,其中ＢＪ１和ＳＪＺ１～２分别采于北京市和石家庄市的献血员血清;ＢＪ２和ＮＣ１为北京市和南昌市急性乙型肝炎病人…     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

庚型肝炎病毒感染对慢性丙型肝炎的临床与病理学影响

目的 探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染对慢性丙型肝炎（ＣＨ－Ｃ）的临床与病理学影响。方法 应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法对５３例经肝穿活检确诊的ＣＨ－Ｃ患者血清标本进行了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测,并将合并与未合并ＨＧＶ感染者进行了临床与病理学对比。结果 ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（２８．３０％）。合并与未合并ＨＧＶ感染者在临床表现、肝功能等生化指标水平、ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率及肝脏病理损害等方面差     

庚型肝炎病毒（HGV／GBV—C）NS3区基因序列的多变性

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病人血清中检测庚型肝炎病毒。采用５６个循环周期的减温ＰＣＲ方法对ＮＳ３区基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行了克隆、测序。在ＮＳ３区，ＨＧＶ与样品之间核苷酸的同源性在８２．０％～９１．４％之间；而ＧＢＶ－Ｃ与样品之间的同源性为７８．４％～８４．２％之间。ＮＳ３区变异较大，这种变异可能与ＨＣＶ的基因变异的趋势相类似。     

乙型肝炎病毒在丁型肝炎病毒包装中的作用机理研究

用含ＨＢＶ全基因和ＨＢＶ大、中、小分子表面蛋白基因的真核细胞表达质粒（ＣＭＶ－ＨＢＶ、ＣＭＶ－ＬＳ、ＣＭＶ－ＭＳ、ＣＭＶ－Ｓ）分别与含ＨＤＶ ｃＤＮＡ三聚体的重组质粒共转染ＣＨＯ细胞。转染后３天在上述４种转染细胞内及培养上清中均检出了ＨＤＶ ＲＮＡ和ＨＤＡｇ表明上述４种转染细胞的培养上清中均有ＨＤＶ病毒颗粒的包装和分泌。提示：ＨＤＶ病毒的包装可能仅需ＨＢＶ Ｓ 基因及其小分子表面蛋白的辅助。     

合成肽抗原在庚型肝炎病毒抗体检测中的初步应用

为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况，依照对ＨＧＶ氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇位点分析，采用固相法合成了ＨＧＶ不同区段的４条多肽，以此为抗原建立了检测抗ＨＧＶ－ＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验。检测５７份非甲－戊型肝炎病人血清，抗ＨＧＶ－ＩｇＧ阳性者２０份，阳性检出率为３５．０９％（２０／５７），ＨＧＶ ＲＮＡ阳性者１４份，阳性率为２４．５６％（１４／５７）。检测甲型肝炎病人血清３０份，阳