粉防已碱对血管紧张素II诱导心肌肥大及p-ERK1/2表达的影响

目的：观察粉防已碱(tetrandrine, Tet)对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌肥大及p-ERK_1/2表达及活性的影响。方法：培养新生大鼠心肌细胞,用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率、细胞图像分析系统测量细胞体积、考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量、［₃H］-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；以ERK免疫沉淀活性试剂盒测定ERK活性,Western-blot测定p-ERK_1/2表达。结果：Tet能显著抑制Ang II诱导的心肌细胞搏动频率、体积、总蛋白含量、蛋白合成速率的上升；对p-ERK_1/2表达及活性具有剂量依赖性的抑制作用。结论：Tet可以明显抑制Ang II诱导的心肌肥大,机制与降低p-ERK_1/2表达及活性有关。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞细胞外信号调节激酶表达的影响

目的从细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）激活角度研究姜黄素（curcumin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥大反应的作用。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为AngⅡ组（10-6mol/L AngⅡ）、姜黄素组（10-6mol/L AngⅡ＋2.5×10-8g/L姜黄素）及对照组（正常培养的心肌细胞）。3组分别培养24h,收集心肌细胞,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,免疫印迹法测定ERK1/2表达。应用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果①3组间心肌细胞蛋白合成速率比较有统计学意义（F=20.68,P〈0.01）,AngⅡ（10-6mol/L）处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率明显增加,姜黄素能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率的增加;②AngⅡ（10-6mol/L）处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达明显增加,预先以姜黄素2.5×10-8g/L处理心肌细胞30min,发现姜黄素可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达。结论姜黄素可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞ERK1/2的表达,这可能是姜黄素治疗心肌肥厚的重要机制之一。     

丹参酮ⅡA磺酸钠影响AngⅡ诱导心肌细胞肥大反应及p-p38,MKP-1表达

 目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠(Sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大反应及p-p38,MKP-1表达的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[³H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌细胞肥大指标;用Western-blot测定p-p38,MKP-1表达。结果STS能显著降低AngⅡ诱导的心肌细胞蛋白含量、蛋白合成速率上升;对p-p38表达具有显著抑制作用;同时上调MKP-1表达。结论STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应,机制与上调MKP-1表达,降低p-p38表达有关。     

三七总皂苷对新生大鼠心肌细胞肥大的影响及机制

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法采用MTT法检测细胞毒性;采用相差显微镜测量细胞大小,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标;RT-PCR检测心肌细胞原癌基因c-fos mRNA的表达。结果三七总皂苷能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞增大,蛋白质合成速率的显著增加及心肌细胞原癌基因c-fos mRNA表达的增强,其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦相似。结论三七总皂苷可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,这与其抑制了原癌基因c-fos的表达有关。     

丹参提取物对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的:研究丹参提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌肥大及相关基因表达的影响,并探讨其抑制心肌肥大的作用机制。方法:乳鼠心肌细胞原代培养,复制AngⅡ致心肌细胞肥大模型,随机分为模型组(10-6g.L-1AngⅡ),缬沙坦(10-4,10-3,10-2g.L-1Val)对照组,丹参提取物10-4,10-3,10-2g.L-1组的丹参提取物。BI-2000医学图像分析系统进行心肌细胞计数和直径测定,Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,反转录PCR(RT-PCR)法测定蛋白激酶D1(PKD1)mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型组心肌细胞数量上变化不大,心肌细胞直径、总蛋白质含量及PKD1 mRNA的表达明显增加(P<0.05);和模型组相比,Val对照组心肌细胞直径、总蛋白质含量及PKD1 mRNA的表达明显降低(P<0.05);而丹参提取物中、高剂量组心肌细胞直径、总蛋白质含量及PKD1 mRNA的表达均明显降低(P<0.05)。结论:丹参提取物能显著抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大,可能与对PKDl mRNA的表达调控密切相关。     

Ang Ⅱ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fog,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响.方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10-6 mol·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+丹参酮ⅡA(10-8g·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+缬沙坦(10-mol·L-1)组,丹参酮ⅡA(10-1g·L-1)组,缬沙坦(10-6mol·L-1)组.相差显微镜测量心肌细胞大小,[3H]一亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fog,c-jun mRNA的表达.结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05).采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c.fog,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大.     

参附汤治疗Ang Ⅱ致心肌细胞肥大机制研究

目的探讨参附汤治疗AngⅡ导致心肌细胞肥大的机制。方法建立AngⅡ致心肌细胞肥大模型,采用MTT法、CCK-8试剂盒检测心肌细胞的存活率,测定搏动频率、采用rt PCR测定相关基因Caspase-3、Beclin1和Atg5的表达量。结果与空白组相比,AngⅡ组细胞的存活率降低,搏动频率增加,相关基因Caspase-3、Beclin1和Atg5的表达量明显升高;参附汤含药血清及血中移行成分组可使AngⅡ致损的乳鼠心肌细胞的存活率升高,降低细胞搏动频率和抑制Caspase-3、Beclin1和Atg5的表达。结论参附汤对AngⅡ导致的心肌肥大细胞具有保护作用,其机制是通过抑制细胞自噬和凋亡。     

氧化苦参碱保护醛固酮诱导的心肌细胞损伤作用机制分析

目的:研究氧化苦参碱(OMT)抑制细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化对醛固酮(ALD)诱导心肌细胞损伤的干预作用。方法:采用胰酶消化与差数贴壁分离纯化原代心肌细胞,免疫细胞化学分析心肌细胞纯度。实验分为空白组、模型组(1×10-5mol·L-1ALD)和OMT高(3.78×10-4mol·L-1),低剂量(1.89×10-4mol·L-1)组共4组。运用MTT法检测细胞存活率,LDH外漏法测定细胞膜损伤程度,蛋白免疫印迹法分析p-ERK1/2及ERK1/2蛋白表达,实时荧光定量PCR分析ERK mRNA表达。结果:OMT可抑制ALD诱导的细胞存活率降低和LDH外漏增加;与模型组比较,OMT预处理后p-ERK1/2蛋白表达明显下调。结论:OMT对ALD诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用与抑制ERK1/2蛋白磷酸化有关。     

白花前胡提取液含药血清对ET-1诱发体外培养心肌细胞肥大及凋亡的影响

目的:探讨白花前胡提取液含药血清抗内皮素-1(ET-1)促发心肌细胞肥大效应及其对肥大心肌凋亡影响。方法:采用乳鼠心肌细胞体外培养纯化,比较白花前胡提取液含药血清对内皮素诱导体外培养心肌细胞活性、心肌细胞表面积,以及对肥大心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达的影响。结果:白花前胡提取液含药血清能够有效缩小ET-1促发的体外培养肥大心肌细胞表面积,降低肥大心肌细胞搏动频率,抑制肥大心肌细胞凋亡以及改善Bcl-2/Bax蛋白表达的失衡状态。结论:白花前胡提取液含药血清能有效降低心肌细胞对ET-1刺激的反应性,遏制心肌肥厚、心室重塑以及细胞凋亡,有调节因ET-1刺激引起的心肌细胞凋亡相关基因表达改变的作用。     

藁本内酯抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及其作用机制

目的:研究藁本内酯(LIG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的影响,并探讨其作用机制。方法:分离纯化SD大鼠心肌细胞后进行原代培养;将培养的心肌细胞经AngⅡ(0.5 mg·L)诱导和不同质量浓度LIG(20,40,80 mg·L-1)作用1~3 d,另设空白组,在倒置显微镜下观察细胞形态,测定细胞表面积;运用BCA蛋白浓度测定方法测定各组心肌细胞中总蛋白含量;流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹(Western blot)测定各组心肌细胞中p53,Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:与空白组比较,原代培养的新生大鼠心肌细胞经AngⅡ诱导后细胞形态发生明显变化,心肌细胞出现肥大效应,细胞表面积和细胞总蛋白含量明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显上升(P0.05),诱导凋亡p53和Bax蛋白表达明显上升而抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(P0.05);与AngⅡ单独作用组比较,不同浓度LIG和AngⅡ联合作用能够明显抑制心肌细胞肥大效应,细胞表面积、细胞总蛋白含量及细胞凋亡均逐渐下降并呈剂量依赖效应(P0.05)。结论:LIG能够抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,并可能通过诱导Bcl-2蛋白表达,抑制p53,Bax蛋白表达而降低细胞凋亡率发挥作用。