干扰素体外释放酶联免疫法在结核病诊断中的价值

目的 分析干扰素体外释放酶联免疫法(quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosis IFN-γ release assay,TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值。 方法 用北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌相关γ-干扰素检测试剂盒（体外释放酶联免疫法）（Wantai quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosis IFN-γ release assay, WT-IGRA）（简称WT试剂）和澳大利亚Cellestis有限公司生产的QuantiFERON^®-TB(QuantiFERON^®-TB GOLD in tube,QFT-GIT)（简称QFT试剂）检测病区与门诊结核患者（249例）及健康者（140例）的全血标本,结果与其结核菌素试验（PPD）、痰结核分枝杆菌培养及痰涂片结果相比较,分析TB-IGRA阳性率、特异度及试剂间的相关性。结果 249例结核病患者,WT试剂和QFT试剂阳性率分别为76.3%（190/249）和67.1%（167/249）,特异度都是83.3%（100/120）;痰菌阳性和痰菌阴性结核病组,WT试剂阳性率分别为74.1%（43/58）和76.1%（83/109）,差异无统计学意义（χ²=0.082,P＞0.05）;QFT试剂阳性率分别为67.2%（39/58）和65.1%（71/109）,差异无统计学意义（χ²=0.075,P＞0.05）;WT试剂与QFT试剂总符合率为84.3%。 结论 TB-IGRA对结核病有一定的诊断价值。     

外周血IFN—γ的检测在结核分枝杆菌潜伏感染诊断中的价值

目的探讨利用酶联免疫斑点（Elispot）法检测外周血结核抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答反应在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法将150例健康者按结核暴露程度分成4级，采用Elispot技术检测其外周血单个核细胞（PBMC）结核菌抗原特异性IFN-γ分泌水平；其中111例进行结核菌素皮试（PPD皮试）；39例采用全血干扰素试剂（Quantiferon—TB—Gold，QFT—G）进行IFN-γ分泌水平的平行检测。结果采用Elispot检测结果显示体外IFN-γ应答反应水平与结核菌暴露程度成正相关（r=0．4155，P〈0．0001），不同暴露程度分级的IFN-γ应答阳性率分别是：4级（55．6％）、3级（33．3％）、2级（16．7％）、1级（6．8％）。不同暴露程度分级与PPD皮试结果的相关性没有统计学意义（r=0．1206，P=0．2073）；不同暴露程度分级的PPD皮试反应阳性率分别为4级（33．3％）、3级（27．8％）、2级（11．1％）、1级（22．0％）。对Elispot检测结果与QTF—G检测结果进行平行比较分析，两种方法检测结果没有统计学差异（χ^2=0．125，P=0．7237）。结论外周血结核抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答反应水平与结核菌暴露程度成正相关，Elispot检测体外IFN-γ应答反应在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试，可以用于对潜伏感染者的筛查。     

采用干扰素释放反应试验和PPD皮试对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染筛查的研究

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ免疫酶联斑点法（ELISPOT）和传统的结核菌素皮试（PPD皮试）对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染现状进行筛查,并比较两种方法的差异。方法采用自主研制的Elispot试剂盒（简称Elispot）和PPD皮试,对133例健康志愿者进行平行检测。结果A高校99例志愿者中PPD皮试有49例阳性（49.5％）,Elispot检测有20例阳性（20.2％）;B高校34例志愿者中PPD皮试有27例阳性（79.4％）,Elispot检测有2例阳性（5.9％）。对两种方法进行平行比较分析,结果有统计学差异（X^2=41.31,P〈0.005）;在PPD（卅）组中Elispot阳性率最高为28.57％;在（廾）-（-）组中分别为22.2％、12.5％及12.28％。结论结核菌特异性IFN-γ Elispot试剂盒在健康人群中检测阳性率比传统的PPD皮试要低,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试,在结核分枝杆菌潜伏感染早期诊断有较好的发展前景。     

卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响

目的探讨卡介苗（BCG）对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测影响,评价Elispot检测在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法对98例某高校学生同时进行Elispot检测和PPD皮试,其中27例PPD皮试结果和Elis-pot检测均为阴性的受试者进行卡介苗接种。结果 98例受试者中,48例PPD皮试阳性,13例Elispot检测阳性,两种检测结果比较差异有统计学意义。对上述27例受试者接种BCG后PPD皮试结果全转为阳性,Elispot检测仍为阴性。在BCG接种前后,ESAT-6和PoolA作用下IFN-γ分泌水平均无差异;但在BCG作用下,BCG接种后IFN-γ分泌水平显著高于接种前。结论 Elis-pot检测体外IFN-γ应答反应不受卡介苗接种影响,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试。     

全血γ干扰素测定试验在承德地区结核病诊断价值研究

目的探讨全血γ干扰素测定试验(TB-IGRA)在承德地区结核分枝杆菌感染的临床价值。方法选取自2014年5月1日至2015年5月1日间,来中国人民解放军第二六六医院就诊和住院治疗的142例结核病患者、85例非活动性结核患者,均行全血特异性γ干扰素(IFN-γ)含量测定,同时与抗酸染色和血结核抗体检测进行平行比较分析。结果结核病患者体内γ干扰素(IFN-γ)水平显著高于非结核病患者,差异有统计学意义(P0.05);全血γ干扰素测定试验对结核分枝杆菌(MTB)感染者的敏感性为88.73%(126/142),特异性为88.24%(75/85);142例结核病患者中,抗酸染色和血结核抗体的阳性率分别为:41.55%(59/142)和65.49%(93/142),全血γ干扰素测定试验与抗酸染色、结核抗体阳性率差异有统计学意义(P0.01、P0.05)。结论全血γ干扰素测定试验可以快速、有效的诊断结核分枝杆菌感染患者,是一种适合本地区结核病诊断的试验方法。     

结核菌特异性IFN-γ Elispot检测结核感染情况分析

目的通过结核菌特异性IFN-γElispot检测技术,了解痰涂阳性肺结核患者密切接触者中结核潜伏感染情况。方法应用Elispot技术对1052例痰涂阳性肺结核患者的密切接触者进行外周血结核菌特异性IFN-γ水平检测,同时进行PPD皮试。结果在密切接触者的家庭成员和同事中Elispot的阳性率分别是29.4%和22.1%,PPD强阳性结果是30.5%和8.9%;两者阳性率有统计学意义。其中14例确诊为肺结核患者,发病率为1.3%。结论 Elispot诊断结核感染的特异性高于PPD,用Elispot筛查结核密切接触者,有利于早期发现结核病人。     

TB-IGRA检测在结核病诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放(TB-IGRA)定量试验在结核病诊断中的价值。方法对2013年1月1日至2013年7月31日我院985例住院和门诊结核病患者同时进行PPD皮肤测试和ELISA法定量检测血清γ-干扰素的含量,并对其结果行回顾性分析。结果 TB-IGRA的敏感度为88.4%,特异度为90.8%;297例菌阳肺结核TB-IGRA检测出阳性275例(92.6%),60岁以下年龄段TBIGRA阳性检出率为91.4%(774/847),显著高于60岁以上组70.3%(97/138)(P0.01)。结论 TB-IGRA比PPD测试有更高的检测灵敏度和特异性,是一种有价值的结核病诊断的检测方法。     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素与纯蛋白衍化物的细胞免疫作用比较

目的 通过结核分枝杆菌肝素结合血凝素(HBHA)与纯蛋白衍化物(PPD)的免疫作用比较,探讨HBHA的免疫保护作用及诊断应用价值.方法 选取阴性对照者、潜伏感染者、肺结核患者,分离入选者的外周血单个核细胞,分为无刺激、HBHA、PPD刺激组,培养4 d后收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中的γ-干扰素(IFN-γ)和白介素4.结果 HBHA刺激后3组产生的IFN-γ中位数分别为49.5 ng/L、781.9 ng/L、341.8 ng/L,潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于阴性对照者,略高于肺结核患者.HBHA特异的IFN-γ在不同治疗时间肺结核之间有显著差异.结论 HBHA有较好的免疫原性,可以刺激潜伏感染者产生高水平的IFN-γ,潜伏感染者未发展为活动性结核病可能与HBHA的免疫保护作用有关.HBHA特异的IFN-γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者.     

γ-干扰素试验及比较皮试在结核污染牛群的应用研究

目的引进了国外的牛结核病γ-干扰素试验和比较变态反应,与我国常用单纯颈部变态反应试验进行比较,评价不同检疫方法的优缺点。方法5个结核污染牛群的167头牛同时用牛结核病γ-干扰素试验和比较变态反应进行检测,其中的106头牛用于其他变态反应方法的比对。结果167头牛中,γ-干扰素试验和国外比较变态反应检出阳性符合数为89头,阳性符合率为92.7%(89/96);106头牛中,国产牛型结核菌素(PPD)检与国外牛型PPD检出的阳性符合数为78头,阳性符合率为93.41%(78/83.5),国内常规皮试检出阳性牛84头,阳性率为79.25%(84/106),国外常规皮试检出阳性牛66头,阳性率为62.26%(66/106),国内比较变态反应与国外比较变态反应之间的阳性符合数为59头,阳性符合率为92.19%(59/64)。结论证实γ-干扰素试验和国外比较变态反应之间具有较好的阳性符合率,国内牛PPD与国外牛PPD试验结果相似,但国内常规皮试的特异性很低,而将国内皮试改进为国内比较皮试,则与国外常规的比较皮试具有较好的阳性符合率。     

γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌潜伏感染及结核病诊断中的临床意义

目的 探讨三种结核分枝杆菌抗原刺激外周血单个核细胞（PBMC)后γ干扰素(IFN-γ)释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染及结核病的诊断意义。并与结核菌素皮试(TST)进行比较。方法 研究对象共分三组，活动性结核组(57例)，健康对照组(27例)，肿瘤组(29例)，分别用结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)，早期分泌抗原靶6kDa蛋白(early secretary antigenic target 6kDa protein ESAT-6)，38kDa抗原与PBMC共同培养5天，后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中IFN-γ的浓度。结果 ①健康组：TST与BCG接种史及排菌病人密切接触程度呈正相关(B=0．047和P=0．041)，ESAT-6为抗原的IFN-γ释放水平与结核病接触程度密切相关(P=0．005)，而与BCG接种史无明显相关。②当阴阳性界定值定为1000pg／ml时。38kDa抗原刺激后的IFN-γ浓度对于结核病诊断的敏感性为64．9％，特异性为89．3％.结论 ESAT-6刺激后的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染的诊断意义可能优于TST。38kDa抗原刺激后的IFN-γ释放反应可能有结核病的辅助诊断意义。     

两种结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究

目的 评价新的国产结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒（TB-IGRA）--体外释放酶联免疫法诊断结核病的敏感性和特异性。 方法 采用TB-IGRA试剂盒对319例肺结核、23例肺外结核、39例排除结核的肺部疾病和104例健康人群的血清标本进行检测,同时与澳大利亚Cellestis公司的QuantiFERON-TB GOLD in tube（QFT-GIT）试剂进行平行比较分析。 结果 采用TB-IGRA试剂,检测肺结核病人的敏感性为90.9%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为76.9%;采用QFT-GIT试剂,检测肺结核病人的敏感性为88.4%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为80.4%,2种试剂进行平行比较,敏感性和特异性方面差异无统计学意义。 结论 TB-IGRA试剂盒对诊断结核病有较高的敏感性和特异性,可用于结核病尤其是涂阴肺结核和肺外结核的辅助诊断。     

ADA、IFN-γ及结核分枝杆菌抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的探讨ADA活性、IFN-γ含量和结核分枝杆菌抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法检测56例已经经组织病理学或病原学明确诊断的结核性胸膜炎患者,20例经细胞学或组织病理学明确诊断的恶性胸腔积液患者,以及12例其他渗出性胸腔积液患者的胸液和血清中的ADA活性和IFN-γ含量以及抗结核分枝杆菌抗体阳性率,经统计学处理后,评价各项指标对结核性胸膜炎诊断的灵敏度、特异度及临床诊断符合率。结果结核性胸液中ADA活性、IFN-γ含量分别为（50.98±13.07）U/L、（139.46±70.43）pg/ml,结核分枝杆菌抗体阳性率60.7%,与恶性胸液组和其他组比较差别有统计学意义,P<0.05。以45U/L为临界值,ADA对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为80.4%,特异度96.9%,临床诊断符合率为86.4%;IFN-γ以100pg/ml为临界值对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为83.9%,特异度93.8%,临床诊断符合率为87.5%;胸液中结核分枝杆菌抗体检测对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为 60.7%,特异度为87.5%,临床诊断符合率为70.5%。以3项指标联合检测任何2项阳性对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为 92.9%,特异度100%,临床诊断符合率为95.5%。结论ADA活性、IFN-γ含量和结核分枝杆菌抗体联合检测可极大地提高结核性胸膜炎的诊断效能。     

T细胞酶联免疫斑点法对风湿性疾病患者潜伏性结核感染诊断价值的初步研究

目的 探讨T细胞酶联免疫斑点法(TSPOT)对风湿性疾病患者潜伏结核感染的诊断价值.方法 应用TSPOT-TB试剂盒对126例明确诊断的风湿性疾病患者血液标本进行结核分枝杆菌(Mtb)特异性T细胞应答的检测,同时对所有病例做结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)试验进行联合分析.结果 TSPOT检测阳性率23.8%,PPD试验阳性率为34.9%,两者一致率为71.4%.其中PPD(-)者中11例TSPOT(+),占13.4%;PPD(+)中有25例TSPOT(-),占56.8%.有卡介苗接种史的患者PPD试验的阳性率显著高于无卡介苗接种史的患者(4l%与19%,P＜0.05),但有无卡介苗接种史的两组患者在TSPOT检测的阳性率上差异无统计学意义(22%与27%,P＞0.05).结论 卡介苗接种影响风湿性疾病患者PPD试验的结果,但对TSPOT检测结果未造成影响.TSPOT技术检测显示本研究风湿性疾病患者中的结核潜伏感染率为23.8%.     

结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用

目的建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点（Elispot）检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性。方法采用以早期分泌抗原靶6kDa蛋白（ESAT-6）抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术（简称Elispot）;应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂（Quantiferon-TB-Gold,QFT-G）进行平行检测。结果采用Elispot检测,结核患者的阳性率最高（75.0%）,显著高于健康对照（7.3％）和其他肺部疾病患者（11.1%）,结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elispot检测结果进行配对比较无显著性差别（χ²=1.6,P>0.05）。 结论建立了结核菌特异性IFN-γ Elispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察。     

γ-干扰素释放分析T-SPOT.TB在结核性疾病中的诊断价值

目的评价γ-干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在结核性疾病中的诊断价值。方法采用T-SPOT.TB试剂盒对疑诊或待排结核患者外周血中释放γ-干扰素的结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞进行检测。结果γ-干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在结核性疾病阳性检出率为83.3%(20/24),明显高于结核菌素试验(tuberculin skin test,TST)的41.7%(10/24)、涂片找抗酸杆菌的26.7%(4/15)、分枝杆菌分离培养的22.2%(2/9),差异有统计学意义(P<0.05)。γ-干扰素释放分析T-SPOT.TB检测诊断结核性疾病敏感性、特异性分别为83.3%、96.4%,显著优于结核菌素试验。结论γ-干扰素释放分析T-SPOT.TB检测是诊断结核的快速敏感方法,在结核性疾病诊断中有重要价值。     

深圳献血员结核分枝杆菌潜伏感染调查研究

目的了解深圳献血员结核分枝杆菌潜伏感染的情况和相关特点。方法使用ELISPOT技术检测结核分枝杆菌特异性IFN-γ来了解1503例合格献血员结核分枝杆菌潜伏感染情况。结果 1503例合格献血员中有148例为结核分枝杆菌潜伏感染阳性,阳性率为9.85%,男性与女性阳性率没有差异,年龄在25岁以下人群阳性率低于年龄在25岁以上人群。结论献血员结核分枝杆菌潜伏感染问题不容忽视。     

γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用评价

目的探寻γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用价值方法 34例菌阳肺结核患者,238例菌阴肺核患者,33例非结核患者,30例健康体检者,分别进行血清结核杆菌抗体检测、结核菌素试验(TST)以及结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放酶联免疫试验(TB-IGRA),对其检测结果进行统计分析。结果TB-IGRA、血清结核杆菌抗体试验以及TST的诊断敏感性分别为87.13%、76.10%和64.71%;诊断特异性分别为90.48%、66.67%和71.43%;阳性预测值分别为97.53%、90.79%和90.72%;阴性预测值分别为61.96%、39.25%和31.91%;诊断效率分别为87.77%、74.33%和65.97%。TB-IGRA的诊断敏感性和诊断特异性均显著高于血清结核杆菌抗体试验以及TST(P0.01)。结论 TB-IGRA对结核的诊断具有较高敏感性和特异性,对于菌阴肺结核的辅助诊断和疑似结核感染患者的排除优于其它两种方法。     

HIV合并结核潜伏感染患者CD_4~+细胞免疫功能影响的研究

目的观察HIV合并结核潜伏感染患者CD+4细胞免疫功能影响。方法选取136例HIV感染者,分别进行PPD和ELISPOT检测确定HIV合并结核潜伏感染者,随后通过流式细胞术检测治疗前后患者CD+4细胞的变化。结果 PPD试验对结核菌抗原阳性反应为3.4%;ELISPOT检测阳性率为20.6%,高于PPD皮试阳性率。流式结果显示HIV感染患者CD+4细胞数小于50/μl共有25例,51-200/μl有64例,大于200/μl有47例,各组ELISPOT检测阳性率分别为4%,28.1%和14.9%。9例HIV合并结核潜伏感染患者治疗9个月后,ELISPOT检测斑点中位数减少61.6%。结论 HIV合并结核潜伏感染者CD+4细胞明显降低,且普遍低于200/μl。     

CFP21-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用

目的用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)评价检测CFP21蛋白在结核分枝杆菌感染中的诊断效果,同时,比较CFP21、CFP10和ESAT6的应用价值。方法取28例临床确诊结核患者和26例健康志愿者外周血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用CFP21、CFP10和ESAT6蛋白刺激,定量检测PBMC分泌的特异性γ干扰素(IFN-γ)水平,判断结核分枝杆菌感染情况。用ELISA检测血清抗结核抗体。结果 ELISA检测结核病患者血清结核抗体阳性率为57.1%;以CFP21、CFP10和ESAT6为抗原,用ELISPOT方法检测结核病患者IFN-γ阳性率分别为25.0%、39.3%和32.1%。结论应用CFP21蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法有潜在的临床应用价值,但CFP21作为抗原用于结核分枝杆菌感染诊断的敏感性低于CFP10和ESAT6。     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素与纯蛋白衍化物的细胞免疫作用比较

目的通过结核分枝杆菌肝素结合血凝素（HBHA）与纯蛋白衍化物（PPD）的免疫作用比较,探讨HBHA的免疫保护作用及诊断应用价值。方法选取阴性对照者、潜伏感染者、肺结核患者,分离入选者的外周血单个核细胞,分为无刺激、HBHA、PPD刺激组,培养4d后收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中的γ-干扰素（IFN-γ）和白介素4（IL-4）。结果HBHA刺激后3组产生的IFN—γ中位数分别为：49．5ng／ml、781．9ng／ml、341．8ng/ml,潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于阴性对照组,略高于肺结核组,HBHA特异的IFN-γ在不同治疗时间肺结核之间有显著差异。结论HBHA有较好的免疫原性,可以刺激潜伏感染者产生高水平的IFN-γ,潜伏感染者未发展为活动性结核病可能与HBHA的免疫保护作用有关,HBHA特异的IFN-γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者。