酶联免疫斑点试验检测技术（Elispot）在诊断结核性脑膜炎及Ⅲ型肺结核中的应用价值

目的评价酶联免疫斑点技术（Elispot）检测外周血结核杆菌抗原特异性r干扰素（IFN-r）水平在结核脑膜脑炎及Ⅲ型肺结核患者诊断中的应用价值。方法利用Elispot技术分别对383例结核病人（包括73例结核性脑膜炎患者、310例Ⅲ型肺结核患者）、97例健康人外周血结核杆菌抗原特异性r干扰素（IFN-r）水平进行定量检测。结果Elispot技术在结核病中诊断敏感性为81．46％,特异性为85．57％;结核脑膜脑炎组Elispot阳性率为61．64％;Ⅲ型肺结核患者组Elispot阳性率为86．13％;健康对照组Elispot阳性率为10。31％;各组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论Elispot技术在结核病诊断中具有良好的辅助诊断价值,在Ⅲ型肺结核中的诊断价值优于结核性脑膜脑炎。     

结核菌特异性IFN-γ Elispot检测结核感染情况分析

目的通过结核菌特异性IFN-γElispot检测技术,了解痰涂阳性肺结核患者密切接触者中结核潜伏感染情况。方法应用Elispot技术对1052例痰涂阳性肺结核患者的密切接触者进行外周血结核菌特异性IFN-γ水平检测,同时进行PPD皮试。结果在密切接触者的家庭成员和同事中Elispot的阳性率分别是29.4%和22.1%,PPD强阳性结果是30.5%和8.9%;两者阳性率有统计学意义。其中14例确诊为肺结核患者,发病率为1.3%。结论 Elispot诊断结核感染的特异性高于PPD,用Elispot筛查结核密切接触者,有利于早期发现结核病人。     

结核菌特异性IFN-γ Elispot检测在活动性结核病和结核感染诊断中的应用

目的评价早期建立的结核菌特异性IFN-γ Elispot检测在活动性结核病和结核感染诊断中的应用价值。方法应用Elispot技术对1 154例结核病患者,52例非结核病肺部疾病对照,384例新发痰菌阳性结核患者的密切接触者,422例健康对照进行外周血结核菌特异性IFN-γ水平检测。对健康对照和密切接触者同时还进行平行的PPD皮试。结果结核患者Elispot检测的阳性率显著高于对照人群及结核病密切接触者。其中,血行播散性结核、继发性肺结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎和其他肺外结核患者Elispot阳性率分别为91.3%,81.7%,86.5%,66.2%,89.8%。非结核病肺部疾病对照、健康对照和新发结核病人密切接触者Elispot阳性率分别为13.5%,15.4%和35.4%。在密切接触者筛查中,发现活动性结核病人17例,其中Elispot阳性14例(82.4%),PPD强阳性5人(29.4%);两者阳性率差异有统计学意义。结论在结合结核病史、结核病接触史以及临床表现的基础上,结核菌特异性IFN-γ的检测对活动性结核病诊断有一定的辅助诊断价值。通过检测结核高危人群结核菌特异性IFN-γ的水平,对早期发现活动...     

结核分枝杆菌早期分泌抗原ESAT-6的高效表达及其在结核分枝杆菌特异细胞免疫检测中的应用

目的 获得纯化的MTB早期分泌抗原ESAT-6,并对其抗原性及在MTB特异性细胞免疫检测中的应用价值进行评价.方法 采用基因工程技术表达MTB ESAT-6蛋白,通过Western blot法分析ESAT-6与特异性抗体的反应性.以纯化ESAT-6为抗原,用酶联免疫斑点技术(Elispot)检测肺结核患者、健康医务工作者、自然村居民外周血γ-干扰素的应答水平,同时与用于隐性结核感染及结核病诊断的QFT-G检测法进行平行比较,对其在MTB感染细胞免疫检测中的应用价值进行评价.结果 成功表达和纯化了 ESAT-6重组蛋白,所表达的蛋白能被特异性抗ESAT-6抗体识别,同时与肺结核外周血单核细胞反应,刺激后者产生γ-干扰素.Elispot技术检测肺结核患者、健康医务工作者、自然村居民的阳性率分别为36/49(73.5%)、11/62(17.7%)、17/194(8.8%),同时用QFT-G法对肺结核患者和健康医务工作者进行检测阳性率分别为38/49(77.6%)、14/58(24.1%),两种检测方法比较敏感度(73.5%,77.6%;χ2=0.381,P>0.05)和特异度(82.3%,75.9%;χ2=0.406,P>0.05),差异无统计学意义.结论 利用pET原核表达系统可成功地表达和纯化MTB ESAT-6重组蛋白,以ESAT-6为抗原建立的Elispot外周血IFN-γ检测技术与QFT-G的特异性和敏感性相当,可用于结核病的辅助诊断.     

γ-干扰素释放试验对老年肺结核的辅助诊断价值

目的评价γ-干扰素释放试验(interferon-γrelease assays,IGRAs)中T细胞斑点检测(T-SPOT.TB)辅助诊断老年肺结核的价值。方法回顾性分析2015年6月至2016年6月首都医科大学附属北京胸科医院、北京市海淀医院收治已经确诊的196例肺结核病人与249例非肺结核病人临床资料,按照年龄将纳入人群分为老年组和中青年组。分析T-SPOT.TB对老年组和青年组的诊断效能及T-SPOT.TB对菌阴、菌阳肺结核的诊断效能。结果老年组T-SPOT.TB检测的敏感度、特异度均低于中青年组,差异具有统计学意义(P0.05)。T-SPOT.TB的敏感度、特异度与年龄呈负相关(r=-0.211、-0.233,P0.05)。老年组菌阳肺结核和菌阴肺结核的敏感度分别为85.00%、69.33%,2亚组差异具有统计学意义(P0.05)。中青年组菌阳肺结核和菌阴结核检测的敏感度分别为96.29%、76.92%,2亚组差异有统计学意义(P0.05)。结论 IGRAs对老年肺结核诊断效能较低,尤其是菌阴性老年肺结核,但其诊断的敏感度高于其他结核病相关检测方法,对老年肺结核的辅助诊断仍具有一定的应用价值。     

结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用

目的建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点（Elispot）检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性。方法采用以早期分泌抗原靶6kDa蛋白（ESAT-6）抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术（简称Elispot）;应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂（Quantiferon-TB-Gold,QFT-G）进行平行检测。结果采用Elispot检测,结核患者的阳性率最高（75.0%）,显著高于健康对照（7.3％）和其他肺部疾病患者（11.1%）,结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elispot检测结果进行配对比较无显著性差别（χ²=1.6,P>0.05）。 结论建立了结核菌特异性IFN-γ Elispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察。     

比较结脑病人血液和脑脊液IFN-γ的表达水平

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(Elispot)检测结核性脑膜炎病人外周血和脑脊液细胞中IFN-γ的表达,评价该方法在结核性脑膜炎诊断中的应用情况。方法采用自建立的结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术(简称Elispot)检测16例结核性脑膜炎病人PBMC和脑脊液中结核菌特异性IFN-γ水平。结果 ELISPOT检测两种细胞分别在ESAT6蛋白和Pool A多肽的作用下,释放的IFN-γ水平均没差别(P0.05);两种标本ELISPOT检测阳性率没有差异(P0.05)。结论建立的结核特异性的Elispot检测诊断方法适用于脑脊液标本的检测,并且其检测效果与外周血细胞的检测是基本一致。     

肺泡灌洗液效应T细胞检测对涂阴肺结核的快速诊断价值

目的探讨检测患者肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中的效应T细胞对涂阴肺结核快速诊断价值。方法收集2016-2017年在南通市第六人民医院结核科住院的120例疑似肺结核患者的BALF,经确诊后分为涂阳肺结核组43例、涂阴肺结核组56例,非结核感染组21例。利用结核感染效应T细胞斑点试验(T-SPOT)对所有患者的BALF中的效应T细胞进行检测,评估其阳性率;收集涂阴组患者BALF其他结核检测指标:结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB)、使用BACTEC MGIT 960系统的结核分枝杆菌快速培养(960培养)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)及外周血T-SPOT检测,与BALF T-SPOT进行对比,并计算BALF T-SPOT对于涂阴肺结核的诊断价值。结果涂阳组和涂阴组BALF T-SPOT阳性率无明显差异(χ~2=0.677,P0.05),但均明显高于非结核组(C2=51.325和51.889,P0.05)。涂阴肺结核患者BALF T-SPOT检测的ROC曲线下面积为0.932,诊断准确度较高。涂阴患者BALF T-SPOT的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为91.1%、95.2%、98.1%、80%,阳性率明显高于其他结核检测指标。结论利用T-SPOT技术检测BALF中效应性T细胞对于快速诊断涂阴肺结核有较高的临床实用价值。     

老年肺结核病人血清皮质醇、醛固酮、ACTH水平的临床研究

本文采用放免法检测30例老年肺结核患者血清皮质醇、醛固酮和ACTH水平。结果显示,老年肺结核组血清皮质醇、醛固酮水平较老年健康组和中青年肺结核为高,而ACTH则较其为低。老年肺结核组皮质醇、醛固酮和ACTH水平超过正常值者分别为19例(63.3％)、9例(30％)和3例(10％),与中青年肺结核组比较前两者差异显著。并说明老年患者皮质醇、醛固酮和ACTH水平与病情、化疗有关。     

采用干扰素释放反应试验和PPD皮试对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染筛查的研究

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ免疫酶联斑点法（ELISPOT）和传统的结核菌素皮试（PPD皮试）对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染现状进行筛查,并比较两种方法的差异。方法采用自主研制的Elispot试剂盒（简称Elispot）和PPD皮试,对133例健康志愿者进行平行检测。结果A高校99例志愿者中PPD皮试有49例阳性（49.5％）,Elispot检测有20例阳性（20.2％）;B高校34例志愿者中PPD皮试有27例阳性（79.4％）,Elispot检测有2例阳性（5.9％）。对两种方法进行平行比较分析,结果有统计学差异（X^2=41.31,P〈0.005）;在PPD（卅）组中Elispot阳性率最高为28.57％;在（廾）-（-）组中分别为22.2％、12.5％及12.28％。结论结核菌特异性IFN-γ Elispot试剂盒在健康人群中检测阳性率比传统的PPD皮试要低,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试,在结核分枝杆菌潜伏感染早期诊断有较好的发展前景。     

肺结核患者痰和血浆IFN-γ含量检测的临床意义探讨

目的探讨肺结核患者痰和血浆中γ-干扰素（interferon-gamma,IFN-γ）水平在结核病诊断、鉴别诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）分别检测44例活动性肺结核患者（PTB）、36例正常对照者、18例肺癌患者痰和血浆中IFN-γ含量。结果结核分枝杆菌潜伏感染者（LTBI）痰和血浆IFN-γ含量与健康人相接近（P〉0.05）;肺结核患者血浆IFN-γ含量显著高于正常对照及肺癌患者（P值均〈0.05）,肺结核患者痰中IFN-γ含量显著低于正常对照及肺癌患者（P值均〈0.01）;肺结核患者痰IFN-γ含量低于血浆IFN-γ含量;痰及血浆中IFN-γ的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.90和0.91,当痰中IFN-γ诊断临界值为21.40 pg/ml时,敏感度85.71%、特异性82.35%;当血浆IFN-γ诊断临界值为27.91 pg/ml时,敏感度71.43%、特异性94.12%。结论痰和/或血浆中IFN-γ可以作为肺结核诊断（尤其是菌阴肺结核）、鉴别诊断的重要辅助指标之一。     

血清白介素1和γ干扰素的检测对肺结核的诊断价值

目的探讨血清白介素1(IL-1)和γ干扰素(IFN-γ)的检测在肺结核诊断中的意义。方法采用酶联免疫法(ELISA)检测42例肺结核患者和27例健康人血清中IL-1和IFN-γ的水平。结果与健康人组相比较,肺结核组血清中IL-1[(78.21±27.13)pg/mL vs(8.80±6.94)pg/mL]和IFN-γ[(56.85±20.62)pg/mL vs(29.11±31.52)pg/mL]的水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论血清IL-1和IFN-γ的测定有助于肺结核患者的诊断。     

外周血IFN—γ的检测在结核分枝杆菌潜伏感染诊断中的价值

目的探讨利用酶联免疫斑点（Elispot）法检测外周血结核抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答反应在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法将150例健康者按结核暴露程度分成4级，采用Elispot技术检测其外周血单个核细胞（PBMC）结核菌抗原特异性IFN-γ分泌水平；其中111例进行结核菌素皮试（PPD皮试）；39例采用全血干扰素试剂（Quantiferon—TB—Gold，QFT—G）进行IFN-γ分泌水平的平行检测。结果采用Elispot检测结果显示体外IFN-γ应答反应水平与结核菌暴露程度成正相关（r=0．4155，P〈0．0001），不同暴露程度分级的IFN-γ应答阳性率分别是：4级（55．6％）、3级（33．3％）、2级（16．7％）、1级（6．8％）。不同暴露程度分级与PPD皮试结果的相关性没有统计学意义（r=0．1206，P=0．2073）；不同暴露程度分级的PPD皮试反应阳性率分别为4级（33．3％）、3级（27．8％）、2级（11．1％）、1级（22．0％）。对Elispot检测结果与QTF—G检测结果进行平行比较分析，两种方法检测结果没有统计学差异（χ^2=0．125，P=0．7237）。结论外周血结核抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答反应水平与结核菌暴露程度成正相关，Elispot检测体外IFN-γ应答反应在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试，可以用于对潜伏感染者的筛查。     

卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响

目的探讨卡介苗（BCG）对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测影响,评价Elispot检测在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法对98例某高校学生同时进行Elispot检测和PPD皮试,其中27例PPD皮试结果和Elis-pot检测均为阴性的受试者进行卡介苗接种。结果 98例受试者中,48例PPD皮试阳性,13例Elispot检测阳性,两种检测结果比较差异有统计学意义。对上述27例受试者接种BCG后PPD皮试结果全转为阳性,Elispot检测仍为阴性。在BCG接种前后,ESAT-6和PoolA作用下IFN-γ分泌水平均无差异;但在BCG作用下,BCG接种后IFN-γ分泌水平显著高于接种前。结论 Elis-pot检测体外IFN-γ应答反应不受卡介苗接种影响,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试。     

ESAT-6／CFP-10融合蛋白诊断结核性感染和结核病的研究

目的：探讨ESAT-6／CFP-10融合蛋白刺激外周血单个核细胞（PBMC）释放IFN-γ反应及其对结核性感染和结核病的诊断价值。方法：选取健康对照组（34例）,密切接触组（19例）和结核病组（39例）3组对象,按其有无卡介苗（BCG）接种各分成两个2组共6小组：健康对照组BCG未接种者（15例）、健康对照组BCG接种者（19例）、密切接触组BCG未接种者（6例）、密切接触组BCG接种者（13例）、结核病组BCG未接种者（7例）和结核病组BCG接种者（32例）。分离PBMC并分别与PPD和ESAT-6／CFP-10融合蛋白共同培养5d,以酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养上清液中IFN-γ,观察6组对象IFN-γ释放反应。结果：PPD刺激后,健康对照组BCG未接种者与密切接触组BCG未接种者结果之间差异有统计学意义（P〈0．01）,而3组BCG接种者之间结果差异无统计学意义（P〉0．05）。ESAT-6／CFP-10融合蛋白刺激后,健康对照组、密切接触组、和结核病组3组总阳性率分别为0％,21．1％,87．2％,阳性率明显增加。健康对照组BCG未接种者与密切接触组BCG未接种者结果之间差异有统计学意义（P〈0．05）;健康对照组BCG接种者与密切接触组BCG接种者结果之间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：ESAT-6／CFP10融合蛋白为结核杆菌特异性抗原,能够区分BCG接种和结核病,在结核性感染和结核病的诊断中有应用价值。     

A study on the clinical features of pulmonary tuberculosis in elderly patients

The clinical findings of pulmonary tuberculosis in elderly patients aged 75 years of age or older (elderly group) were compared with the middle-aged patients aged between 45 and 54 years of age (middle-aged group) and the young patients aged 34 years of age or younger (young group). The elderly patients who died in hospital were also compared with the elderly patients who survived. Study subjects were culture-positive pulmonary tuberculosis patients who were discharged from our hospital from December 1996 to November 1998. There were 79 patients in the elderly group, 95 in the middle-aged group, and 88 in the young group. The results were as follows. 1) The male/female ratio was significantly lower in the elderly group (1.9:1) than the middle-aged group (6.9:1). 2) Complication was noted more frequently in the elderly group. However, diabetes mellitus was noted less frequently in the elderly group (12.7%) than the middle-aged group (28.4%). 3) The frequency of cavitation was lower in the elderly group (59.5%) than the middle-aged group (87.4%). 4) The fever over 38 degrees C was noted less frequently in the elderly group (17.7%) than the other groups, while the frequency of the fever over 37 degrees C showed no significant difference between the elderly group and the other groups. 5) The frequencies of hypoalbuminemia and appetite loss were higher in the elderly group than the other groups. 6) The elderly group showed high mortality rate of 31.6%. The complication with cerebrovascular disease was noted significantly higher in the patients who died in hospital than those who survived. The frequency of widespread infiltrates, fever over 38 degrees C, neutrophilia, hypoalbuminemia and appetite loss were all significantly higher in the patients who died in hospital while their sputa were still positive on culture than those who survived. Our study clearly showed the features of elderly pulmonary tuberculosis patients in comparison with middle-aged patients and young patients. These features are very important to suspect the diagnosis of pulmonary tuberculosis in elderly patients with some atypical manifestation. Our study also suggests that the delay in diagnosing tuberculosis causes more frequently the patients' deterioration and death in elderly patients than in middle-aged patients and young patients.