屋尘螨提取液致敏BALB/c与C57BL/6小鼠肺部变应性炎症模型的比较

目的研究以屋尘螨提取液复制BALB/c和C57BL/6小鼠肺部变应性炎症模型的方法.方法BALB/c和C57BL/6小鼠各分为对照组、加强组和常规组.加强组在第1天采用皮下注射,以后隔日采取腹腔注射进行致敏,再用提取液多次滴鼻激发(第15～17天).最后1次滴鼻24 h后对小鼠作肺泡灌洗.常规组则于第1、8天腹腔注射2次,第15～17天滴鼻3次.对照组用PBS作注射和滴药.进行灌洗液细胞计数和分类,肺组织病理计分,灌液洗用ELISA测定IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ含量.结果①C57BL/6加强组肺部病理计分明显升高,呈明显变应性炎症病理改变;灌洗液中细胞计数和嗜酸性粒细胞计数明显升高(P＜0.05);灌洗液IL-4、IL-5明显升高(P＜0.05),IFN-γ、IL-2无明显变化;②BALB/c加强组、腹腔注射致敏组和C57BL/6腹腔注射致敏组可见炎性细胞浸润,但嗜酸性细胞较少,BALF中IL-4、IL-5升高较加强组为弱,灌洗液中细胞计数增高,但嗜酸性细胞计数较对照组无明显差异,③单剂量组上述指标与对照组比较无显著差异.结论与BALB/c相比,在屋尘螨致敏小鼠哮喘模型的复制中,C57BL/6更易取得成功,且使用皮下注射加强致敏C57BL/6小鼠所复制屋尘螨致敏哮喘模型更为典型.     

麻黄水提物雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察麻黄水提物雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症及白细胞介素-13(IL-13)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达的影响。方法将24只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、哮喘模型组、麻黄组,每组8只。除正常对照组用生理盐水外,哮喘模型组、麻黄组用卵蛋白腹腔注射致敏及滴鼻激发建立哮喘模型,麻黄组每次激发前1h予以麻黄水煎液雾化吸入30min,2次/天,连续7d。正常对照组、哮喘模型组用等量生理盐水代替麻黄水煎液雾化吸入,吸入方法和时间同麻黄组。小鼠末次激发24h后,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)和嗜酸性粒细胞(EOS),HE染色观察支气管及其周围组织病理改变,免疫组化法测定支气管肺组织中IL-13、Eotaxin的表达,ELISA法检测IL-13、Eotaxin的浓度。结果与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中WBC、EOS计数,支气管肺组织中IL-13、Eotaxin蛋白表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与哮喘模型组比较,麻黄组小鼠以上各项指标均降低,支气管及其周围组织炎症细胞浸润减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论麻黄水提物雾化吸入能减轻哮喘小鼠气道炎症,抑制支气管肺组织中IL-13、Eotaxin蛋白的表达可能是其抗炎机制之一。     

从SARS患者血清发现双相型深部真菌的报告

目的通过制备BALB/c小鼠过敏性哮喘模型,研究共刺激分子OX40在哮喘中的表达.方法腹腔注射卵蛋白致敏小鼠,两周后雾化吸入卵蛋白激发哮喘发作,以生理盐水腹腔注射及雾化吸入为空白对照.比较支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数百分数;肺组织HE及PAS染色以确定动物造模是否能模拟哮喘的病理状态;肺组织冰冻切片行免疫组化检测哮喘小鼠肺组织OX40的表达情况.结果卵蛋白激发后,小鼠的支气管肺泡灌洗液中的细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞百分数较对照组增高,且差异有统计学意义,哮喘小鼠肺组织中OX40的表达明显增多.结论BALB/c小鼠是制备过敏性哮喘的理想模型,哮喘时小鼠肺组织中OX40的表达明显增多.     

哮喘小鼠模型中小鼠外周血IL-18水平与肺中嗜酸性粒细胞测定

目的测定哮喘小鼠外周血IL-18水平与哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量。方法24只BALB／C鼠随机分为两组，B组小鼠腹膜注射OVA抗原3次后给予雾化OVA抗原激发哮喘。末次激发后24h处死小鼠。ELISA法测定哮喘小鼠外向血IL-18水平，获取哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液，细胞计数板法与组织染色法测定支气管肺泡灌洗液中白细胞总数与嗜酸性粒细胞数量。结果哮喘小鼠外周血IL-18升高，且与生理盐水对照组差异有显著性（P〈0．01）。哮喘组小鼠肺支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比与生理盐水对照组相比差异均有显著性（P〈0．01）。结论IL-18可能参与哮喘的病理反应。     

一种改良型小鼠哮喘模型方法的建立及评价

目的:改良建立小鼠哮喘模型的方法并评价其效果.方法:清洁级BALB/c小鼠20只,随机分为模型组和对照组,模型组于第0和14d注射OVA(卵清蛋白)致敏,第21～25天雾化吸入5%OVA激发,对照组用生理盐水替代.结果:模型组在激发过程中出现明显头面部瘙痒,呼吸加深加快,安静少动,弓背,前肢缩抬等哮喘急性发作表现.BALF(支气管肺泡灌洗液)中白细胞总数及嗜酸性粒细胞分类明显增多.血清及BALF中IL-4明显增高,INF-γ下降,OVA特异性IgE增高.肺组织病理切片见小支气管及伴行血管周围有较多炎症细胞浸润,可见大量嗜酸性粒细胞,杯状细胞增生,平滑肌增厚,部分肺泡间隔融合形成肺气肿.结论:通过对小鼠哮喘模型建立方法的改良,成功复制出小鼠哮喘发作的动物模型.     

卵清蛋白诱导小鼠建立支气管哮喘模型

目的:建立一种稳定的小鼠哮喘模型,以便用于支气管哮喘的研究及治疗。方法:清洁级,雌性BALB/c小鼠16只,随机分为模型组和对照组,模型组于第0天和第14天注射卵清蛋白(ovalbumin,OVA)氢氧化铝溶液致敏,第28～30天雾化吸入1%OVA溶液激发,对照组用生理盐水替代OVA溶液。结果:模型组在雾化过程中出现了较明显的头面部瘙痒,前肢缩抬,弓背,呼吸加深加快,安静少动等哮喘急性发作症状。支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞数(eosinophils,EOS)和白细胞总数均明显增多。肺组织病理切片(HE染色后)可见小支气管和伴行血管周围都有较多的炎症细胞浸润,可以看到大量嗜酸性粒细胞,平滑肌增厚,杯状细胞增生,部分肺泡间隔融合并形成肺气肿。结论:用OVA致敏的方法可以成功地建立小鼠哮喘模型。     

荷瘤小鼠髓系来源抑制性细胞对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的初步探讨髓系来源抑制性细胞（MDSC）对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法将6周龄SPF级BALB/c雄鼠5只制成4T1乳腺癌细胞成瘤小鼠,用于制备MDSC。6周龄SPF级BALB/c雌鼠30只随机分为正常对照组、哮喘模型组和细胞移植组。采用免疫磁珠技术分选肿瘤小鼠骨髓中的MDSC,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的诱导下外扩增培养,光学显微镜观察其体外培养过程中的形态特征,流式细胞仪（FACS）分析其表型特征。哮喘模型组和细胞移植组予卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏,OVA雾化诱发哮喘。细胞移植组在诱导哮喘的第10 d经尾静脉注入MDSC。HE染色观察小鼠肺部病理改变,检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类。结果肺组织病理观察显示正常对照组支气管周围基本无炎症细胞浸润;哮喘模型组支气管周围大量炎症细胞浸润,杯状细胞增生;细胞移植组支气管、血管黏膜下和周围肺组织炎症较哮喘模型组减轻。哮喘模型组和细胞移植组BALF细胞总数、嗜酸粒细胞和中性粒细胞计数均显著高于正常对照组（P〈0.05）,而细胞移植组嗜酸性粒细胞计数则明显低于哮喘模型组（P〈0.05）。结论静脉输注荷瘤小鼠MDSC可一定程度上抑制哮喘小鼠气道炎症。     

无气道高反应性的嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型的建立

目的应用不同大小的变应原颗粒雾化小鼠,尝试建立具有明显的嗜酸粒细胞（EOS）气道炎症、但无气道高反应性的BALB／c小鼠模型。方法BALB／c雌性小鼠,分为3组,每组6—8只：大颗粒变应原雾化激发组（实验组）、小颗粒变应原雾化激发组（哮喘组）、生理盐水对照组（对照组）。予卵蛋白（OVA）致敏后,实验组和哮喘组第28、29、30天分别用PARI TIA喷雾器和PARI LC STAR喷雾器雾化l％ OVA 15 min激发;xff照组致敏、激发采用生理盐水。测定动物的气道反应性,观察气道炎症程度。结果哮喘组的气道反应性高于实验组和对照组,实验组与对照组的气道反应性比较差异无统计学意义（P＞0．05）。实验组肺泡灌洗液中EOS百分率高于对照组,但低于哮喘组。实验组出现支气管周围EOS等炎症细胞浸润,程度轻于哮喘组。结论采用大颗粒变应原进行雾化激发初步成功建立了具有明显的EOS气道炎症、但无气道高反应性的BALB／c小鼠模型,为进一步研究气道高反应性的发生机制奠定了基础。     

泡桐花总黄酮抗C57BL/6小鼠哮喘气道炎症的实验研究

目的:研究泡桐花总黄酮抗实验性C57BL/6小鼠哮喘气道炎症的作用.方法:以卵蛋白致敏和引喘C57BL/6小鼠为模型,观察泡桐花总黄酮大、小剂量对小鼠哮喘发作程度、小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)数、支气管黏膜EOS计数以及哮喘小鼠肺组织病理学改变的影响.结果:泡桐花总黄酮明显减轻C57BL/6小鼠哮喘发作程度,使BALF中EOS数明显下降,显著降低细支气管黏膜EOS的浸润和黏膜EOS计数.病理组织学检察发现,泡桐花总黄酮可明显减少C57BL/6哮喘小鼠肺间质及肺泡腔内EOS等炎细胞浸润.结论:泡桐花总黄酮具有抑制哮喘鼠气道过敏性炎症反应的作用.     

隐丹参酮对哮喘模型小鼠呼吸道炎症的作用

[目的]观察隐丹参酮对哮喘模型小鼠呼吸道炎症的作用.[方法]取雌性BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、隐丹参酮低、高剂量(15,30 mg/kg)组,给予相应处理.采用鸡卵白蛋白致敏和激发的方法制作哮喘小鼠模型,末次激发24 h后处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液,测定总炎性细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数量及IL-4,IL-5,IL-13水平.[结果]与正常组比较,哮喘组小鼠支气管肺泡灌洗液中总炎性细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量及IL-4,IL-5,IL-13水平均显著升高(P<0.05);与哮喘组比较,隐丹参酮低、高剂量组上述各项指标均明显降低(P<0.05).[结论]隐丹参酮具有抗哮喘作用,其机制可能与下调Th2细胞因子、减少炎性细胞浸润有关系.     

三个品系小鼠流感病毒气溶胶感染模型的比较

[摘要] 目的 通过气雾攻击产生气溶胶的感染方式对三个品系的小鼠分别进行感染,比较三个品系小鼠在感染过程中的感染差异,从而对三个品系小鼠流感模型的特点进行分析,为流感发病机制的研究及疫苗和药物的开发选择合适的感染模型提供参考。方法 选用A/Puerto Rico/8/34（H1N1）病毒株,采用气雾攻击的方法感染近交系C57BL/6、BALB/c和远交群 ICR三个品系的小鼠,每日称小鼠体重,肉眼观察小鼠状态,分别于感染后3d,7d,14d处死小鼠,取肺脏称其湿重,进行肺脏的病毒测定及病理观察。结果 三个品系小鼠均可感染,其中C57BL/6小鼠的存活率低于其他两个品系,3d 的肺指数和病毒载量均明显高于ICR小鼠（P<0.05),镜下病理结果显示较其他两个品系也更明显。BALB/c小鼠与其他两个品系小鼠相比,体重在后期的恢复最慢,存活率比 C57BL/6高但比ICR低;肺指数和病毒载量与其他两个品系相比没有显著差异;镜下病理改变相似,但弱于C57BL/6强于ICR。ICR小鼠的发病进程与其他两个品系小鼠基本相似,但体重、存活率、肺指数、病毒载量及镜下病理改变等指标均弱于其他两个品系。结论 三个品系小鼠均可建立流感气溶胶模型,但感染后的三个模型各有特点,在实验中可以根据不同的研究目的来选用合适的小鼠品系建立模型。     

清气化痰汤对哮喘小鼠肺部炎症的影响

目的 观察清气化痰汤对哮喘小鼠气道炎症和肺组织炎性反应的干预作用.方法 将45只BALB/c小鼠分为正常对照组(CON组)、哮喘模型组(MOD组)、地塞米松组(TRE组)、清气化痰汤组(X1组)、清气化痰汤联合地塞米松组(X2组).通过卵清清蛋白和氢氧化铝凝胶进行致敏和雾化建立哮喘小鼠模型.取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数、嗜酸性粒细胞计数及观察肺组织病理变化.结果 与CON组比较,MOD组BALF细胞计数和嗜酸性粒细胞计数明显增多,TRE组、X1组、X2组BALF细胞计数和嗜酸性粒细胞计数均明显减少,TRE组和X2组治疗后第15天与第5天比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);各治疗组均能减轻小鼠肺组织病理炎性浸润,减少肺大泡产生、气道上皮增厚,X2组炎症损伤轻.结论 清气化痰汤能减轻气道炎症,改善模型小鼠的肺组织炎性反应.     

BALB/c、C57BL/6小鼠糖皮质激素效应差异机制研究

目的 观察BALB／c和C57BL／6两株小鼠的糖皮质激素(Gc)效应差异，并对其分子机制进行初步探讨。方法 采用放免测定、Western blot和EMSA方法检测两株小鼠即时应激前后血清皮质醇浓度、脑组织糖皮质激素受体(GR)表达和脑组织GRE结合效率。结果 BALB／c和C57BL／6小鼠存在Gc-GR信号通路效应差异，C57BL／6小鼠应激前、后GRE结合效率(P＜0．01)和GR胞核／胞装比值(P＜0．01)均高于BALB／c小鼠，但两株小鼠应激前后血清皮质醇浓度(P＞0．05)和胞装内GR含量(P＞0．05)相差不显著。结论 GR核转位量导致的GRE结合差异在两株小鼠Gc—GR效应差异中扮演了重要角色。     

miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟
物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白（OVA）致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用
鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察
病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞
总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低（P<0.01）,并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围
炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/mL相比,哮喘+miR-20b 模拟物处理组的含量18.19±
3.67 pg/mL明显降低（P<0.01）。结论miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来
介导。
     

诱导抗独特型抗体抑制小鼠移植物排斥反应

目的 探讨抗独特型诱导对小鼠异位心肌移植排斥反应的影响。 Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备抗同种异品系抗体（Ａｂ１）,Ａｂ１交联ＫＬＨ后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体（Ａｂ２）,作为受体,观察Ａｂ２对小鼠异位心肌组织移植排斥反应的影响。结果 Ａｂ１交联ＫＬＨ和弗氏佐剂免疫可以有效诱导抗独特型抗体（Ａｂ２）,和对照组相比,Ａｂ２诱导组的小鼠移植物的存活时间明显延长（     

连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效

 目的  评价连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效。方法  将50只SPF级BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、连花高剂量组、连花低剂量组,每组10只。采用卵清白蛋白＋氢氧化铝致敏,并雾化激发复制小鼠支气管哮喘模型,给药组于每次激发前30 min给药,共计7次。采用特殊气道阻力值评估气道高反应性,肺组织HE染色及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞分类计数评价各组小鼠气道炎症性改变,ELISA法和磁性Luminex分析法检测BALF和血清中IL-4、IL-13、INF-γ的表达。结果  地塞米松组和连花高剂量组能显著降低气道阻力(P<0.05)。地塞米松组和连花高、低剂量组BALF中的各类炎性细胞数量和IL 13的表达均明显减少(P<0.05)。血清IL-13的表达在地塞米松组明显降低(P<0.05),但在连花高、低剂量组中没有变化。各组小鼠BALF和血清中IL-4和INF-γ的表达没有统计学差异。结论  连花定喘片可缓解哮喘症状,可能与其降低Th2型细胞因子IL-13的含量,从而减轻气道炎症有关。     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.     

修饰后日本血吸虫Sjc-97基因的真核表达及其免疫原性

目的:研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因第3区域片段(Sjc-97f3)毕氏酵母表达产物的免疫原性.方法:根据毕氏酵母密码子使用频率重新设计Sjc-97核苷酸序列,依据不对称PCR原理人工合成Sjc-97f3,并在毕氏酵母中表达.表达产物通过Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤层析方法纯化,再分别与ISA720和Al(OH)3佐剂乳化后,免疫C57BL/6和昆明小鼠,通过尾蚴膜反应和ELISA反应检测特异性抗体.结果:Sjc-97f3基因在毕氏酵母中获得了高水平分泌表达,其表达产物能与日本血吸虫免疫血清进行特异性免疫反应.经与佐剂乳化后,该蛋白具有良好的免疫原性.ELISA结果显示重组蛋白在小鼠体内可激发明显的抗体反应,但2种佐剂所诱导的抗体水平以ISA720佐剂为高; 该抗原在不同品系小鼠中的抗体水平存在显著差异(P<0.01),昆明鼠的抗血清滴度远高于C57BL/6小鼠.小鼠免疫血清能识别日本血吸虫表面抗原,产生特异的尾蚴膜反应. 结论:密码子优化的Sjc-97f3在毕氏酵母中获得高效表达,其产物具有良好的免疫原性.     

抗独特型抗体对小鼠移植低免疫反应状态的诱导作用

目的：探讨抗独特型抗体对小鼠移植耐受的诱导作用。方法：以C57BL/6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体（Abl），Abl交联KLH后，免疫BALB/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体（Ab2），以此为移植受体，观察Ab2对小鼠心脏移植耐受的诱导作用。结果：Abl交联KLH和弗氏佐剂免疫可有效地诱导Ab2，与对照组相比，Ab2诱导组的小鼠移植物存活时间明显延长。结论：移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的Ab2，可以对小鼠特异性低免疫反应状态起到有效的诱导作用。     

薄荷醇下调肺组织P物质改善哮喘气道炎症及气道高反应性的研究

目的 探讨雾化吸入薄荷醇对哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的作用及其对肺组织P物质(substance P,SP)含量的影响.方法 按随机数字表法将30只6～8周龄BALB/c雌鼠分为对照组、哮喘组及薄荷醇治疗组,哮喘组和薄荷醇治疗组用鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立哮喘模型,薄荷醇治疗组于每次雾化激发前给予1.6％薄荷醇溶液5 mL雾化吸人30 min,连续10 d,对照组用PBS替代.于末次雾化24 h内行肺功能检测小鼠气道高反应性;48 h内灌取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数及细胞分类;肺组织HE染色观察肺部病理改变;ELISA检测血清总免疫球蛋白E(IgE)水平及肺匀浆SP含量;免疫组化染色检测肺组织SP的表达.结果 哮喘组气道高反应性明显高于对照组(P＜0.05),而薄荷醇治疗组较哮喘组显著降低(P＜0.05);哮喘组BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对计数均较对照组明显增加(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组显著减少(P＜0.01);HE染色显示,哮喘组支气管和血管周围炎症细胞浸润明显,薄荷醇治疗组较哮喘组明显减轻;ELISA结果显示,哮喘组血清总IgE水平及肺匀浆SP含量均较对照组升高(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组减轻(P＜0.05);免疫组化染色结果显示,哮喘组肺组织SP在气道上皮细胞及血管周围强阳性表达,薄荷醇治疗组中度阳性表达.结论 雾化吸入薄荷醇能减轻哮喘小鼠气道炎症及降低气道高反应性,可能与减少SP含量进而减轻肺部神经源性炎症相关.