系统性红斑狼疮BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的分化发育

目的：研究Ｙａａ基因与骨髓Ｂ细胞系细胞的分化发育是否有相互关系。方法：用Ｗｈｉｔｌｏｃｋ－Ｗｉｔｔｅ法朋内髓细胞中培养纯化纱细胞，继而检测Ｂ细胞系细胞对指多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）刺激后的表型、增殖反应和抗ＤＮＡ抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况。结果：用Ｗｈｉｔｌｏｃｋ－Ｗｉｔｔｅ法成功地从在细胞中培养分离出Ｂ细胞系细胞。经ＬＰＳ刺激后，雌雄ＢＸＳＢ小鼠Ｂ细胞系细     

狼疮鼠骨髓树突状细胞的分离培养和免疫学特性

目的对狼疮鼠骨髓树突状细胞进行分离、培养并分析其免疫学特性,为进一步研究和应用狼疮鼠骨髓来源树突状细胞(DC)奠定基础。方法分离、纯化6周龄雄性BXSB狼疮鼠骨髓单核细胞,以含10%胎牛血清、2ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和20ng/ml重组小鼠白细胞介素-4的RPMI-1640培养基培养,以脂多糖(LPS,1μg/ml)刺激24h体外诱导BXSB狼疮鼠骨髓细胞分化为DC,倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞表面分子,混合淋巴细胞反应检测其刺激T细胞增殖能力。结果经体外诱导培养第2～8天可见大量细胞集落形成,培养的DC具有典型树突状形态,同时DC可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。结论体外诱导培养可稳定获得BXSB狼疮鼠骨髓来源DC。     

Fas、Bcl-2在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的表达

目的 :观察 Fas、Bcl- 2在 γ射线体外诱发的急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓细胞中表达情况 ,以探讨辐射致癌的机制。方法 :采用 4次 1.75 Gyγ射线全身照射 BAL B/ c小鼠诱发白血病模型 ,通过流式细胞仪对照射后白血病组、未癌变组及对照组小鼠骨髓细胞中 Fas、Bcl- 2的表达进行检测 ;应用抗 Fas抗体诱导细胞凋亡 ,进一步观察 Fas、Bcl- 2的表达对骨髓细胞凋亡的影响。 结果 :白血病小鼠骨髓细胞 Fas表达较未癌变组及对照组明显下降 (P<0 .0 1) ,而 Bcl- 2的表达明显增强 (P<0 .0 1) ;白血病小鼠骨髓细胞明显耐受抗 Fas抗体诱导的细胞凋亡。 结论 :Fas低表达、Bcl- 2高表达导致了细胞凋亡受到抑制 ,这可能是辐射引起小鼠急性淋巴细胞白血病的机制之一。     

荷瘤小鼠骨髓来源树突状细胞诱导的抗肿瘤作用

目的:探讨能否从荷瘤小鼠骨髓细胞诱导出功能正常、具有抗肿瘤作用的树突状细胞(DC),与正常小鼠骨髓来源的DC比较有无差异。方法:于体外用mGM-CSF和mIL-4分别从正常小鼠和CT26结肠腺瘤小鼠的骨髓细胞诱导DC,并用CT26肿瘤细胞抗原冲击致敏。用相差显微镜观察DC的形态学变化;流式细胞术检测CT26肿瘤细胞抗原致敏前后DC表面分子变化;3H-TdR掺入法检测肿瘤抗原致敏DC刺激T细胞增殖的能力;乳酸脱氢酶(LDH)4 h释放法检测肿瘤抗原致敏DC诱导同基因T细胞增殖、分化为细胞毒性T细胞(CTL)的杀伤活性。结果:荷瘤小鼠骨髓来源DC与正常小鼠骨髓来源DC的Ia-Kd、H-2Kd、CD80、CD86I、CAM-1表达水平和它们刺激T细胞增殖的能力以及所诱导产生的CTL杀伤活性均无显著性差异。结论:荷瘤小鼠骨髓来源的DC与正常小鼠骨髓来源的DC具有相似的功能和抗肿瘤作用,提示可以从荷瘤机体的DC前体诱导出具有抗肿瘤作用的DC用于肿瘤的免疫治疗。     

rhGM-CSF对60Co照射小鼠外周血细胞和骨髓细胞动态变化的影响

目的: 探讨重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 对受照小鼠外周血和骨髓细胞的影响. 方法:采用6.0 Gy 60Co-γ照射小鼠造成造血功能损伤,采尾静脉血计数外周血白细胞及其分类, 取一侧股骨骨髓计数骨髓有核细胞,取另侧骨髓制片观察骨髓粒系分裂池、存贮池、成熟池骨髓细胞绝对值动态变化. 结果:Leucomax与rhGM-CSF 不能使受损血细胞恢复常态,但能动员外周造血器官与贮备池血细胞加速释放, 在骨髓严重受抑后,能使骨髓细胞粒系增殖提前,分裂池细胞分化增殖,诱导贮备池不成熟的细胞发育成熟细胞. 结论:rhGM-CSF对60Co 辐射小鼠的粒细胞和单核细胞具有增殖和动员作用.     

杀菌/渗透增强蛋白在小鼠组织器官和细胞中的分布

目的探讨生理状态和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,杀菌渗透增强蛋白(murine bactericidal/permeability-increasing protein,muBPI)在小鼠组织器官和细胞中的表达情况。方法①实验小鼠分为3组,即LPS未刺激组、LPS刺激组和阴性对照组;②制备小鼠心、肝、脾、肺、肾、胸腺、睾丸、小肠组织切片和骨髓细胞、腹腔灌洗细胞、骨髓源树突状细胞涂片;③采用免疫组化方法检测muBPI在上述组织器官和细胞中的表达。结果①LPS未刺激组小鼠睾丸、小肠、肾脏组织切片和骨髓细胞、腹腔灌洗细胞、骨髓源树突状细胞涂片均呈黄色着染;LPS刺激后上述组织切片和细胞涂片呈棕黄或深棕色着染;阴性对照组呈现非特异微弱黄色背景着染;②LPS未刺激组小鼠肺、肝组织切片呈微弱黄色背景着染;LPS刺激后上述组织切片呈棕黄色着染;阴性对照呈微弱黄色背景着染;③其余器官组织切片在LPS刺激或未刺激组均呈现与阴性对照组相同的非特异微弱黄色背景着染。结论①生理状态下,小鼠睾丸、小肠、肾脏、骨髓细胞、腹腔灌洗细胞和骨髓源树突状细胞可组成性表达BPI蛋白,LPS刺激后BPI蛋白表达量显著增高;②生理状态下,小鼠肺、肝组织不表达BPI蛋白,LPS可诱导上述组织表达BPI蛋白;③其余组织器官在生理状态下和LPS刺激后均不表达BPI蛋白。     

TLR4参与多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡作用研究

目的:探讨TLR4信号对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法:用RT-PCR和PE染色流式细胞仪检测骨髓瘤细胞株中TLR4基因的转录和蛋白的表达情况;MTT法检测细胞在脂多糖(LPS)刺激下增殖变化;AnnexinV-PI双染色流式检测细胞经LPS预处理后对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响.结果:骨髓瘤细胞株中存在TLR4 基因的转录和蛋白的表达,但表达水平有差异.骨髓瘤细胞在LPS刺激下,表达TLR4的MM1-s细胞增殖明显(P<0.05),对阿霉素诱导的凋亡有明显的抵抗作用;而不表达TLR4的U266细胞增殖未受明显影响.而且LPS不能保护阿霉素对U266细胞的诱导凋亡作用.结论:TLR4信号对在多发性骨髓瘤的增殖和生存都起重要作用.     

BXSB狼疮鼠骨髓细胞凋亡的实验研究

目的 通过在体外对BXSB狼疮鼠骨髓细胞进行培养,检测BXSB狼疮鼠骨髓细胞的凋亡情况,从而在干细胞水平上探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制.方法 取4月龄雄性BXSB狼疮鼠和雄性BALB/c小鼠各6只.从小鼠股骨提取骨髓细胞后,用台盼蓝染色法检测骨髓细胞的活性,计数.然后将骨髓细胞悬液加入6孔培养板,每孔加入等量的骨髓细胞.置于37℃、5%CO2中培养24 h后收集骨髓细胞,用TUNEL法检测细胞的凋亡.结果 ①BXSB狼疮鼠骨髓细胞数量明显高于同龄BALB/c小鼠,而且BXSB狼疮鼠与同龄BALB/c小鼠相比,骨髓细胞数/小鼠体重之比也明显升高.②BXSB狼疮鼠骨髓细胞中凋亡水平明显下降.结论 BXSB狼疮鼠的发病可能与其骨髓细胞的凋亡异常有关.     

地塞米松对M-CSF体外诱导分化的骨髓巨噬细胞的影响

目的研究地塞米松对单核细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导分化的骨髓巨噬细胞的影响。方法 M-CSF诱导分化的小鼠骨髓巨噬细胞,采用不同浓度地塞米松处理,进行形态学观察及增殖生长测定。免疫荧光法检测其吞噬功能,RT-PCR技术检测巨噬细胞各种细胞因子mRNA水平的表达。结果不同浓度地塞米松处理后,M-CSF体外诱导分化的骨髓巨噬细胞的增殖活性被明显抑制,且具有剂量依赖性;而且M-CSF体外诱导分化的骨髓巨噬细胞的吞噬活性被有效抑制。经过地塞米松处理后细胞趋于类圆形,伪足变宽、变短。地塞米松能抑制M-CSF体外诱导分化的骨髓巨噬细胞的促炎症因子mRNA水平的表达。结论地塞米松能有效抑制M-CSF体外诱导分化的骨髓巨噬细胞的活化及功能,为其作为免疫调节剂治疗噬血细胞综合征提供实验依据。     

抗B细胞抗体在自身免疫性疾病治疗中的应用

B淋巴细胞是介导获得免疫应答的重要组分,起源于胎肝,妊娠12～16周迁移至骨髓,在骨髓基质细胞和细胞因子辅助下分化成熟。分化成熟过程如下所示:前B(Pre-B)→不成熟B→处女型B→成熟B→记忆B→产生抗体的浆细胞。表面抗原CD20表达干除浆细胞以外各个分化阶段,充当B细胞表面跨膜Ca~(2+)离子通道,在B细胞活化过程中发挥关键作用。因此,针对CD20的靶向治疗对于主要由B细胞介导的疾病的作用受到关注。大多实验研究证实,抗CD20单克隆抗体可与B细胞表面CD20高亲和力结合,通过多种机制选择性删除B细胞,其机制包括抗体依赖性细胞毒作用、补体介导的细胞毒作用,抑制细胞增殖和直接诱导B细胞凋亡。因此,抗CD20单克隆抗体在自身免疫性疾病的治疗中起到了重要的作用。     

BXSB小鼠胸腺内B细胞异常增生机理的初步分析

采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测了不同月龄与性别ＢＸＳＢ小鼠胸腺中Ｂ细胞的增殖反应，初步分析Ｂ细胞异常增生的机制。结果显示发病的ＢＸＳＢ小鼠胸腺Ｂ细胞具有自发增殖能力，此与正常小鼠不同，而其对ＬＰＳ的应答增殖反应较正常小鼠高２．５倍以上。发病的ＢＸＳＢ小鼠胸腺基质细胞对其Ｂ细胞的增殖无任何影响。实验结果表明发病ＢＸＳＢ小鼠胸腺Ｂ细胞的增加与其本身的异常有关，而非胸腺基质细胞的作用     

SLE动物模型自身免疫状况的观察——抗核抗体和B细胞功能的测定

本文采用间接免疫荧光法(IIF)和反向溶血空斑法(RPFC),对BXSB、NZW两种鼠的自身免疫状况做了较系统的观察。结果表明:BXSB、NZW的抗核抗体(ANA)滴度以BXSB雄民最高,且随着月龄的增加而增高。NZW鼠的ANA水平接近BXSB雌鼠,其雌鼠的滴度高于雄鼠。BXSB鼠脾中和骨髓中的免疫球蛋白分泌细胞(IgSC)在发病中所起的作用可能不同。     

HER2/neu诱导DBA/2小鼠特异性CTL应答及其抑瘤效应研究

目的：探讨HER2/neu原癌基因DNA疫苗免疫诱导特异性细胞免疫应答及其在体内的抑瘤效应。方法：将重组HER2/neu原癌基因真核表达载全转染P815细胞，用细胞组织化学及Western-blot方法鉴定质粒在细胞中的表达。在DBA/2小鼠体内构建表达HER2抗原的肿瘤动物模型，通过重组质粒免疫小鼠，诱导小鼠产生细胞免疫应答，观察免疫动物体内的抗瘤效应。结果：在体外获得了稳定表达HER2/neu基因的P815细胞；免疫小鼠脾细胞中诱导出特异性CTL，并杀伤HER2/neu阳性的P815细胞；荷瘤小鼠的肿瘤生长受抑，存活期延长。结论：HER2/neu原癌基因DNA疫苗免疫可诱导特异性细胞免疫应答，并具有一定抗瘤效应。     

克隆化的人骨髓间充质干细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的:分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),建立克隆化扩增的细胞系并初步鉴定其分化特性和细胞的分子标记.方法:利用间充质干细胞贴壁生长的特性,显微镜下挑取原代单个成纤维样生长单位中的细胞,逐步扩大培养,最终得到克隆化扩增的hMSCs.选择有利于其生长的血清,低密度培养,传70%～80%生长汇合时传代保种.RT-PCR检测其Oct-4、SDF1、CD49a、CK19、c-met基因的表达;流式细胞术检测细胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD44、CD29、CD90、HLA-1和HLADR;体外向骨、软骨、脂肪细胞方向诱导分化鉴定其分化潜能.结果:建立了人骨髓间充质干细胞系并在体外实现了克隆化扩增,该细胞系在体外连续培养达60个细胞倍增时间仍保持多向分化的潜能.细胞不表达CD34、CD45、CD14、HLA-DR,但表达Oct-4、SDF-1、CD49a、CK19、c-met、CD44、CD29、CD90、HLA-1.体外能诱导出骨、软骨、脂肪细胞.结论:得到了一个可稳定传代的克隆化扩增的人骨髓间充质干细胞系,该细胞系在体外可以分化为骨、软骨、脂肪细胞,并表达Oct-4、CK19和c-met.     

辛伐他汀选择性抑制慢性髓性白血病细胞增殖并诱导凋亡

目的:探讨胆固醇合成限速酶3-羟3-甲基戊二酰辅酶A (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A , HMG-CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对慢性髓性白血病（chronic myelogenous leukemia , CML）细胞增殖和凋亡的影响。方法:正常骨髓和CML骨髓单个核细胞用10 mg*L－1辛伐他汀处理24 h后,接种于甲基纤维素培养体系中,分析粒单细胞集落刺激因子(colong forming unit-granulocyte macrophage, CFU-GM)集落形成能力。同时,用流式细胞仪测定辛伐他汀处理72 h后正常骨髓和CML骨髓单个核细胞中亚二倍体细胞以及DNA末端标记阳性细胞作为细胞凋亡的指标。结果:辛伐他汀可选择性抑制CML细胞增殖并诱导CML细胞凋亡,而对正常骨髓细胞无明显作用。结论:CML骨髓细胞较正常骨髓细胞对辛伐他汀敏感,表明该制剂作为CML化疗或体外净化进行自体骨髓移植具有潜在的应用价值。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及凋亡的研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经细胞诱导分化的潜能,及分化后的凋亡情况?方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基对第三代MSCs进行诱导分化,诱导分化的细胞按分化时间3?7?14 d分成A?B?C三组?三组诱导分化细胞分别进行NSE免疫组织化学,MAP2免疫荧光化学以及TUNEL凋亡细胞检测?结果:A?B?C三组细胞在细胞形态上与神经细胞相似,并且表达神经细胞特异性标记抗原NSE?MAP2,但是C组细胞表达强度弱于B组,并且阳性细胞比例少于B组(P < 0.05)?A?B?C三组TUNEL凋亡阳性细胞比例呈逐渐增多趋势(P < 0.05)?结论:含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,随着诱导时间的推移,分化细胞状态下降,凋亡比例增多?     

多途径联合诱导器官移植耐受和促进免疫功能重建

器官移植是治疗终末器官功能衰竭的主要方法,由于组织配型和高效免疫抑制剂的应用,急性排斥的发生率已大大降低,但目前慢性排斥仍无有效的控制方法,致使器官移植患者的长期(5～10年或更长)存活率明显偏低,而移植患者终身使用免疫抑制剂使感染、肿瘤的发病率增高,不但增加患者经济负担,而且严重影响患者的生活质量.通过诱导免疫耐受(移植耐受)的方法是解决移植排斥,避免上述问题的理想方法.     

尿多酸肽诱导慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药细胞生长抑制及分化的体外观察

目的观察尿多酸肽（CDA-2）在体外对慢性粒细胞性白血病（CML）伊马替尼（IM）耐药细胞株K562R生长抑制及诱导分化的作用。方法MTT和集落形成实验观察CDA-2对CML细胞株K562、IM耐药细胞株K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞生长抑制作用。吉姆萨染色观察细胞形态,膜联蛋白-V（Annexin-V）／碘化丙啶（PI）染色分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b、CD14的表达,反转录PCR（RT-PCR）检测细胞分化相关基因、细胞周期调节基因及DNA甲基化转移酶基因的表达。结果CDA-2均可抑制K562、K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞的生长,且对K562R细胞和IM耐药CML患者骨髓细胞的生长抑制更明显;CDA-2改变了K562和K562R细胞形态,诱导细胞向成熟分化,并引起细胞周期在G1期的停滞;这种停滞可能与CDA-2抑制DNA甲基转移酶活性,逆转细胞周期调节基因的甲基化状态有关。结论CDA-2在体外对K562R细胞株有很强的生长抑制和诱导分化的作用,提示CDA-2可能成为治疗IM耐药的CML患者的一种新药。     

灯盏花素改善肿瘤化疗药物对小鼠lewis肺癌的治疗指数

目的:观察灯盏花素对肿瘤化疗药物治疗效果的影响。方法:MTT法检测灯盏花素体外对阿霉素、环磷酰胺或氟脲嘧啶诱导脾脏细胞凋亡的保护作用;将lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠皮下和肺,采用灯盏花素联合阿霉素、环磷酰胺或氟脲嘧啶治疗小鼠,观察肿瘤大小、外周血细胞数、骨髓细胞数、脾细胞凋亡、及小鼠存活时间。结果:灯盏花素体外对阿霉素、环磷酰胺或氟脲嘧啶诱导的脾脏细胞凋亡有保护作用。在体研究,治疗组均有比未治疗组不同比例的肿瘤生长减慢,单独化疗导致骨髓细胞和外周血细胞数减少、脾细胞凋亡增加。实验结束时,与单一药物治疗相比,灯盏花素联合化疗均能显著延长小鼠存活时间。单独化疗虽比未治疗组小鼠存活时间稍长,但无统计学差异。结论:单独化疗对伴随肿瘤转移的荷瘤小鼠生命延长无实际意义,灯盏花素能改善肿瘤化疗药物的治疗指数。     

刺五加多糖对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的影响

本文用抗Thy-1.2单克隆抗体和补体在体外特异地去除C_(57)BL/6(H—2~b)小鼠骨髓中的T细胞,成功地对致死量照射的BALB/c(H—2~d)小鼠进行了异基因骨髓移植。移植后55天,异基因骨髓移植小鼠的免疫功能明显低于正常小鼠。在移植后45天,用每日100mg/kg剂量的刺五加多糖经腹腔连续给药10天,小鼠对胸腺不依赖抗原TNP-Ba的PFC反应以及对ConA和LPS增殖反应均较对照小鼠明显增加,但对胸腺依赖抗原SRBC的PFC反应以及BSA诱导的DTH反应无明显改善。