他克莫司对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响

目的探讨脊髓损伤后他克莫司（FK506）对热休克蛋白70表达的影响及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型。雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组（n=12）、损伤组（n=30）和FK506组（n=30）。FK506组伤后5min一次性经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg）,假手术组和损伤组以相同方法给予0．9％的生理盐水。术后行脊髓功能评分;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测热休克蛋白70mRNA的表达;免疫组织化学染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和热休克蛋白70的表达;原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡。结果热休克蛋白70mRNA和蛋白的表达在FK506组较损伤组明显增加（P〈0．05）,分别于伤后6、24h达高峰;FK506组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达和神经细胞凋亡均较损伤组明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;脊髓功能评分在FK506组显著优于损伤组（P〈0．05）。结论FK506能抑制脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活性,减轻神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复,其机制可能与诱导热休克蛋白70表达增加有关。     

脊髓损伤后细胞凋亡基因调控研究进展

脊髓损伤后神经细胞发生凋亡与基因调控密切相关,调控过程有多基因参与,包括半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)家族、血清凋亡相关蛋白Fas及其配体FasL系统、p53基因、细胞凋亡相关基因Bcl-2家族和即刻早基因等,其中caspase家族参与凋亡各个时期,是细胞凋亡途径的核心成分。该文就这些基因在脊髓损伤后神经细胞凋亡调控机制中的作用近期研究进展作一综述。     

波叶青牛胆醇提物通过Wnt/β-catenin对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:探讨波叶青牛胆醇提物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响机制.方法:实验分为对照组、高糖组、低、中、高剂量药物组、LiCl组、高剂量药物组+LiCl组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)、β...     

增生性瘢痕退行性变过程中的细胞凋亡和相关基因表达

增生性瘢痕发生的重要机制之一是成纤维细胞不能进入正常的程序性死亡,导致其异常增殖使细胞外基质过度沉积。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases)的活化形式过度表达可诱导细胞凋亡。本实验对增生性瘢痕退行性变的不同时期采用原位缺口末端标记(TUNEL)法作细胞凋亡检测,探讨细胞凋亡及caspase-3在该过程中的作用机制。     

Caspase-3和Caspase-8在婴幼儿血管瘤中的表达和意义

目的：探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）在各阶段婴幼儿血管瘤组织中的表达及其与婴幼儿血管瘤消退的关系。方法：采用Westernblot和RT-PCR方法检测Caspase-3和Caspase-8及mRNA在15例不同时期婴幼儿血管瘤组织中的表达。结果：Caspase-3和Caspase-8在各期均有表达,在增生早期和中期表达较弱,增生晚期表达最强,消退期表达减少,但仍有表达;Caspase-3mRNA和Caspase-8mRNA在各期均有表达,增生晚期表达显著,消退期表达减少。结论：Caspase-3和Caspase-8参与了婴幼儿血管瘤细胞的凋亡过程,它们的活化诱导了细胞凋亡的发生,可能在婴幼儿血管瘤自发消退的过程中发挥着作用。     

颅脑损伤后神经细胞凋亡的分子调控

<正> 凋亡是多细胞有机体在一定的生理或病理条件下遵循自身的程序,通过内源性DNA内切酶的激活,主动结束生命的过程。近些年来,对细胞凋亡机制的研究证明,细胞凋亡参与了颅脑损伤后继发性病理生理演变的全过程。颅脑损伤后神经细胞发生凋亡的最有力证据是关于其分子机制的研究。大量实验证实多种基因产物的主动表达与颅脑损伤后细胞凋亡之间存在密切关系。而caspase家族蛋白酶是神经细胞凋亡途径的核心成分,细胞凋亡的信号可触发由caspases参与的级联效应,导致靶细胞解体。 1 caspase家族 Caspase是eysteine-dependent aspartate-specific protease(半胱-天冬氨酸蛋白酶)的简称,是一类位点特异性蛋白水解酶。在对线虫C. elegans的基因分析显示,至少有3种基因直     

聚集素、p-糖蛋白、Caspase-3在原发性肝癌中的表达及其相关性

细胞凋亡抑制蛋白家族中的聚集素（Clu）在人类多种肿瘤中均有过度表达并参与肿瘤的发生、发展，是一个有潜在价值的肿瘤标志物。我们应用免疫组织化学法检测原发性肝细胞癌（HCC）中Clu、p-糖蛋白（p-gp）及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3的表达并探讨它们之间的相关性及临床意义。     

Xiap、Smac与消化系肿瘤的研究进展

消化系肿瘤在中国恶性肿瘤发病率的前5位中占了3位,包括胃癌、结直肠癌和肝癌,而恶性程度极高的胰腺、胆道系肿瘤的罹患率也逐年攀升。X连锁凋亡抑制蛋白(Xiap)是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的一员,是唯一能够同时抑制起始阶段和效应阶段的凋亡抑制蛋白,能够阻止细胞凋亡。第二种线粒体来源半胱氨酸蛋白酶激活剂(Smac)通过特异性结合并抑制IAPs对下游效应半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase的抑制,促进细胞凋亡。本文就Xiap、Smac与消化系肿瘤关系的研究进展做一综述。     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

细胞凋亡与软骨终板钙化的关系

软骨终板钙化是一自然退变过程,异常应力、营养通道障碍、炎性细胞因子和细胞凋亡等因素均可加速其钙化,其中细胞凋亡起着主要作用。近年研究证实,细胞凋亡过程实际上是半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)不可逆性有限水解底物的级联放大反应过程,软骨终板细胞主要经一氧化氮途径和Fas途径诱导细胞凋亡,导致软骨终板营养通道障碍、细胞外基质合成减少和细胞密度降低,并形成恶性循环,加重软骨终板钙化。导致软骨终板细胞凋亡的具体信号转导通路和相关基因,尚待进一步研究。该文就细胞凋亡与软骨终板钙化关系研究进展作一综述。     

喜树碱诱导人膀胱癌细胞RT4和MGH凋亡的实验研究

目的 研究DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用。方法 体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CFr处理，用FACScan流式细胞仪分析细胞凋亡的发生及变化，用Western blotting的方法检测了CFT处理不同时间段，bcl-2与bax表达的变化，以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物酶(PARP)的活性的改变。结果 CPT处理膀胱癌细胞24h后，细胞凋亡率明显上升，且CPT诱导的凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性。CFT诱导膀胱癌细胞RT4和MGH后均未见bcl-2和bax表达水平的改变，但是可以观察到凋亡执行蛋白Caspase-3和PARP的激活。结论 CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡，其抑制膀胱癌细胞的作用可能与肿瘤细胞发生凋亡有关。     

马兜铃酸诱导的人肾小管上皮细胞凋亡的可能机制

目的 探讨马兜铃酸(AA)诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)凋亡的可能机制.方法 (1)应用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测AA的细胞毒作用.(2)应用Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡指数(AI).(3)应用RT-PCR观察细胞p53 mRNA表达.(4)应用分光光度法检测细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性.结果 (1)80,160μg/ml浓度AA刺激细胞48h后,LDH释放率显著性增高(P＜0.01).(2)20、40μg/mL浓度AA刺激细胞48h后,可明显抑制细胞生长并诱导其凋亡.(3)AA诱导细胞凋亡时,p53 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).(4)AA诱导细胞凋亡时,Caspase-3酶活性显著升高(P＜0.01).结论 体外条件下,AA可明显抑制HK-2细胞生长并诱导其凋亡；AA诱导HK-2凋亡途径可能是非p53依赖途径；凋亡过程中存Caspase-3酶的激活.     

辛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖、凋亡及细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的 观察辛伐他汀(simvastatin)诱导大鼠系膜细胞增殖、凋亡及可能参与其中的凋亡信号通路，探讨他汀类药物非降脂依赖性肾保护作用的相关机制。方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定系膜细胞的增殖状况。透射电子显微镜、碘化丙啶染色(PI)流式细胞仪(FCM)分析检测系膜细胞的凋亡。活化半胱氨酸检测试剂盒定性及定量检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。结果 (1)MTT检测显示辛伐他汀可显著抑制大鼠系膜细胞的增殖(P < 0.05)。(2)辛伐他汀处理细胞24 h后，电镜下可见细胞体积缩小、染色质浓染、致密、边移和凋亡小体形成；FCM检测均可见亚二倍体凋亡峰。定量分析发现，系膜细胞数量与辛伐他汀浓度呈剂量依赖性(P < 0.05)。(3)活化半胱氨酸检测到辛伐他汀组细胞内caspase-3的表达，并且随药物浓度和作用时间的增加而增加。结论 辛伐他汀非降脂依赖的肾保护作用的作用机制之一是诱导系膜细胞凋亡，从而抑制其增殖，其机制可能与激活caspase-3有关。     

一氧化氮供体吗多明改善胆汁郁积和内毒素血症的生存率和减少肝细胞凋亡

梗阻性黄疸患者的并发症危机增加，尤其是脓毒症，术前的血清胆红素值与术后并发症和死亡率有关，术前经皮胆管引流也不能改变这一局面。胆汁郁积也是脓毒症的后果，可发展成肝功能衰竭，它与内毒素血症一起经半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶介导的径路激发肝细胞凋亡。有多种细胞外信息可激发细胞凋亡，一起     

血红素氧合酶-1减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤

目的诱导血红素氧合酶-1,提高老龄大鼠供肝的抗氧化能力,观察其能否减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤。方法　老龄SD大鼠为供者,成年SD大鼠为受者,随机分为实验组和对照组。实验组:供者供肝切取前24 h腹腔注射血晶素;对照组:供者供肝切取前24 h腹腔注射生理盐水。受者肝移植后3、6、12、24、48 h分别取移植肝组织,检测抗氧化酶、抗氧化剂、凋亡细胞和凋亡因子的表达情况。结果　实验组移植肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和维生素E、维生素C含量较对照组明显增加,丙氨酸转氨酶(ALT)则较对照组明显降低;另外,实验组较对照组凋亡细胞数量减少,BCL-2表达增加,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)表达降低。结论诱导血红素氧合酶-1可以减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关。     

成纤维细胞生长因子2对凋亡成纤维细胞中S100蛋白表达的影响

目的观察热损伤后成纤维细胞凋亡模型中,外用成纤维细胞生长因子2(FGF2)对凋亡细胞S100蛋白表达的影响。方法用含体积分数5％小牛血清的DMEM溶液培养已大致融合的成纤维细胞24 h,置入45℃恒温水浴锅中孵育10 min,建立热损伤细胞模型(热损伤组,3瓶),在上述基础上立即加入FGF2(FGF2组,10μg/L,3瓶)。两组细胞继续常规培养30 min后作免疫荧光双标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)以及S100蛋白、磷酸酪氨酸蛋白(P-tyr)、src基因产物蛋白同源的酪氨酸激酶催化功能区-2(SH2-P)表达的变化。结果热损伤组细胞可以同时表达caspase-3蛋白和PCNA两种抗体, 其灰度值分别为140±31、52±8;FGF2组细胞亦见上述两种抗体表达,灰度值分别为75±28、131± 17,PCNA表达量与热损伤组比较,差异有统计学意义(P<0．05)。同时,热损伤组成纤维细胞S100、 P-tyr蛋白、SH2-P蛋白表达阳性,FGF2组细胞S100蛋白和SH2-P的表达明显较弱(P<0．05)、P-tyr 的表达略有减弱。结论离体情况下,热损伤可诱导成纤维细胞凋亡信号的表达;S100蛋白在 FGF2对热损伤导致的凋亡成纤维细胞的增殖和抗凋亡作用中扮演重要角色。     

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶对人肺癌A549细胞的凋亡作用

目的　探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (Caspase) 3基因对人肺癌A5 49细胞的凋亡诱导作用。方法　构建Caspase 3的真核表达载体pEGFP Caspase 3 ,转染A549细胞株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )、免疫组织化学等方法检测转染后A549细胞中Caspase 3基因的表达。用荧光显微镜、电镜、四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色方法观察Caspase 3对A5 49细胞的抑制、凋亡作用。结果　Caspase 3基因在A5 49细胞中有表达 ;形态学观察证实转染后 48h的细胞株有细胞凋亡 ;转染Caspase 3后 2 4～ 48h细胞生长明显受到抑制。结论　重构型Caspase 3基因对人肺癌A5 49细胞有致凋亡作用。     

姜黄素对肝癌HepG2细胞和肝脏正常细胞L-02细胞的生长抑制作用及其机制

目的 观察姜黄素对肝癌HepG2细胞和肝脏正常L-02细胞的生长抑制作用,探讨其抗肿瘤的作用和机制.方法 贴壁法培养HepG2细胞和L-02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法分析姜黄素对细胞生长的抑制率,流式细胞仪(FACS)检测细胞周期及凋亡,免疫细胞化学及Western blot技术检测半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9、死亡受体5(DR5)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)和bax蛋白的表达.结果 姜黄素在100 mg/L浓度下,对HepG2细胞生长抑制率可达84％,凋亡率为25.89％,而诱导正常L-02细胞的凋亡率为10.10％,阻滞HepG2细胞周期于G1期,此过程中Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8被激活,DR5蛋白表达上升,bcl-2/bax蛋白表达比率下降.结论 姜黄素能够选择性杀伤HepG2细胞,并通过内源性和外源性两条通路促其凋亡.     

GM1对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的:观察神经节苷脂(ganglioside,GM1)对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法:中度脊髓损伤大鼠随机分为对照组及治疗组,在蛛网膜下腔注射生理盐水或神经节苷脂,采用原位末端标记检测凋亡细胞DNA(TUNEL)、流式细胞仪磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(AnnexinV/PI)双标检测凋亡细胞及荧光酶联测定法测定半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase3)的活性。结果:对照组及治疗组均发现凋亡细胞阳性表达,且均在3d达到高峰,但GM1治疗组阳性表达显著低于对照组(P<0.05)。结论:神经节苷脂有阻断神经细胞凋亡的作用,对损伤脊髓组织有明显保护作用。     

ADAM17-shRNA通过Akt/GSK3β信号通路促进HT29结肠癌细胞的凋亡

目的探讨沉默解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因的表达对HT29结肠癌细胞增殖和凋亡的抑制作用及其可能机制。方法将HT29结肠癌细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组,干扰组细胞转染重组慢病毒载体以沉默ADAM17基因的表达,阴性对照组细胞转染阴性对照重组慢病毒载体,空白对照组细胞加入等量的PBS溶液。采用实时荧光定量PCR法(real-time PCR)检测ADAM17 mRNA的表达,采用Western blot法检测ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase3)、磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(P-GSK3β)及糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白的表达,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力的变化,采用Annexin-V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与阴性对照组和空白对照组比较,干扰组细胞中ADAM17 mRNA及其蛋白的表达水平均较低,同时点(培养24、48及72 h)的吸光度值(A值)也较低,细胞凋亡率较高,caspase3蛋白的表达水平较高,P-Akt和P-GSK3β蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 ADAM17基因沉默可能通过抑制Akt/GSK3β通路的激活,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。