针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的] 研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法] 选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果] R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论] 三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

利用基因芯片研究针刺对快速老化小鼠海马基因表达的影响

[目的]利用基因芯片技术研究“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠(SAMP10)海马基因表达的影响。[方法]选取雄性8月龄快速老化小鼠(SAMP10)(分成针刺腧穴组,针刺非穴组,对照组)和同源正常老化小鼠(SAMR1),采用cDNAmicroarray技术,分析伴随快速老化SAMP10海马基因表达谱的变化以及针刺对其的影响。[结果]芯片结果显示,伴快速老化,P10海马共有7类10个基因的表达发生变化,8个基因表达下调,2个基因表达上调,施予“益气调血,扶本培元”针法后,所有与SAMP10快速老化相关基因的表达均被部分或全部的逆转,显示针刺具有特异性。[结论]“益气调血,扶本培元”针法能够良性调节脑老化相关基因的表达,并可能通过该种作用延缓脑衰老。     

针刺对快速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的影响

[目的] 探讨针刺对快速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的调节。[方法] 运用快速老化鼠SAMP8和正常老化鼠SAMR1作为实验对象,采用“三焦针法”（原“益气调血,扶本培元”针法）,应用荧光指示剂及荧光探针标记,观察针刺对小鼠皮层、海马线粒体钙离子浓度以及活性氧簇含量的影响。[结果] SAMP8对照组皮层、海马线粒体钙离子浓度和活性氧簇与正常对照组相比,表达上调;针刺组表达下调并趋向正常组;非穴组表达上调,与针刺组有显着差异。[结论] 针刺能明显抑制线粒体内钙离子的蓄积,减少氧自由基的产生。非穴位的针刺在一定程度上会对机体产生不良刺激,加速氧化损伤。     

不同针刺法对P15在SAMP8不同脑区星型胶质细胞表达的影响

[目的] 了解细胞周期相关因子细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P15)在老年性痴呆(AD)模型快速老化模型小白鼠(SAMP8)不同脑区星型胶质细胞中的表达规律及不同针刺组方(醒脑组和补虚组)对其表达的影响。[方法] 用免疫组化双标记法分别标记SAMP8脑组织星型胶质细胞(AS)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P15),用病理图像分析技术测定皮质、海马、纹状体、嗅球4个脑区中同时标记为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和P15阳性细胞数。[结果] 与正常组比较,AD模型组海马区同时表达GFAP和P15的阳性细胞数减少(P<0.05),其他3个脑区的表达差异无统计学意义。"醒脑组"可同时提高其在AD模型海马和嗅球中的表达,而"补髓组"只提高海马区的表达(P<0.05)。[结论] 8月龄SAMP8海马区表达P15的星形胶质细胞减少,可能是AD重要的病理机制;针刺可促进不同脑区星型胶质细胞P15的表达,并有针刺组方特异性。增加海马、嗅球区星形胶质细胞P15的表达,可能是"醒脑开窍"针刺法干预AD的潜在机制。     

“补肾活血”针法对快速老化模型小鼠SAMP8学习记忆能力及海马CA1区NEP表达的影响

目的研究"补肾活血"针法对快速老化模型小鼠SAMP8(Senescence Accelerated Mouse Prone 8,SAMP8)学习记忆能力及海马CA1区中性内肽酶(neprilysin,NEP)表达的影响。方法将6月龄雄性快速老化模型小鼠SAMP8 20只随机分为针刺组和SAMP8对照组,各组10只;另选取10只同龄雄性正常老化小鼠SAMR1(Senescence Accelerated Mouse/resistant 1)为正常对照组。针刺组针刺"百会"、双侧"血海"、"肾俞"以及"膈腧"4周。治疗结束后,采用Morris水迷宫测定"补肾活血"针法对小鼠学习记忆能力的影响,免疫组化方法检测小鼠海马CA1组织中NEP的表达情况。结果针刺组学习记忆能力明显较SAMP8对照组增强(潜伏期缩短、跨平台象限次数增加)(P<0.05);针刺组NEP相对表达量明显较SAMP8对照组增高(P<0.05)。结论"补肾活血"针法可能通过上调NEP表达,促进Aβ降解,改善Aβ相关的认知障碍来防治阿尔茨海默病,这可能是"补肾活血"针法防治阿尔茨海默病作用机制的一部分。     

华北地区CYP1A2基因常见SNP位点的分布

目的 建立CYP1A2基因-3860G >A、-3113G >A、-2467delT、-739T >G、-163C >A、2321G >C、5347C >T等7个SNP位点的检测方法,探讨7个SNP位点在华北地区人群中的分布。方法 选取健康受试者,提取全血样本DNA,以Primer Premier 5软件自设计引物及探针,采用扩增阻滞突变系统（ARMS）结合TaqMan探针技术（ARMS-TaqMan法）建立CYP1A2基因7个SNP位点基因分型方法。结果 -3860G >A、-3113G >A、-2467delT、-739T >G、-163C >A、2321G >C、5347C >T7个SNP位点的突变等位基因频率分别为0.292、0.078、0.524、0.078、0.657、0.148、0.127。结论 成功建立7个SNP位点的ARMS-TaqMan基因分型方法,该方法具有准确、操作简单、高通量等优势。     

交泰丸对利血平诱导小鼠抑郁模型的影响

[目的] 探讨交泰丸对利血平诱导小鼠抑郁模型的影响。[方法] 采用小鼠强迫游泳实验（FST）、小鼠悬尾实验（TST）和小鼠利血平拮抗实验,通过高效液相色谱（HPLC）测定小鼠海马和皮质组织中单胺类神经递质[去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）]含量的变化,探讨交泰丸的抗抑郁作用。[结果] 交泰丸组方各剂量组均能明显减少FST和TST的不动时间,并且均能拮抗利血平诱导的小鼠眼睑下垂和体温下降,而且可以逆转NE和5-HT的减少以及降低5-HIAA的含量。[结论] 交泰丸具有明显的抗抑郁作用,并且可以通过调节海马组织和皮质中NE和5-HT的含量而发挥抗抑郁作用。     

“三焦针法”治疗血管性痴呆的临床疗效研究

[目的] 观察"三焦针法"治疗血管性痴呆的临床疗效。[方法] 将符合条件的86例血管性痴呆患者随机分为观察组及对照组每组43例,在内科治疗的基础上,观察组采用"三焦针法"治疗,对照组采用传统针刺法治疗,分别于治疗前和治疗12周后,以简易精神状态检查表（MMSE）、日常生活自理能力量表（ADL）进行疗效评价,比较两组间的疗效差异。[结果] 1）入院前两组患者在性别、年龄、受教育情况、病程及类型等基线水平上无统计学差异（P>0.05）。2）各组患者治疗后与治疗前相比,MMSE评分均有所升高,观察组明显优于对照组（P<0.05）。3）各组患者治疗后与治疗前相比,ADL评分均有所改善（P<0.05）,但观察组患者与对照组相比ADL评分无显著性差异（P>0.05）。[结论] "三焦针法"治疗血管性痴呆具有肯定的临床疗效,能改善患者的认知功能及行为能力,且疗效优于传统针刺法。     

枸杞叶及枸杞多糖对星形胶质细胞α7nAChR的表达影响

【目的】 探讨不同剂量枸杞叶和枸杞多糖对5、7个月龄快速老化模型小鼠SAMP8脑海马星形胶质细胞及原代培养的SD大鼠脑海马星形胶质细胞α7nAChR表达的影响。 【方法】 实验一:选用 5、7 个月龄SAMP8,以同龄正常老化SAMR1 为正常对照。SAMP8随机分为给药组和对照组,给药组分为枸杞叶全汁高、低剂量组和枸杞多糖高、低剂量组。给药组灌胃服用高、低剂量枸杞叶全汁或枸杞多糖,每天1次,连续8周,对照组灌胃服用等量蒸馏水;免疫荧光双标染色检测SAMP8脑海马星形胶质细胞α7nAChR的表达。实验二:用含10%、20%枸杞叶及枸杞多糖脑脊液培养海马原代星形胶质细胞,于给药后培养24、36、48、72 h后收集细胞,采用MTS细胞活性检测,免疫荧光及蛋白质印迹法检测α7nAChR的表达。 【结果】 实验一:免疫荧光双标结果显示:(1)5、7 个月龄SAMR1较同月龄SAMP8脑海马区星形胶质细胞和α7nAChR阳性细胞表达均减少;(2)5个月龄SAMP8对照组较7个月龄SAMP8对照组脑海马区星形胶质细胞和α7nAChR阳性细胞表达均减少;(3)5、7个月龄SAMP8各给药组与同月龄SAMP8对照组比较,各给药组脑海马区星形胶质细胞和α7nAChR阳性细胞表达均减少;(4)同月龄高、低剂量组间无明显变化。实验二:(1)细胞活性结果显示:与空白脑脊液组比较,含10%、20%枸杞叶及枸杞多糖脑脊液培养海马原代星形胶质细胞36、48、72 h后,其细胞的活性均增加,但10%枸杞多糖脑脊液组有显著性差异;(2)蛋白质印迹结果显示:与空白脑脊液组比较,含10%、20%枸杞叶及枸杞多糖脑脊液培养海马原代星形胶质细胞36、48 h后,α7nAChR表达均增加,但10%枸杞多糖脑脊液组有显著性差异。 【结论】 不同剂量枸杞叶和枸杞多糖对5、7个月龄快速老化模型小鼠SAMP8及原代培养的SD大鼠脑海马星形胶质细胞α7nAChR表达均有影响。     

中药柴贝止痫汤对难治性癫痫大鼠多药耐药基因MDR1表达的研究

[目的]通过比较不同药物干预对多药耐药基因1(MDR1)的影响,观察难治性癫痫大鼠脑内MDR1mRNA的表达和分布,探讨难治性癫痫多药耐药可能的分子病理机制,及中药复方柴贝止痫汤对其表达的影响。[方法]以不同药物干预下,观察癫痫发作的平均持续时间、癫痫发作级别,以判定、分析药物的疗效。采用荧光实时定量聚合敏链反应(PCR)的方法,分析、比较多药耐药基因MDR1在各组大鼠海马和皮质部位的表达和分布。[结论]与正常组大鼠比较,各致痫组MDR1mRNA表达含量均有明显增高,具有统计学意义(P<0.05)。[结论]癫痫的反复发作可以诱导慢性难治性癫痫大鼠海马和皮质MDR1mRNA的表达,中药复方柴贝止痫汤具有一定抑制MDR1药物转运体功能。     

比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选

目的 筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法 根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果 经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论 引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。     

成纤维细胞生长因子19转录活性及上游结合元件分析

目的 构建FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒,并研究分析其启动子区的转录活性和结合元件。方法 设计特异性引物PCR扩增基因组DNA,得到长为3323bp的FGF19基因启动子区片段,将此PCR产物插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic Vector,获得全长为3323bp的FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒。在此基础上设计特异性引物,构建5''端系列缺失荧光素酶报告基因质粒。通过瞬时转染实验检测所构建质粒的相对荧光素酶活性,分析不同启动子区片段对FGF19基因转录活性的影响,并用软件预测影响启动子转录活性的关键转录因子。结果 构建了7个FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒,经双酶切和测序验证均正确。瞬时转染及荧光素酶报告基因分析实验发现启动子区-2351~-2316是调控FGF19启动子转录活性的重要序列,且在线软件预测该序列存在潜在的转录因子位点。结论 FGF19基因启动子区-2351~-2316是调控其启动子转录活性的关键位置。     

“三焦针法”改善慢性肾脏病患者失眠症的临床观察

[目的] 通过"三焦针法"对慢性肾脏病合并不寐患者辨证施治，探讨"三焦针法"治疗慢性肾脏病患者失眠症的临床疗效。[方法] 对天津市第一中心医院慢性肾脏病管理中心长期随访的89例慢性肾脏病3、4期未透析患者以匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评价睡眠质量。筛选出失眠症患者为研究对象，并随机选取30例患者实施"三焦针法"针灸治疗，其余患者作为对照组给予综合治疗。针灸治疗总疗程为3个月，继续随访至6个月。全部患者治疗前、3个月疗程结束、6个月随访结束后记录患者一般情况、实验室指标、PSQI评分、中医症状评分、SF-36生活质量评分以及评估的肾小球滤过率（eGFR），评价干预前后上述各项指标的变化。[结果] 全部患者中男性占60.7%，平均年龄52.5岁，平均eGFR 48.9 mL/（min·1.73 m²）。至6个月随访结束，针灸治疗组PSQI评分与基线评分比较下降值明显高于对照组。针灸治疗组各项中医症状评分改善情况优于对照组，失眠缓解率明显高于对照组。两组之间eGFR及SF-36评分变化无明显差异。[结论] "三焦针法"可以显著改善CKD3、4期未透析患者的失眠症，各项中医症状也得到相应改善。     

大花红景天尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因组DNA的克隆及分析

目的 克隆大花红景天Rhodiola crenulata尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因组DNA,并利用生物信息学对其编码区与启动子进行分析。方法 以大花红景天为样品,采用优化的CTAB法提取大花红景天基因组DNA,并利用hiTAIR-PCR技术经过3次步移获得大花红景天UDPGT（RcUDPGT）基因DNA序列,并利用生物信息学对其进行分析。结果 克隆得到RcUDPGT基因的DNA序列2 977 bp,其中包含1 499 bp的编码区域（包括82 bp的内含子序列）和1 500 bp的编码区5’上游侧翼域序列（包括启动子区域）。生物信息学分析证明该序列为UDPGT基因且与其他植物UDPGT同源,具有亲水性且定位于细胞质中,三级结构预测表明该基因编码的蛋白具有UDPGT功能结合位点。启动子分析表明其存在光响应、厌氧响应、热响应、低温响应、压力与防御响应和花色素苷合成响应元件等。结论 克隆的RcUDPGT基因结构完整,具有典型的功能结合位点,为红景天分子生物学与代谢工程研究提供参考。     

姜黄素对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区细胞凋亡干预的研究

目的 探讨姜黄素对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区细胞凋亡的影响。方法 将45只SD雄性大鼠分为3组,既假手术组（NS组）、Aβ模型组（AB组）和姜黄素干预组（CU组）。AB组和CU组直接注射Aβ_1-42于大鼠海马CA1区;CU组用姜黄素给予大鼠连续灌胃30天。采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,采用TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡。结果 姜黄素可以缩短AD模型大鼠水迷宫测试的潜伏时间,改善大鼠学习记忆能力。Aβ模型组海马组织细胞出现明显的细胞凋亡,姜黄素干预组海马TUNEL阳性神经细胞数目（24.63±3.28个）比Aβ模型组（45.92±2.71个）明显减少（P<0.01）。结论 姜黄素可明显改善Aβ所致AD大鼠学习记忆功能,姜黄素可显著改善大鼠海马CA1区Aβ诱导的细胞凋亡。     

三焦针法对阿尔茨海默病免疫功能影响的研究

[目的]观察三焦针法对阿尔茨海默病（AD）的临床疗效及对患者免疫功能的影响。[方法]收集AD患者32例和健康老年人30例。AD组给予三焦针法,取穴膻中、中脘、气海、血海、足三里和外关,健康组不给予任何干预。利用简易精神状态检查表（MMSE）、临床痴呆量表（CDR）、老年性痴呆评估量表-认知分量表（ADAS-cog）和日常生活活动量表（ADL）评价AD患者针刺前后的认知功能、非认知功能和日常生活能力。应用流式细胞术和酶联免疫吸附法（ELISA法）检测外周血CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺T细胞数量、CD4⁺/CD8+比例、免疫球蛋白（IgG）、白介素（IL）-1β、IL-2、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）的水平。[结果]针刺后AD组MMSE评分升高,CDR、ADAS-cog、ADL评分降低（P<0.05）。与健康组比较,AD组CD3⁺、CD8⁺T细胞数量减少,CD4⁺T细胞数量增加（P<0.05）,针刺后CD3⁺T细胞数量增加（P<0.05）。与健康组比较,AD组IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ水平增加（P<0.05）,IgG未见明显改变（P>0.05）,针刺后以上细胞因子水平降低（P<0.05）。[结论]三焦针法可能通过调节AD患者的免疫功能而改善其痴呆状态。     

小鼠Agouti基因变异及生物信息学分析

目的 分析候选基因Agouti的多态性，揭示染色体工程小鼠毛色差异的分子机制.方法 首先，用测色仪检测小鼠的毛色差异.其次，利用DNA芯片进行全基因组扫描确定候选基因Agouti.最后，运用生物信息学软件分析Agouti基因cDNA序列和氨基酸序列的多态性，预测突变对蛋白结构和功能产生的影响.结果 发现Agouti基因cDNA序列上存在5个SNPs，使Agouti信号蛋白产生了3个错义突变.生物信息学分析发现，其中一个错义突变使该蛋白丢失了一个β折叠，并且其三级结构发生改变，最终导致与受体结合的能力相较于野生型有所下降.结论 在毛色基因Agouti的编码区发现了一个新的错义突变，该突变使Agouti信号蛋白与受体结合能力下降，最终导致小鼠的毛色由浅灰色变为深灰色.     

刺五加鲨烯合酶和鲨烯环氧酶基因单核苷酸多态性及其与总皂苷量的相关性研究

目的 筛选刺五加鲨烯合酶（SS）和鲨烯环氧酶（SE）基因存在的单核苷酸多态性（SNP）位点,分析各SNP位点与刺五加总皂苷量的相关性。方法 采用分光光度法测定刺五加总皂苷的量,并划分为具有显著差异（P＜0.01）的高、低量组;RT-PCR法扩增刺五加SS、SE基因,根据测序结果筛选SNP位点,利用R×C表的χ²检验分析相关关系。结果 刺五加SS基因存在6处SNP,其中704 bp位点为错义突变,其他位点为同义突变,各位点均不与刺五加总皂苷量显著相关。SE基因存在9处SNP,其中导致错义突变的164、199、227、232 bp位点及同义突变的279、285 bp位点与刺五加总皂苷量显著相关（P＜0.05）,其他位点为同义突变,与刺五加总皂苷量间无显著相关性。结论 刺五加SS和SE基因存在SNP,SE基因164～285 bp位点的AGAACG与刺五加总皂苷高量组显著相关,TAGTTC与低量组显著相关。     

半夏凝集素基因的克隆与氨基酸序列初步分析

目的 克隆半夏凝集素基因并对其氨基酸序列生物信息与已报道相关基因进行对比分析,为抗虫基因利用和转基因育种研究奠定基础。方法 根据已报道的植物凝集素基因序列设计特异引物,以半夏叶片DNA为模板进行PCR扩增,获得特异性片段,将其连接到测序载体上,进行序列测定,用分析软件分析序列信息。结果 克隆1 069 bp的半夏凝集素基因(pta),开放阅读框全长804 bp,编码268个氨基酸残基;预测相对分子质量和等电点分别为2.91×10⁴和7.77,功能区完整,具有1条信号肽和3个甘露糖结合区;已在GenBank中登记（登录号AY725425）。结论 克隆的半夏凝集素基因序列信息完整,具有典型的甘露糖结合位点,可以作为抗虫基因用于抗虫育种。     

丹参酮ⅡA对TNF-α损伤平滑肌细胞MCP-1、IL-1β表达的影响

[目的]探讨丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。[方法]培养大鼠主动脉平滑肌细胞,复制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)损伤模型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、放射性免疫方法检测MCP-1、IL-1β的表达,并观察丹参酮ⅡA的作用。[结果]丹参酮ⅡA能够抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞MCP-1、IL-1β的过度表达。[结论]抑制动脉粥样硬化过程中MCP-1、IL-1β的表达可能是丹参酮ⅡA的作用机制之一。