亚砷酸钠对人永生化皮肤角质形成细胞组蛋白H3K9me2及组蛋白去甲基化酶JHDM2A和JHDM2B表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)组蛋白H3K9me2及组蛋白去甲基化酶JHDM2A、JHDM2B表达的影响。方法将对数生长期HaCaT细胞暴露于含终浓度分别为0.00 (对照)、2.50、5.00、10.00μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基染毒24 h。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中的JHDM2A、JHDM2B mRNA表达水平,采用免疫印迹法检测H3K9me2修饰水平和JHDM2A、JHDM2B蛋白表达水平。结果与对照组比较,5.00、10.00μmol/L亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞H3K9me2蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05),且亚砷酸钠剂量与H3K9me2蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.898)。各亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞中JHDM2A和JHDM2B mRNA和蛋白的表达水平与对照组比较无明显变化,差异均无统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可以诱导组蛋白H3K9me2表达降低,但不能改变组蛋白去甲基化酶JHDM2A和JHDM2A的表达水平,JHDM2A、JHDM2B可能不参与砷致HaCaT细胞组蛋白H3K9me2的去甲基化作用。     

UVB诱导A375细胞自噬与凋亡调控机制探讨

目的探究中波紫外线(UVB)对人表皮黑色素瘤细胞株A375细胞自噬与凋亡的诱导效应。方法 (1)取对数生长期A375细胞,分别予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射,于照射后3、6、9、12 h收集细胞,用单丹磺酰戊二胺染色法观察细胞自噬,用吖啶橙/溴乙锭染色法观察细胞凋亡。(2)予相应剂量的UVB照射10.0、15.0 m J/cm~2组A375细胞,于照射后18、24、36、48 h收集细胞,以CCK-8法检测细胞存活率。(3)予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后3、6、9、12 h收集细胞;予剂量为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后9 h收集细胞;用免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相互作用蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达。上述3个实验均另设不予UVB照射(予假照射)的对照组。结果 (1)剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射诱导的A375细胞自噬和细胞凋亡均表现为随着照射后时间的延长而增强,但在15.0 m J/cm~2UVB照射后12 h,细胞自噬已观察到降低。(2)10.0、15.0 m J/cm~2组细胞活力均随照射后时间的推移而增加(P0.05);在照射后18~48 h,10.0和15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于对照组(P0.05);在照射后24~48 h,15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于10.0 m J/cm~2组(P0.05)。(3)10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平在照射后0~12 h内均随照射时间的增加而增加(P0.05),而15.0 m J/cm~2组细胞仅在照射后0~9 h内观察到上述改变,在12 h时间点上述2个自噬相关蛋白明显下降(P0.05);10.0和15.0 m J/cm~2组细胞Bcl-2蛋白相对表达水平在照射后3~12 h内均随照射时间的增加而下降(P0.05),Bax蛋白相对表达水平均在照射后0~12 h内随照射时间的增加而增加(P0.05)。0.0~10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平,0.0~15.0 m J/cm~2组细胞Bax蛋白相对表达水平,均随照射剂量的增加而增加(P0.05);5.0~15.0 m J/cm~2组Bcl-2蛋白相对表达水平随照射剂量的增加而下降(P0.05)。结论剂量为10.0和15.0 m J/cm~2UVB照射均可诱导A375细胞发生自噬和凋亡;10.0 m J/cm~2UVB照射诱导的细胞自噬可部分抵抗UVB对凋亡的诱导而使细胞活力增强,15.0 m J/cm~2UVB诱导的自噬不足以发挥上述作用,且以诱导凋亡为主导效应。     

UVB:辐射对人角质形成细胞HaCaT的DNA损伤及其机制

目的研究不同剂量UVB辐射对人角质形成细胞HaCaT DNA损伤的影响及机制。方法采用紫外辐照装置照射人角质形成细胞Ha Ca T建立急性紫外辐射细胞模型;MTT法检测不同剂量紫外辐射对细胞存活的影响;免疫荧光和流式细胞术分别检测细胞核内磷酸化γH2AX焦点形成及蛋白表达水平;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测不同剂量不同时间照射后早期细胞凋亡百分数;免疫印迹法分别检测Caspase-3活化水平。结果 UVB辐射可抑制HaCaT细胞的存活,有一定的量效关系;相对较大剂量的UVB辐射可观察到明显的焦点形成;UVB照射后各剂量点磷酸化γH2AX的表达均明显高于未照射的对照组;UVB辐射可通过Caspase-3活化诱导细胞发生早期凋亡,照射后20 h,早期凋亡细胞百分数明显增加,特别是在UVB相对较大剂量范围内更明显,并有随照射剂量增高而增加的趋势。结论 UVB辐射可通过诱导DNA双链断裂抑制人HaCaT细胞存活,并通过激活Caspase-3而诱导细胞凋亡,细胞凋亡延迟,可能导致细胞更易于发生突变进而形成皮肤肿瘤。     

姜黄素对中波紫外线损伤HaCaT细胞保护作用

目的 通过姜黄素(Cur)影响中波紫外线(UVB)辐射HaCaT细胞线粒体膜电位(△ψ)及其相关因子,探讨其对UVB损伤细胞的保护作用及其机制.方法 HaCaT细胞经UVB辐射后,加入不同剂量姜黄素继续培养,通过罗丹明123和Fluo-3/AM荧光强度检测细胞△ψ电位和细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),以流式细胞术检测caspase-3和细胞色素c(Cyt C)凋亡相关蛋白的表达.结果 UVB辐射HaCaT细胞后,低线粒体膜电位的细胞数为(80.8±2.23)%,[Ca2+]i为(71.9±1.61)%,caspase-3和Cyt c蛋白表达量分别为(29.00±1.60)%和(27.5±1.60)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);加入姜黄素后与UVB组比较,细胞线粒体膜电位、[Ca2+]i及Cyt c和caspase-3蛋白表达均呈剂量-效应关系,即随着药物浓度的增加,具有低细胞线粒体膜电位的细胞数、Cyt c和caspase-3蛋白表达均显著减少,[Ca2+]i显著降低.结论 姜黄素可能通过提高细胞线粒体膜电位,降低[Ca2+]i含量,减弱Cyt c和caspase-3的级联反应,达到其抑制UVB辐射引起的HaCaT细胞凋亡,具有对UVB损伤HaCaT细胞的保护作用.     

扇贝多肽对紫外线A诱导HaCaT细胞Fas、c-fos表达的影响

目的观察扇贝多肽(PCF)对紫外线A(UVA)照射后HaCaT角质形成细胞Fas、c-fos表达的影响,以探讨PCF保护UVA致HaCaT细胞损伤的分子机制。方法体外培养的HaCaT角质形成细胞分为5组:对照组、UVA模型组、5.69mmol/LPCF组、2.84mmol/LPCF组、1.42mmol/LPCF组。蛋白质印迹法检测Fas、c-fos蛋白表达;RT-PCR检测FasmRNA表达;荧光定量PCR检测c-fosmRNA表达。结果 UVA照射后模型组Fas、c-fos表达均显著增加(P0.01),1.42～5.69mmol/L剂量范围内的PCF可抑制UVA引起的HaCaT细胞Fas、c-fosmRNA及蛋白表达(P0.05),且有剂量依赖性。结论 PCF可通过抑制Fas、c-fos表达而抑制UVA诱导的HaCaT细胞损伤。     

UVB照射角质形成细胞对DNA甲基转移酶1表达的影响

目的观察中波紫外线(UVB)照射下的角质形成细胞(Ha Ca T细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达情况。方法体外培养人永生化Ha Ca T细胞,分别用0 m J/cm2、10 m J/cm2、20 m J/cm2、40 m J/cm2 UVB照射,24 h后收集细胞采用Western blot方法测定细胞中DNMT1的蛋白水平。结果 UVB照射的Ha Ca T细胞内的DNMT1蛋白表达水平明显高于未照射细胞(P<0.05)。结论 UVB照射Ha Ca T细胞会导致DMNT1表达增加,在皮肤光老化可能起重要作用。     

白藜芦醇抑制海马β-APP表达改善大鼠学习记忆

目的探讨白藜芦醇(resvertrol,Res)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆及β-淀粉样前体蛋白(β-APP)表达的影响。方法采用去卵巢合并D-半乳糖(100 mg/kg)注射制备AD大鼠模型,60只雌性Wistar大鼠随机分为模型组、白藜芦醇低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg)、戊酸雌二醇组(0.8 mg/kg)及假手术组(蒸馏水),连续灌胃12周,利用Morris水迷宫检测大鼠空间记忆能力;Western blot检测大鼠海马中β-APP表达。结果随着训练天数增加,各组大鼠逃避潜伏期逐渐缩短,与模型组比较,白藜芦醇80 mg/kg组、戊酸雌二醇组大鼠逃避潜伏期[分别为(16.49±4.18)、(17.05±2.71)s]明显缩短,穿越平台次数[分别为(3.90±0.97)、(3.44±0.63)次]明显增加(P<0.05),白藜芦醇各组大鼠在目标象限内停留时间延长(P<0.05);白藜芦醇20、40、80 mg/kg组大鼠海马β-APP蛋白表达水平[分别为(0.57±0.054)、(2.63±0.50)、(0.28±0.043)]较模型组(0.27±0.057)明显下降(P<0.05)。结论白藜芦醇可以改善AD大鼠的空间记忆能力,其机制可能与抑制海马β-APP的表达有关。     

SET蛋白对精母细胞株(GC-2 spd)增殖和组蛋白乙酰化的影响

目的:观察SET蛋白对GC-2 spd精母细胞株增殖和组蛋白乙酰化的影响,探讨SET蛋白调节精子形成的作用。方法:体外培养GC-2 spd细胞,通过精母细胞标志物乳酸脱氢酶C(LDHC)和睾丸特异激酶1(TESK1)鉴定。琼脂糖珠免疫共沉淀试剂盒检测SET蛋白与组蛋白H4的结合。分别转染空载腺病毒(Ad H1-si RNA/NS,对照组)和SET干涉腺病毒(Ad H1-si RNA/SET,干涉组),比较细胞增殖情况,荧光显微镜观察GC-2spd细胞中SET蛋白的表达;用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测m RNA以及蛋白的表达。结果:免疫荧光显示精母细胞株GC-2 spd阳性表达LDHC和TESK1;SET蛋白表达于GC-2细胞的胞核和胞质中,免疫共沉淀提示SET蛋白与组蛋白H4结合。转染SET干涉腺病毒后,核内和胞质中SET蛋白表达明显降低(P0.01)。与对照组相比,干涉组细胞增殖明显降低,组蛋白H4乙酰化水平明显增高(P0.05);但组蛋白乙酰化酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)m RNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:精母细胞核内和胞浆中均表达SET蛋白;SET蛋白降调,则抑制GC-2spd细胞增殖。SET蛋白可能通过与组蛋白H4相互作用调节其乙酰化,参与调节精子形成。     

纳米二氧化硅致人永生化表皮细胞膜蛋白质组的影响

目的采用蛋白质组学技术探讨15 nm二氧化硅致体外培养的人永生化表皮细胞(HaCaT)膜蛋白质表达的变化。方法分别以2.5、5.0和10.0 mg/L的15nm二氧化硅溶液处理HaCaT细胞24 h,以dd H2O为溶剂对照。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况。运用亚细胞蛋白质组提取试剂盒对10.0 mg/L的15 nm二氧化硅溶液处理24 h的HaCaT细胞和正常对照组细胞进行膜蛋白提取,采用差异荧光双向凝胶电泳(2D-DIGE)分析和基质辅助激光解析飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱鉴定。对差异蛋白质进行GO(gene oncology)功能聚类及跨膜结构域预测分析,采用Western blot免疫印迹验证差异蛋白的表达。结果细胞增殖实验显示,15 nm二氧化硅可以引起HaCaT细胞整体增殖水平下降,呈剂量依赖关系;与正常细胞相比,HaCaT细胞经15 nm二氧化硅以2.5、5.0和10.0 mg/L处理24 h后,活力水平分别为(91.3%±6.1%)、(81.7%±7.0%)和(74.0%±2.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。质谱鉴定了10个差异表达蛋白,其中7个差异蛋白具有1个以上的跨膜结构域,GO功能聚类表明这些差异蛋白主要涉及结合活性和结构分子活性。Western blot免疫印迹结果表明G蛋白偶联受体179和L-肌动蛋白表达变化趋势与蛋白质组学分析结果一致。结论 15 nm二氧化硅能够引起HaCaT细胞增殖水平降低,并且导致膜蛋白表达水平的下降。     

p53对低剂量UVB诱导的MEF细胞辐射损伤中miR-365表达的影响

目的探讨低剂量中波紫外线UVB造成MEF损伤过程中,p53对MEF细胞miR-365表达的影响。方法以MEF细胞为研究对象,分为野生型小鼠胚胎成纤维细胞组(MEFP53+/+组),p53缺失的小鼠胚胎成纤维细胞组(MEFP53-/-组),CCK-8法检测低剂量UVB(30 J/m2)照射后3、6、12、18、24 h细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期G2/M期比例变化,蛋白质印迹法检测两种细胞p53蛋白表达量,实时荧光定量PCR检测miR-365的表达。结果 UVB照射后两组细胞存活率存下降;而两组细胞在12、18、24、36 h的存活率相比差异有统计学意义(t值分别为2.4、3.1、3.2、2.8,P值均0.05);MEFP53+/+细胞在照射后6、12、18、24 h的G2/M期细胞比例上升,与0 h组相比差异均有统计学意义(t值分别为2.1、2.3、2.5、2.8,P值均0.05);p53在MEFP53-/-细胞中几乎不表达;UVB照射后,MEFP53-/-细胞中miR-365的mRNA在6、12、18、24、36 h显著下降(t值分别为2.0、3.2、3.3、2.9、2.8, P值均0.05),而MEFP53+/+细胞中只有18 h显著下降(t=4.2,P0.05)。12、18、24、36 h四个时间点,两组细胞之间miR-365差异有统计学意义(t值分别为2.2、2.6、2.4、2.3,P值均0.05)。结论 p53可能通过调控miR-365参与低剂量UVB引起的MEF细胞G2/M期阻滞。     

紫外线诱导HaCaT细胞IL10 mRNA及蛋白表达

目的探讨紫外线致机体免疫抑制的作用机制。方法体外培养人角质形成细胞系（HaCaT）,以0.6,1.2,1.8,2.4,3.0,3.6 J/cm^2长波紫外线（UVA）照射,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力。以2.4 J/cm^2UVA照射HaCaT细胞,于0,2,4,12,24,48 h收集细胞及培养掖,分别采用RT-PCR和双抗夹心ELISA方法,检测白细胞介素10（IL10）mRNA及其蛋白表达。结果3.0,3.6 J/cm^2UVA照射使体外培养的HaCaT细胞活力明显降低（P〈0.05）;0.6～2.4 J/cm^2UVA照射对细胞活力无明显影响（P〉0.05）。HaCaT细胞经2.4J/cm^2UVA照射后12h,IL19 mRNA呈弱表达;照射后24h,培养液中IL10蛋白水平为（17.45±0.65）pg/ml;照射组其他各检测时点及对照组细胞未见IL10 mRNA及蛋白表达。结论正常情况下HaCaT细胞并不表达IL10,UVA照射可诱导其表达。     

tBHQ对无机砷致人皮肤角质细胞损伤保护作用

目的探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致人皮肤角质细胞系HaCaT细胞损伤的保护作用。方法用Alamar Blue还原法检测细胞活力,用荧光探针2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成,用硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)的生成。结果NaAsO2(25、50μmol/L)单独处理后,各组细胞活力明显下降(P<0.01),分别为82%和59%;细胞经tBHQ(25、50μmol/L)预处理后,tBHQ 25μmol/L组细胞活力分别恢复至(101.44±1.63)%和(92.06±9.95)%,tBHQ 50μmol/L组细胞活力分别恢复至(98.88±2.03)%和(91.12±7.87)%;NaAsO2(25、50μmol/L)单独处理后,各组细胞内ROS水平明显上升(P<0.01),分别为对照组的1.64和3.86倍;细胞经tBHQ(25、50μmol/L)预处理后,tBHQ 25μmol/L组ROS水平分别下降为对照组的0.95和1.87倍,tBHQ 50μmol/L组ROS水平分别下降为对照组的0.79和1.69倍;NaAsO2(25、50μmol/L)单独处理后,细胞内MDA含量明显上升(P<0.01),分别为2.28、2.96 nmol/(mgμprot);细胞经tBHQ(25、50μmol/L)预处理后,tBHQ 25μmol/L组MDA含量分别下降为2.05、2.43 nmol/(mgμprot),tBHQ 50μmol/L组MDA含量分别下降为2.10、2.60 nmol/(mg.prot)。结论 tBHQ对无机砷致人皮肤角质细胞损伤具有保护作用,且具有一定的剂量-反应关系。     

Perilla frutescens Extracts Enhance DNA Repair Response in UVB Damaged HaCaT Cells

Physiological processes in skin are associated with exposure to UV light and are essential for skin maintenance and regeneration. Here, we investigated whether the leaf and callus extracts of Perilla frutescens (Perilla), a well-known Asian herb, affect DNA damage response and repair in skin and keratinocytes exposed to Untraviolet B (UVB) light. First, we examined the protective effects of Perilla leaf extracts in UVB damaged mouse skin in vivo. Second, we cultured calluses using plant tissue culture technology, from Perilla leaf explant and then examined the effects of the leaf and callus extracts of Perilla on UVB exposed keratinocytes. HaCaT cells treated with leaf and callus Perilla extracts exhibited antioxidant activities, smaller DNA fragment tails, and enhanced colony formation after UVB exposure. Interestingly, keratinocytes treated with the leaf and callus extracts of Perilla showed G1/S cell cycle arrest, reduced protein levels of cyclin D1, Cyclin Dependent Kinase 6 (CDK6), and γH₂AX, and enhanced levels of phosphorylated checkpoint kinase 1 (pCHK1) following UVB exposure. These observations suggest that the leaf and callus extracts of Perilla are candidate nutraceuticals for the prevention of keratinocyte aging.     

HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的观察热休克转录因子1(HSF1)与热休克蛋白70(HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立8mJ/cm2UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型。将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50μmol/L槲皮素)。Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡;蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达;Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达。结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于1h开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平;UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高。结论 8mJ/cm2UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加。HSF1/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关。     

亚砷酸钠对HaCaT细胞的氧化应激作用

目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤永生化角质形成细胞株(HaCaT)的氧化应激作用。方法用AlamarBlue还原法检测NaAsO2对细胞活力的影响,用PI染色法检测细胞的凋亡和坏死率,利用2′7′二乙酰二氯荧光素(DCFHDA)检测细胞内ROS水平,同时用荧光法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量。结果0001μmolL至1μmolL组的AlamarBlue还原率显著高于对照组,而10μmolL以上组的AlamarBlue还原率下降,20μmolL组的凋亡和坏死率显著高于对照组,各实验组的DCF荧光强度与对照组相比明显提高,1μmolL以上组细胞内GSH水平增高,5μmolL组GSSG水平增高。结论各浓度砷引起HaCaT细胞内ROS增多,低浓度时促进细胞增殖,高浓度则抑制细胞活力,砷诱导HaCaT细胞内的GSH增多,发挥解毒作用。     

亚砷酸钠对HaCaT细胞增殖周期及ROS生成影响

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖、细胞周期及活性氧(ROS)生成影响。方法以0、25、50μmol/L NaAsO2作用于HaCaT细胞6 h后,以Alamar Blue还原法检测细胞增殖水平;以流式细胞仪检测细胞周期及ROS水平。结果 25、50μmol/L NaAsO2组细胞增殖水平分别为(93.5±1.18)%、(82.9±2.64)%,明显低于对照组(100±0.51)%(P<0.05);G2/M期细胞数分别为(19.15±0.29)%、(18.12±1.35)%,明显高于对照组(15.24±0.04)%(P<0.05);ROS水平分别为(128.61±6.23)%、(152.92±7.25)%,明显高于对照组(100.00±3.45)%(P<0.05)。结论 NaAsO2作用可引起HaCaT细胞ROS含量增高,同时G2/M期细胞数增多,但G2/M期细胞比例增高并不是由细胞增殖作用所引起。     

短期暴露于纳米SiO_2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响

目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10μg/ml组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用高效毛细管电泳(HPCE)定量分析纳米SiO2处理细胞24h后,基因组DNA总体甲基化的变化,用Q-PCR和Western Blot方法检测甲基化相关蛋白mRNA和蛋白的表达变化,并用DNA甲基化转移酶活性试剂盒检测DNA甲基化转移酶的活性。结果 HPCE定量分析结果显示纳米SiO2可引起HaCaT细胞总体甲基化程度降低,呈剂量依赖性关系;与正常细胞相比,微米SiO2以及2.5、5和10μg/ml纳米SiO2组分别降低37.8%、43.9%、54.9%和52.8%,差异有显著性(P<0.05);对照组5-aza-dC处理后使HaCaT细胞甲基化程度减少27.3%。各组酶的蛋白表达与mRNA表达水平及DNMTs活性变化具有相同的变化趋势,经纳米SiO2处理的HaCaT细胞,DNMT1、DNMT3a及MBD2表达随着纳米SiO2剂量的上升而下降,DAC组表达水平最低。结论纳米SiO2能引起HaCaT细胞整体基因组DNA甲基化水平降低,可能与DNA甲基化转移酶的酶活性降低有关。     

不同粒径二氧化硅致人永生化表皮细胞氧化应激相关蛋白表达水平改变

目的探讨不同粒径二氧化硅(SiO2)染毒致人永生化表皮细胞(HaCaT)氧化应激相关的抗氧化酶:含铜与锌超氧化物歧化酶(SOD-1)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶(GSR)蛋白表达水平的变化。方法不同质量浓度(5.0、10.0、15.0 mg/L)的15 nm和>100 nm的SiO2作用于HaCaT细胞24 h后,采用蛋白印迹法(Western blotting)观察各组细胞内SOD-1、CAT和GSR蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,不同粒径SiO2处理HaCaT后,细胞内SOD-1、CAT和GSR蛋白表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。对于15 nm组,SOD-1、CAT和GSR的蛋白表达水平随SiO2水平的增加呈现下降趋势;对于>100 nm组,3个蛋白的表达水平随SiO2水平的增加而上调。结论不同粒径SiO2的处理下,细胞内SOD-1、CAT和GSR等氧化应激相关抗氧化酶蛋白表达水平呈现明显的变化,提示SiO2诱导的生物学效应与粒径有关。     

Characterization of chikungunya virus infection of a human keratinocyte cell line: Role of mosquito salivary gland protein in suppressing the host immune response

The chikungunya virus (CHIKV) is a mosquito-borne virus that has recently re-emerged in several countries. On infection, the first vertebrate cells to come into contact with CHIKV are skin cells; mosquitoes inoculate the virus together with salivary gland protein into host skin while probing and feeding on blood. However, there is little known about the susceptibility of human skin cells to CHIKV infection. To clarify this, we investigated the kinetics of CHIKV in the human keratinocyte cell line, HaCaT. CHIKV actively replicated in HaCaT cells, with virus titers in the supernatant increasing to 2.8 × 10⁴ plaque-forming units (PFU) ml⁻¹ 24 h post infection. CHIKV infection suppressed production of interleukin-8 (IL-8) in HaCaT cells. The function of IL-8 is to recruit immune cells to virus-infected sites, a process known as chemotaxis. Furthermore, we assessed the role of mosquito salivary gland protein in CHIKV infections by comparing the levels of CHIKV gene expression and chemokine production in HaCaT cells with and without salivary gland extract (SGE). SGE enhanced both the expression of the CHIKV gene and the suppression effect of CHIKV on IL-8 production. Our data suggest that the HaCaT cell line represents an effective tool for investigating the mechanism of CHIKV transmission and spread in skin cells. At the mosquito bite site, CHIKV works together with SGE to ensure the virus replicates in skin cells and escapes the host immune system by suppression of IL-8 production.