小麦面筋蛋白短肽的镇痛作用研究

采用小鼠热板法和小鼠醋酸扭体法对由不同蛋白酶(碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶)水解制备的小麦面筋蛋白短肽的镇痛活性进行了测定。结果表明,由碱性蛋白酶、胃酶、胃酶和胰酶复合水解制备的3种面筋蛋白短肽(AWGH、PWGH和PPWGH)具有较好的镇痛作用。在小鼠热板法实验中,其痛阈提高百分率分别为(77.78±13.82)%、(81.22±9.69)%和(79.78±22.77)%;在小鼠醋酸扭体实验中,其扭体抑制率分别为(38.25±2.98)%(、57.82±3.04)%和(52.43±3.87)%。     

男性年龄与精子质量和精浆生化的关系

目的探讨不同年龄段男性精子质量与精浆弹性硬蛋白酶和精浆中性α-葡萄糖苷酶的关系。方法回顾性分析在嘉兴市妇幼保健院门诊检测精子质量和精浆生化(精浆弹性硬蛋白酶、精浆中性α-葡萄糖苷酶)的3 262例患者的临床资料。根据年龄分为5组:25岁组、25~29岁组、30~34岁组、35~39岁组和≥40岁组;并按精子质量分为少弱精子症(301例)、少精子症(193例)、弱精子症(1 335例)及正常精子组(1 433例)。统计分析不同精子质量不同年龄段男性的精浆弹性硬蛋白酶、精浆中性α-葡萄糖苷酶资料。结果 (1)3 262例精液分析,精浆中性α-葡萄糖苷酶异常发生率7.14%,精浆弹性硬蛋白酶水平确诊感染率29.25%;(2)各年龄组总体精浆中性α-葡萄糖苷酶异常发生率相似(P0.05),生殖道感染发生率随年龄增加有增高趋势(P0.05);(3)不同精子质量各组总体精浆中性α-葡萄糖苷酶异常发生率不同(P0.05),其中少精子症和少弱精子症组均显著高于弱精子症组及精子正常组(P0.05),但生殖道感染发生率相似(P0.05);(4)随着年龄增加,不同精子质量各组精浆中性α-葡萄糖苷酶异常发生率相似(P0.05),而精浆弹性硬蛋白酶异常发生率有增高趋势(P0.05),其中少弱精子症、少精子症患者各年龄组间比较均有统计学差异(P0.05);(5)各精子质量组精浆弹性硬蛋白酶测定值均随着年龄增加呈增高趋势,且正常精子组的精浆弹性硬蛋白酶测定值在35~39岁组及≥40岁组均显著高于25岁组(P0.05)。结论男科门诊患者中生殖道感染具有普遍性;伴随难以自愈的生殖道感染的少弱精子症、少精子症和弱精子症可能与男性患者年龄增加有关,亦可能与附性腺病变严重程度、病程进展所处不同阶段有关。     

脱脂小麦胚芽的蛋白酶法水解及其蛋白水解物的功能性质

研究了不同蛋白酶对脱脂小麦胚芽的水解特性.实验发现,碱性蛋白酶和复合风味酶可溶出脱脂小麦胚芽中蛋白质的80%,而木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶则相对较低.对采用碱性蛋白酶得到的脱脂小麦胚芽蛋白水解物(DWGP)的功能性质进行了研究,pH值为6.0时氮溶指数约为70%,中性条件下乳化活性、乳化稳定性及乳化能力分别为64%,57%及62%.在pH值为7和70℃,持水性为232%.DWGP可作为一种潜在的功能性蛋白资源应用于食品中.     

热应激反应对内毒素刺激中性粒细胞释放蛋白酶的影响

目的探讨热应激反应对内毒素刺激中性粒细胞释放蛋白酶的影响。方法将中性粒细胞分成四组:内毒素组,加入内毒素后37℃下孵育;热休克组,42℃下热休克40min,加入内毒素,37℃下再孵育;氯化镉组,加入热应激反应诱导剂氯化镉孵育1h,加入内毒素,37℃下再孵育;对照组,37℃下孵育。在热应激后各组取细胞测定热休克蛋白(HSP)70表达水平,然后相当于内毒素刺激30min后,分别加细胞松弛素B及甲硫三肽(fMLP),37℃5min后,取上清液测溶菌酶、葡萄糖醛酸苷酶、弹性蛋白酶释放量。结果热休克组和氯化镉组,中性粒细胞HSP70mRNA表达及HSP70水平均明显高于内毒素组和对照组。有内毒素刺激的各组溶菌酶、葡萄糖醛酸苷酶、弹性蛋白酶释放量百分比高于对照组;但热休克组和氯化镉组的三种蛋白酶释放量百分比均低于内毒素组。结论热应激反应抑制内毒素刺激中性粒细胞蛋白水解酶的释放可能是机体为减轻炎性损伤的一种保护性反应。     

晚期糖基化终末产物对中性粒细胞生物学行为的影响

目的 观察晚期糖基化终末产物(AGE)对中性粒细胞生物学行为的影响,了解皮肤组织中AGE蓄积与糖尿病愈合中异常炎性反应的关系. 方法 体外分离培养SD大鼠中性粒细胞.在细胞悬液中加入不同的刺激物,根据所加物质分为:对照组,加入RPMI 1640培养液;A组,加入0.315 mg/mL AGE+RPMI 1640;B组,加入0.625 mg/mL AGE+RPMI 1640;C组,加入1.250mg/mL AGE+RPMI 1640.噻唑蓝法检测中性粒细胞活力;反转录-PCR法检测L-选择素mRNA表达;酶联免疫吸附测定法检测中性粒细胞弹性蛋白酶释放量;二氢二氯荧光黄二醋酸盐法检测中性粒细胞内活性氧水平. 结果 A、B、C组中性粒细胞活力(0.320±0.030、0.380±0.020、0.290±0.010)均高于对照组(0.170±0.040,P＜0.05).各实验组L-选择素mRNA表达水平(A组0.95±0.08、B组1.36±0.27、C组0.50±0.26)、弹性蛋白酶释放量(A组1.98±0.43、B组2.50±0.43、C组2.01±0.18)、活性氧水平(A组1.64±0.20、B组2.16±0.26、C组3.26±0.75)也均高于对照组(此3项指标分别为0.36±0.26、0.91±0.21、0.72±0.15,P＜0.05). 结论 AGE能增强中性粒细胞活力,使细胞的多种生物学行为发生改变,这可能是糖尿病异常炎性反应的主要原因之一.     

L68菌株邻苯二酚2,3-双加氧酶纯化及性质

L68菌株中的邻苯二酚 2 ,3 双加氧酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFastFlow柱层析、Hydroxyapatite柱层析、Sephadex G15 0凝胶过滤分离 ,并经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,达到了电泳纯 .提纯倍数为 2 34 .1倍 ,收率为 2 0 .2 % .酶相对分子质量为 (132± 10 )kDa ,由 4个相对分子质量相同的亚基组成 .最适反应温度 35℃ ,且酶活力在 15～ 65℃比较稳定 ;最适 pH为 8.0 ,在 pH 7.0～ 10 .5酶活力较高且比较稳定 .某些金属离子尤其是Fe3+ 对酶活力有强烈的抑制作用 .以邻苯二酚为底物 ,Km 为 2 0 .63μmol/L ,Vmax为 2 .82 μmol/ (min·mg)     

(R)-1-苯基-1,2-乙二醇脱氢酶的纯化及酶学性质

高压匀浆破碎近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCCM203011)得酶粗提液,经乙醇沉淀、DEAE-Sephacel离子交换层析、SuperdexG-75凝胶层析及亲和(Cibacron Blue 3GA)层析纯化得到以NADP+为辅酶的醇脱氢酶,SDS-PAGE电泳鉴定为单一条带,纯化后比活力提高20倍.HPLC凝胶柱层析法检测相对分子质量为45 000,SDS-PAGE电泳测得相对分子质量为43 000,表明该酶为单亚基结构.以(RS)-1-苯基-1,2-乙二醇(简称苯乙二醇)为底物,该酶最适反应温度为45℃,最适反应pH值为8.0.金属离子中Mg2+对酶活的有一定激活作用.以纯酶催化转化消旋体苯乙二醇,该酶优先选择(R)型对映体为底物.     

黄孢原毛平革菌产蛋白酶对过氧化物酶的影响

在培养黄孢原毛平革菌产生木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)过程中产生的胞外蛋白酶与LiP和MnP的快速失活有关.该蛋白酶在pH 7的条件下酶活很高,其主要作用是促进LiP和MnP的分解,而不是抑制它们的产生.HgCl2是蛋白酶的抑制剂,其抑制机理类似于HgCl2对蛋白酶K(PK)的抑制.添加HgCl2的发酵液能提高过氧化物酶的酶活和稳定性,最佳添加量为1 μmol/L,最佳添加时间在接种后第5天.     

短梗霉多糖发酵液后处理工艺研究

研究了低色素出芽短梗霉菌株G-58发酵液的后处理工艺。发酵液热处理后,用活性炭脱色,活性炭适宜添加量是0.6%,多糖得率94.5%,脱色率为34.8%;乙醇为沉淀剂,用量为发酵液体积3倍;多糖沉淀再用体积分数75%乙醇洗涤3次脱盐,多糖得率90.6%,多糖纯度96.8%;60℃热风干燥;产品白色、易溶,相对分子质量较大;最终多糖得率是85.6%。     

碱性高温淀粉酶基因的克隆与表达及酶特性的初步研究

从土壤中筛选到一能分泌碱性高温淀粉酶的芽孢杆菌属菌株。用质粒pTB522作载体,该淀粉酶基因(amyA)被克隆并在枯草芽孢杆菌ANA-1中得到表达。又通过亚克隆,得到含酶基因的更小重组质粒pTBX32(14.6kb)。携带该重组质粒的枯草芽孢杆菌ANA-1分泌的淀粉酶的特性与供体菌的相同。该酶作用最佳pH为8.5、最适温度为75℃,但在65℃,pH8.5条件下处理1h,该酶活性不降低。通过硫铵沉淀、热处理、DEAE——纤维素色谱和亲和色谱等分离技术,从培养液中部分纯化了该酶,其分子量估计为56000。     

微生物胞外多糖--热凝胶的酶法提取

采用中性蛋白酶处理热凝胶胞外多糖发酵液,降解其中的菌体,实验证明,与传统的酸碱法相比,中性蛋白酶法更能有效地对热凝胶多糖发酵液提纯,而且保持了其主要性能--热成胶性.进一步确定了酶法提取纯化热凝胶的最优条件,获得的多糖产品为纯一的β-(1,3)葡聚糖,且有效地去除了蛋白质等杂质.     

茶渣中蛋白质酶法提取工艺

研究了蛋白酶法提取茶叶加工后茶渣中蛋白质的工艺。结果显示，碱性蛋白酶和复合蛋白酶提取效果较好；碱性蛋白酶法提取的最佳工艺为酶加量49／6、液固比35：1（mL／g）、提取时间4h，提取率可达34．29，6；复合蛋白酶法提取的最佳提取工艺为酶加量39，6、液固比35：1（mL／g）、提取时间4h，提取率可达18．69／6；双酶法提取中，采用先复合蛋白酶，后碱性蛋白酶，提取效果较好，并且碱性蛋白酶占总酶加量比例对提取率的影响较大，当碱性蛋白酶占25％时，提取率达到最大，为42．19，6；双酶法提取的最佳提取工艺为pH8．0，温度60℃，酶加量49，6，提取率可达47．8％。     

精子碱性单细胞凝胶电泳法优化条件的建立及效果分析

目的:探讨精子碱性单细胞凝胶电泳法(SCGE)的主要影响因素,并优化条件,以利于标准化。方法:采用不同浓度H2O2处理精子,碱性SCGE检测精子DNA碎片(SDF),探讨凝胶层数、DNA解旋及电泳时的p H、DNA解旋及电泳时间、计数精子数对结果的影响,分析优化后方法的重复性,并用于检测40例精液标本。结果:3层琼脂糖凝胶可降低本底,DNA解旋及电泳缓冲液最佳p H值为10,最佳DNA解旋及电泳时间分别为40 min和30 min,计数50个精子即可保证结果的可靠性。优化后的碱性SCGE,用尾部DNA含量百分比表示,其批内、批间变异系数(CV)分别为3.12%、7.13%,用DNA损伤得分表示,其批内、批间CV分别为2.38%和6.09%。与健康生育男性相比,少弱畸形精子症不育男性精液SDF显著升高(P0.05)。结论:优化后的精子碱性SCGE,重复性好,易于标准化,可用于不育男性SDF检测,适合在临床推广应用。     

一株腐乳生产菌的筛选、鉴定及其生理特征

以家制腐乳毛坯为对象,筛选出一株腐乳生产菌。这株菌产生以中性和碱性蛋白酶为主的蛋白酶系,酶活力高达1100 U/g干曲。根据菌株在PSA上的菌落特征、菌丝形态、产孢结构及其孢子形态等对毛霉鉴定的基础上,结合18S rDNA序列分析表明,该株毛霉菌为雅致放射毛霉（Actinomucor elegans WL3.006）。生产菌能在土豆、麸皮及豆腐坯等固体培养基上茂盛生长,对数生长期在12～36 h,最适生长温度为25～28℃,最适碳源为果糖,最适氮源为牛肉浸膏,适宜pH值为6～8;40 g/L NaCl对其生长有明显抑制;用卤水或石膏点制的豆腐白坯均适于此菌的生长。     

一种改进的自体表皮细胞悬液制取方法

目的:探讨新的自体表皮细胞悬液制取方法。方法:选取30只大鼠,应用切削皮法结合胰蛋白酶和组织微粒法结合中性蛋白酶/胰蛋白酶法两种技术获得自体表皮细胞悬液并进行细胞产量和活力的比较。结果实验组整个操作约1h内即可完成,而对照组则需要1.5天的时间。实验组活细胞率0.966±0.35,对照组活细胞率0.971±0.42,两组间比较无明显差异(P0.05)。细胞产量:实验组(1.5±0.52)×106,对照组(1.9±0.72)×106,两组间比较有无差异(P0.05)。结论:切削皮法结合胰蛋白酶法制取表皮细胞悬液,制取的表皮细胞悬液的产量和活力与组织微粒法结合中性蛋白酶/胰蛋白酶法比较无显著差异,但操作简单和耗时少。     

纤溶酶原激活剂和基质金属蛋白酶在皮肤伤口修复中的暂时性作用

纤溶酶原激活剂(PA)系统由尿激酶型PA(uPA)和组织型PA(tPA)两种酶组成;基 质金属蛋白酶(MMPs)是包括11种酶的一族蛋白酶。本实验旨在测定在皮肤损伤反应中PA和MMP系统的暂时活性。实验选用30只C129雄性小鼠,经戊巴比妥(30mg/kg)静脉麻醉后,用1.5cm×1.5cm模板制造标准化的切除性伤口,伤口边缘经安息香酊处理后     

酶法从猪皮制备食用明胶工艺的研究

本文研究了用蛋白酶从猪胶皮中提取食用明胶的工艺过程和控制条件。猪胶皮经酸溶胀后,进行磨浆处理,在合适的条件下用1398中性蛋白酶水解,水解产物经提取、澄清、浓缩和干燥等过程即可得到明胶产品。本文用差示扫描量热法(DSC)测定了胶原蛋白的变性温度,用凝胶过滤色谱法测定了明胶的分子量分布。通过酶法工艺研究,大大缩短了明胶生产的周期,提高了产品的产量和质量,降低了成本,便于国内实现酶法制明胶的工业化。     

碱性还原电位水对复用诊疗器械清洗效果的研究

目的观察碱性还原电位水与多酶清洗液清洗复用诊疗器械的清洗效果。方法采用ATP荧光检测仪,检测经常规方法即多酶清洗液清洗的复用诊疗器械(80件)和用碱性还原电位水清洗的复用诊疗器械(80件),比较其清洗效果。结果经碱性还原电位水清洗的器械不合格率为5.00%,多酶清洗液清洗的器械不合格率为3.75%,二者比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论碱性还原电位水清洗效果与多酶清洗液相当,但具有使用方便、绿色环保等优势。     

氮离子束诱变提高黄嘌呤氧化酶产生菌产酶能力

通过氮离子束诱变节杆菌(Arthrobacter sp.g-1984)筛选到黄嘌呤氧化酶高产菌株X7,产酶活力为24.49 U/g,是出发株产酶活力(8.81 U/g)的2.78倍,经发酵条件优化后,产酶活力达到36.67 U/g,是出发菌株产酶活力的4.16倍,产酶高峰缩短了21 h.对细菌黄嘌呤氧化酶酶学性质进行了初步研究,其最适反应条件为37℃、pH 6.5、Fe2 对酶活力有较强的抑制作用,EDTA对酶活力有明显的激活作用.     

中华猕猴桃蛋白酶性质的研究及其在肉类嫩化剂制备中的应用

本文研究了中华猕猴桃蛋白酶的一些性质和它在配制肉类嫩化剂中的应用。此酶对两种不同的底物具有两种不同的最适pH,即以酪蛋白为底物时,最适pH为5.0～6.5,而以笨甲酰精氨酸乙酯(BAEE)为底物时,最适pH为7.5。在pH4.0～10.0范围内,酶能保持稳定。在65℃热处理16分钟,酶活力残存50%。将此酶配制成肉类嫩化剂处理牛肉,其蛋白萃取液中总可溶性含氮及可溶性非蛋白氮含量均比对照样品高,其脯氨酸甘氨酸含量也有明显的增加。这表明猕猴桃蛋白酶对肌肉组织中的胶原蛋白和弹性蛋白产生了一定作用。流变性质试验也表明该嫩化剂是有效的。