人眼结膜杯状细胞的定量研究

目的：研究杯状细胞在结膜各个方位的分布、形态及数量。方法：6眼（30－90岁）结膜,采用切片结合铺片的方法,1％阿利新兰,0．3％甲苯胺兰,HE染色,经显微摄像头输入Macintosh图象处理系统计数。结果：杯状细胞呈多房空泡状,圆形,核偏 位,单个,散在或密集分布。不同年龄组均以鼻下象限数量最多。80－90岁组杯状细胞的绝对数明显下降。结论：切片,铺片联合图象处理系统可以定量,准确地计算杯状细胞在结膜中的绝对数,从而为眼表疾病的研究提供有力的参考指标。     

海藻糖对鼠蒸发过强型干眼模型结膜杯状细胞的影响

背景:近年来研究表明海藻糖可以有效降低角膜上皮细胞在干燥环境中的死亡率,有可能成为一种治疗干眼症的新型药物。目的:评价海藻糖滴眼液对大鼠蒸发过强型干眼疗效。方法:SD大鼠15只(30只眼),采用随机数字表法分为正常组、对照组和实验组,每组5只(10只眼)。正常组不给予处置,后2组通过机械性阻止大鼠瞬目,暴露角结膜制作干眼模型。对照组和治疗组暴露24h后分别给予生理盐水、海藻糖滴眼液点双眼,4次/d,共2周。分别于暴露后1,3,5,7,14d进行ShirmerI试验、荧光染色;同时应用结膜印迹细胞学检测结膜杯状细胞密度。于暴露14d后取双眼结膜、角膜,行病理学检查。结果与结论:正常组与对照组和实验组的ShirmerI试验结果比较差异均无显著性意义(P0.05)。正常组与对照组和实验组角膜荧光素染色结果比较差异有显著性意义(P0.05),实验组第3,7,14天角膜荧光染色积分明显少于对照组(P0.05)。对照组和实验组均导致了结膜鳞状化生的退化,用药后结膜杯状细胞密度随着时间的延长逐渐增加,与正常组比较差异均有显著性意义(P0.05)。实验组杯状细胞密度在暴露第3,5,7,14天明显高于对照组(P0.05)。病理检查结果显示对照组角膜组织中出现明显的炎症细胞浸润,实验组结膜组织中未发现明显的炎症细胞浸润。结果提示海藻糖滴眼液可以抑制结膜杯状细胞数目的减少,对蒸发过强型干眼有一定的治疗效果。     

小肠肠腺细胞特殊染色方法的尝试

小肠是人体消化和吸收的重要器官,也是实验教学重点学习的内容。但小肠腺的细胞种类多,结构复杂,常规H-E染色只能观察到吸收细胞和杯状细胞,其中的潘氏细胞和内分泌细胞经常用特殊染色方法在另外的片子中观察,不利于实验课教学和学生学习与鉴别。采用不同染色方法,能在1张切片上同时观察潘氏细胞、内分泌细胞和杯状细胞的形态结构,目前国内还鲜见报道。本实验采用特殊染色方法,同时显示3种细胞的形态结构,此方法具有可重复性,并且此方法染色的切片,可长期保存不掉色,为实验课教学提供方便条件,提高了实验课教学质量。     

糖尿病患者角结膜上皮稳定性的改变

目的了解糖尿病患者病程、血糖控制状况以及糖尿病视网膜病变与角结膜上皮改变的关系。方法选择60例（120眼）2型糖尿病患者作为病例组，54名（108眼）非糖尿病患者作为对照者，性别年龄成组匹配。分别进行角膜知觉检查、角膜荧光素染色（FL）、结膜印迹细胞学检查（CIC）检查、糖尿病眼底检查、眼底照相或荧光造影，观察杯状细胞及结膜化生情况。结果糖尿病组角膜知觉下降（P〈0．05），角膜荧光素染色阳性增加（P〈0．05），杯状细胞丢失，结膜上皮细胞鳞状化生级别增加。糖尿病病程、血糖控制状况以及糖尿病视网膜病变严重程度与结膜上皮细胞鳞状化生级别、杯状细胞密度和角膜FL累积分间有显著的相关性（均P〈0．01）。结论糖尿病患者角结膜上皮的损害，且糖尿病病程长、血糖控制状况差和糖尿病视网膜病变严重者，损害程度亦重。     

改良网状纤维、丽春红组合染色用于杯状细胞染色效果的观察

正网状纤维染色在病理诊断中的应用非常广泛,特别是在协助肿瘤诊断和鉴别诊断中有较大帮助。目前,文献报道网状纤维染色应用于杯状细胞染色少见。作者经过摸索,采用改良Gomori网状纤维-丽春红组合染色法用于显示杯状细胞效果较好,现介绍如下。1 材料与方法1.1 材料收集2019年7月海军军医大学附属长海医院病理科送检的经外科手术切除的十二指肠标本9例,标本均经10%中性福尔马林固定后取材,行常规流程制成3 μm厚石蜡切片,     

改良快蓝焦油固紫染色法

改良快蓝焦油固紫(Luxol Fast Blue—CresylViloet)染色是根据Diamond法改良而建立的联合染色方法.可以同时在一张切片上观察神经细胞、神经胶质细胞和髓等结构.该方法具有两个突出优点:(1)使用冰冻切片法,制作时间周期短.染色方法简便,切片不易破碎.可制直径>2厘米的连续切片,对脑切片尤为适宜,便于科研工作中的连续观察.(2)集神经细胞,神经胶质细胞和髓鞘于一体.结构清晰,容易分辨.可使用于中枢神经系统的研究和教学中.1 方法1.1固定10%福尔马林液灌注或直接固定.10%盐水福尔马林用碳酸镁饱和液再固定14～20天.中间更换新固定液一次.1.2 冲洗 组织流水冲洗1小时,入20%蔗糖内至组织块下沉.1.3 切片 冰冻切片20～40μm.收集切片于20%酒精溶液中,便于展平切片.     

胚胎小肠杯状细胞偶氮卡红染色

近几年的研究表明,杯状细胞的数量、分泌性质、形态和分布的改变与许多疾病的发生有关[1-3],越来越引起人们的关注.目前较多采用印迹细胞学方法研究杯状细胞的形态和数量变化[4],PAS加苏木精染色可显示杯状细胞所含的黏蛋白及所有细胞的细胞核.然而传统的H-E染色观察杯状细胞时主要是凭细胞形态似高脚杯来判断,而PAS反应加苏木精染色方法因细胞膜上广泛存在着糖蛋白和黏多糖使得在观察杯状细胞的数量及分布上有局限性.本实验采用偶氮卡红两色法染色观察人胚胎消化道组织杯状细胞的位置、分布及数量取得较好的效果,现报道如下.     

雌激素α和β受体在大鼠结膜上皮和Henle腺上的分布

目的阐明雌激素α、β受体在大鼠结膜上皮和Henle腺的分布。方法选择22例青春期SD雌性大鼠上眼睑标本,采用免疫组织化学方法对结膜上皮和Henle腺雌激素α、β受体进行检测;同时采用放射免疫分析技术检测大鼠血清雌二醇的浓度。结果22例大鼠中,19例大鼠的结膜上皮雌激素α受体呈阳性表达,17例大鼠的结膜上皮雌激素β受体呈阳性表达。18例大鼠Henle腺深部的基底细胞雌激素α受体呈阳性表达,17例大鼠的Henle腺深部的基底细胞雌激素β受体呈阳性表达。在所有的大鼠中,Henle腺的杯状细胞雌激素α、β受体均呈阴性表达。雌激素α、β受体在结膜上皮阳性表达率间比较,差异无显著性(P>0.05);雌激素α、β受体在Henle腺深部的基底细胞阳性表达率间比较,差异亦无显著性(P>0.05)。正常大鼠血清雌二醇水平经检测含量为(22.13±3.54)ng/L。结论雌激素及其受体对大鼠结膜上皮、Henle腺深部的基底细胞具有重要的调控作用,但对Henle腺的杯状细胞分泌黏液功能无直接调节作用。     

借助自组装多肽水凝胶构建高活性复层结膜上皮细胞片

目的:评价RAD16-I自组装多肽水凝胶构建复层结膜上皮细胞片的效果,并探讨其作用机制.方法:酶消化法提取兔结膜上皮细胞(rCECs),倒置显微镜观察其形态,阿尔辛蓝-过碘酸-希夫染色检测杯状细胞,免疫荧光检测特异性蛋白细胞角蛋白4(CK4)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达;磷脂酶脱细胞法制得脱细胞的细胞外基质(d...     

三种固定液对Feulgen反应显示DNA的比较

<正>本实验用10%福尔马林(10%FA),FAA液(甲醛、95%酒精、冰醋酸按10:85:4体积比)及Carnoy氏液作为固定液,对一个月SD大鼠睾丸组织(约3mm~2/块)进行固定.制得5μm的切片后,分别用Felugen反应显示DNA和H—E染色法染切片,并对Feulgen染色切片中的糖原细胞用图象分析仪进行DNA定量测定.结果发现:(1)选择60个左右大小、染色深浅均相近的精原细胞进行图象分析,用平均光密度值进行比较.发现Carnoy固定的切片,其均值最大而变异系数(CV)最小;10%FAA固定的居中,FAA固定的切片均值最小而CV最大.在镜下观察中,发现10%FA及FAA液固定后的切片染色均匀而Carnoy所染切片中曲细精管着色深浅不一.所以我们认为,(1)用10%FA作固定液对DNA的定量分析较适合.(2)对细胞核及细胞质的形态而言,经FAA液和Carnoy氏液固定的组织,其染色效果较由10%FA固定的组织好.经 FAA液和Carnoy氏液固定的切片,低倍镜下可见曲精小管管腔内初级精母细胞的丝状染色体及其他细胞的颗粒状染色质,高倍镜下核的结构更加清晰.而经10%FA固定的组织切片,低倍镜下管腔内的各级生精细胞的胞核呈现均匀成片的紫红色,观察不到丝状染色体,高倍镜下仔细分辨,才可隐约见到.但因Carnoy氏液固定的组织块脆性大,不易切片,所以FAA液固定最适于形态观察.     

大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术

本实验应用 PNAg和 ConAg细胞化学技术 ,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应。材料与方法 :雄性 SD大鼠 4只 ,体重2 5 0～ 30 0 g。动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,进行心脏灌注固定 (固定液为 4%多聚甲醛 0 .1 M PB( p H7.3)。动物静置于 4℃ ,3hr后取出大脑 ,用上述固定液后固定 3hr。取具有海马的脑组织 ,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片。PNAg和 Con Ag的制备 :1 )枸橼酸还原法配制 7nm胶体金 ;2 )胶体金分别与 PNA和 Con A稀释液按一定比例结合 ;3)超速离心 ,4℃ ,36 0 0 0 /rpm45分钟 ;4)收…     

保留后根的新型脊髓旁矢状面切片技术及其在脊髓突触传递研究中的应用

目的:对保留脊神经后根的脊髓切片技术进行改良,增加所保留的脊神经后根纤维投射到脊髓后角浅层的完整性,以提高实验效率。方法:选用4～5周的SD大鼠,应用振动切片机对其脊髓腰骶膨大分别进行横断面或矢状面切片,在全细胞模式记录下,给予后根刺激观察两者中诱发出兴奋性突触后电流(EPSCs)的成功率,并对其进行比较;调整后根刺激参数分别刺激Aβ、Aδ和C纤维以诱发EPSCs,并对不同纤维诱发的EPSCs进行鉴别。结果:在保留后根的横断面和矢状面切片上诱发出EPSCs的成功率分别是38.43±9.97%和86.36±5.32%,具有显著的统计学差异(P<0.0001);与非保留后根的脊髓切片上诱发出的EPSCs相比,应用保留后根的脊髓横断面切片和矢状面切片所诱发的EPSCs均可通过刺激强度和潜伏期的差异,对不同纤维诱发的EPSCs进行有效的区分。结论:保留后根的脊髓矢状面切片刺激后根反应率显著高于横断面切片,且可对不同纤维诱发的EPSCs进行有效区分。因此,保留后根的脊髓矢状面切片比横断面切片更完整的保留了后根到脊髓后角浅层的投射,可提高实验效率,是研究脊髓中枢突触传递及其可塑性的可靠离体模型。     

小鼠哮喘气道重构模型的建立及组织形态计量学定位定量初步研究

目的：建立BALB/c小鼠哮喘气道重构模型,确立该模型的肺组织形态计量学定位定量指标。方法：(1)使用自凝造牙粉和自凝牙托水制作BALB/c小鼠的支气管树树脂铸型,确定肺组织形态学测量的具体部位。(2)30只BALB/c小鼠随机分为正常组、对照组和模型组,每组10只。观察3组小鼠一般整体改变、支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞(EOS)计数和肺组织切片HE染色光镜下大体病理改变,确定模型是否成功;同时对肺组织切片进行阿利辛蓝-过碘酸雪夫（AB-PAS）染色,以Image-Pro Plus 6.0图像分析软件在确定的目标部位测量上皮层厚度、平滑肌层厚度、杯状细胞计数和杯状细胞面积占上皮层面积百分比,确定正常参考值。结果：（1）成功建立BALB/c小鼠支气管树树脂铸型。（2）模型组小鼠的整体改变、BALF 中嗜酸性粒细胞计数以及HE染色光镜下肺组织病理学改变均证实成功建立了哮喘气道重构模型。（3）AB-PAS染色结果显示模型组目标气道上皮层厚度、平滑肌层厚度、杯状细胞计数和杯状细胞面积占上皮层面积百分比测量值均显著高于正常组和空白对照组（P<0.01）。结论：通过支气管树树脂铸型确定的目标支气管能够作为哮喘气道重构形态计量学分析的有效部位。     

慢性酒精中毒对大鼠腺垂体GH细胞的影响

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用4%多聚甲醛行全身灌流后取脑垂体 ,Bouin液固定、石蜡包埋 ,切片厚 5 μm。用兔抗鼠 GH抗血清 (北京中山生物技术有限公司提供 ,1∶ 5 0稀释 ) ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。 40倍物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用目镜测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其中间值作为细胞的直径。结果如下 :1各对照组免疫染色阳性细胞的直径大于相应实…     

大鼠吸入NO_2、SO_2和香烟时肺部c-fos基因的表达研究

目的 :探讨大鼠被动吸入ＮＯ2 、ＳＯ2 和香烟烟雾等空气主要污染物与ｃ -ｆｏｓ基因激活的关系。方法 :将Ｗｉｓｔａｒ大鼠置于气体刺激装置中 ,被动吸入ＮＯ2 、ＳＯ2 与香烟烟雾 ,分别在 1周、2周等时点对肺组织取材 ,切片Ｈ -Ｅ染色 ;采用免疫组化Ｓ -Ｐ法检测支气管粘膜上皮ＦＯＳ蛋白 ,以 2 0个高倍视野中免疫反应阳性细胞数反映ｃ -ｆｏｓ基因表达水平。结果 :( 1 )大鼠肺组织主要为炎症病变为主 :支气管纤毛柱状上皮变性、坏死、脱落 ,部分粘膜上皮出现增生 ,杯状细胞增多 ,粘膜下中性粒细胞等炎细胞侵润 ,肺间质充血、水肿。其中以…     

改进型“瑞士卷”法在小鼠肠道组织切片中的应用

目的为提高小鼠肠管组织石蜡切片的整体质量, 探讨一种改进型"瑞士卷"法在肠道组织病理切片中的应用。方法分别采用常规"瑞士卷"制作方法和改进型"瑞士卷"法脱水包埋小鼠回肠、结直肠组织样本, 制成组织切片。HE染色用于评估组织切片整体形态质量、组织器械性损伤及黏膜下层与肌层分离的情况;免疫组织化学染色LYVE-1标记淋巴管、染色CD31标记血管, 分析黏膜下层结构完整性;采用免疫荧光染色对小鼠回肠潘氏细胞(溶菌酶阳性)及结直肠杯状细胞(MUC2阳性)予以标记。结果 HE染色显示改进型"瑞士卷"组小鼠肠管组织切片整体形态及外观更加规整, 组织未发生器械性损伤, 且极少见黏膜下层与肌层分离的现象;免疫组织化学结果显示, 改进型"瑞士卷"组小鼠肠管组织切片黏膜下层多见完整的淋巴管和血管结构, 计数其黏膜下层完整淋巴管和血管的数量分别为(701.0±46.7)条和(881.6±58.7)条, 显著高于常规方法组(149.5±23.6)条和(122.9±20.2)条(P<0.05);免疫荧光发现, 改进型"瑞士卷"组小鼠回肠潘氏细胞及结直肠杯状细胞定位准确, 极少见细胞结构缺失的情况。结论改进...     

慢性酒精中毒对大鼠腺垂体LH细胞的影响

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用 4%多聚甲醛行全身灌流。取脑垂体 ,Bouin液固定、脱水、石蜡包埋 ,5μm厚切片常规脱蜡处理。用鼠抗人L H抗体 (1∶ 40 0 0 ) ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。40倍接物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用镜下测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其平均值作为细胞的直径。结果如下 :1对照组免疫染色阳性细胞的直径随年龄增长无明显变化。 3个…     

培养细胞的免疫细胞化学操作体会

对培养的细胞进行免疫细胞化学反应 ,可以在培养皿内直接进行 ,亦可经树脂包埋后 ,在半薄切片上进行。本实验应用上述二种方法 ,对培养的大鼠内耳血管纹的组织细胞进行了免疫细胞化学显示。组织细胞处理 :1 )平皿培养和盖玻片上培养的大鼠内耳血管纹处组织细胞 ,经Bouin固定液固定 4h,0 .0 1 Mol/L PBS浸洗 ,0 .1 %的 Triton x- 1 0 0处理 2 0 min;2 )平皿培养的细胞经酶处理 ,离心收集 ,2 %戊二醛固定液固定 4h,经丙酮脱水与锇酸固定( - 2 0℃ )、树脂包埋、半薄切片。免疫细胞化学反应 :上述处理的细胞或切片进行免疫细胞化学反应 ,其…     

八肽胆囊收缩素与甲—脑啡肽在EC细胞中的共存及含量的相互关系

用免疫组织化学相邻切片多重标记技术，观察了ＣＣＫ－８与Ｍ－ＥＮＫ在小肠ＥＣ细胞中的共存，并结合图像分析技术研究同一细胞中共存物质含量的关系。实验取猪十二指肠，Ｂｏｕｉｎ液固定，制备１μｍ厚连续石蜡切片。在相切片上分别用兔抗５－ＨＴ，ＣＣＫ－８和Ｍ－ＥＮＫ抗体进行ＰＡＰ法免疫组织化学染色。     

心壁内P物质免疫反应神经纤维的来源

心脏含Sp免疫反应神经纤维,但其起源于何处,未见直接形态学研究报道。本实验在成年大鼠左心室前壁内注入20％～40％HRP生理盐水溶液12～16 μl,存活2天,常规灌流固定。取双侧胸_(1～3)脊神经节、结状神经节,切片用HRP和免疫组化PAP(第Ⅰ抗体为Sp)结合法反应。在脊神经节和结状神经节内观察到3种细胞:较多的Sp单标细胞;一些以中、小型为主的HRP标记细胞;少数中、小型的HRP和Sp-IR双重标记细胞。对照组置换试验和吸收试验免疫反应阴