二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其可能的分子机制

背景与目的：二烯丙基二硫（DADS）是大蒜中的一种脂溶性单体化合物,对多种肿瘤细胞有促凋亡作用.本实验旨在探讨DADS抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制.方法：分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳与Western blot检测DADS抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase 3）蛋白的表达.结果：MTT结果显示,50、100、200及400 μmol/L DADS作用CNE2细胞48 h,抑制率分别为3.66%、14.25%、29.66%及61.28%,呈浓度依赖性（P＜0.05）.形态学观察发现,DADS处理24 h后,部分CNE2细胞变圆,体积明显缩小,胞质强嗜酸性,核固缩、深染,核染色质积聚至核膜周边,呈现凋亡细胞形态学改变.流式细胞术分析显示,50、100、200和400 μmol/L DADS作用24 h,凋亡率分别为（10.8±1.3）%、（14.8±1.1）%、（21.7±2.0）%及（29.8±2.6）%,呈浓度依赖性诱导CNE2细胞凋亡（n=3,P＜0.05）.200及400 μmol/L DADS分别作用CNE2细胞24 h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带.Western blot检测显示,50、100、200和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,Bcl-2蛋白与β-Actin的灰度值比分别是1.92±0.21、1.21±0.18、0.89±0.14及0.41±0.09,与对照组（2.24±0.26）比较,差异有显著性（P＜0.05）;Bax蛋白与β-Actin的灰度值比分别是0.78±0.14、1.12±0.19、1.54±0.22及2.08±0.27,与对照组（0.33±0.08）比较,差异有显著性（P＜0.05）;随浓度的增加,Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调.200、400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,与对照组相比,Caspase 3酶原蛋白条带变细并且可见到蛋白裂解产物,表明DADS可以促进Caspase 3的活化.结论：DADS具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调导致Bcl-2/Bax比值下降,促进Caspase 3的活化有关.     

沉默BRCAA1基因对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的机制

目的：研究沉默乳腺癌相关抗原1（breast cancer—associated antigen1，BRCAA1）基因对胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其可能的机制。方法：构建BRCAA1基因shRNA载体，将构建的shRNA—BRCAAI质粒与阴性对照质粒shRNA—N转染胃癌MGC-803细胞，24h后用荧光显微镜观察转染效率，实时定量PCR检测BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平。MTT法检测转染后24、48与72h的细胞增殖水平，Annxin—VPE／7AAD检测转染24h后的细胞凋亡水平，Westernblotting检测转染48h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果：BRCAA1siRNA表达质粒转染MGC-803细胞24h的转染效率为（81．2±2．6）％。转染后48hMGC．803细胞的BRCAA1mRNA水平下降了61．4％，MGC-803细胞增殖的抑制率达45．0％，转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞[（14．4±1．6）％vs（5．4±2．0）％，（4．4±2．5）％，P〈0．05]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加（P〈0．05），Bcl-2的表达量显著减少（P〈0．05）。结论：BRCAAI基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC．803细胞的增殖和诱导细胞凋亡，其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达有关，     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞BxPC-3中XIAP基因表达的研究

背景与目的：凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins,IAPs）是细胞内一类重要的凋亡抑制因子家族,X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP）是IAPs家族中重要的一员,在多种肿瘤细胞中高表达,并与肿瘤的化疗耐药相关。本研究旨在探讨吉西他滨（gemcitabine,GEM）诱导胰腺癌细胞BxPC-3中XIAP的表达及其与化疗耐药的关系。方法：3.10μg/mL GEM作用于BxPC-3细胞不同时间后（0、24、36、48和72h）用流式细胞仪分析各实验组细胞周期及凋亡情况（其中0h为对照组）,运用RT-PCR检测XIAP mRNA转录,采用Western blot法检测XIAP蛋白表达。结果：实验组细胞被阻滞于G0/G1期;各实验组细胞凋亡率分别增加至（10.3±1.8）%、（14.2±1.5）%、（18.8±1.7）%和（20.3±2.0）%,实验组与对照组（1.23±1.6）%相比性差异有统计学意义（F=146.24,P〈0.05）,48h组与72h组相比差异无统计学意义（P〉;0.05）。XIAP mRNA转录及蛋白表达均随GEM作用时间延长而增加,实验组较对照组增加,差异有统计学意义（F=83.72,F=103.58,P〈0.05）,24h与36h组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,36h组与48h组间、48h与72h组间比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：GEM能抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖并促进凋亡,随着作用时间的延长其药物敏感性减低。GEM作用一定时间可诱导XIAP表达增加,从而可能参与并使凋亡受阻,进而促进化疗耐药得以实现。     

DADS通过MAPK和PI3K/Akt 信号通路下调Mcl-1诱导白血病细胞凋亡*

目的:二烯丙基二硫（DADS）为天然植物大蒜中的提取物,能抑制多种肿瘤细胞生长,本文探讨丝裂原激活的蛋白激酶（MAPKs）、3- 磷酸肌醇激酶（PI 3K/Akt）信号通路和Bcl- 2 家族成员在DADS诱导的人白血病HL- 60细胞凋亡中的作用。方法:利用流式细胞术检测DADS 诱导的白血病细胞凋亡,Western blot研究MAPKs和PI 3K/Akt信号通路在DADS 诱导的人白血病HL- 60细胞凋亡中的变化及对Bcl- 2 家族凋亡相关蛋白表达的影响。结果:DADS呈浓度和时间依赖性地诱导人白血病HL- 60细胞凋亡,在此过程中ERK/MAPK 和PI 3K/Akt信号通路被抑制,而p38MAPK 信号通路被激活,ERK/MAPK 和PI 3K/Akt信号通路通过降低Mcl-1（myeloid cell leukemia-1）和升高Bax 的表达诱导人白血病细胞凋亡,而p38MAPK 则不是通过调控Mcl-1 和Bax 的表达诱导人白血病细胞凋亡,进一步利用RNA干扰技术沉默Mcl-1 基因可增加DADS对HL- 60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。结论:MAPK 和PI 3K/Akt信号通路通过下调Mcl-1 的表达参与了DADS诱导的HL- 60细胞凋亡作用。      

二苯乙烯苷抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及对P13K／Akt信号通路的影响

目的：研究二苯乙烯苷（2,3,5,4’tetrahhydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG）对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及对P13K／Akt信号通路的影响。方法：M。rr法检测细胞增殖活性,AnnexinV／PI双标法检测细胞凋亡,Western印迹法检测PTEN、p-PKB、cvclinD1、Bcl-2、caspase3和NF-κB蛋白的表达,RT—PCR检坝4P13K上游抑制物PTENmRNA的表达。结果：1、10和100μmol／L的THSG处理细胞24、48和72h后,明显抑制MCF-7细胞增殖,100μmol／L作用48h的增殖抑制率为41．8％（P〈0．05）,但低浓度（0．1、0．01μmol／L）THSG出现弱的促增殖作用。1、10和100μmol／LTHSG作用48h后,MCF-7细胞凋亡率分别为（6．25±0．65）％、（5．04±0．83）％和（7．98±0．67）％。1、10和100μmol／LTHSG上调PTEN的蛋白表达量,下调p-PKB和cyclinDI的蛋白表达,均呈剂量依赖性;而对NF-κB、Bcl-2和caspase-3表达却无明显影响。THSG能轻徽上调PTENmRNA水平。结论：THSG可抑制MCF-7细胞增殖,该作用可能是通过抑制P13K／Akt信号通路实现的。     

骨桥蛋白反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞SKOV3粘附侵袭的实验研究

目的研究骨桥蛋白（OPN）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）抑制人卵巢癌细胞株SKOV3粘附侵袭及诱导凋亡的作用。方法用脂质体将骨桥蛋白ASODN转染卵巢癌细胞SKOV3。实验分3组：对照组,随机序列寡核苷酸（random oligonucleotide,rODN）组和ASODN组。通过荧光定量RT-PCR、流式细胞仪检测法、黏附细胞计数法和Boyden小室法分别测定骨桥蛋白mRNA和细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达及癌细胞黏附力、侵袭力的变化。Annexin V染色法、DNA ladder法和Hoechst染色法检测凋亡。结果转染后ASODN组骨桥蛋白mRNA的相对定量比值较对照组显著降低（1.95±0.81 vs 5.26±0.66,P〈0.01）;流式细胞仪检测骨桥蛋白表达结果显示,转染后平均荧光指数明显降低,细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达下降（P〈0.01）;转染后ASODN组黏附力和侵袭力均较对照组显著下降（黏附细胞百分数值为16.97±1.60 vs 36.14±1.16,穿透聚碳酸酯膜细胞数为44.67±2.08 vs 83.67±4.51,P值均〈0.01）;经骨桥蛋白ASODN作用后SKOV3细胞发生凋亡。而rODN组上述各指标较对照组无明显变化。结论骨桥蛋白的表达与黏附侵袭能力密切相关,反义寡核苷酸能有效抑制卵巢癌细胞株SKOV3细胞骨桥蛋白基因的表达,从而抑制蛋白质的合成,降低其黏附侵袭能力,并能够诱导凋亡。     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

KDR蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及临床意义

目的：探讨卵巢浆液性肿瘤（OSC）与正常卵巢组织中血管内皮生长因子受体（KDR、蛋白）的表达情况及临床意义。方法：利用Western Blotting方法对38例OSC、14例卵巢交界性浆液性瘤、11例卵巢良性浆液性瘤以及10例正常卵巢组织中KDR蛋白进行检测。结果：OSC组织中KDR蛋白表达的阳性率（89．5％）高于卵巢交界性浆液性瘤组织（64．3％）（P〈0．05）。OSC组织中KDR蛋白表达的相对含量（141．10±87．31）明显高于卵巢交界性浆液性瘤（65．60±11．61）组织（P〈0．005）。KDR蛋白在OSC和卵巢交界性浆液性瘤组织中表达的阳性率和相对含量均高于卵巢良性浆液性瘤（18．2％，42．62±12．66）及正常卵巢（10．0％，37．72±12．96）组织（P〈0．05）。手术病理分期Ⅲ期＋Ⅳ期OSC组织KDR蛋白表达的阳性率（96．2％）和相对含量（181．96±96．37）高于Ⅰ期＋Ⅱ期（75．0％，112．37±59．28）OSC组织（P〈0．05）。组织学Ⅲ级OSC组织KDR蛋白表达的阳性率（95．5％）和相对含量（171．76±91．66）高于Ⅰ级（4／6，87．96±35．59），有统计学意义（P〈0．05）。有淋巴结转移的OSC组织中KDR蛋白表达的阳性率（96．2％）和相对含量（219．25±92．4）与无淋巴结转移的OSC组织（75．0％，108．43±30．45）相比较，有统计学意义（P〈0．05）。有腹水的OSC组织中KDR蛋白表达的阳性率（83．3％）及相对含量（139．94±83．94）与无腹水的OSC组织（85．7％，167．07±93．66）相比较，无统计学意义（P〉0．05）。结论：卵巢浆液性肿瘤的发生、发展与KDR蛋白的过高表达密切相关。KDR蛋白表达与卵巢浆液性癌生物学行为相关。     

NS-398和罗格列酮协同诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨特异性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398和过氧化物酶体增殖因子活化受体（PPAR）γ激动剂罗格列酮对人胰腺腺癌细胞株SW1990细胞凋亡的调控作用及其机制。方法SW1990细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM液中,常规培养24 h后加NS-398（150μmol/L）和（或）罗格列酮（50μmol/L）,连续培养48 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应（RT- PCR）法检测凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA表达。结果NS-398组、罗格列酮组和联合用药组的细胞凋亡率分别为（10.65±3.93）%、（14.51±2.36）%和（25.87±5.24）%,显著高于对照组的（3.12±1.76）% （P〈0.05和P〈0.01）,联合用药组的细胞凋亡率明显高于NS-398或罗格列酮单一用药组（P〈0.01）。NS-398和罗格列酮显著下调Bcl-2 mRNA在SW1990细胞的表达（P〈0.01）。结论NS-398、罗格列酮通过下调Bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合使用具有协同作用。     

锝标突触结合蛋白ⅠC2A片段探测肺癌凋亡的实验研究

目的探讨锝标突触结合蛋白ⅠC2A片段（^99mTc-C2A）探测非小细胞肺癌（NSCLC）化疗后,肿瘤细胞凋亡的情况。方法采用2-IT修饰后配体交换法标记合成^99mTc-C2A。H460 NSCLC肿瘤裸鼠25只,以25 mg／kg紫杉醇化疗诱导,分成治疗前、化疗诱导后12、24、48、72 h共5组,^99mTc- C2A显像探测化疗前后各组肿瘤组织细胞凋亡,勾画感兴趣区,计算肿瘤与对侧正常组织放射性比值（T／NT）。显像结束后,即刻断颈处死,取出肿瘤及各脏器,测定每克组织百分注射剂量率（％ID／g）。瘤体分成两部分,一部分通过流式细胞术测定肿瘤组织活化半胱氨酸天冬蛋白水解酶（caspase-3）,另一部分通过光镜HE及TUNEL染色测定凋亡指数。结果^99mTc-C2A显像显示,治疗前肿瘤有少量放射性摄取,肿瘤摄取为（1．21±0．51）％ID／g;化疗诱导后肿瘤摄取（％ID／g）明显增加,12、24、48 h肿瘤摄取分别为2．82±0．90、3．13±0．48和3．52±1．18。治疗前肿瘤T／NT为1．48±0．23;12、24、48 hT／NT分别为1．79±0．34、2．23±0．33和2．78±0．34,各组之间差异均有统计学意义（P〈 0．05）。未化疗组活化caspase-3为2．33±0．63％;紫杉醇化疗后,大量caspase-3被激活,12、24、48 h分别为（10．03±2．15）％、（33．80±5．04）％和（57．80±11．29）％。光镜HE及TUNEL染色法显示,未化疗组有散在细胞发生凋亡,化疗诱导后12、24、48、72 h大批细胞发生凋亡,12、24、48 h每个高倍视野中的凋亡细胞数分别为（8．25±2．27）％、（34．43±4．73）％和（71．88±11．88）％。肿瘤摄取同活化caspase-3及凋亡细胞数有很好的相关性。结论^99mTc-C2A显像可早期探测实体肿瘤化疗后凋亡,并和活化caspase-3及凋亡指数呈直线相关。C2A有望成为探测细胞凋亡的分子探针,进而早期预测和评价肿瘤疗效。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。