不同方法检测造血干细胞移植受者巨细胞病毒感染的研究

[目的]探讨造血干细胞移植后检测巨细胞病毒(CMV)感染的有效方法。[方法]分别应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法、荧光定量PCR(FQ-PCR)、间接免疫荧光法(IFA)检测11名干细胞移植受者,96份标本的血清IgM抗体、血浆DNA负荷量和外周血白细胞PP65抗原。[结果]ELISA、FQ-PCR和IFA的阳性检出率分别为15.63%、34.38%、36.46%。ELISA的阳性检出率明显低于FQ-PCR和IFA法。IFA与FQ-PCR两种检测方法对CMV感染的测定结果具有良好的一致性(kappa值为0.818)。[结论]IFA和FQ-PCR是检测造血干细胞移植受者CMV早期感染较为敏感的指标,具有良好的临床应用价值。     

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒检测的探讨

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后巨细胞病毒(CMV)活动性感染的有效检测方法。方法分别应用普通PCR、巢式PCR、流式细胞仪同步检测13例allo-HSCT后患者117份外周血标本的CMV DNA和pp65抗原。结果普通PCR 检测阳性率为44．4％,巢式PCR检测阳性率为24．8％,流式细胞仪检测阳性率为30．8%。临床活动性感染率为27．4％。普通PCR 检测阳性率与临床活动性感染率之间无明显相关性(r=0．207,P>0．05)。巢式PCR和流式细胞仪的阳性检出率之间的差异无统计学意义(P>0．05),它们和临床活动性感染有明显的相关性(r分别为0．518和0．529,P<0．05)。结论巢式PCR检测CMV DNA和流式细胞仪检测pp65抗原可用于allo-HSCT后CMV活动性感染的诊断。     

聚合酶链反应在临床巨细胞病毒感染检测中的应用和研究

本文用聚合酶链反应(PCR)技术检测76份患儿尿标本中巨细胞病毒(CMV)DNA,其中32份尿标本做了病毒分离,另44例同时做血清CMV IgM抗体检测。结果PCR和病毒分离阳性符合率为100％,与CMV IgM抗体检出率无显著差异(P>0.05)。证明PCR方法具有特异性高、敏感性好、操作简便、检测周期短等优点,适用于临床进行CMV感染的快速诊断。     

肾移植受者巨细胞病毒隐性感染的筛查方法及应用

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)隐性感染的筛查方法,为临床早期发现CMV活动性感染提供诊断依据。方法收集笔者医院2009年10～12月期间门诊随访233例肾移植受者外周静脉血标本450份,分别采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、巢式PCR(nPCR)以及酶联免疫吸附(ELISA)法对标本进行检测,同时采用ELISA法检测他克莫司(Tac)浓度。结果 233例肾移植受者CMV-IgG均为阳性,CMV-IgM则均为阴性;Real-time PCR技术检测CMV-DNA阳性85例(36.48%),以低拷贝数为主。nPCR技术检测CMV-DNA阳性10例(4.29%),两种技术检测总阳性率存在显著性差异(P<0.05);随着Tac药物浓度升高,CMV-DNA阳性率呈增高趋势,药物高浓度组CMV-DNA阳性率高于低浓度组(P<0.05)。结论 Real-time PCR是筛查肾移植受者CMV隐性感染较为理想的方法,尤其在受者药物浓度偏高时更具有临床应用价值。     

CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义

目的 探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV)-DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义.方法 应用PE 5700全自动PCR扩增分析仪,检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿(病儿组)尿液中的CMV-DNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMV-DNA含量,并测定治疗后的病毒载量.同时与血清CMV-IgM抗体检测结果进行比较.对部分病儿进行临床观察和随访.结果 病儿组CMV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%.治疗后两组病儿尿液中CMV-DNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较, 差异有显著性(t=4.159、5.438,P<0.01).实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMV-IgM检测方法.9 例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化;4例CMV 肝炎经治疗后, 1 例CMV-DNA转阴,3例仍阳性;4例无症状性感染病儿CMV-DNA转阴或降至低水平.结论 实时荧光定量PCR技术检测CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点,量化结果便于对治疗过程进行连续监测,为病儿治疗和随访提供有效帮助.     

肾移植术后巨细胞病毒检测的临床意义

目的　探讨肾移植术后检测巨细胞病毒感染的意义。方法　利用酶联免疫吸附法 (Enzymelinkedimmunosor bentassay ,ELISA)以及聚合酶链反应 (Polymerasechainreaction ,PCR)检测肾移植术后受者血清中的抗 CMV抗体及CMV DNA。结果　检测了 72例肾移植术后的受者抗 CMV抗体及CMV DNA ,抗 CMV抗体及CMV DNA阳性率均明显高于术前(P <0 0 1) ,其中 2 5 %的CMV感染者发展为CMV病。移植术后CMV DNA阳性者发生急性排斥反应的几率明显高于CMV DNA阴性者。结论　检测肾移植受者血清中的抗 CMV抗体及CMV DNA可以协助诊断肾移植受者是否感染CMV以及引起的CMV病 ,对临床治疗肾移植术后CMV病有着重要的意义     

免疫学

050528　CMV感染细胞核抗早期抗原抗体 (PE NA)的测定及临床评价 /陈　悦…∥中国优生与遗传杂志 —2004, 12(5) —123~125对目前国内各种广泛应用于婴、幼儿的CMV实验室检测方法进行初步评价。方法:本研究建立了应用间接荧光免疫法测定CMV细胞核抗早期抗原抗体 (PENA)的新方法,同时进行PCR检测和ELISA检测IgM、IgA、IgG实验,对 491例临床可疑为CMV感染的患儿进行检测,同时进行PCR方法及ELISA-IgM、IgA、IgG方法的检测,观察结果,并与尿中寻找CMV包涵体方法结果相比较。结果:PENA(1 /20)阳性率 54 99%,PENA(1 /100)…     

低基质磷酸化蛋白检测对婴儿肝炎综合征巨细胞病毒活动性感染的诊断价值

目的:探讨低基质磷酸化蛋白(PP65)抗原血症检测法(AA)在诊断婴儿肝炎综合征巨细胞病毒(CMV)活动性感染中的诊断价值.方法:对52例婴儿肝炎综合征患儿采用间接免疫荧光染色法检测PP65、免疫荧光定量PCR检测血浆HCMV-DNA、酶联免疫吸附法(ELISA)检测CMV-IgM等三种方法平行检测52例血标本.通过检测的结果,分析AA对婴儿肝炎综合征巨细胞病毒活动性感染的诊断价值.结果:①52例婴儿肝炎综合征患儿有39例CMV活动性感染,PP65、PCR、ELISA的阳性检出率分别为82.1%(32/39)、87.2%(34/39)和56.4%(22/39).三方法的阳性检出率存在差异(x2=11.37,P＜0.01),两两比较PP65与IgM差异具有显著性(x2=6.01,P＜0.05),与PCR相比差异无显著性(P＞0.05).②相对于PCR,PP65的敏感性与特异性为94.1%、100%.阳性预测值为100%(32/32),阴性预测值为71.4%(5/7),两者的总符合率为94.9%(37/39).结论:PP65抗原血症检测法具有高敏感性和特异性,对婴儿肝炎综合征CMV活动性感染有早期诊断的意义,可指导早期干预治疗.     

外周血干细胞移植后并发巨细胞病毒感染的荧光定量PCR检测与防治

目的评价荧光定量PCR技术对外周血干细胞移植(PBSCT)后并发巨细胞病毒(CMV)感染的临床意义.方法用荧光定量PCR技术对5例行异基因PBSCT(Allo-BSCT)、1例行自体PBSCT患者的血液,在移植前后进行CMV DNA动态检测.CMV感染的预防,移植早期采用阿昔洛韦,外周血中性粒细胞数达1.0×109/L用国产更昔洛韦5mg/kg/天.血CMV DNA阳性患者用进口更昔洛韦10mg/kg/天加膦甲酸钠80mg/kg/天治疗.结果 5例PBSCT患者血CMVDNA阴性,临床上未发生CMV引起的疾病;1例Allo-PBSCT患者在移植前后血CMV DNA呈阳性,+60天发生间质性肺炎,用进口更昔洛韦、膦甲酸钠和免疫球蛋白治疗,低氧血症一度好转,后合并细菌和真菌败血症而死亡.结论荧光定量PCR对CMV DNA的检测特异性强、快速、灵敏.PBSCT患者CMV DNA阳性者应按CMV活动性感染及时治疗.     

巨细胞病毒DNA早期抗原与巨细胞病毒-IgM、IgG滴度一致率的对比研究

目的 :正确认识巨细胞病毒 (CMV)DNA及CMV早期抗原 (EA)的病毒学意义及临床价值。方法 :检查 34例急性黄疸性肝炎患儿和 19例健康儿童的血白细胞CMV DNA、尿CMV DNA、血白细胞CMV EA ,并与其同时检测的CMV IgM、CMV IgG双份血清 (急性期 /恢复期 )滴度有 4倍以上升高 (IgG升高 )相比较。结果 :CMV DNA与CMV IgM及CMV IgG升高的一致率都低于 5 0 % ;CMV EA与CMV IgM的一致率为 6 6 .7% (肝炎患儿 )、6 8.4% (健康儿童 ) ,显著高于血CMV DNA( 37.7% ,P <0 .0 1)和 CMV DNA( 4 4.4% ,P <0 .0 5 )与CMV IgM的一致率 ,但CMV EA与CMV IgG升高无相关性 ;CMV DNA与CMV EA在肝炎患儿和健康儿童中的检出率无显著差异性。结论 :CMV DNA定性检查不适于做为CMV活动性感染的指标 ,而CMV EA更能反映CMV的活动性感染。联合开展CMV的多种抗原检查以及定量检查CMV 抗原和DNA可能是必要的     

荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液巨细胞病毒在儿童CMV感染诊断中的意义。方法分别应用FQ-PCR和ELISA法检测75例确诊或高度怀疑为CMV感染和25例对照儿童尿CMV-DNA和血清CMV-IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果75例确诊或疑诊CMV活动性感染患儿中,检测到CMV-DNA 66例;检测到CMV-IgM 54例。两种方法阳性符合率为77%,FQ-PCR和ELISA法阳性检出率分别为88%和72%,有统计学差异(P<0.05)。结论FQ-PCR法检测尿CMV-DNA对诊断活动性CMV感染具有良好的应用价值。     

荧光定量PCR技术在白血病化疗后患者巨细胞病毒感染检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR检测在白血病化疗后患者巨细胞病毒感染中的诊断价值。方法对50例白血病化疗后患者,取静脉血用FQ-PCR检测CMV-DNA,ELISA法检测CMV-IgM。结果50例标本中19例CMV-DNA阳性。阳性率为38%。阳性标本CMV-DNA在1.30×10^3～4.21×10^5拷贝/ml之间,平均6.43×10^4拷贝/ml。CMV-IgM阳性12例,阳性率为24%。2种方法阳性检出率差异有统计学意义（χ^2=8.01,P〈0.01）。结论在连续动态CMV检测多种指标时,结合DNA检测具有更高的临床应用价值,尤其是FQ-PCR方法可快速、灵敏、特异、定量地检测CMV,在CMV感染的诊断、治疗方案选择和疗效观察方面必将有广泛的应用前景。     

ELISA检测脐血中巨细胞病毒IgM抗体诊断先天性巨细胞...

Cytomegalovirus IgM (CMV IgM) antibodies of 582 cord sera from 6 hospitals in Chengdu were detected by direct ELISA and indirect ELISA. Twenty-seven cases with CMV IgM antibody positive were detected from 582 cord sera. Twenty-five and 15 cases were found to have CMV IgM antibody by direct ELISA and indirect ELISA, respectively (P greater than 0.05). Indirect ELISA for detection CMV IgM antibody was only interfered by high concentration of CMV IgG and rheumatoid factor. Children with CMV IgM antibody positive were followed-up to 5-6 months. Hearing loss was detected by impedance audiology in only 2 cases. But the other physical and mental examinations were normal. The result showed that the prevalence of congenital CMV infection is 4.6% in our study and direct ELISA method is more specific and sensitive than indirect ELISA method to detect CMV IgM antibody in cord serum.     

巨细胞病毒检测及在异基因造血干细胞移植中应用研究

目的:探讨检测巨细胞病毒(CMV)的方法学及在异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)中临床应用的价值.方法:以45例Allo-HSCT为研究对象,采集移植前供者、移植前后及恢复期受者的抗凝血标本,分别采用CMV-pp65单克隆抗体免疫组化法和ELISA法,检测CMV早期抗原和IgG、IgM抗体,并进行多点动态观察.结果:45例患者163份系列标本,CMV早期抗原阳性75份,是在移植后6～242天首次检出,平均70天;其中≤45天出现阳性者26例,占58%.术前供、受者CMV-IgG抗体均阳性,CMV-IgM抗体供、受者各1例阳性,其中受者持续阳性.术后45例中21例出现CMV-IgM抗体阳性,首次检出时间在14～234天,平均127天,比早期抗原检出时间推迟近2个月.45例中因CMV感染而致间质性肺炎25例,占55%.结论:异基因造血干细胞移植采用CMVpp55单克隆抗体免疫组化法检测巨细胞病毒感染,快捷、准确、灵敏,对患者的诊断、治疗和预后判断有重要意义,值得推广.     

肾移植术后排斥反应与巨细胞病毒感染有关

目的 :探讨巨细胞病毒 (CMV)感染在肾移植术后的发生率及CMV感染与排斥反应的关系。方法 :检测2 0 8例肾移植受者术后CMVDNA和 48例肾移植受者血清CMVIgM、IgG抗体。并定期复查CMVDNA ,对CMVDNA阳性的患者给予抗病毒治疗。结果 :术后CMVDNA阳性受者急性排斥反应的发生率增加 ,经抗CMV治疗 ,则排斥反应减少。结论 :预防和治疗CMV感染的重要性     

亚甲基蓝/光化学法灭活血浆巨细胞病毒的初步研究

目的 探讨亚甲基蓝／光化学法对血浆CMV灭活的效果。方法 应用ELISA对献血者进行CMV-IgM抗体筛选，应用荧光定量PCR检测仪对亚甲基蓝／光化学法处理的CMV-IgM抗体阳性血浆进行CMV核酸检测。结果 在166例血浆标本中，经ELISA检测发现33例CMVIgM抗体阳性，阳性率为19．9％；在33例CMV-IgM抗体阳性血浆中，经亚甲基蓝／光化学法灭活后，定量PCR检测特定的CMVDNA片段拷贝数为0。结论 初步证明用亚甲基蓝／光化学法对血浆CMV可能有一定的灭活作用。     

ELISA检测脐血中巨细胞病毒IgM抗体诊断先天性巨细胞病毒感染的探讨

作者用直接和间接ELISA方法,对成都市6所医院初生婴儿582例的脐应进行了巨细胞病毒(CMV)IgM抗体检测。结果:两种方法检出CMV IgM抗体阳性者共27扮,阳性率4.6％,其中用直接ELISA检测,阳性者25份,间接ELISA阳性者为15份。前者明显优于后者(P<0.05),表明其敏感性高,特异性强。CMV IgM抗体阳性儿临床随访至5～6月龄,2例听力异常,1例眼底可疑异常。     

造血干细胞移植受者免疫抑制治疗 与巨细胞病毒感染的关系

目的：探讨异基因造血干细胞移植(HSCT)术后免疫抑制治疗个体外周血中巨细胞病毒(CMV)脱氧核糖核酸( DNA)与免疫抑制剂环孢素A(CsA)血药浓度变化的关系,并评价其潜在的临床应用价值。方法：选择行异基因HSCT的32例患者进行回顾性分析。移植前采用更昔洛韦预防CMV感染。移植后应用核酸扩增(PCR)荧光检测法定期进行CMV DNA监测。根据CMV DNA检测结果将患者分为CMV DNA阴性组和CMV DNA阳性组。用酶放大免疫技术（EMIT）定期监测CsA血药浓度,分析CMV DNA与CsA血药浓度的关系。结果：异基因造血干细胞患者CMV感染率为53.13%(17/32);DNA阳性组的CsA血药浓度明显高于CMV DNA阴性组（P＜0.05）;通过ROC曲线得出异基因干细胞移植患者使用CsA药物第7,14,21天时曲线下面积与0.5比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）,分别对应的血药浓度为203.15, 215.55和302.65 ng/mL。结论：免疫抑制药物浓度可影响CMV DNA的动态变化,CsA血药浓度偏高可能是导致造血干细胞移植受者移植后对CMV易感的原因之一,适时监测CsA血药浓度对指导临床用药有一定的辅助价值。