抗肌萎缩蛋白基因51号外显子的精确定位

抗肌萎缩蛋白基因是迄今发现的人类最大基因，长约2300kb，含有75个外显子。对该巨大基因的研究是近年来医学分子生物学研究的一个热点。虽然抗肌萎缩蛋白基因Hind Ⅱ片段排序后就知道第51号外显子位于3．1kb的第40号Hind Ⅱ片段中，由于抗肌萎缩蛋白基因组DNA至今未被克隆，     

应用10对引物多重PCR方法检测DMD基因缺失

目的 建立适合于Duchenne型进行性肌营养不良(DMD)临床基因诊断的10对引物多重PCR方法,并探讨其临床应用价值.方法 抽提55例DMD患者及正常对照者外周血DNA,选取肌营养不良蛋白基因的10对外显子引物,应用多重PCR反应方法,同时扩增10个特异性片段,扩增产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果 55例DMD患者中,28例(50.9%)存在外显子缺失.27例(49.1%)未检测到缺失;25例缺失片段集中于第45～53外显子,3例缺失片段集中于第12-19外显子.第50外显子缺失频率最高;其次为外显子45、47、51、52,再次之为外显子12、53.结论 DMD基因缺失片段主要分布于第45-53、12-19外显子2个缺失热点区域.该方法具有临床应用价值,是检测DMD基因缺失的首选方法.     

人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达

目的 构建人微小抗肌萎缩蛋白基因（microdystrophin）的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞（rMSC）,研究其体外表达情况。方法 限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒poD-NA3．1（＋）的Notl位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3．1（＋）／microdystrophin。通过酶切和测序对质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染人rMSCs中,经过G418筛选后。用RT—PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物。结果 pcDNA3．1（＋）／microdystrophin经过Notl、HindⅢ酶切鉴定及测序证实插入片断正确。提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录：对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光．说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达。结论 成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染人rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达．为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础。     

抗肌萎缩蛋白基因51号外显子的筛选及其两侧内含子的亚克隆

用ｃＤＭＤｓ探针，从人Ｘ染色体噬菌体文库中筛选并作ＤＮＡ印迹杂交鉴定出含有抗肌萎缩蛋白基因５１号外显子的克隆。经限制酶切图谱分析，确定ＫｐｎⅠ和ＨｉｎｄⅡ为亚克隆位点，从而获得了与抗肌萎缩蛋白基因５１号外显子相连的５０和５１号内含子亚克隆，为该区段的核苷酸顺序分析打下了基础。     

人血栓调节蛋白基因真核表达质粒的构建

目的：构建人血栓调节蛋白(human thrombomodulin，hTM)基因的真核表达质粒，为研究hTM在抗血栓、抗炎症、抗血管增生等方面的作用及其临床应用奠定基础。方法：用PCR法扩增出hTMcDNA表达片段。把载体质粒pcDNA3．1( )／neo和hTM片段用EcoRⅠ HindⅢ双酶切，T4DNA连接酶进行连接。结果：重组质粒在大肠杆菌菌株DH5α内扩增。提取、纯化后用HindⅢ、EcoRⅠ酶切鉴定及测序鉴定证明hTMcDNA表达片段已被完整、正确的插入到pcDNA3．1( )／neo质粒中。结论：成功构建了hTM基因的真核表达质粒pcDNA-hTM。     

部分抗肌萎缩蛋白基因酵母人工染色体物理图谱

酵母人工染色体(Yeast Artificial Chromosome,YAC)是近年发展起来的大容量克隆载体,可容纳数十万乃至上百万碱基对的DNA大片段,对克隆巨大基因和绘制大尺度物理图谱具有显著的优越性。抗肌萎缩蛋白基因是迄今发现的人类最大基因,长约、2300kb,该基因的异常,导致其蛋白产物一抗肌萎缩蛋白(Dystrophin)异常而引起假肥大型肌营养不     

肌萎缩侧索硬化症家系铜锌超氧化物歧化酶基因突变位点的检测

目的：检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症（ALS）家系的铜、锌超氧化物歧化酶（SOD1）基因突变位点,同时比较单链构象多态性（SSCP）和变性高效液相色谱法（DHPLC）的实用价值.方法：采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行PCR扩增,分别采用SSCP和DHPLC分析各外显子的多态性,异常样本进行DNA直接测序.结果：①两种方法均发现家系成员Ⅱ5、Ⅲ1、Ⅲ3、Ⅲ13、Ⅲ20、Ⅳ1、Ⅳ20的第2外显子和家系成员Ⅲ1、Ⅲ11、Ⅲ20第5外显子存在突变,直接测序证实第2外显子编码区和第5外显子非编码区均插入了一个碱基A.②DHPLC还发现家系成员Ⅲ1的第4外显子有杂合子色谱,直接测序证实其第4外显子存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变.结论：①该家系SOD1基因第2、4、5外显子均存在突变,第2外显子的突变可能是引起该家系发病的原因.②DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷、可靠的手段.     

抗肌萎缩蛋白基因缺失热区50号和51号内含子的克隆和测序

抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因是迄今发现的人类最大基因,长约2300 kb,含有75个外显子,编码14 kb mRNA。该基因的异常导致其蛋白产物抗肌萎缩蛋白异常,从而在临床上出现病情严重的假肥大型肌营养不良症(DMD)和病情缓和的Becker肌营养不良症(BMD)。60％以上的DMD/BMD是由于该基因部分外显子缺失所致,其中位于缺失热     

抗肌萎缩蛋白基因缺失热区50号和51号内含子的克隆和测序

抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因是迄今发现的人类最大基因，长约2300kb，含有75个外显子，编码14kb mRNAE。该基因的异常导致其蛋白产物抗肌萎缩蛋白异常，从而在临床上出现病情严重前假肥大型肌营养不良症(DMD)和病情缓和的Becker肌营养不良症(BMD)。60％以上的DMD／BMD是由于该基因部分外显子缺失所致，     

兄妹同患假肥大型肌营养不良症

目的探讨同患假肥大型肌营养不良症(DMD)兄妹的临床以及实验室检查特点。方法对患者进行临床观察、血清酶、肌电图、心电图及心脏彩色超声检查、肌肉病理HE染色,免疫组织化学染色检测肌肉组织抗肌萎缩蛋白、utrophin的表达,用多重连接探针扩增法对抗肌萎缩蛋白基因1～79号外显子进行缺失和/或重复突变检测,利用抗肌萎缩蛋白基因的CA短串联重复序列(STR)对该家系进行STR-PCR连锁分析。结果兄妹二人符合DMD诊断,具有典型的DMD临床表现,肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶、羟丁酸脱氢酶和谷草转氨酶的水平均显著高于正常值,肌电图呈肌源性损害,肌肉HE染色符合DMD,男患者的抗肌萎缩蛋白表达阴性,女患者的少量肌纤维仍可见不连续膜阳性,两患者抗肌萎缩蛋白基因的1～79号外显子未见缺失和重复突变,女患者与男患者携带相同的母源性X染色体。结论携带DMD致病基因的女性携带者可以具有临床以及实验室的典型表现,应加强对携带者的全面检查。     

妊娠期高血压疾病中血清可溶性肝X受体α水平的变化

目的检测正常妊娠和妊娠期高血压疾病患者血清中肝X受体α的水平,探究肝X受体α与妊娠期高血压疾病的发病关系及意义。方法采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测44例妊娠期高血压疾病患者(妊娠期高血压15例、轻度子痫前期14例、重度子痫前期15例),16例正常晚期妊娠妇女和22例正常中孕妇女血清中肝X受体α水平。结果妊娠期高血压疾病组血清中肝X受体α浓度为(4.67±2.12)μg/ml,正常晚期妊娠组为(2.79±0.87)μg/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期患者血清中可溶性肝X受体α水平逐渐升高[分别为(3.57+0.86)μg/ml,(4.48+0.92)μg/ml,(6.05+3.12)μg/ml],各组间差异有统计学意义(P<0.05)。正常中期妊娠组血清中肝X受体α浓度与正常晚期妊娠组比较差异无统计学意义。结论血清肝X受体α水平升高可能与妊娠期高血压疾病的发病及病情发展有关,有可能成为疾病的预测指标。     

血清绒毛膜促性腺激素、孕酮、泌乳素与早期妊娠结局的关系分析

目的 探讨绒毛膜促性腺激素(HCG)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)与早期妊娠结局的关系.方法 以早期异常妊娠为甲组共30例,包括胚胎停育26例,异位妊娠4例;乙组为维持至中、晚期妊娠或分娩共80例.在停经≤40d、41～50d、51～60d、61～70d、71～80d不同时段每例测定3项值2～4次;定期B超检测妊娠情况.结果 停经≤40d孕酮值甲组明显低于乙组,停经41～50d和停经51～60d HCG和P值甲组明显低于乙组.各期PRL值两组间无统计学意义.回归分析:停经≤40d孕酮与妊娠结局相关(P＜0.05);停经41～50d孕酮与妊娠结局显著相关(P=0.000 6);停经41～50d绒毛膜促性腺激素和停经51～60d时孕酮、绒毛膜促性腺激素与早期妊娠结局相关(P＜0.05).结论 停经早期测定血清孕酮值确定早期异常妊娠较测定HCG值更有意义.血清泌乳素与早期自然流产的关系有待深入研究.     

PRE- AND POST-OPERATIVE HYPOTHALAMIC-PITUITARY- THYROIDAL AXIS FUNCTION IN PATIENTS WITH PROLACTINOMA, GROWTH HORMONE TUMOUR AND ACTH TUMOUR

Pre- and postoperative hypothalamic-pituitary-thyroid axis function was studied in 38 patients with pituitary adenomas (PRL, GH and ACTH tumours), of whom 35 were surgically confirmed and three diagnosed by clinical signs, CT scanning and hormone assessments. About ten days after operation, the same study was repeated in 10 patients with prolactinoma and 7 with growth hormone (GH) tumour. The preoperative abnormal serum TSH response to TRH was found in 8/20 patients with prolactinoma, 9/16 with GH tumour, and 2/2 with Cushing's disease due to ACTH microadenoma. The incidence of abnormal TSH response to TRH was not significantly increased in patients with larger adenoma in either PRL or GH tumour group. In 8 cases of prolactinoma, metoclopramide (MCP, 10 mg, P.O.) test was also performed and there was a significant positive correlation between TSH responses to TRH and to MCP. Serum TT3 in the GH tumour group was within normal ranges, but significantly higher than that of the normal and prolactinoma groups. After operation, TT3 was significantly decreased as compared with that before operation and there were marked changes in TSH response to TRH. In conclusion, there were some abnormalities in TSH control in patients with non-TSH pituitary tumour, and in serum TT3 control in patients with GH tumour. The surgical treatment of pituitary adenoma can lead to transient decrease in TSH reserve and serum TT3 level probably resulting from both stress and/or destruction of thyro-trophs by the operation.     

妊娠期雌二醇和催乳素与瘦素的关系

目的研究妊娠期间性激素与瘦素水平之间的关系。方法在180例不同孕周的妇女中,按孕周分为＜20周组,20～23周组,24～27周组,≥28周组,采用酶联免疫吸附法测定其外周血血清雌二醇(E2)和催乳素(PRL),放射免疫法测定血清瘦素水平,分析这些激素之间的相互关系。结果E2和PRL均随妊娠进展而逐步升高(P＜0.0001),组间均有显著差异(P＜0.05)。各组瘦素水平均高于非妊娠组,但组间差异无显著性。瘦素水平与孕妇的体重及体重指数显著相关(P＜0.01),与PRL也呈正相关(P＜0.05),而与B无明显相关。结论PRL水平与妊娠期瘦素水平升高有一定关系。     

妊娠高血压疾病孕妇血清脂联素水平变化与血压、尿蛋白关系的研究

目的探讨妊娠高血压疾病患者血清脂联素水平变化与血压、尿蛋白的关系。方法以100例妊娠期高血压疾病孕妇为研究对象,其中轻度子痫前期69例,重度子痫前期31例;选取同期100倒正常孕晚期孕妇为对照组。采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测孕妇血清脂联素水平,同时检测血压及尿蛋白,比较二组血清脂联素水平、尿蛋白、血压的关系。结果妊娠高血压疾病组血清脂联素水平明显低于对照组,尿蛋白、血压明显高于对照组（P〈0．05）;妊娠高血压疾病组血清脂联素水平与尿蛋白含量呈负相关（r=-0．70,P〈0．01）,与血压无明显相关性。结论检测妊娠高血压疾病孕妇血清脂联素变化对判断患者病情及预后有一定价值。     

ALTERATION OF CHOLESTEROL SULFATE IN HUMAN SERA DURING THE COURSE OF PREGNANCY

Objective To determine the concentrations of cholesterol sulfate ( CS) in human sera and pla-cental villi during the course of pregnancy. And to analyze its inhibitory activity on thrombin and further characterize the functional significance of CS. Methods The concentrations of CS were determined by thin-layer chromatog-raphy (TLC) on 60 cases of normal pregnant women and 30 cases of normal placental villi. The effect of CS in human sera on the activity of thrombin was analyzed. Results The concentrations of CS in human sera gradually increased from the first to third trimester of gestation with a correlation coefficient of 0. 69, and a correlation between the concentration of CS and weeks of gestation (P <0. 01). CS was also contained in the placental villi, and its concentrations at the second and third trimester of gestations were 4. 7 and 6. 2-fold of that at the first trimester of gestation. CS inhibited the activity of thrombin. Conclusion Placental CS is one of the sources of CS in the serum , pr     

正常孕妇血清锌和铜浓度测定的意义

测定214例正常孕妇不同孕周的血清锌、铜浓度和40例健康非孕妇女血清锌、铜浓度。结果表明:孕妇血清锌浓度孕24周后随孕周逐渐下降(Ρ<0.001)。血清铜浓度孕12周后随孕周进行性升高(Ρ<0.001)。所得正常数值,可作为临床应用的参数。     

垂体微腺瘤合并高催乳素血症的成份分析及其临床意义

本文对16例高催乳素血症合并垂体微腺瘤患者利用凝胶层析技术结合放射免疫测定血清中催乳素(PRL)的成分进行分析。按卵巢功能分组,卵巢功能正常组6例,卵巢功能障碍组10例。PRL水平两组无显著差异,而大分子催乳素(BPRL) 大大分子催乳素(BBPRL)的比例正常组明显高于障碍组,单体PRL水平则障碍组显著高于正常组,说明卵巢功能障碍主要是由于较高生物活性的单体PPL引起。在溴隐亭治疗1周、4周时,PPL下降幅度正常组均明显低于障碍组,PPL下降幅度与PRL水平无关。而与BPRL BBPRL比例呈负相关,提示某些经溴隐亭治疗PRL下降不明显的高催乳素血症可能与其循环中BPRL BBPRL比例较高有关。     

广西贺州市孕妇全血微量元素检测结果探讨

目的：探索广西贺州市孕妇和健康妇女全血微量元素含量水平,为合理补充微量元素提供参考依据。方法：将968例来自广西贺州市人民医院孕妇按孕周分为早孕组186例,中孕组730例和晚孕组52例,采用原子吸收分光光度法检测早孕组、中孕组、晚孕组及86例来自广西贺州市人民医院正常对照组妇女全血中的微量元素铜、锌、钙、镁、铁的含量,比较4组检测值。结果：早、中、晚孕组与对照组相比,铜随孕期增加而增加,差异有统计学意义（P〈0．01）,但早、中、晚孕3组间差异无统计学意义（P〉0．05）;全血锌、钙在早、中孕期随孕周的增加其含量不断降低,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,但早、中、晚孕3组比较无明显差异（P〉0．05）;全血镁、铁随孕周的增加其含量不断降低,早、中、晚孕期检测结果与对照组比较均有差异（P〈0．05）;其中铁元素早、中、晚孕组均缺乏明显（P〈0．01）。结论：广西贺州市孕妇应该根据自身情况适当补充微量元素。     

诺果宁、培高利特和降乳散对乙菧酚诱发的大鼠泌乳素瘤防治作用的初步研究

研究多巴胺受体激动剂诺果宁、培高利特及中药汤剂降乳散对乙酚 (DES)诱发的大鼠泌乳素(PRL)瘤的防治作用。方法 :成年Wistar大鼠切除卵巢后随机分 5组 ,用空白硅胶管皮下植入作为对照组 ;其它 4组均植入DES硅胶管 ,其中有 3组分别用诺果宁、培高利特和降乳散灌胃。8周后处死动物 ,做垂体的免疫组化检查 ,用放免法测定外周血PRL水平。结果 :DES可使血清PRL水平、垂体重量和PRL阳性细胞计数明显增高 (P <0 0 0 1)。结论 :这三种药物对DES诱发的大鼠PRL瘤均具有一定程度的防治作用。下丘脑多巴胺水平的降低可能是大鼠PRL瘤的致病因素之一。