大肠癌组织中生长抑素与cyclins、CDKs表达的相关性研究

目的研究大肠癌组织中生长抑素(SS)的表达与细胞周期调控因子———细胞周期素(cyc lins)、细胞周期依赖性蛋白激酶(CDKs)表达的相关性,了解SS对大肠癌细胞增殖的具体调控机制,从而进一步完善大肠癌的发病机制,为激素依赖性大肠癌的内分泌联合基因治疗提供理论依据。方法随机选择79例大肠癌(结肠癌、直肠癌)患者的手术切除标本,用免疫组织化学方法中的SP法检测SS、cyc linD1、cyc linE、cyc linA、cyc linB1、cdc2、CDK2、CDK4的表达情况。结果Cyc linE、CDK2在大肠癌组织SS高表达组的表达低于低表达组(P<0.05)。Cyc linD1、cyc linA、cy-c linB1、cdc2、CDK4在大肠癌组织SS高、中、低表达组三组间相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在大肠癌组织中,SS表达的水平越高,cyc linE、CDK2的阳性表达率越低,因此,SS对大肠癌细胞周期的调控可能是:SS抑制大肠癌细胞cyc linE、CDK2基因的表达,使cyc linE-CDK2复合物的水平降低,进而抑制细胞从G1期到S期的转化,使进入S期的细胞数减少,以诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。     

细胞S期激酶相关蛋白与妇科肿瘤关系的研究进展

细胞的生长、分裂必须经过间期和有丝分裂期。细胞周期得以运行的核心机制是在一系列细胞周期素（cyclin）相起伏的调控下,相应的周期素依赖性蛋白激酶（cyclin-dependent-kinase,CDK）依次激活,驱动细胞由G2,S,G2到M期。细胞周期调控机制的紊乱,将造成细胞失控性生长,最终导致肿瘤发生。细胞S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase-associated protein 2,Skp2）是泛素连接酶复合物SCF（Skpl-Cullin-F-box）的底物识别序列,对细胞周期的调控起重要作用,     

大肠癌组织中生长抑素与cyclins、CDKs表达的相关性研究

目的 研究大肠癌组织中生长抑素（SS）的表达与细胞周期调控因子——细胞周期素（cyclins）、细胞周期依赖性蛋白激酶（CDKs）表达的相关性，了解SS对大肠癌细胞增殖的具体调控机制，从而进一步完善大肠癌的发病机制，为激素依赖性大肠癌的内分泌联合基因治疗提供理论依据。方法随机选择79例大肠癌（结肠癌、直肠癌）患者的手术切除标本，用免疫组织化学方法中的SP法检测SS、cyclinD1、cyclinE、cyclinA、cyclinB1、cdc2、CDK2、CDK4的表达情况。结果CyclinE、CDK2在大肠癌组织SS高表达组的表达低于低表达组（P〈0．05）。CyclinD1、cyclinA、cyclinB1、cdc2、CDK4在大肠癌组织SS高、中、低表达组三组间相比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在大肠癌组织中，SS表达的水平越高，cyclinE、CDK2的阳性表达率越低，因此，SS对大肠癌细胞周期的调控可能是：SS抑制大肠癌细胞cyclinE、CDK2基因的表达，使cyclinE-CDK2复合物的水平降低，进而抑制细胞从G1期到S期的转化，使进入S期的细胞数减少，以诱导细胞周期阻滞，抑制细胞增殖。     

活化蛋白-1和细胞周期蛋白在石英诱导的细胞周期改变中的作用

目的 探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞(HELF)中AP-1/细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)通路在细胞周期改变中的作用.方法 建立稳定转染空载体PXJ的HELF系(HELF-PXJ)及空载体PXJ与反义cyclin D1质粒或反义细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4)质粒分别共转染的HELF系(简称anti-D1和anti-K4),将HELF-PXJ、anti-D1和anti-K4细胞分为对照组和石英刺激组(共6组),各对照组不加任何处理,石英刺激组用200 μg/ml石英处理细胞24h.检测AP-1对石英诱导的cyclin D1、CDK和E2F-4表达改变的影响.AP-1的化学抑制剂姜黄素(curcumin) 20μmol/L预处理细胞1h后,200 μg/ml石英刺激24 h,将HELF分为4组,分别为HELF对照组、HELF+石英组、HELF+curcumin对照组、HELF+curcumin+石英组.用免疫印迹(Western blot)法和免疫荧光法检测cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达;运用反义RNA技术证明通路的上下游关系;用流式细胞术检测细胞周期变化.结果 200 μg/ml石英处理HELF细胞,cyclin D1和CDK4蛋白表达升高,E2F-4蛋白表达明显降低,而E2F-1蛋白的表达没有明显改变.HELF-PXJ+石英组G1期细胞所占比例下降,S期细胞所占比例升高,与HELF-PXJ对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).抑制cyclin D1或CDK4表达后,与对照组比较,anti-D1+石英组和anti-K4+石英组G1期细胞和S期细胞百分比无明显变化.抑制AP-1活性,与HELF+石英组比较,HELF+curcumin+石英组cyclin D1和CDK表达均减低,E2F-4表达增多.结论200μg/ml石英可诱导cyclin D1和CDK4蛋白表达增高,E2F-4蛋白表达减少,并通过AP-1/cyclin D1通路诱导细胞周期改变.     

苯并(a)芘通过活化蛋白-1-细胞周期蛋白D1/E2F-1信号通路引起细胞周期的改变

目的 探讨活化蛋白-1(activated protein-1,AP-1)在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]引起的人胚肺成纤维细胞(HELF)周期改变中的作用以及AP-1与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)和E2F-1/4的上下游关系.方法 转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48 h后,加入2μmol/L B(a)P作用24 h,用荧光检测法检测AP-1的相对活性.用AP-1的化学抑制剂姜黄素(curcumin)抑制其活性,观察它与cyclin D1/CDK4和E2F-1/4的上下游关系.采用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用Western blot检测细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白水平的改变.结果 2 μmol/LB(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±2)%减少为(48±3)%,差异有统计学意义(P＜0.05);AP-1的活性增加;cyclin D1/E2F-1的蛋白含量增加;CDK4/E2F-4的蛋白水平没有明显改变.抑制AP-1活性后,B(a)P诱导的细胞周期的改变被逆转,B(a)P诱导的cyclin D1/E2F-1蛋白含量的增加被抑制,CDK4/E2F-4蛋白含量没有明显改变.结论 B(a)P通过AP-1引起HELF周期的改变.AP-1是cyclin D1/E2F-1的上游信号分子,但对CDK4/E2F-4的表达不具有调节作用.     

细胞周期蛋白在恶性肿瘤中的表达及其在肿瘤治疗中的作用

细胞周期蛋白(Cyclins)是细胞周期调节的核心分子,与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKIs)等组成细胞周期调控网络系统。细胞周期调控机制的异常与肿瘤的发生发展密切相关,细胞周期蛋白的异常表达与CDKs结合形成的复合物,将导致细胞周期紊乱、细胞增殖失控,最终促使多种细胞癌变。Cyclins在多种恶性肿瘤中高表达,并在肿瘤的治疗中发挥重要作用。     

CDK1与肿瘤细胞周期调控

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,CDK1是细胞周期调控的内源性分子,在细胞周期中与其他相关分子相互协调并与细胞信号转导通路之间形成复杂的调控网络,与细胞增殖、细胞分化及细胞凋亡相关联.本文综述CDK1的结构和功能及其效应分子在细胞周期的调控,并简要阐述了CDK1介导的细胞周期调控异常与在肿瘤组织中的表达特征的关系.为肿瘤的治疗提供一个新的靶点和方向.     

Cyclin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变

目的研究苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期分布及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达的影响,并探讨两种蛋白含量改变与细胞周期效应之间的关系。方法将反义cyclin D1质粒和反义CDK4质粒导入HELF细胞内,建立两种质粒稳定转染的细胞模型。用0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h,用蛋白印迹方法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达水平;利用流式细胞技术检测B(a)P处理对HELF细胞及两种稳定转染细胞系细胞周期的影响。结果成功建立了反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的细胞系。不同剂量B(a)P处理可引起cyclin D1蛋白表达的显著增加,但对CDK4蛋白表达无明显影响;2.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h后,引起其细胞周期G1期显著下降,S期显著增加;2.5μmol/L的B(a)P处理反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的HELF细胞24h后,对其细胞周期的分布无显著影响。结论Cyclin D1和CDK4基因均参与了B(a)P所致细胞周期改变过程,并发挥正性调节作用。     

番茄红素对前列腺癌细胞PC-3增殖和细胞周期的影响

目的研究番茄红素对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对癌细胞增殖的影响,流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达的变化。结果番茄红素抑制PC-3细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使G0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少)。RT-PCR结果显示,cyclin D1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调。上述作用呈剂量效应关系。结论番茄红素可诱导PC-3细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

金雀异黄素对胶质瘤细胞株细胞生长周期影响

目的 研究金雀异黄素(genistein)对人胶质瘤U251MG细胞生长和细胞周期的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度genistein在不同作用时间下对U251MG细胞生长的影响,用流式细胞仪分析细胞周期分布,蛋白免疫印迹( western blotting)技术检测细胞周期素Bl(cyclinBl)和细胞周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)蛋白表达.结果Genistein对胶质瘤细胞生长有明显抑制作用,使细胞生长停滞于G2/M期,并使细胞cyclin B1、CDK1蛋白表达下降(均P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论Genistein对U251 MG细胞生长有明显抑制作用,诱导G2/M期阻滞可能与下调cyclinB1和CDK1蛋白表达有关.     

Hesperetin induced G1-phase cell cycle arrest in human breast cancer MCF-7 cells: involvement of CDK4 and p21

This study was to investigate the effects of hesperetin on cell proliferation and cell cycle arrest and explored the mechanism for these effects in breast carcinoma MCF-7 cells. Hesperetin significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner after treatment for 48 and 72 h and resulted in significant cell cycle arrest in the G1 phase. In the G1-phase related proteins, hesperetin downregulates the cyclin-dependent kinases (CDKs) and cyclins and upregulates p21(Cip1) and p27(Kip1) in cells treated with hesperetin for 48 h and 72 h. After 72 h treatment, these phenomenons were more pronounced. Hesperetin treatment at high concentration for 72 h resulted in a decrease in CDK2 and CDK4 together with cyclin D. In addition, hesperetin increases the binding of CDK4 with p21(Cip1) but not p27(Kip1) or p57(Kip2). Taken together, our data suggest for the first time that the regulation of CDK4 and p21(Cip1)1 may participate in the anticancer activity pathway of hesperetin in MCF-7 cells.     

cyclinD1/E2F通路在苯并(a)芘引起人胚肺成纤维细胞周期改变中的作用

目的探讨细胞周期蛋白D1（cyclinD1）／细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4），E2F-1／4通路在苯并（a）芘[B（a）P]引起的人胚肺成纤维细胞（HELF）周期改变中的作用。方法分别用2μmol／L的B（a）P作用HELF24h和100μmol／LB（a）P作用3次，每次24h，细胞具有转化细胞的部分特征（THELF）。用转染反义cyclinD1和CDK4质粒的HELF（A-D1，A-K4）和T-HELF（T-A-D1，T-A-K4）研究cyclinD1／CDK4与E2F-1／4的上下游关系。用流式细胞仪和Western blot法检测细胞周期、cyclin D1、CDK4和E2F-1／4蛋白表达的改变。结果2μmol／LB（a）P作用24h HELF中G1期细胞数明显减少。在A-D1和A-K4的HELF中，cyclinD1和CDK4表达的抑制阻断了由B（a）P引起的细胞周期从G1期进入S期的变化。B（a）P刺激后HEIF中cyclinD1和E2F-1的表达明显增加。在A-D1中，E2F-1的高表达被抑制。B（a）P作用A-K4细胞后，CDK4表达明显升高，E2F-4表达明显降低。T-A-D1和T-A-K4的T-HELF多数停留在G1期。与HELF相比，T-HELF中cyclin D1的表达明显增加；与T-HELF相比，T-A．D1和T-A-K4中E2F-4表达明显增加。结论在2μmol／L B（a）P作用的HELF中，B（a）P通过cyclinD1／CDK4-E2F-1／4信号转导通路引起细胞周期的改变。在T-HELF中，B（a）P通过cyclinD1／CDK4-E2F-4信号转导通路引起细胞周期的改变。     

赫赛汀及9-顺式视黄酸对乳腺癌联合抑制作用

目的 探讨赫赛汀联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞周期进程及分布的影响及其相应的分子机制.方法 利用流式细胞仪检测经赫赛汀、9-顺式视黄酸单独和联合作用后,癌基因(ErbB2/neu)阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞周期进程和分布的变化.在此基础上,利用免疫印记和半定量PCR法对CDK2、Cyclin E、P27的表达进行检测,同时利用免疫沉淀法检测CyclinE/CDK2结合力的变化.结果 与对照组比较,一定剂量的赫赛汀和9-顺式视黄酸可将MDA-MB-453细胞的周期进程阻遏于G0/G1期从而抑制其增殖活性.经2者联合作用后,cyclin E、CDK2 的表达较对照组均有所下降,其中以CDK2的变化最为明显,而P27蛋白表达则明显升高.同时,2者联合作用还能有效降低CyclinE/CDK2的结合能力.结论 赫赛汀和9-顺式视黄酸可在体外分别通过改变Cyclin E、CDK2和P27的表达和活性起到协同抑制HrbB2/neu阳性乳腺癌的目的.     

全反式视黄酸阻断苯并(a)芘致成纤维细胞周期改变的通路

目的 观察全反式视黄酸（ATRA）逆转苯并（a）芘诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）细胞周期紊乱过程中细胞周期素D1（cyclin D1）、细胞周期素依赖性激酶K4（CDK4）、转录因子E2F-1和E2F-4的作用.方法 用0.1 μmol/L ATRA预处理细胞后,再用2 μmol/L苯并（a）芘作用细胞,用Western blotting方法测定其蛋白表达水平;建立稳定转染了反义cyclin D1质粒和反义CDK4质粒的细胞系,应用反义技术证明上下游关系;用流式细胞技术 测定细胞周期.结果 2μmol/L苯并（a）芘作用于HELF24h后,cyclin D1、E2F-1蛋白表达水平明显增高,CDK4和E2F-4蛋白表达水平无明显变化;用0.1 μmol/LATRA预处理24h后,cyclin D1、E2F-1蛋白表达水平明显下降;与相同作用的对照组相比,苯并（a）芘刺激反义cyclin D1或反义CDK4细胞后E2F-1表达增加的幅度明显降低;与相同作用的对照组相比ATRA预处理的反义cyclin D1或反义CDK4细胞中,苯并（a）芘诱导的E2F-1过表达水平降低的幅度明显降低;流式细胞术测定结果显示,苯并（a）芘诱导细胞从G1期进入S期,ATRA通过聚积G1期细胞而阻滞苯并（a）芘诱导的细胞周期进程.结论 ATRA通过cyclin D1/E2F-1途径阻断苯并（a）芘诱导的HELF的细胞周期改变.     

Investigation of TF-binding lectins from dietary sources and SRL on proliferation and cell cycle progression in human colon HT29 and SW620 cells

TF antigen binding lectins from dietary sources PNA, ACA, ABL, JAC, and SRL from Sclerotium rolfsii have been reported to induce diverse effects on cancer cell proliferation by different mechanisms. This study aimed to compare effects of these lectins on growth and cell cycle progression in colon cancer HT29 and SW620 cells. As reported SRL, ABL, and JAC inhibited while PNA and ACA increased cell proliferation. ABL and JAC treated HT29 cells showed increased cell population in G0/G1 phase. PNA, ACA, ABL, and JAC increased SW620 cell population in S and decreased in G2/M phase. In contrast, SRL and JAC increased hypodiploid population in both the cells. PNA and ACA reduced whereas SRL and ABL diminished cell cyclin D1 expression. SRL, PNA, and ACA also reduced cellular cyclin D3 level while SRL, ABL, and JAC reduced cyclin E levels. ABL decreased CDK5 levels while SRL and ACA completely abolished CDK5 expression. All the lectins completely abolished cyclin D2 expression. These results not only confirms growth regulatory effects of TF-binding lectins but also indicates different effects of these lectins on cell growth is associated with regulation on expression of cell cycle associated proteins in G1-S phase and on cell cycle progression.     

Synthesis and apoptosis inducing ability of new anilino substituted pyrimidine sulfonamides as potential anticancer agents

A series of anilino substituted pyrimidine sulfonamides were prepared and evaluated for their anticancer activity. These sulfonamides showed promising activity with IC₅₀ values ranging from 5.6 to 12.3 μM. The detailed biological aspects of some of the promising compounds (3d, 3e and 3g) on the K562 cell line were studied. Interestingly, compounds induced G1 cell cycle arrest and down regulation of G1 phase cell cycle regulatory proteins such as cyclin D1, CDK4. These compounds also exhibited inhibition of NF-κB as well as its downstream target gene Akt1 and the phosphorylated form of AKt ser 474 proteins. One of the representative compound 3e could be considered as the potential lead for its development as a new anticancer agent.     

Cyelin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变

目的 研究苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期分布及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达的影响,并探讨两种蛋白含量改变与细胞周期效应之间的关系.方法 将反义cychn D1质粒和反义CDK4质粒导入HELF细胞内.建立两种质粒稳定转染的细胞模型.用0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h.用蛋白印迹方法检测cvclin D1和CDK4蛋白表达水平;利用流式细胞技术检测B(a)P处理对HELF细胞及两种稳定转染细胞系细胞周期的影响.结果 成功建立了反义cyelin D1和反义CDK4稳定转染的细胞系.不同剂量B(a)P处理可引起cvclin D1蛋白表达的显著增加,但对CDK4蛋白表达无明显影响;2.5/μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h后,引起其细胞周期G1期显著下降,S期显著增加;2.5μmol/L的B(a)P处理反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的HELF细胞24h后,对其细胞周期的分布无显著影响.结论 Cyelin D1和CDK4基因均参与了B(a)P所致细胞周期改变过程,并发挥正性调节作用.