肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。     

抗原致敏树突状细胞诱导CTL对MCF-7细胞的体外杀伤效应

目的:采用MCF-7乳腺癌细胞裂解物致敏树突状细胞(DC),观察其体外诱导人T淋巴细胞产生特异性抗乳腺癌免疫的效能。方法:联合应用细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)中诱导出DC,体外负载MCF-7细胞冻融抗原,活化自身T淋巴细胞,采用ELISA法测定γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-12(IL-12)水平,乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对MCF-7细胞的杀伤效应。结果:负载抗原DC与T淋巴细胞共培养产生IFN-γI、L-12的水平,显著高于未负载抗原DC组(P<0.05)、单纯抗原组(P<0.01)和对照组(P<0.01);负载抗原DC诱导CTL对MCF-7的杀伤效应,显著高于其他3组(P<0.01)。结论:MCF-7细胞裂解物致敏DC诱导的人CTL,对MCF-7细胞具有明显的特异性杀伤效应。     

树突状细胞介导的肝癌免疫治疗实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为介导的原发性肝癌免疫治疗新方法。方法采用肝癌细胞制备肿瘤细胞性抗原冲击致敏体外培养的DC,体外混合淋巴细胞反应检测抗原致敏DC;刺激同基因T淋巴细胞增殖的能力,观察负载肿瘤抗原的DC;体内外诱导产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）及其抗肿瘤能力。结果经肝癌细胞抗原致敏的DC;能诱导较强的自体T细胞增殖,且诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC和未经肝癌细胞抗原致敏的DC;激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对非同种肿瘤细胞无明显的杀伤作用,经BEL7402肿瘤细胞抗原致敏的DC;经皮下免疫小鼠可诱导有效的免疫保护作用,可抵抗野生型BEL7402细胞的再攻击,肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,生长减慢。结论DC具有强大的刺激T淋巴细胞增殖和诱导产生特异性CTL的能力,在体内外均能激发特异性抗肿瘤免疫应答。     

负载肿瘤抗原的树突状细胞疫苗诱导CTL的抗肿瘤效应

目的:探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的体外杀瘤作用及对荷瘤小鼠的治疗作用.方法:体外培养的小鼠骨髓树突状细胞用小鼠结肠腺癌细胞株CT26细胞抗原冲击致敏制备负载肿瘤抗原的DC疫苗;负载肿瘤抗原的DC疫苗激活同源T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),采用乳酸脱氢酶(LDH) 4 h释放法检测CTL在体外对CT26细胞的杀伤活性;建立CT26荷瘤小鼠模型,应用CTL治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤大小和小鼠存活期.结果:负载CT26肿瘤抗原的DC疫苗能够诱导T细胞增殖分化为肿瘤特异CTL,该CTL对CT26细胞有高效而强烈的杀伤作用,杀伤率为(83.95±11.25)%,而对B16细胞、3LL Lewis 细胞无明显杀伤作用,杀伤率分别为(12.75±5.36)%和(11.38±4.57)%.应用CTL治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期.结论:负载肿瘤抗原的DC疫苗能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性并能治疗荷瘤小鼠.提示负载肿瘤抗原的DC疫苗诱导的CTL可能在肿瘤的免疫治疗中发挥重要作用.     

两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用

目的 比较两种抗原负载方式对树突状细胞(DCs)疫苗的影响.方法 抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LoVo细胞,提取肿瘤细胞裂解物或者使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LoVo细胞的杀伤作用.结果 两种方式均可培养的成熟DCs,诱导的CTL细胞分泌IFN-γ有所增加;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LoVo细胞,腺相关病毒提呈抗原制备的DCs疫苗对LoVo细胞的杀伤作用明显高于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.结论 两种抗原提呈方式均可培养出成熟的DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,并可诱导自体CTL增殖.使用腺相关病毒转染DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.     

CpG-ODN加强树突状细胞疫苗治疗小鼠膀胱肿瘤的实验研究

目的探讨含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)对树突状细胞(DC)疫苗治疗小鼠膀胱肿瘤作用的影响。方法应用CpG-ODN作为DC成熟的刺激信号,体外诱导DC成熟,BTT739膀胱肿瘤细胞抗原提取物致敏DC制备DC疫苗,建立BTT739荷瘤小鼠动物模型,随机分为磷盐酸缓冲液(PBS)对照组、DC疫苗组、CpG-ODN组、DC+CpG-ODN联合治疗组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予治疗,每组分2个亚组,分别用于测量瘤重、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。流式细胞仪检测肿瘤组织中浸润性树突状细胞(TIDC)表面共刺激分子CD80、CD86的表达。结果第2次治疗7 d后,联合治疗组平均瘤重及平均肿瘤体积均显著低于其余3个组(P0.01),荷瘤小鼠生存期显著长于其余3个组(P0.05)。肿瘤组织中TIDC表面CD80、CD86表达水平,联合治疗组略高于CpG-ODN组,差异无统计学意义(P0.05),但均显著高于PBS对照组和DC疫苗组(P0.05)。结论CpG-ODN可增强负载肿瘤抗原的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠的抑瘤效应和生存期延长作用,其机制主要是通过诱导DC成熟。     

转基因树突状细胞瘤苗诱导的CTL对肿瘤细胞的靶向性杀伤作用

目的：观察mAFP基因转染的树突状细胞（DC）瘤苗诱导的靶向性细胞毒性T细胞（以下简称靶向性CTL）对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：用构建的mAFP基因转染的DC瘤苗免疫C57BL／6小鼠,取免疫小鼠脾细胞诱导CTL,LDH非放射性细胞毒性试验检测其对不同肿瘤细胞的杀伤作用。用ELISA法检测CTL诱导过程中TNF—α和IFN-γ分泌变化规律。结果：AFP基因转染的DC瘤苗免疫小鼠后能诱导具有较高抗肿瘤活性的靶向性CTL,这种靶向性CTL对AFP分泌性肿瘤细胞具有更强的杀瘤活性,且在CTL诱导过程中TNF-α和IFN-γ分泌水平明显增高,与对照组比较差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：AFP基因重组腺病毒修饰的DC瘤苗免疫C57BL／6J小鼠,能诱导出针对AFP抗原的靶向性CTL,并也能通过分泌TNF-α和IFN-γ实现对AFP分泌性肿瘤细胞的特异性杀伤。     

乳酸杆菌在树突状细胞诱导抗肿瘤免疫杀伤中的作用

目的 探讨乳酸杆菌在树突状细胞(DC)诱导抗肿瘤免疫杀伤中的作用及其意义.方法 采用混合淋巴细胞反应(MLR)、ELISA法分别测定经乳酸杆菌作用后的冻融宫颈癌抗原负载DC体外刺激T细胞的增殖情况以及上清液中白细胞介素12(IL-12)与γ干扰素(IFN-γ)的含量;噻唑蓝法(MTT法)测定乳酸杆菌冻融抗原致敏DC激活的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对宫颈癌HeLa细胞的杀伤作用.结果 与单纯冻融抗原、单纯乳酸杆菌致敏DC比较,经乳酸杆菌作用后的冻融宫颈癌抗原负载DC在体外明显增强T细胞的增殖能力(P<0.05)、增加上清液中IL-12与IFN-γ的含量(P<0.05);与单纯冻融抗原、单纯乳酸杆菌致敏DC比较,乳酸杆菌明显增强冻融抗原致敏DC激活的CTL对宫颈癌Helm细胞的杀伤力(P<0.05),结论乳酸杆菌可以增强树突状细胞诱导的对宫颈癌细胞的肿瘤免疫杀伤作用.     

多发性骨髓瘤抗原致敏树突状细胞介导的体外抗瘤活性

目的：探讨多发性骨髓瘤KM3细胞株冻融抗原和弱酸洗脱抗原肽负载树突状细胞（DC）后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对KM3细胞的杀瘤作用。方法：联合GM-CSF,IL-4和TNF-α,体外诱导单核细胞生成DC,并使其致敏KM3特异性冻融抗原或酸洗脱抗原,然后与自体T淋巴细胞共同培养3d,生成特异性CTL,并采用MTT法检测其对KM3细胞的杀伤率。结果：在细胞因子作用下,体外培养的外周血单个核细胞可诱导分化为成熟的DC;应用KM3肿瘤抗原致敏DC,诱导生成的CTL对KM3肿瘤细胞具有较强的杀伤效应。结论：KM3冻融抗原和酸洗脱抗原激发的DC与自体T淋巴细胞孵育能诱生抗KM3细胞特异性CTL。     

树突状细胞对肿瘤特异性CTL体外激发、扩增及功能的作用研究

目的:研究凋亡肿瘤细胞负载的DCs联合细胞因子对T细胞体外激发、扩增及功能的诱导作用。方法:人B淋巴瘤细胞株Raji经顺铂(DDP)诱导凋亡，体外共育法负载DCS，DCs和T细胞体外共培养观察DC5对T细胞的效应，采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析T细胞表型：ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10的含量；溶血实验检测细胞毒性T细胞(CTL)产生穿孔素的能力；体外肿瘤杀伤实验分析CTL的特异性肿瘤杀伤作用。结果：凋亡肿瘤细胞负载联合CD40激发的DCs能有效地激发自体T细胞的体外扩增并诱导具有较特异杀伤肿瘤细胞作用的CTL。结论：凋亡肿瘤细胞负载的DCS在CD40信号的作用下对自体T细胞具有较强的激发和扩增效应．所获得的CTL对肿瘤细胞具有较特异的杀伤作用。     

循环肿瘤细胞和播散肿瘤细胞对食管癌患者预后的meta分析

目的 用循环肿瘤细胞(CTCs)和播散肿瘤细胞(DTCs)预测食管癌患者的预后仍存在争议,本文旨在探究食管癌患者CTCs/DTCs是否与患者临床病理特征、预后及生存状况存在相关性.方法 通过PubMed、Web of Science、Embase及Cochrane数据库检索所有CTCs/DTCs相关研究.制定文献纳入/排除标准并依此选择文献.以比值比(OR)、相对危险度(RR)、风险比(HR)和95％可信区间(95％ CI)作为效应指标,用Review Manager5.3、Statal2.0软件进行计算和分析.结果 共纳入19项研究,包含1766例食管癌患者.Meta分析显示,CTCs/DTCs与患者下列临床病理参数:肿瘤分期(OR=1.95)、浸润深度(OR=1.99)、淋巴结转移(OR=2.44SEN)、远处转移(OR=5.98sEN)、分化程度(OR=1.67)、淋巴脉管转移(OR=4.48);预后:复发(RR=6.86SEN)、转移(RR=3.22);生存状况:总体生存率(OS)整体分析(HR=3.46)、无病生存率/无进展生存率(DFS/PFS)整体分析(HR=3.00)显著相关.结论 食管癌患者CTCs/DTCs与肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、分化程度、淋巴脉管转移、复发、转移显著相关,也与总体生存率、无病生存率/无进展生存率显著相关.因此,CTCs/DTCs可作为食管癌患者临床预测指标.     

481例恶性肿瘤患者循环肿瘤细胞(CTC)检测的回顾性分析

 目的  基于CellSearch平台,回顾性分析肝癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌7类肿瘤患者循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)数量及形态特征,探讨其临床价值。方法  回顾分析复旦大学附属中山医院检验科2014年12月至2016年4月7类肿瘤患者共481例CTC检测结果,有CTC检出者回顾原始荧光检测图像,随访时间更新至2018年4月。比较7类肿瘤患者术前、术后CTC数量变化及形态特征。分析肝癌患者不同治疗阶段的CTC形态变化及其临床价值。结果  术前组CTC检出率为53%～100%,术后组为0～37%,7类肿瘤术后组均有显著下降,其中乳腺癌和胃癌下降最为显著(χ2=9.12, P=0.003; χ2=5.76, P=0.016)。不同肿瘤CTC形态存在较大异质性,以肝癌和肺癌为甚。肝癌患者连续监测结果显示,不同治疗阶段的CTC数量及形态均有变化且与临床预后相关。结论  7类肿瘤术后组CTC7.5检出率显著低于术前组。在肝癌治疗监测过程中,CTC形态变化对于治疗反应及临床预后可能有一定的提示作用。     

放疗联合溶瘤病毒治疗对肿瘤细胞的影响

溶瘤病毒治疗是近年来兴起的一种新的肿瘤基因治疗途径。在溶瘤腺病毒被批准用于临床治疗肿瘤的情况下,溶瘤病毒治疗与放疗相结合将对恶性肿瘤的治疗产生重要影响。文章就放疗联合溶瘤病毒治疗对肿瘤细胞的杀伤作用作一综述。     

恶性肿瘤患者应用细胞因子诱导的杀伤细胞治疗后不良反应分析

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine—inducedkiller,CIK）治疗恶性肿瘤中出现的不良反应、不良反应出现的可能原因及针对性治疗措施。方法回顾分析2008年3月一2012年10月730例恶性肿瘤患者回输CIK细胞悬液后各种不良反应的临床表现、实验室检查结果、采取的治疗措施及分析可能的原因。结果CIK细胞回输后的不良反应有：发热（6．85％1、皮疹（1．64％）、消化道不适（0．96％）、关节疼痛（0．41％）、类过敏样反应及溶瘤综合征（均为O．14％）、类全身炎症反应综合征样反应（0．68％）,除合并血压下降、严重过敏样反应及溶瘤综合征需对症处理外,余无需特殊处理。不良反应原因可能与CIK细胞的归巢特征及个体差异有关。结论此疗法是安全有效的过继免疫治疗方法,相关不良反应经积极对症处理后可恢复。     

洛拉曲克在肿瘤细胞中的药代动力学研究

目的探讨新型药物洛拉曲克在肿瘤细胞中的转运特点与其敏感性之间的关系。方法采用MTT法测定洛拉曲克对三株肿瘤细胞C6、SRS-82、LoVo的生长抑制作用。通过高效液相色谱法测定经洛拉曲克处理后的细胞内外药物浓度。结果C6是三株细胞中对洛拉曲克最敏感的,SRS-82和LoVo细胞对洛拉曲克的IC50值分别是C6细胞的6.8和13.8倍。洛拉曲克在这三株细胞中胞内与胞外浓度存在线性关系。C6的细胞内稳态浓度显著高于其他两株细胞。结论本研究的结果表明,洛拉曲克可快速进入细胞,不同细胞株对洛拉曲克有不同的吸收能力,这种现象可部分解释肿瘤细胞对洛拉曲克不同的敏感性。     

Enhancing Antitumor by Immunization with Fusion of Dendritic Cells and Engineered Tumor Cell

Antitumor immune responses are consideredto be primarily mediated by T cells.Based on theprevious data that genetically engineered tumorcells can be used to be against tumor as a source ofwhole- cell antigens,and as well as the secretion ofcytokines and,or costimulatory molecules,manyof the immunotherapeutic approaches developed totreat tumor in animal model or clinical trials[1— 3 ] .However,tumor cells are poor antigen- presentingcells (APCs) ,because of the lack of costimulatorymolecule e…     

循环肿瘤细胞检测在不同转移灶晚期乳腺癌中的应用研究

[摘要]　目的　探讨不同单发转移部位乳腺癌患者对循环肿瘤细胞（circulating tumor cell,CTC）检测的敏感性。　方法　采集119例乳腺癌单发转移（肝、肺、骨）患者的外周血7.5 mL,按转移部位分成3组,采用cellsearch方法检测血液标本中的CTC,统计分析各组检出率及阳性率,并比较其差异。　结果　晚期乳腺癌肝、肺、骨转移患者外周血中CTC的检出率分别为35.5%（11/31）、47.5%（19/40）、68.8%（33/48）,骨转移组的检出率明显高于肺及肝转移组（P<0.05）。肝、肺、骨转移组CTC的阳性率分别为32.3%（10/31）、12.5%（5/40）、12.5%（6/48）,肝转移组与肺及骨转移组比较差异有显著性意义（P<0.05）。　结论　CTC检测对于晚期乳腺癌骨转移患者的敏感性较高。相比骨转移及肺转移,晚期乳腺癌肝转移患者的预后相对较差。     

多聚乙烯亚胺介导肿瘤细胞基因转染

目的:利用阳离子多聚物多聚乙烯亚胺(PEI)纳米凝胶将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转入同步化的肿瘤细胞中并检测绿色荧光蛋白的表达率,探讨PEI作为载体介导肿瘤细胞基因转染中细胞周期对转染效率的影响?方法:通过6 MV X线照射及药物阻滞使Hela及A549细胞同步化,在5个PEI/DNA梯度比(2/2?4/2?6/2?8/2?10/2 ?滋g/?滋g)下利用PEI介导EGFP报告基因转染进入上述同步化细胞,流式细胞仪和荧光显微镜下测定绿色荧光蛋白表达率,通过梯度试验分析细胞周期时相与表达率之间的关系?结果:在不同增殖状态及PEI/DNA比值梯度下,一定剂量-时间的X射线和顺铂可以使Hela细胞同步化于S期,一定剂量-时间的艾素可以使A549细胞同步化于G2/M期,而血清饥饿法培养则可以使细胞阻滞于G0/G1期,在不同细胞周期时相下EGFP的转染效率不同,两种同步化细胞均表现出S期及G2/M期细胞的转染率显著高于对照组(P < 0.05)和G0/G1期细胞(P < 0.0001)?结论:PEI导入基因的表达效率受细胞周期制约,PEI介导的基因转染受到宿主细胞摄取?转运入核及转录能力的影响,而该进程都是细胞周期依赖性的?     

洛拉曲克在肿瘤细胞中的药代动力学研究

目的：探讨新型药物洛拉曲克在肿瘤细胞中的转运特点与其敏感性之间的关系。方法：采用MTT法测定洛拉曲克对三株肿瘤细胞C6、SRS－82、LoVo的生长抑制作用。通过高效液相色谱法测定经洛拉曲克处理后的细胞内外药物浓度。结果：C6是三株细胞中对洛拉曲克最敏感的，SRS－82和LoVo细胞对洛拉曲克的IC50值分别是C6细胞的6．8和13．8倍。洛拉克克在这三株细胞中胞内与胞外浓度存在线性关系。C6的细胞内稳态浓度显著高于其他两株细胞。结论：本研究的结果表明，洛拉曲克可快速进入细胞，不同细胞株对洛拉曲克有不同的吸收能力，这种现象可部分解释肿瘤细胞对洛拉曲克不同的敏感性。